CN107278886A - 一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法 - Google Patents

一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107278886A
CN107278886A CN201610189940.9A CN201610189940A CN107278886A CN 107278886 A CN107278886 A CN 107278886A CN 201610189940 A CN201610189940 A CN 201610189940A CN 107278886 A CN107278886 A CN 107278886A
Authority
CN
China
Prior art keywords
regeneration
medium
callus
culture
sweet potato
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610189940.9A
Other languages
English (en)
Inventor
周志林
唐君
曹清河
张安
赵冬兰
孙书军
项彩云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
JIANGSU XUHUAI REGION XUZHOU AGRICULTURE SCIENCE AND TECHNOLOGY INSTITUTE (JIANGSU XUZHOU SWEET POTATO RESEARCH CENTER)
Original Assignee
JIANGSU XUHUAI REGION XUZHOU AGRICULTURE SCIENCE AND TECHNOLOGY INSTITUTE (JIANGSU XUZHOU SWEET POTATO RESEARCH CENTER)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by JIANGSU XUHUAI REGION XUZHOU AGRICULTURE SCIENCE AND TECHNOLOGY INSTITUTE (JIANGSU XUZHOU SWEET POTATO RESEARCH CENTER) filed Critical JIANGSU XUHUAI REGION XUZHOU AGRICULTURE SCIENCE AND TECHNOLOGY INSTITUTE (JIANGSU XUZHOU SWEET POTATO RESEARCH CENTER)
Priority to CN201610189940.9A priority Critical patent/CN107278886A/zh
Publication of CN107278886A publication Critical patent/CN107278886A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法，属甘薯组织培养改良技术。选取经过继代培养的胚性愈伤组织为试验材料，挑选色泽鲜亮、长势较好的接种于分化培养基，于28±1℃，光照10小时/天的条件下培养15天；然后将培养的胚性愈伤转移至再生培养基继续培养；而后，挑选再生的子叶胚或者再生小植株接种于低渗培养基，完成植株再生。有益的效果：通过这一再生方法，可显著促进体细胞胚的发育，获得较多子叶胚及再生植株，再生率提高了10%以上，获得再生植株显著增加，该方法重复性好，便于操作。

