CN107320448A - 一种包裹人参皂苷Rg3的球形胶束及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了包裹人参皂苷Rg3的球形胶束的制备方法，包括：称取人参皂苷Rg3以及载体材料，溶解于适量有机溶剂中，待充分溶解后除去有机溶剂，室温下置于真空干燥箱中过夜；加入适量去离子水进行水化，待其充分溶解后超声；将超声后的水化液用滤膜过滤，得到透明的聚合物胶束溶液，冻干得到所述球形胶束。本发明公开了包裹人参皂苷Rg3的球形胶束。本发明还公开了包裹人参皂苷Rg3的球形胶束的应用。

Description

一种包裹人参皂苷Rg3的球形胶束及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及中药药物制剂，具体涉及一种包裹人参皂苷Rg3的球形胶束及其制备方法与应用。
背景技术
阿霉素(Doxorubicin，DOX)是一种有效的临床抗癌药物，已被广泛用于各种血液和实体肿瘤的治疗。然而，在临床应用中表现出剂量相关的心脏毒性作用，可能会影响化疗的疗效，且对患者的生存时间及生活质量产生严重影响。阿霉素诱发的心脏毒性的机制十分复杂，可能涉及包括活性氧(ROS)生成，线粒体功能障碍，细胞损伤和凋亡，钙超载等方面。阿霉素在体内氧化还原循环过程中生成的的醌和类醌物质诱导ROS产生，引发心肌细胞内的线粒体功能失调，导致DNA损伤，脂质过氧化，蛋白质羰基化等。阿霉素诱导的ROS主要产生于线粒体内，因主要参与氧化还原循环过程的各种复合物物，如NAD(P)H，分布于线粒体内。且阿霉素稳定结合线粒体外膜上的磷脂成分，这些导致阿霉素集中作用于线粒体，导致阿霉素增加线粒体铁和细胞内ROS水平。此外，阿霉素和其主要代谢物增加钙释放通道的开放，导致钙离子外力，造成肌原纤维的肌节恶化。阿霉素结合DNA和TOP2β形成三元TOP2β-阿霉素-DNA复合物可诱导核转录调节基因和线粒体DNA损伤，进而诱导的细胞凋亡。
人参皂苷Rg3(Rg3)是五加科植物人参的主要活性成分之一，具有抗氧化、免疫调节、抗炎和抗衰老等功效。最新的研究还表明，Rg3具有心血管保护[5]及抗癌活性。这些研究结果启示，联合使用DOX与Rg3不仅能拮抗阿霉素诱导的心脏毒性也提协同高抗癌作用。然而，Rg3具有低水溶性和生物利用度，从而限制了它的临床应用。
Pluronic F127(PF127)已在生物医学和制药科学广泛研究，它是由一个三嵌段共聚物聚丙烯氧化物(PPO)链及两侧聚氧化乙烯(PEO)链共轭而成，可以自发地自组装成胶束。PF127 PPO段构成的疏水核心为亲脂性药物封装成密闭胶束，而PEO段可以抑制蛋白质的吸附，可提高难溶性药物的溶解度。胶纳米载体系统易于准备，避免有机溶剂的使用。一些研究表明，共聚物可作为MDR调节剂，它还可以帮助药物穿过血脑屏障(BBB)和肠道屏障[10]、防止结合蛋白由网状内皮系统消除(RES)，Pluronic胶束还可以为封装的药物增加在体内循环次数。因此，可以通过自发的自组装封装Rg3 Pluronic F127胶束以改善其水溶性和生物利用度。
发明内容
本发明设计开发了一种包裹人参皂苷Rg3的球形胶束，本发明的发明目的是提供人生皂苷Rg3的用药剂型，以解决Rg3水溶性低和用药后生物利用度低的问题。
本发明设计开发了一种包裹人参皂苷Rg3的球形胶束的制备方法，本发明的发明目的是提供一种Rg3高水溶性和高生物利用度的制备方法。
本发明设计开发了一种包裹人参皂苷Rg3的球形胶束的应用，本发明的发明目的是为了降低阿霉素在临床用药的过程中降低心脏毒性以及在于阿霉素联合应用的过程中增加抗癌性。
本发明提供的技术方案为：
一种包裹人参皂苷Rg3的球形胶束的制备方法，包括：
