CN107299111A - 检测MOG‑IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件制备、CBA检测试剂盒及其应用 - Google Patents

检测MOG‑IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件制备、CBA检测试剂盒及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种检测MOG‑IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件制备、CBA检测试剂盒及其应用，细胞爬片组件的制备方法为：S1：MOG质粒构建；S2：过表达MOG基因的慢病毒包装；S3：过表达MOG基因的细胞株(MOG‑293T细胞株)构建；S4：细胞爬片组件的制备。所述试剂盒包括细胞爬片组件、抗人IgG‑FITC二抗、封闭液、PBS和封片剂；采用该试剂盒可进行临床样品MOG自身免疫IgG抗体检测。本发明的试剂盒操作简单，检测的特异性强，灵敏度高，实验结果重复性好，能够进行推广应用，并可用于临床样品MOG自身免疫IgG抗体的检测。

Description

检测MOG-IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件制备、CBA检测试 剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及生物、医学领域中的自身免疫性疾病及临床自身免疫 IgG抗体检测分析领域，具体涉及一种基于细胞的间接免疫荧光检测 (cell-based assays，CBA)试剂盒制备与临床血样、脑脊液样品中MOG 自身免疫性抗体的CBA快速检测技术，是一种快速完成MOG自身免疫抗体检测的有效方法，即本发明具体涉及一种用于临床样品MOG自身免疫IgG抗体检测的CBA检测试剂盒用的细胞爬片组件的制备、CBA 检测试剂盒及应用。
背景技术
髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MyelinOligodendrocyte Glycoprotein， MOG)由218个氨基酸组成，是免疫球蛋白超家族中的一员，在中枢神经系统特异性的表达，仅存在于少突胶质细胞和中枢神经系统髓鞘表面。MOG在神经发育过程中表达相对较晚，提示其是一个重要的少突胶质细胞成熟的表面标志物，参与髓鞘的完整性、黏附、细胞表面交互作用等。以往研究表明，MOG作为中枢神经系统的靶抗原同时参与了体液免疫和细胞介导的免疫反应。
现有检测抗原抗体的方法都是利用抗原抗体免疫结合原理为基础开展的，最为人熟知的两种免疫学经典实验方法：酶联免疫吸附法(enzyme linked Immuno sorbentassay，ELISA)和蛋白印迹法(Westernblots)。 ELISA指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。Westernblot 法是一种将电泳与免疫结合起来的技术，可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性，是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。
现有技术的缺点：现有的研究已发现MOG具有不同的表位，包括线性肽段表位、构象表位及糖基化表位。只有识别MOG的天然的(完整形态的)非连续构象表位抗体才具有诱发脱髓鞘的潜力，而识别变性的线性肽段表位的MOG-IgG抗体并不具备致病的能力。在进行ELISA 或Westernblots检测时，抗原需要先抽提纯化(ELISA)或变性(Western blots)后才能进行下游实验。其很可能导致检测到的MOG-IgG其实只是识别MOG蛋白线性肽段表位的MOG抗体。并不适合用于检测识别天然MOG蛋白的非连续构象表位的MOG-IgG抗体。因此ELISA与 Westernblot检测方法无法做临床样品检测所需的高灵敏度与特异性。这也导致实验结果重复性差，甚至互相矛盾。虽然众所公认MOG抗体与人类脱髓鞘性疾病关系密切，但其机制研究一直没有重大进展。所以，正确选择抗MOG抗体的检测方法非常重要。
近年来，用CBA方法检测MOG-IgG抗体的方法已经越来越得到各方重视，国外也已有公司把目光投向了这个领域。但不管国内国外，几乎所有的尝试都仅限于以基础科研为目的的探索，并未进行进一步临床验证实验。且在国内并没有相关检测产品的生产与销售。该试剂的研发成功将有利于临床样品的MOG-IgG检测及对应疾病的诊断、治疗。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是提供一种用于临床样品MOG自身免疫 IgG抗体检测的CBA检测试剂盒及其制备与应用方法，以解决了现有技术中的不足。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现：
一种检测MOG-IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
S1：MOG质粒构建：从人的体细胞中抽提总mRNA，并反转录成 cDNA，设计MOG特异性PCR引物，扩充出全长MOG cDNA，并将该MOG cDNA连接到质粒载体上进行转化，扩增抽提，得到MOG质粒；
S2：过表达MOG基因的慢病毒包装：将MOG质粒和作为对照的空载体质粒分别与病毒包装体系质粒共转染进细胞中；转染后，获得病毒感染细胞，即得到过表达MOG的病毒颗粒和由空载体质粒转染所得到的不表达MOG的对照病毒颗粒；
S3：过表达MOG基因的细胞株(MOG-293T细胞株)构建：接种细胞，用上述所得的过表达MOG的病毒颗粒和不表达MOG的对照病毒颗粒分别感染所接种的细胞；感染后，筛选过表达MOG-293T细胞株与 Vector-293T细胞株，将其进行冻存保种；
S4：MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件的制备
①接种步骤S3中所得到的过表达MOG-293T细胞株与Vector-293T 细胞，并保证二者接种的细胞量相近；②待细胞融合度达到80-100％，除去培养Vector-293T细胞和过表达MOG-293T细胞株的培养基，加入多聚甲醛，0～10℃固定过夜；③PBS洗涤细胞，风干，则MOG-IgG CBA 检测用细胞爬片组件制备完成。
进一步地，步骤S1中，所述的MOG特异性PCR引物的正向引物序列为：ATGGCAAGCTTATCAAGACCC，反向引物序列为： GAAGGGATTTCGTAGCTCTTC。
进一步地，步骤S1中，所述MOG质粒构建的具体过程为：(1)以人神经少突胶质细胞为材料，抽提总mRNA，并利用反转录试剂盒将 mRNA反转录成cDNA；(2)设计MOG特异性PCR引物，扩充出全长 MOG cDNA，并将所得MOG cDNA进行克隆，然后连接到质粒载体上，所述质粒载体为pLVX-IRES-mcherry慢病毒质粒载体；(3)将质粒进行转化、摇菌，扩增抽提，得到MOG质粒；
进一步地，在步骤S2中，所述过表达MOG基因的慢病毒包装的过程为：接种HEK293T细胞，待细胞融合度达到80-90％，借助转染试剂，将所得的MOG质粒和作为对照的空载体质粒pLVX-IRES-mcherry分别与病毒包装体系质粒psPAX2和PMD2.G均按照质量比2:2:1的比例一起共转染至HEK293T细胞；转染40～55小时后，收取含病毒颗粒的细胞培养基上清；上清经超滤法浓缩，获得浓缩后高滴度的病毒颗粒，即病毒感染细胞；然后进行病毒滴度验证，确保病毒滴度合格，则得到过表达MOG的病毒颗粒和不表达MOG的对照病毒颗粒。
进一步地，在步骤S3中，所述过表达MOG基因的细胞株(MOG-293T 细胞株)构建过程为：接种HEK293T细胞，待细胞融合度达到40-50％，借助感染试剂，用步骤S2中所得的过表达MOG的病毒颗粒和不表达 MOG的对照病毒颗粒分别感染HEK293T细胞；感染48～72小时后，进行抗生素筛选，并采用未进行病毒转染的HEK293T细胞做为抗生素筛选对照组，当对照组的HEK293T细胞被杀死后，完成筛选，则筛选好的细胞即为过表达MOG-293T细胞株与Vector-293T细胞株。
进一步地，在步骤S3中，所述的转染试剂为阳离子聚合物 polybrene(聚凝胺，即溴化己二甲铵)，其能够加强病毒的感染效率；感染48～72小时后，进行抗生素嘌呤霉素筛选；接种HEK293T细胞的培养基为成分以及各种成分的加量为：DMEM培养基+10％胎牛血清+1000U青霉素+1000mg/L链霉素。
进一步地，在步骤S4中，培养Vector-293T细胞和过表达MOG-293T 细胞株的培养基均为：DMEM培养基+10％胎牛血清+1000U青霉素 +1000mg/L链霉素。
进一步地，在步骤S4中，将过表达MOG-293T细胞株与Vector-293T 细胞株分别接种于可拆卸的12小室载玻片中，其中，6室接种过表达 MOG-293T细胞株，6室接种Vector-293T细胞株，并保证每个小室所接种的细胞量相近；除去培养Vector-293T细胞和过表达MOG-293T细胞株的培养基，用PBS洗涤细胞2次，加入200ul 4％多聚甲醛，4℃固定过夜。