Description

一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法
技术领域
本发明涉及一种组织培养改良技术，具体是一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法。
背景技术
植株再生是进行遗传转化的前提，提高胚性愈伤组织再生率将有助于利用基因工程进行作物遗传改良。甘薯组织培养高频率植株再生是进行甘薯遗传转化的重要一步。一般认为，甘薯植株再生比较困难。截至目前，前人研究表明胚性愈伤组织再生率为50-60%，个别品种可以达到90%，平均单块愈伤再生植株2株；为加快通过甘薯体细胞杂交及基因工程进行甘薯遗传改良，胚性愈伤再生率还有待进一步提高，基因型还需进一步拓宽，以及单块愈伤的再生植株数还需提高。
发明内容
本发明提供一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法，通过利用这一再生方法，较当前主要培养方法培养的胚性愈伤组织再生率可以提高10%以上，并且拓宽了基因型范围，单块愈伤的植株再生数可达8-10株，显著提高了胚性愈伤再生率和单块愈伤出苗量。
本发明是通过如下技术方案实现的：一种胚性愈伤组织再生的方法，将经过继代培养的胚性愈伤组织，挑选色泽鲜亮、长势较好的接种于分化培养基；接种于分化培养基后，于28±1℃，光照10 小时/天条件下培养15天；然后将培养的胚性愈伤转移至再生培养基中，继续培养；挑选再生的子叶胚或者再生小植株接种于低渗培养基，完成植株再生
所述的挑选经过继代、色泽鲜艳、长势较好的胚性愈伤组织接种于分化培养基，MS基本培养基+ABA 1mg/L+ZT 1.0 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L，灭菌前调PH：5.8-6.0；进行培养的，这一配方是在前期大量预试验及基础工作基础上，积极引进ZT，同ABA协同作用，可以显著提高胚性愈伤组织再生率。
所述的接种于分化培养基培养15天后，将其转入再生培养基（MS基本培养基+ZT0.5 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L）继续培养，而前人的操作是直接转入MS培养基，相对于前人方法，本方法可以显著提高单块愈伤出苗量，无需离体繁殖，一次性可以获得足够基础再生苗。
所述的将再生的子叶胚或再生小植株转入低渗培养基（MS基本培养基+蔗糖 20g/L+ Phytagel 2.5g/L），就是为了促进子叶胚的快速萌发，以及再生植株的快速生根，为获得壮苗奠定基础。
本发明的有益效果是：通过这一再生方法，可显著促进体细胞胚的发育，获得较多子叶胚及再生植株，胚性愈伤组织再生率提高了10%以上，单块愈伤再生植株数显著增加，该方法重复性好，便于操作；这一再生技术的改进，将有助于优异基因的利用，促进甘薯遗传改良。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的方法和效果，但不限制本发明的保护范围。
实施例1
1.试验材料和方法
1.1试验材料：甘薯品种：商薯19
1.2试验方法：所选试验材料为继代培养的商薯19胚性愈伤，挑选色鲜艳、状态较好的接种于分化培养基（MS基本培养基+ABA 0-2 mg/L+ZT 0-1.5 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel2.5g/L，灭菌前调PH：5.8-6.0），培养15d，促进体细胞胚胎发育；而后将其转入再生培养基中（MS基本培养基+ZT 0-1.0 mg/L+蔗糖 30 g/L+ Phytagel 2.5g/L，灭菌前调PH：5.8-6.0）培养；挑选发育的子叶胚获再生小植株接种于低渗培养基（MS基本培养基+蔗糖 20g/L+ Phytagel 2.5g/L）。每个重复接种20块胚性愈伤，设三次重复。培养条件为：（28±1）℃，日光灯冷光源强度为2400Lux。
调查及数据统计：培养30 d后，统计植株再生率和单块愈伤成苗数。
结果与分析
2.1不同分化培养基对胚型愈伤组织再生的影响
在分化培养基培养15 d，转入低渗培养基，再培养30 d后，胚性愈伤已分化出子叶胚，甚至小植株，具体结果见表1：与对照相比，分化培养基中添加ABA、ZT均有助于植株再生；尤其，ABA和ZT的相互作用可以有效促进植株再生；在本试验中，添加ABA1mg/L和ZT 1mg/L植株再生率最高，达85.0%，
表1：不同分化培养基对植株再生率的影响
激素组合 mg/L 植株再生率 %
ABA/0 +ZT/0 （对照） 0
ABA/1 43.3
ABA/2 21.7
ZT/1 30.0
ZT/1.5 23.3
ABA/1+ZT1 85.0
ABA/1+ZT1.5 71.7
ABA/2+ZT/1 51.7
ABA/2+ZT/1.5 41.7
2.2不同再生培养基对出苗量的影响
将在ABA 1mg/L和 ZT 1mg/L继代培养15 d的胚性愈伤转入再生培养基培养，30 d后统计出苗量，具体结果见表2：在一般不添加激素的培养基上，成苗比较晚，也比较少，为2.1株；添加不同浓度ZT后，对成苗具有一定促进作用；尤其添加ZT 0.5 mg/L再生培养基，愈伤成苗量获得显著提高，达到9.8株/块愈伤。
表2：不同再生培养基对出苗量的影响
激素组合 mg/L 单块愈伤出苗数 株
ZT/0 2.1
ZT/0.25 2.9
ZT/0.5 9.8
ZT/1.0 4.3
3. 这一再生方法在更多基因型上的应用效果验证
将继代培养的不同基因型的胚性愈伤接种于分化培养基（MS基本培养基+ABA 1 mg/L+ZT 1 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L）培养15 d，而后转入再生培养基（MS基本培养基+ZT 0.5 mg/L+蔗糖 30 g/L+ Phytagel 2.5g/L）培养，成苗后转入低渗培养基（MS基本培养基+蔗糖 20g/L+ Phytagel 2.5g/L）培养。如表3所示，10个不同基因型品种，较常规培养其植株再生率最少提高了16.7-45%，成苗数获得显著提高，为常规的1.5-6.3倍.
表3： 再生方法效果验证
CK ：分化培养基（MS基本培养基+ABA 1 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L）培养15d，而后转入低渗培养基（MS基本培养基+蔗糖 20g/L+ Phytagel 2.5g/L）培养。

Claims (1)