称取人参皂苷Rg3以及载体材料，溶解于适量有机溶剂中，待充分溶解后除去有机溶剂，室温下置于真空干燥箱中；
加入适量去离子水进行水化，待其充分溶解后超声；
将超声后的水化液用滤膜过滤，得到透明的聚合物胶束溶液，冻干得到所述球形胶束。
优选的是，所述载体材料为PluronicF127。
优选的是，所述有机溶剂为乙腈，所述载体材料PluronicF127质量分数为83.4％～95.3％，所述去离子水体积为5～10ml。
一种包裹人参皂苷Rg3的球形胶束，使用所述的制备方法得到：所述球形胶束的纳米粒径为40～100nm，并且所述人参皂苷Rg3包裹在所述球形胶束内部，所述载体材料PluronicF127亲水基团在外部。
优选的是，所述球形胶束的纳米粒径为49.44nm。
使用所述的包裹人参皂苷Rg3的球形胶束在减轻阿霉素诱导心脏毒性的应用。
使用所述的包裹人参皂苷Rg3的球形胶束在联合阿霉素抗肿瘤的应用。
本发明与现有技术相比较所具有的有益效果：
1、通过药用高分子材料PluronicF127对人参皂苷Rg3进行包裹，应用PluronicF127的疏水端结构与人参皂苷Rg3共价结合，将Rg3包裹在PluronicF127形成的球形胶束结构内，并且将PluronicF127亲水端暴露在外，实现增加包裹后Rg3胶束的水溶性，增加载Rg3胶束在消化系统内的摄取量；
2、PluronicF127能够显著增加包裹后Rg3的体内循环时间，增加Rg3的缓释作用，提高人参皂苷Rg3的体内生物利用度；
3、包裹后的Rg3胶束直径小于100nm，接近50nm，这使得Rg3胶束能够有效通过肿瘤细胞的内吞作用被肿瘤细胞摄取，增加Rg3在肿瘤组织中的摄入量，提高对肿瘤的治疗效果；
4、人参皂苷Rg3显著改善阿霉素引发的心功能障碍，并且PF-Rg3胶束改善效果优于Rg3单体；
5、PF-Rg3胶束联合阿霉素具有增加对乳腺癌的杀伤作用，同时降低肿瘤细胞对阿霉素的耐药性，增加耐药乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性。
附图说明
图1为Pluronic F127 Rg3胶束物理特征示意图。
图2为Pluronic F127 Rg3胶束电镜扫描图。
图3为Pluronic F127 Rg3胶束药物释放曲线图。
图4为Pluronic F127 Rg3胶束及单体药时曲线图。
图5为Pluronic F127 Rg3减少阿霉素引起的C57BL/6小鼠死亡结果示意图。
图6A为正常对照组室壁运动及扩张情况示意图。
图6B为模型组室壁运动及扩张情况示意图。
图6C为Pluronic F127对照组室壁运动及扩张情况示意图。
图6D为Pluronic F127 Rg3胶束组室壁运动及扩张情况示意图。
图6E为Rg3单体组室壁运动及扩张情况示意图。
图7A为Pluronic F127 Rg3胶束和Rg3单体抑制DOX引起的EF％降低结果示意图。(其中，与正常对照组相比：*p<0.05，**p<0.01；与模型组对比：#p<0.05，##p<0.01；与Rg3单体组对比：&p<0.05,&&P<0.01)
图7B为Pluronic F127 Rg3胶束和Rg3单体抑制DOX引起的FS％降低结果示意图。(其中，与正常对照组相比：*p<0.05，**p<0.01；与模型组对比：#p<0.05，##p<0.01；与Rg3单体组对比：&p<0.05,&&P<0.01)
图7C～7H为Pluronic F127 Rg3胶束和Rg3单体抑制DOX引起的心室扩张结果示意图。(其中，与正常对照组相比：*p<0.05，**p<0.01；与模型组对比：#p<0.05，##p<0.01；与Rg3单体组对比：&p<0.05,&&P<0.01)
图8为Pluronic F127 Rg3胶束和Rg3单体联合阿霉素抑制肿瘤生长结果示意图。(其中，与正常对照组相比：*p<0.05，**p<0.01；与模型组对比：#p<0.05，##p<0.01；与Rg3单体组对比：&p<0.05，&&P<0.01)
图9为4T1-β细胞MTT结果示意图。(其中，与正常对照组相比：*p<0.05，**p<0.01；与模型组对比：#p<0.05，##p<0.01；与Rg3单体组对比：&p<0.05,&&P<0.01)
图10为MDA-MB-231细胞MTT结果示意图。(其中，与正常对照组相比：*p<0.05，**p<0.01；与模型组对比：#p<0.05，##p<0.01；与Rg3单体组对比：&p<0.05,&&P<0.01)
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例1
本发明以人参皂苷Rg3为模型药物，选择PluronicF127胶束作为聚合物材料，制备载人参皂苷Rg3胶束，以包封率、载药量和胶束溶液的稳定性为考察指标，在单因素试验的基础上，采用星点设计对混合胶束的处方和制备工艺进行优化，并对最优处方的理化性质进行表征。
实验方法
1、HPLC分析方法的建立：人参皂苷Rg3体外分析方法应用HPLC方法，色谱条件如下：(1)反相色谱柱；(2)流动相为乙腈：水＝50：50；(3)流速1mL/min；(4)检测波长：UV-203nm；(5)进样量：20μL；(6)出峰时间：9.3min；该方法专属性良好，对检测无干扰，分离度良好；在0.5-50μg/ml浓度范围内，色谱峰面积与浓度为线性关系；精密度符合检测要求。
2、制备方法：称取一定量的人参皂苷Rg3以及载体材料PluronicF127，溶解于适量乙腈中，待充分溶解后，于60℃下旋转蒸发除去有机溶剂，室温下置于真空干燥箱中过夜以除去残留溶剂得药膜骨架；加入适量去离子水进行水化，待其充分溶解后超声30min；将水化液用0.22μm醋酸纤维素酯膜过滤，得到透明的聚合物胶束溶液，冻干备用；制备无药胶束时除不加入药物外，其他步骤方法同上。
以上述方法制备胶束，载体材料总量为200mg，胶束包封率和载药量测定方法为：称取人参皂苷Rg3胶束10mg，加入适量乙腈，涡旋30s后超声离心15min，12000rpm离心15min后取上清液进样测定；采用Malvern粒度仪，以动态光散射法测定混合胶束的粒径及其分布。取胶束溶液适量，适当稀释后滴于覆盖碳膜的电镜铜网上，磷锡酸负染，室温干燥置于透射电镜下观察纳米粒的外观形态并拍照。
采用透析法考察PluronicF127Rg3胶束的体外释放行为，释放介质为含0.5％吐温的PBS溶液。本释放试验设计为Rg3完全释放后介质中Rg3浓度为2.0μg/ml。分别于0，15，30min和1，2，4，6，8，10，12，24，36，48，72h取样0.5ml，同时补入等量37°空白释放介质。釆用HPLC法测定释放样品中Rg3的浓度。
12只SD雄性大鼠(200±60g)，由北京维通利华公司提供；随机分为两组：人参皂苷Rg3胶束组(PF-Rg3)和人参皂苷Rg3单体组，分别每组六只；大鼠在给药前禁食12小时，并允许自由饮水。
单剂量口服Rg3 50mg/kg大鼠体重，两组药物均用生理盐水溶解；大鼠的血液样本(250μL)收集在肝素化1.5毫升的聚乙烯管内，口服给药后0，0.033，0.083，0.167，0.25，0.333，0.5，1，2，4，6，8，10，24，34，48h经眶下静脉收，血标本离心分离在7000g 10分钟，存放在20℃冰箱直到分析。
实验结果
结果如表1所示，PluronicF127质量分数为83.4％～95.3％，离子水体积为5～10m为较优制备工艺。
表1包封率星点优化表
实验结果表明，Rg3水溶液呈现混浊状，经包合后的PluronicF127Rg3胶束水溶液澄清透明，说明包合后可以增加Rg3的水溶性。
如图1所示，测得粒径大小均匀，PDI值较窄(PDI：0.339，PDI<0.5)，呈单峰分布，载药胶束粒径为49.44nm，包合后Rg3胶束粒径符合药用标准。将适当稀释的胶束置于透射电镜观察，图2可见载药胶束形态圆整，其粒径与动态光散射法测定的数据基本一致。
如图3所示，人参皂苷Rg3是难溶于水的药物，在水中溶解度极低，为了模拟在体内的释放行为，采用含0.5％的吐温的PBS溶液作为释放介质，可以达到所需条件，结果显示，72h内PluronicF127Rg3胶束中Rg3仅释约80％，这说明聚合物胶束不但具有增溶作用还具有缓释效应。
如图4所示，50mg/kg Rg3口服剂量后，大鼠血浆中PF-Rg3药时曲线下面积约1.3倍高于Rg3单体。这一结果表明，人参皂甙Rg3胶束能显著提高其生物利用度。
在本实施例中，以包封率为考察指标，在单因素考察的基础上，应用星点设计设计进行优化，得到较优处方为PluronicF127质量分数为83.4％～95.3％，离子水体积为5～10m。制备得到的粒径约为49.44nm，且单峰分布，外观呈圆球状，直径小于100纳米的Rg3胶束可以避免网状内皮系统(RES)的吸收从而延长药物体内循环时间，促进药物在病灶组织的分布，这种具有较小直径的Rg3胶束能够促进实体肿瘤通过高通透性和滞留效应(EPR)促进对药物的摄取；Rg3水溶性差是其口服生物利用低的主要原因，包合Rg3在内的PluronicF127胶束在水溶性方面相较于Rg3单体提高400-650倍，在37℃，pH值7.4的环境下，经72小时约80％的Rg3从Rg3胶束中被释放，表明PluronicF127Rg3胶束在体外具有缓释效应，且增加Rg3的口服生物利用度。
实施例2
阿霉素可以引发剂量依赖性充血性心力衰竭和心肌病变，致使心肌损伤，严重影响心肌的收缩及舒张功能；本发明通过对阿霉素心脏毒性损伤后小鼠的心功能和线粒体功能进行评价，验证Rg3胶束与Rg3单体对于阿霉素心脏毒性的治疗效果。
动物选取以及实验试剂配置、给药
8周龄健康C57BL/6J小鼠，雌雄各半，体重18±2g，SPF级，合格证号为11401300027002，由北京市华阜康生物科技股份有限公司供，许可证号为SCXK(京)2014-0004。以上动物均在中国医学科学院放射医学研究所清洁级动物房饲养，室温20～25℃，相对湿度40～60％，小鼠采用标准饲养方式，明暗环境各12h交替，适应性饲养一周进行实验。
含10mg/ml浓度的Rg3的PluronicF127Rg3胶束：称取210mgPluronic F127 Rg3胶束，溶于1ml生理盐水中，4℃储存备用。
10mg/ml浓度的Rg3混悬液：称取10mg人参皂苷Rg3单体，溶于1ml生理盐水中，4℃储存备用。
20mg/ml阿霉素溶液：称取20mg注射用盐酸多柔比星，加入1ml生理盐水，超声溶解后4℃储存备用。
2,2,2-三溴乙醇溶液：称取0.375g2,2,2-三溴乙醇粉末，加1ml叔戊醇溶解，于40℃水浴中避光孵育2h，待完全溶解后加入24ml超纯水稀释，经0.22μl微孔滤膜滤过后置于4℃储存备用。
8周龄C57BL/6J小鼠，雌雄各半，适应性饲养一周后，随机分为4组，分别为：正常对照组(Control)，模型组(Model)，Pluronic F127对照组(PF127)，PluronicF127Rg3胶束组(P-Rg3)，Rg3组(Rg3)。用量计算，实验前配制，按每10g给予0.13ml药物的体积每日灌胃一次。正常对照组和模型组均以灌胃方式给予等体积的生理盐水。
实验方法
1、模型制备：造模采用腹腔一次性注射20mg/kg小鼠体重的阿霉素。空白对照组腹腔给予等体积的生理盐水。造模后一天开始给予治疗药物，Pluronic F127 Rg3胶束组和Rg3组均灌胃给予剂量为含Rg310mg/kg小鼠体重的药物，每日一次，持续2周，末次给药后，进行后续实验。
2、死亡率统计：给药过程中每天记录各组小鼠死亡情况。
3、超声心动监测：进行小鼠心动超声检测，超高分辨率小动物超声实时影像系统开机后待用，将探头MS-400固定，升降台调节探头高度，旋转调节探头方向。将小鼠称重后标记，用异氟烷麻醉(完全麻醉：1％氧气+5％异氟烷于麻醉盒内麻醉；持续麻醉：1％氧气+2％异氟烷)。用胶带将小鼠腹部向上固定于操作台，胸部褪毛，均匀涂抹一层超声耦合剂于小鼠胸部，将操作台向右下倾斜30左右，并通过X、Y微调操作台位置。胸骨旁长轴，选取B型超声长轴切面(二维成像)，可见左心室，主动脉和二尖瓣瓣叶，获得图像；位置不变，选取M型超声长轴切面，获得M型超声图像。对M型超声图像进行测量，选择长轴测量包(PLAX)对小鼠收缩期和舒张期进行测量，获得左室前壁厚度(LVAW)、左室内径(LVID)、左室后壁厚度(LVPW)、左室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)的收缩期和舒张期值等数值。对每一只小鼠均取三个心动周期进行测量，求取平均值。
4、统计学处理：实验数据用SPSS17.0软件包进行统计学处理。实验结果以均数±标准差进行表示，组间比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)。P<0.05为差异有统计学意义。
实验结果
1、m-Rg3减少阿霉素引起的C57/BL小鼠死亡率：实验中记录每组30只小鼠的存活情况，生存率结果显示，在阿霉素诱发心脏毒性小鼠模型中，除正常组小鼠外，其余各组小鼠都有不同程度的死亡。实验终点时，模型组小鼠死亡21只，死亡率为70％。Rg3单体给药组小鼠死亡18只，死亡率为60％，而PF-Rg3组小鼠死亡15只，死亡率为45％，与模型组相比具有更为明显的改善，表明PF-Rg3相较于Rg3单体具有更明显减少阿霉素引起的C58/BL小鼠死亡率的效果，实验结果如图5所示。
2、PF-Rg3明显改善阿霉素诱导的心功能障碍：心功能障碍是阿霉素诱发心脏毒性时心脏的主要功能性改变，本发明对实验各组小鼠的心脏进行超声心动检测，图6A～6E为M型超声心动检测的典型图，从图中可以看出，阿霉素引起的心功能障碍主要表现为心室腔扩张，左室室壁运动减弱，而给予药物治疗后明显抑制了心室腔的扩张，改善左室室壁运动状态。临床上，射血分数(EF％)、左室短轴缩短率(FS％)是评价心脏收缩舒张功能的重要指标。因此，本发明对小鼠超声心动检测的结果进行了统计，实验结果如图7A～7H显示，阿霉素能够显著降低小鼠心脏的射血分数(EF％)和短轴缩短率(FS％)(P<0.01)，同时伴随着左室室腔腔(LVID)的扩张(舒张期p<0.01，收缩期p<0.05)，左室室壁厚度(LVAW)减少(收缩期具有显著性，p<0.01；舒张期有降低趋势但无统计学意义)，室间隔厚度显著性减少(舒张期p<0.01，收缩期p<0.05)。而给予药物治疗后，EF％和FS％明显增加(PF-Rg3组，P<0.01；Rg3组P<0.05)。左室室腔扩张情况得到不同程度的改善，舒张期PF-Rg3组改善显著(P<0.05)，Rg3组有趋势但无统计学意义，收缩期左室室腔扩张情况PF-Rg3组与Rg3组均有显著改善(P<0.01)。舒张期左室室壁厚度PF-Rg3组与Rg3组均有增加趋势但无统计学意义，收缩期PF-Rg3组左室室壁厚度增加(P<0.05)，Rg3组有趋势但无统计学意义。室间隔厚度PF-Rg3组与Rg3组均有显著增加(P<0.05)。综上结果，人参皂苷Rg3可以改善阿霉素引起的心功能障碍，改善心室腔的扩张以及左室壁的运动状态，而载Rg3的PluronicF127胶束改善效果优于Rg3单体。
在本实施例中，本发明通过制备阿霉素诱导的心脏毒性小鼠模型来验证Rg3胶束和Rg3单体的治疗效果，给药期间对各组小鼠死亡率进行统计，并且在经14天给药结束后，本发明对各个实验组小鼠进行了心功能评价，实验结果指示出急性阿霉素心脏毒性小鼠具体表现为左心室扩张以及左室收缩功能减弱，Rg3胶束组和Rg3单体组在心功能方面均有不同程度的改善，两者均可不同程度的减轻阿霉素引起的射血分数和短轴缩短率降低，显著改善阿霉素引起的小鼠心室扩张，因此，Rg3胶束及Rg3单体均可改善阿霉素诱导的小鼠心功能障碍，并且Rg3胶束组治疗效果显著优于Rg3单体组。
实施例3
本实施例应用在体小鼠乳腺癌模型、离体肿瘤细胞和多药耐药细胞，评价Rg3胶束在体内、体外联合阿霉素的抗肿瘤效果。
实验方法
动物来源：8周龄健康Bra-BC小鼠，雌雄各半，体重18±2g，SPF级，合格证号为11401300027002，由北京市华阜康生物科技股份有限公司供，许可证号为SCXK(京)2014-0004。以上动物均在中国医学科学院放射医学研究所清洁级动物房饲养，室温20～25℃，相对湿度40～60％，小鼠采用标准饲养方式，明暗环境各12h交替，适应性饲养一周进行实验。
主要溶液的配置：含10mg/ml浓度的Rg3的PluronicF127Rg3胶束：称取210mgPluronic F127 Rg3胶束，溶于1ml生理盐水中，4℃储存备用；10mg/ml浓度的Rg3混悬液：称取10mg人参皂苷Rg3单体，溶于1ml生理盐水中，4℃储存备用；10mg/ml阿霉素溶液：称取10mg注射用盐酸多柔比星，加入1ml生理盐水，超声溶解后4℃储存备用。
实验分组及给药：8周龄Bra-BC小鼠，雌雄各半，适应性饲养一周后，随机分为4组，分别为：正常对照组(Control)，模型组(Model)，PluronicF127Rg3胶束组(P-Rg3)，Rg3组(Rg3)。用量计算，实验前配制，按每10g给予0.13ml药物的体积每日灌胃一次。正常对照组和模型组均以灌胃方式给予等体积的生理盐水。除正常对照组外，其余各组腹腔注射阿霉素3mg/kg每3天1次，共计4次，正常对照组给予同等剂量的生理盐水。
细胞来源：4T1-β人乳腺癌细胞南京凯基生物技术有限公司，MDA-MB-231人乳腺癌耐药细胞南京凯基生物技术有限公司。
肿瘤心肌细胞的复苏、传代及冻存：细胞从液氮中取出后，直接于37-40℃温水中，迅速摇动并不断观察融化情况，避免温度过高使细胞损伤。然后在无菌条件下，吸出细胞冻存液，移至离心管并加入DMEM培养基。800rpm离心3min，去除上清液，再重复用培养基洗涤一次。加入足量培养液轻轻吹打成为细胞悬液，移入培养瓶(接种密度为5×105个/ml)，置于5％CO2、37℃,饱和湿度的培养箱内培养，24h后更换培养基继续培养；
根据已有的细胞倍增时间进行细胞消化和传代，待细胞处于对数生长期或铺满培养瓶底后，吸弃瓶内培养基，PBS洗去残留的培养液，加入1ml0.25％的胰酶，晃动培养瓶保证胰酶与细胞充分接触，置于37℃培养箱，1min后于显微镜下进行观察细胞形态，若胞质出现回缩，成球形，立即吸弃消化液，加入全培养基终止消化，反复吹打贴壁的细胞形成单细胞悬液。细胞计数后，取1/3的混悬液接种于新的培养瓶内，置于5％CO2、37℃饱和湿度的培养箱内继续培养；
细胞冻存前24h更换培养基，待细胞铺满瓶壁80％以上时，消化、离心收集细胞以含10％DMSO、20％FBS的DMEM培养基调整细胞浓度至108个/ml，分装于冻存管中，1.5ml/管，放入冻存盒中于-80℃冰箱中24h后存放于液态氮中保存。
种板给药：4T1-β及MDA-MB-231细胞以含10％FBS的DMEM含酚红的培养基常规培养，增殖实验前一代换为10％CS-FBS无酚红的DMEM培养。至80％融合时取状态良好的细胞胰酶消化，用1％CS-FBS无酚红的DMEM以5000个细胞每孔接种于96孔板。37℃，5％CO2培养箱中培养24h后，细胞贴壁良好，铺展生长。此时吸去培养液，用D-Hank’s液200μl每孔洗涤1次，加入含有不同浓度药物的1％CS-FBS无酚红的DMEM继续培养72h。设溶剂对照组(0.1％DMSO)、DOX组(5μM)、Rg3+DOX各浓度组、P-Rg3+DOX各浓度组。
MTT测定：加药处理72h后，取出培养板，小心吸弃培养液，加入MTT试剂，使其终浓度为5mg/ml。用锡箔纸包裹培养板，37℃孵育4h。吸弃MTT试剂，加入DMSO，100μl/孔。振荡器上振荡15min，490nm处检测OD值。
乳腺癌小鼠模型的制备：根据已有的细胞倍增时间进行细胞消化和传代，待细胞处于对数生长期或铺满培养瓶底后，吸弃瓶内培养基，PBS洗去残留的培养液，加入1ml0.25％的胰酶，晃动培养瓶保证胰酶与细胞充分接触，置于37℃培养箱，1min后于显微镜下进行观察细胞形态，若胞质出现回缩，成球形，立即吸弃消化液，加入全培养基终止消化，反复吹打贴壁的细胞形成单细胞悬液。细胞计数为1000万个细胞/ml，每只老鼠腋下皮下注射0.1ml细胞悬液，14天后肿瘤长为黄豆大小即可。
实验结果
通过向Bra-BC小鼠腋下抑制4T1β乳腺癌细胞制备乳腺癌小鼠模型，抑制肿瘤细胞数量为104个/只，移植后7天成瘤，且肿瘤大小均匀。经给药14天后，取各组小鼠肿瘤组织称重。结果显示，阿霉素可以明显抑制肿瘤的重量，阿霉素联合Rg3单体抑制效果更优，阿霉素联合PF-Rg3胶束抑制肿瘤重量效果最优，这与PF-Rg3胶束缓释且直径小于100nm易被肿瘤吸收有关，实验结果如图8所示。
在本实施例中，MTT结果显示，阿霉素可以显著抑制4T1β乳腺癌细胞活力(p<0.05)，且PF-Rg3胶束联合阿霉素组相较于阿霉素组抑制效果更显著(p<0.01)，实验结果如图9所示。针对阿霉素易造成癌细胞化疗药耐药性(MDR)，通过对阿霉素耐药乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞进行实验，评价Rg3单体及PF-Rg3胶束是否具有肿瘤细胞增敏效果。实验结果显示，阿霉素0.5μM和1μM两个浓度作用于MDA-MB-231细胞后，细胞活力无变化，且阿霉素联合Rg3单体细胞活力也无差异，PF-Rg3胶束联合阿霉素在两个浓度下均可显著降低MDA-MB-231细胞活力，且成阿霉素计量相关性降低，证明PF-Rg3胶束可以增加耐药乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性，实验结果如图10所示。
Rg3胶束抑制阿霉素心脏毒性的基础上，对阿霉素联合Rg3胶束应用的抗肿瘤能力进行了评价；本发明中对乳腺癌小鼠进行实验验证，结果显示出联合应用后能够更加有效地抑制乳腺癌生长，并且Rg3胶束联合应用后的效果要优于Rg3单体。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (7)

1.一种包裹人参皂苷Rg3的球形胶束的制备方法，其特征在于，包括：
称取人参皂苷Rg3以及载体材料，溶解于适量有机溶剂中，待充分溶解后除去有机溶剂，室温下置于真空干燥箱中；
加入适量去离子水进行水化，待其充分溶解后超声；
将超声后的水化液用滤膜过滤，得到透明的聚合物胶束溶液，冻干得到所述球形胶束。
2.如权利要求1所述的包裹人参皂苷Rg3的球形胶束的制备方法，其特征在于，所述载体材料为PluronicF127。
3.如权利要求1或2所述的包裹人参皂苷Rg3的球形胶束的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为乙腈，所述载体材料PluronicF127质量分数为83.4％～95.3％，所述去离子水体积为5～10ml。
4.一种包裹人参皂苷Rg3的球形胶束，其特征在于，使用如权利要求1-3所述的制备方法得到：所述球形胶束的纳米粒径为40～100nm，并且所述人参皂苷Rg3包裹在所述球形胶束内部，所述载体材料PluronicF127亲水基团在外部。
5.如权利要求4所述的包裹人参皂苷Rg3的球形胶束，其特征在于，所述球形胶束的纳米粒径为49.44nm。
6.使用权利要求5所述的包裹人参皂苷Rg3的球形胶束在减轻阿霉素诱导心脏毒性的应用。
7.使用权利要求5所述的包裹人参皂苷Rg3的球形胶束在联合阿霉素抗肿瘤的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108420793A (zh) * 2017-12-26 2018-08-21 厦门本素药业有限公司 一种空白混合胶束及其制备方法和应用
CN114504558A (zh) * 2022-02-22 2022-05-17 云南中医药大学 一种治疗关节炎的缓释制剂及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102755298A (zh) * 2012-02-07 2012-10-31 李万忠 白藜芦醇冻干聚合物胶束的制备方法及应用
CN103271891A (zh) * 2013-04-28 2013-09-04 福建南方制药股份有限公司 人参皂苷纳米胶束及其制备方法、应用和药物组合物
CN104163915A (zh) * 2013-05-16 2014-11-26 沈阳药科大学 胆固醇-泊洛沙姆-胆固醇三嵌段共聚物及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102755298A (zh) * 2012-02-07 2012-10-31 李万忠 白藜芦醇冻干聚合物胶束的制备方法及应用
CN103271891A (zh) * 2013-04-28 2013-09-04 福建南方制药股份有限公司 人参皂苷纳米胶束及其制备方法、应用和药物组合物
CN104163915A (zh) * 2013-05-16 2014-11-26 沈阳药科大学 胆固醇-泊洛沙姆-胆固醇三嵌段共聚物及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
陈莉莉等: "人参皂苷Rg3拮抗阿霉素导致的心肌细胞损伤作用机制研究", 《南开大学学报》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108420793A (zh) * 2017-12-26 2018-08-21 厦门本素药业有限公司 一种空白混合胶束及其制备方法和应用
WO2019128608A1 (zh) * 2017-12-26 2019-07-04 厦门本素药业有限公司 一种空白混合胶束及其制备方法和应用
CN108420793B (zh) * 2017-12-26 2021-09-24 厦门本素药业有限公司 一种空白混合胶束及其制备方法和应用
CN114504558A (zh) * 2022-02-22 2022-05-17 云南中医药大学 一种治疗关节炎的缓释制剂及其制备方法
CN114504558B (zh) * 2022-02-22 2023-06-09 云南中医药大学 一种治疗关节炎的缓释制剂及其制备方法

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