一种用于临床样品MOG-IgG检测的CBA检测试剂盒，所述试剂盒包括MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件、抗人IgG-FITC二抗、封闭液、10×PBS和封片剂；所述MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件由含有小室的载玻片或爬片、Vector-293T细胞和MOG-293T细胞制备而成，具体地，含有小室的载玻片为含有多个小室的可拆卸载玻片，其中，多个小室含MOG-293T细胞，多个小室含Vector-293T细胞。
进一步地，所述封片剂为抗荧光漂白封片剂；所述封闭液为10％山羊血清。
一种CBA检测试剂盒的应用方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将以上步骤S4中所制备的Kit室温平衡10min，加入10％山羊血清，37℃封闭40分钟；
(2)将临床血清或脑脊液样品用PBS 1:100稀释，37℃孵育1小时；
(3)PBS洗涤细胞两次，加入稀释好的抗人IgG-FITC二抗，37℃避光孵育30分钟；
(4)PBS洗涤细胞两次；
(5)滴加封片剂封片，荧光显微镜镜检、拍照。
本发明至少具有以下有益效果：
本发明提供了一种检测MOG-IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件制备、CBA检测试剂盒及其应用，其通过本申请特定的方法制备使得能够采用试剂盒来检测MOG-IgG抗体，而且检测的特异性强，灵敏度高，实验结果重复性好，能够进行推广应用，这在临床上具有极其重要的意义。
此外，本发明针对现有技术的不足，依据抗体特异性识别抗原蛋白特定表位。相对于ELISA和WB检测方法，CBA检测法中的MOG抗原可以完全呈现出体内MOG的特点，进行抗体阳性检测更能客观的反应临床 MOG-IgG抗体与疾病的关系。
在试剂盒的优化方面，相比传统利用96孔板接种细胞或用盖玻片制作细胞爬片进行试验，将两种不同细胞分别接种于特殊的可拆卸的12 小室载玻片上，十分方便后续的实验操作。过表达与对照细胞在一个板中左右排布，也方便了后续实验结果的对比，可显著提高实验判断的准确性。经实验验证，制成的试剂盒可轻松保存、运输且不影响检测效果。
附图说明
图1是本发明实施例所述的MOG-血清对Vector-293T细胞染色示意图；
图2是本发明实施例所述的MOG-血清对MOG-293T细胞染色示意图；
图3是本发明实施例所述的MOG+血清对Vector-293T细胞染色示意图；
图4是本发明实施例所述的MOG+血清对MOG-293T细胞染色示意图；
图5是本发明实施例所述的ELISA检测法的结果示意图；
图6是本发明实施例所述的CBA检测试剂盒的结果示意图；
图7是本发明实施例所述的过表达MOG基因的慢病毒包装的制备流程图；
图8是本发明实施例所述的做复孔和不做复孔的临床样品稀释示意图；
图9是本发明实施例所述的试剂盒制备与检测运用步骤流程图。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。以下提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通方法人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种用于临床样品MOG自身免疫IgG抗体检测的CBA检测试剂盒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
S1：MOG质粒构建
(1)以人神经少突胶质细胞为材料，抽提总mRNA；
(2)利用反转录试剂盒将mRNA反转录成cDNA；
(3)设计MOG特异性PCR引物，扩充出全长MOG cDNA；所述的 MOG特异性PCR引物的正向引物序列为：ATGGCAAGCTTATC AAGACCC，反向引物序列为：GAAGGGATTTCGTAGCTCTTC；
(4)将扩增所得MOG cDNA进行克隆，连接到pLVX-IRES-mcherry 慢病毒质粒载体上；
(5)然后将pLVX-IRES-mcherry慢病毒质粒进行转化、摇菌，进行扩增抽提，得到MOG质粒；
S2：过表达MOG基因的慢病毒包装，参见图7所示的流程概括图。
(1)将HEK293T细胞接种于6孔板中，每孔接种1×106左右细胞；
(2)待细胞融合度达到80-90％，借助转染试剂，将步骤S1中所得到的MOG质粒和作为对照的空载体质粒pLVX-IRES-mcherry分别与病毒包装体系质粒psPAX2和PMD2.G，均按照质量比2:2:1比例一起共转染进 HEK293T细胞，即MOG质粒:psPAX2:PMD2.G＝2:2:1，空载体质粒 pLVX-IRES-mcherry:psPAX2:PMD2.G＝2:2:1；所述转染试剂可为 life公司的lipofectemin 3000转染试剂。
(3)转染48小时后，收取含病毒颗粒的细胞培养基上清；上清经超滤法浓缩，获得浓缩后高滴度的病毒颗粒，即病毒感染细胞，即过表达 MOG基因的慢病毒包装。
(4)病毒滴度验证，确保病毒滴度合格，得到过表达MOG的病毒颗粒和由空载体质粒转染所得到的不表达MOG的对照病毒颗粒。
S3：过表达MOG基因的细胞株(MOG-293T细胞株)构建
(1)将HEK293T细胞接种于6孔板中，每孔接种1×106左右细胞；
(2)待细胞融合度达到40-50％，借助感染试剂，用步骤S2中所得的过表达MOG的病毒颗粒和不表达MOG的对照病毒颗粒分别感染所接种的HEK293T细胞；此处的转染试剂优选为polybrene(聚凝胺，即溴化己二甲铵)，一种阳离子聚合物，其能够加强病毒的感染效率。
(3)感染50小时后，进行抗生素puromycin(嘌呤霉素)筛选，并用未进行病毒转染的HEK293T细胞作为抗生素筛选的对照组，大约4-6天，当对照组的HEK293T细胞全部被安全杀死后，完成筛选；
(4)筛选好的细胞即为过表达MOG-293T稳定细胞株(即过表达 MOG基因的细胞株)与Vector-293T细胞株，该Vector-293T细胞株即为不表达MOG的对照病毒颗粒感染HEK293T细胞得到的，将其均进行冻存保种；
S4：MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件的制备
(1)同时复苏步骤S3中冻存的过表达MOG-293T细胞株与 Vector-293T细胞株。
(2)待细胞数量足量后接种于可拆卸的12小室载玻片中，接种方法为12小室载玻片的一排(共6室)接种过表达MOG-293T细胞株，另外一排(共6室)接种Vector-293T细胞株，且保证每个小室的细胞量相近，接种布局如下表所示；接种过表达MOG-293T细胞株的培养基成分以及各种成分的加量为：DMEM培养基+10％胎牛血清+1000U青霉素+1000mg/L 链霉素，接种Vector-293T细胞的培养基成分以及各种成分的加量为： DMEM培养基+10％胎牛血清+1000U青霉素+1000mg/L链霉素；
(3)待细胞融合度达到80-100％，去掉上述两种细胞的培养基，用 PBS洗涤细胞2次，加入200ul 4％多聚甲醛，4℃固定过夜。
(4)PBS洗涤细胞两次，倒置自然风干，MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件制备完成，即完成检测MOG-IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件的制备；制备好的MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件可-80℃冻存保存12月以上，-20℃保存1个月以上。
该实施例可同时准备抗人IgG-FITC二抗、封闭液、10×PBS和抗荧光漂白封片剂，得到CBA检测试剂盒，便可直接检测临床样本中的 MOG-IgG。
实施例2
一种用于临床样品MOG自身免疫IgG抗体检测的CBA检测试剂盒，所述试剂盒包括抗人IgG-FITC二抗、封闭液、10×PBS、抗荧光漂白封片剂以及MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件；封闭液优选为10％山羊血清。
优选地，MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件由含有小室的载玻片或爬片、Vector-293T细胞和MOG-293T细胞制备而成，具体地，含有小室的载玻片为含有12个小室的可拆卸载玻片，其中，6室含MOG-293T细胞， 6室含Vector-293T细胞，具体的制备方法参见实施例1的步骤S4。
实施例3
一种CBA试剂盒的应用方法，即采用试剂盒的检测方法包括以下步骤：
Step1：实施例1所制备完成的MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件或实施例2所述的MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件(简称细胞爬片组件) 可-80℃冻存保存12月以上，-20℃保存1个月以上。
Step2：取临床血清或脑脊液样品，如不能马上使用应立即分离后 -80℃保存，以最大限度保证样品中蛋白自然活性；
Step3：根据待测样品数量，决定所需细胞爬片组件数量，如不做复孔，一个细胞爬片组件可检测6个样品；如做复孔，一个细胞爬片组件可检测3个样品，。
Step4：将冻存保存的细胞爬片组件室温平衡10min，加入10％山羊血清，37℃封闭40分钟；
Step5：将临床血清或脑脊液样品用10×PBS按1:100稀释，按图8所示，每个小室100ul，37℃孵育1小时；
Step6：10×PBS洗涤细胞两次，加入稀释好的抗人IgG-FITC二抗(购买厂家：Abcam，艾博抗(上海)贸易有限公司)，37℃避光孵育30分钟；
Step7：10×PBS洗涤细胞两次，去除载玻片上小室的四周；
Step8：滴加抗荧光漂白封片剂封片，荧光显微镜镜检、拍照。
CBA试剂盒的制备与检测运用大体步骤流程概括如图9所示。
实施例4
为了进一步验证CBA检测试剂盒，取MOG-血清(MOG阴性血清) 和MOG+血清(MOG阳性血清)按照实施例3中的方法进行验证，通过最后荧光拍照，KIT(即试剂盒)可非常直观判断出样品中MOG-IgG是阴性还是阳性。
结果显示，MOG-血清在Vector-293T细胞及MOG-293T细胞两组染色都为阴性，分别如图1和图2所示；而MOG+血清对ector-293T细胞染色为阴性，如图3所示，然而，MOG+血清能够特异性识别MOG-293T 组，显出绿色荧光，如图4所示，需要说明的是，将图4改为无色彩图片后降低了实际的显色效果。
实施例5
选取临床NMO/NMOSD(视神经脊髓炎/视神经脊髓炎谱系病)患者血清40例，其中20例AQP4+，20例AQP4-。另外，选取对照正常人血清(NC)20例，一共60例样品进行ELISA法和CBA发检测MOG-IgG 检测。
ELISA检测显示MOG-IgG浓度≥200pg的，AQP4+2例，AQP4-6 例，NC 2例，如图5所示。而CBA检测试剂盒检测结果显示只有2个 MOG-IgG阳性，且只存在于AQP4-中，如图6所示。CBA检测结果与临床症状相符，则相对于ELISA检测法，本发明所述的CBA检测试剂盒的检测方法准确性更高，其明显高于ELISA法。
在本发明中，基于细胞的间接免疫荧光检测(cell-based assays，CBA) 是近年来兴起的一种细胞检测方法，在该方法中，通过体外转染的方式将表达人类MOG蛋白的基因转染到哺乳细胞HEK293T中，转染后的细胞在细胞膜表面表达MOG蛋白。在细胞表面MOG蛋白能保持人体体内一样的天然跨膜折叠结构。检测时，样品中的MOG-IgG抗体可特异性的识别MOG膜外结构域，借助带特定荧光基团标签的抗人IgG抗体与样品中MOG-IgG结合，使用显微镜观测或流式细胞仪进行定量定性分析。
本发明所使用的最原始的HEK293T细胞的购置厂家为ATCC (American typeculture collection，美国模式培养物集存库)，可留种保存。
在本发明中，多个小室的可拆卸载玻片可为在载玻片上设置多个能够接种细胞的小室，具体如图9所示；带小室的载玻片可用其他同类设备代替，只要能够实现本发明的功能便可。
以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明，对于本领域技术人员而言，本发明可以有各种改动和变化。凡在本发明的精神和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测MOG-IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
S1：MOG质粒构建：从人的体细胞中抽提总mRNA，并反转录成cDNA，设计MOG特异性PCR引物，扩充出全长MOG cDNA，并将该MOG cDNA连接到质粒载体上进行转化，扩增抽提，得到MOG质粒；
S2：过表达MOG基因的慢病毒包装：将MOG质粒和作为对照的空载体质粒分别与病毒包装体系质粒共转染进细胞中；转染后，获得病毒感染细胞，即得到过表达MOG的病毒颗粒和由空载体质粒转染所得到的不表达MOG的对照病毒颗粒；
S3：过表达MOG基因的细胞株构建：接种细胞，用上述所得的过表达MOG的病毒颗粒和不表达MOG的对照病毒颗粒分别感染所接种的细胞；感染后，筛选过表达MOG-293T细胞株与Vector-293T细胞株，将其进行冻存保种；
S4：MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件的制备
①接种步骤S3中所得到的过表达MOG-293T细胞株与Vector-293T细胞，并保证二者接种的细胞量相近；②待细胞融合度达到80-100％，除去培养Vector-293T细胞和过表达MOG-293T细胞株的培养基，加入多聚甲醛，0～10℃固定过夜；③PBS洗涤细胞，风干，则MOG-IgGCBA检测用细胞爬片组件制备完成。
2.根据权利要求1所述的检测MOG-IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件的制备方法，其特征在于：步骤S1中，所述的MOG特异性PCR引物的正向引物序列为：ATGGCAAGCTTATCAAGACCC，反向引物序列为：GAAGGGATTTCGTAGCTCTTC。
3.根据权利要求2所述的检测MOG-IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件的制备方法，其特征在于：步骤S1中，所述MOG质粒构建的具体过程为：(1)以人神经少突胶质细胞为材料，抽提总mRNA，并利用反转录试剂盒将mRNA反转录成cDNA；(2)设计MOG特异性PCR引物，扩充出全长MOG cDNA，并将所得MOG cDNA进行克隆，然后连接到质粒载体上，所述质粒载体为pLVX-IRES-mcherry慢病毒质粒载体；(3)将质粒进行转化、摇菌，扩增抽提，得到MOG质粒。
4.根据权利要求1所述的检测MOG-IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件的制备方法，其特征在于：在步骤S2中，所述过表达MOG基因的慢病毒包装的过程为：
接种HEK293T细胞，待细胞融合度达到80-90％，借助转染试剂，将所得的MOG质粒和作为对照的空载体质粒pLVX-IRES-mcherry分别与病毒包装体系质粒psPAX2和PMD2.G均按照质量比2:2:1的比例一起共转染至HEK293T细胞；转染40～55小时后，收取含病毒颗粒的细胞培养基上清；上清经超滤法浓缩，获得浓缩后高滴度的病毒颗粒，即病毒感染细胞；然后进行病毒滴度验证，确保病毒滴度合格，则得到过表达MOG的病毒颗粒和不表达MOG的对照病毒颗粒。
5.根据权利要求1所述的检测MOG-IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件的制备方法，其特征在于：在步骤S3中，所述过表达MOG基因的细胞株构建过程为：
接种HEK293T细胞，待细胞融合度达到40-50％，借助感染试剂，用步骤S2中所得的过表达MOG的病毒颗粒和不表达MOG的对照病毒颗粒分别感染HEK293T细胞；感染48～72小时后，进行抗生素筛选，并采用未进行病毒转染的HEK293T细胞做为抗生素筛选对照组，当对照组的HEK293T细胞被安全杀死后，完成筛选，则筛选好的细胞即为过表达MOG-293T稳定细胞株与Vector-293T细胞株。
6.根据权利要求5所述的检测MOG-IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件的制备方法，其特征在于：在步骤S3中，所述的转染试剂为聚凝胺，其能够加强病毒的感染效率；感染48～72小时后，进行抗生素嘌呤霉素筛选；接种HEK293T细胞的培养基为成分以及各种成分的加量为：DMEM培养基+10％胎牛血清+1000U青霉素+1000mg/L链霉素；
在步骤S4中，培养Vector-293T细胞和过表达MOG-293T细胞株的培养基均为：DMEM培养基+10％胎牛血清+1000U青霉素+1000mg/L链霉素。
7.根据权利要求1所述的检测MOG-IgG的CBA试剂盒用的细胞爬片组件的制备方法，其特征在于：在步骤S4中，将过表达MOG-293T细胞株与Vector-293T细胞株分别接种于可拆卸的12小室载玻片中，其中，6室接种过表达MOG-293T细胞株，6室接种Vector-293T细胞株，并保证每个小室所接种的细胞量相近；
除去培养Vector-293T细胞和过表达MOG-293T细胞株的培养基，用PBS洗涤细胞，加入200ul 4％多聚甲醛，4℃固定过夜。
8.一种用于临床样品MOG-IgG检测的CBA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括以上任一权利要求所制备的MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件、抗人IgG-FITC二抗、封闭液、10×PBS和封片剂。
9.根据权利要求5所述的CBA检测试剂盒，其特征在于：所述MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件由Vector-293T细胞、MOG-293T细胞以及含有小室的载玻片制备而成；其中，含有小室的载玻片为含有多个小室的可拆卸载玻片，多个小室含MOG-293T细胞，多个小室含Vector-293T细胞。
所述封片剂为抗荧光漂白封片剂；所述封闭液为10％山羊血清。
10.一种用于临床样品MOG-IgG检测的CBA检测试剂盒的应用方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
(1)将所制备的MOG-IgG CBA检测用细胞爬片组件在室温平衡10min，加入10％山羊血清，37℃封闭40分钟；
(2)将临床血清或脑脊液样品用PBS 1:100稀释，37℃孵育1小时；
(3)PBS洗涤细胞两次，加入稀释好的抗人IgG-FITC二抗，37℃避光孵育30分钟；
(4)PBS洗涤细胞两次；
(5)滴加封片剂封片，荧光显微镜镜检、拍照。
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