1.一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法，其特征是：将经过继代培养的胚性愈伤组织，挑选色泽鲜亮、长势较好的接种于分化培养基；接种于分化培养基后，于28±1℃，光照10 小时/天条件下培养15天；然后将培养的胚性愈伤转移至再生培养基中，继续培养；挑选再生的子叶胚或者再生小植株接种于低渗培养基，完成植株再生；所述的分化培养基为：MS基本培养基+ABA 1mg/L+ZT 1.0 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L；再生培养基为：MS基本培养基+ZT 0.5 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L；低渗培养基为：MS基本培养基+蔗糖20g/L+ Phytagel 2.5g/L；以上培养基均灭菌前调PH：5.8-6.0。
CN201610189940.9A 2016-03-30 2016-03-30 一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法 Pending CN107278886A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610189940.9A CN107278886A (zh) 2016-03-30 2016-03-30 一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610189940.9A CN107278886A (zh) 2016-03-30 2016-03-30 一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107278886A true CN107278886A (zh) 2017-10-24

Family

ID=60087616

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610189940.9A Pending CN107278886A (zh) 2016-03-30 2016-03-30 一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107278886A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101002539A (zh) * 2007-01-22 2007-07-25 中国农业大学 一种筛选甘薯耐盐突变体的方法
CN101611697A (zh) * 2009-07-13 2009-12-30 周玉玲 甘薯商19的脱毒快繁技术及培养物质
CN102217546A (zh) * 2011-05-24 2011-10-19 江苏徐州甘薯研究中心 一种甘薯胚性愈伤长期增殖保存的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101002539A (zh) * 2007-01-22 2007-07-25 中国农业大学 一种筛选甘薯耐盐突变体的方法
CN101611697A (zh) * 2009-07-13 2009-12-30 周玉玲 甘薯商19的脱毒快繁技术及培养物质
CN102217546A (zh) * 2011-05-24 2011-10-19 江苏徐州甘薯研究中心 一种甘薯胚性愈伤长期增殖保存的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
邱鹏飞等: "不同激素对甘薯胚性细胞悬浮系植株再生的影响", 《山东农业科学》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100581352C (zh) 乌桕组培不定芽高频率植株再生的方法
CN101779598B (zh) 一种建立优良玉米自交系农系531再生体系的方法
CN113584072B (zh) 草莓的遗传转化体系构建方法
Saji et al. Embryogenesis and plant regeneration in anther culture of sunflower (Helianthus annuus L.)
Godishala et al. Plant regeneration via somatic embryogenesis in cultivated tomato (Solanum lycopersicum L.)
CN101946711B (zh) 紫花苜蓿高效组织培养再生的方法
Punia et al. Callus development and plant regeneration from different explants of six wild species of sunflower (Helianthus L.)
CN104429956A (zh) 利用复配led光源进行杉木组培苗瓶内生根的方法
Orshinsky et al. Effects of media on embryoid induction and plant regeneration from cultured anthers of soft white spring wheats (Triticum aestivum L.)
CN115633640B (zh) 一种美人蕉试管苗叶鞘不定芽再生的方法及其应用
CN101965798B (zh) 一种花生体胚诱导及植株再生的方法
Bahgat et al. Establishment of the Regeneration System for Vicia faba L.
CN102599059B (zh) 一种提高低再生力小麦基因型幼胚组织培养再生率的方法
CN102952823B (zh) 一种小麦遗传转化方法
CN101699992A (zh) 一种小麦试管苗叶片反复再生的方法
CN107278886A (zh) 一种甘薯胚性愈伤组织再生的方法
Mizukami et al. Improvement of propagation frequency with two-step direct somatic embryogenesis from carrot hypocotyls
Taha et al. Somatic embryogenesis and production of artificial seeds in Saintpaulia ionantha Wendl.
CN102499079B (zh) 一种葡萄体细胞胚发生的方法
Gjuleva et al. Micropropagation of Platanus acerifolia in vitro
CN110447541A (zh) 一种生菜离体培养高频再生的方法
CN1860860A (zh) 象草体细胞培养高频率植株再生技术
CN111480572A (zh) 一种筛选水稻组培材料的方法
CN100433971C (zh) 苦草球茎离体培养再生方法
CN102144559B (zh) 一种扁穗牛鞭草高频再生体系建立方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination