CN107267527B

CN107267527B - 雄性育性的保持方法及其应用

Info

Publication number: CN107267527B
Application number: CN201710599348.0A
Authority: CN
Inventors: 马力耕; 王峥; 李健; 何航; 陈少霞; 邓兴旺
Original assignee: Weimingwang System Crop Design Frontier Laboratory Beijing Co ltd; Peking University
Current assignee: Beijing Zhiyu wheat Biotechnology Co.,Ltd.; Peking University
Priority date: 2016-07-25
Filing date: 2017-07-21
Publication date: 2021-03-19
Anticipated expiration: 2037-07-21
Also published as: US20190338305A1; WO2018019195A1; CA3031844A1; CA3031844C; CN107304428B; WO2018019193A1; CN107304428A; CN107267527A; US11130967B2

Abstract

本发明公开了一种小麦育性恢复基因及其应用，属于植物生物技术领域，具体涉及一个隐性核雄性不育基因及其启动子的克隆，及其在杂交育种中的应用。本发明通过流式细胞术和高通量测序的方法，成功克隆了一个育性恢复基因FRG1，该基因可以完全恢复兰州核雄性不育突变体或其等位突变体的雄性育性，为构建新型小麦杂交育种技术体系奠定了基础。同时，为解决小麦现有的“三系”和两系”杂交技术所存在不育系育性不稳定、杂交品种资源受局限、制种技术复杂、制种成本高等技术瓶颈问题，提供了更多的可能性。本发明所提供的基因及不育系的繁殖和保持方法，对小麦杂交育种工作具有重要的意义和应用价值。

Description

雄性育性的保持方法及其应用

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及植物隐性核雄性不育基因的克隆，及其雄性不育系的繁殖方法和在杂交育种中的应用，更具体地涉及一个小麦隐性核雄性不育基因及其启动子的克隆，及其在杂交育种中的应用。

技术背景

杂种优势是生物界的普遍现象，杂交种育种是选育新品种的主要途径，是近代育种工作最重要方法。与水稻、玉米、高粱等相比，小麦杂种优势利用的研究相对滞后，近十年来其平均产量的增长也趋于停滞、甚至出现连续多年下滑的局面。小麦是自花授粉作物，小麦杂种优势利用的核心问题是高效生产小麦杂交种的技术体系，国内外大量科学家为此已做出巨大的努力，并取得一系列重要成果。综合近50年来的研究进展，小麦杂种优势利用研究主要集中于：核质互作雄性不育的利用(“三系法”)、化学杀雄技术的利用(“化杀法”)和光温敏核雄性不育的利用(“两系法”)。三系法由于不育系难以繁殖、恢复源较窄、细胞质副效应等原因，未能在生产上大面积应用。化杀法避开了恢复与保持间的相互关系，曾被认为是一种很有希望的小麦杂交制种新技术，但由于其在制种过程中稳定性差、制种成本高及环境污染等多方面原因，在实际生产上也难以推广利用。基于光温敏的两系法虽然具有制种成本低、恢复源广泛，较易获得优势组合等优点，但也面临着两大关键问题——环境因素的不稳定性对不育系育性的影响和利用光温敏特性所选育的小麦不育系十分有限。

隐性核雄性不育突变体用于作物杂种优势利用，其不育性具有易被恢复而不易被保持的特性。与细胞质雄性不育杂交小麦体系相比，隐性核雄性不育突变体用于杂交小麦开发具有以下优点：1)不存在外源细胞质的负面影响，杂种F1优势强；2)父本系对杂种F1的育性恢复度高；3)不育系、保持系、父本系的育种亲本材料选择不受特定恢/保关系的限制，选材范围极广、种质资源利用率高，有利于选育高配合力的杂交种。但是，按照常规方法无法实现纯合核不育系种子的大量有效生产。因此，针对小麦杂种优势利用的现状，建立高效小麦雄性不育繁育新体系，是杂交小麦获得成功应用的最关键因素之一。

小麦显性核雄性不育系由于其自身的遗传特点，既找不到完全的恢复系，也找不到完全的保持系，比如1972年在我国发现的太谷核不育系(即MS2)，因此只适用于常规育种轮回选择和回交育种手段，不能用作杂交小麦育种的亲本。而隐性核雄性不育材料与任何正常材料杂交，F1代均可育，任何育性正常的材料都是其恢复系，只要解决核不育性的标识和有效保持的问题，就能应用于新一代小麦杂交育种技术。

小麦基因组巨大(17Gb)，约是人类的5倍，水稻的40倍，拟南芥的100倍；组成极其复杂，由A、B、D三个具有部分同源关系的染色体组组成，每个染色体组由7对染色体构成，共有21对染色体，是典型的异源六倍体(Zhang ZB,et al.,2002)，并且约75％是简单重复序列(Rachel B,et al.,2012；IWGSC,2014)。近年来，虽然小麦及其近缘种的基因组测序工作取得了很大进展，但截至目前，仍然没有完整的参考基因组序列公布(Vogel JP,et al.,2010；The International Barley Genome Sequencing Consortium,2012；Rachel B,etal.,2012；Ling HQ,et al.,2013；Jia J,et al.,2013；IWGSC,2014)。如此复杂的基因组使得小麦功能基因的研究工作异常困难，目前为止国际范围内小麦突变体成功克隆基因的例子只有寥寥几个。

本发明通过流式细胞术和高通量测序的方法，成功克隆了育性恢复基因FRG1，该基因可以完全恢复兰州核雄性不育突变体或其等位突变体的雄性育性，为构建新型小麦杂交育种技术体系奠定了基础。同时，为解决小麦现有的“三系”和两系”杂交技术所存在不育系育性不稳定、杂交品种资源受局限、制种技术复杂、制种成本高等技术瓶颈问题，提供了更多的可能性。本发明所提供的基因及不育系的繁殖和保持方法，对小麦杂交育种工作具有重要的意义和应用价值。

发明内容

本文提到的所有参考文献都通过引用并入本文。

除非有相反指明，本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域普通技术人员通常所理解的相同的含义。除非有相反指明，本文所使用的或提到的技术是本领域普通技术人员公知的标准技术。材料、方法和例子仅作阐述用，而非加以限制。

本发明提供了一个育性恢复基因FRG1(Fertility Restoration gene1)，所述育性恢复基因的核苷酸序列选自下列组的序列之一：

(a)如SEQ ID NO：2、5、6、8、9、11、12、14、15、17、18、20、21、23、24、

26、27或35所示的核苷酸序列；

(b)其编码氨基酸序列如SEQ ID NO：4、7、10、13、16、19、22、25或28所示的核苷酸序列；

(c)在严谨条件下能够与(a)或(b)中所述序列的DNA杂交的DNA序列；或

(d)与(a)-(c)所述序列有至少80％(优选为至少85％)序列相似性，且具有育性恢复功能的DNA序列；或

(e)与(a)-(d)之任一所述序列互补的DNA序列。

本领域技术人员应该知晓，本发明所述的育性恢复基因还包括与FRG1基因的核苷酸序列或蛋白序列高度同源，并且具有同样的育性调控或恢复功能的同源基因序列。所述高度同源且具有育性调控功能的的同源基因包括在严谨条件下能够与具有SEQ ID NO：2、5、6、8、9、11、12、14、15、17、18、20、21、23、24、26、27或35所示序列的DNA杂交的DNA序列。或是其编码的氨基酸序列与SEQ ID NO:4、7、10、13、16、19、22、25或28所示的蛋白氨基酸序列具有85％以上相似性的核苷酸序列。本文中使用的“严谨条件”是公知的，包括诸如在含400mM NaCl、40mM PIPES(pH6.4)和1mM EDTA的杂交液中于53℃-60℃杂交12-16小时，然后在62℃-68℃下用含0.5×SSC、和0.1％SDS的洗涤液洗涤15-60分钟。

上述同源基因还包括与SEQ ID NO：2、5、6、8、9、11、12、14、15、17、18、20、21、23、24、26、27或35所示序列的全长有至少80％、85％、90％、95％、98％、或99％序列相似性，且具有育性调控功能的DNA序列，可以从任何植物中分离获得。其中，序列相似性的百分比可以通过公知的生物信息学算法来获得，包括Myers和Miller算法、Needleman-Wunsch全局比对法、Smith-Waterman局部比对法、Pearson和Lipman相似性搜索法、Karlin和Altschul的算法。这对于本领域技术人员来说是公知的。

本发明还提供了一种表达盒，所述表达盒含有本发明所公开的育性恢复基因的DNA序列，所述育性恢复基因的核苷酸序列选自下列组的序列之一：

(a)如SEQ ID NO：2、5、6、8、9、11、12、14、15、17、18、20、21、23、24、26、27或35所示的核苷酸序列；

(b)其编码氨基酸序列如SEQ ID NO:4、7、10、13、16、19、22、25或28所示的核苷酸序列；

(e)与(a)-(d)之任一所述序列互补的DNA序列。

具体地，上述表达盒中的育性恢复基因还可操作性的连有一个可驱动其表达的启动子，所述启动子包括但不限于组成型表达启动子、诱导型启动子、组织特异表达启动子、或时空特异表达启动子。更具体地，所述启动子是一个花粉特异表达启动子。优选地，所述花粉特异表达启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明上述表达盒，还进一步的包含一个花粉失活基因，所述花粉失活基因可以干扰植株中含有该花粉失活基因的雄性配子的功能或形成。所述花粉失活基因包括但不限于barnase基因、淀粉酶基因、DAM甲基化酶等。更具体的，所述花粉失活基因是玉米a淀粉酶基因，优选其核苷酸序列如SEQ ID NO:29所示。

本发明上述表达盒，还进一步的包含一个筛选基因，所述筛选基因可以用于将含有该表达盒的植株、植物组织细胞或载体筛选出来。所述筛选基因包括但不限于抗生素抗性基因、或是抗除草剂基因、或是荧光蛋白基因等。具体地，所述筛选基因包括但不限于：氯霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、链霉素抗性基因、奇霉素抗性基因、磺胺类抗性基因、草甘磷抗性基因、草丁膦抗性基因、bar基因、红色荧光基因DsRED、mCherry基因、青色荧光蛋白基因、黄色荧光蛋白基因、荧光素酶基因、绿色荧光蛋白基因等。

本发明还公开了一种植物育性调控的方法，所述方法通过将育性恢复基因转入到frg1雄性不育突变体，使frg1雄性不育突变体的雄性育性恢复，其中所述的育性恢复基因的核苷酸序列选自下列组的序列之一：

(e)与(a)-(d)之任一所述序列互补的DNA序列。

本发明还提供了一种调控植物育性的方法，通过影响育性基因FRG1的表达来调控植物的育性。包括但不限于通过突变FRG1基因的方法，获得frg1雄性不育突变体材料；或是通过基因互补的方法，将FRG1基因用于恢复由相应的FRG1基因突变所导致的雄性不育，使雄性不育突变体恢复成可育。在本发明中，所述的突变包括在育性调控基因的核苷酸序列上进行取代、缺失或添加一个或多个核苷酸。获得突变的方法包括但不限于物理诱变、化学诱变或RNAi、TALEN、CRISPR-Cas9等基因编辑方法。

本发明还包括一种获得frg1雄性不育突变体的方法，所述方法通过突变植物内源的育性调控基因FRG1，或突变与其高度同源的基因的核苷酸序列，使该植物体丧失雄性育性的过程。所述育性调控基因FRG1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4、7、10、13、16、19、22、25或28所示。所述育性调控基因FRG1的核苷酸序列如SEQ ID NO：2、5、6、8、9、11、12、14、15、17、18、20、21、23、24、26、27或35所示。所述“突变”包括但不限于以下方法，如用物理或化学的方法所导致的基因突变，化学方法包括用EMS等诱变剂处理所导致的诱变，所述突变还可以是点突变，也可以是DNA缺失或插入突变，也可以是通过RNAi等基因沉默手段或者通过基因定点突变的方法，所述基因定点突变的方法包括但不限于ZFN定点突变方法、TALEN定点突变方法、和/或CRISPR/Cas9等基因编辑方法。

本发明还提供了一种frg1突变体材料的应用方法，其特征在于所述突变材料是由核苷酸序列的突变所造成，含有该突变后的核苷酸序列的植株具有雄性不育的表型，其中所述核苷酸序列为FRG1基因的核苷酸序列，优选如SEQ ID NO:2、5、6、8、9、11、12、14、15、17、18、20、21、23、24、26、27或35所示。所述突变体材料的应用，包括但不限于在杂交育种中的应用，更具体的是指将frg1突变体植株作为不育系母本，与恢复系杂交，生产杂交种子。

本发明还公开了一种雄性不育系的保持方法，所述方法以frg1雄性不育突变体为转化受体材料，将紧密连锁的3个目标基因转化至该不育突变体受体植株中。所述3个目标基因分别是育性恢复基因FRG1、花粉失活基因和筛选标记基因。其中，育性恢复基因FRG1可使不育的转化受体育性恢复，花粉失活基因可使含有转化的外源基因的花粉失活，即失去授精能力，筛选基因可以用于转基因种子或组织和非转基因种子或组织的分拣，分拣出的非转基因种子用作不育系生产杂交种，转基因种子用作保持系来源源不断地、稳定地生产不育系。

本发明中，在小麦植株中所述frg1雄性不育突变体是指兰州核雄性不育突变体或其等位突变体。本发明中frg1雄性不育突变体也可以称为frg1不育系或frg1雄性不育系，在小麦植株中，也可称为兰州核雄性不育系、兰州核不育、或兰州核雄性不育系的等位不育系等。

上述雄性不育系的保持方法中，所述的花粉失活基因包括但不限于barnase基因、淀粉酶基因、DAM甲基化酶等。更具体的，所述花粉失活基因是玉米a淀粉酶基因Zm-AA，优选其核苷酸序列如SEQ ID NO:29所示。所述花粉失活基因与偏好于雄性配子表达的启动子相连。更具体地，所述偏好于雄性配子表达的启动子包括但不限于PG47启动子、Zm13启动子等。所述筛选基因可以用于将含有该表达盒的植株或载体筛选出来。所述筛选基因包括但不限于抗生素抗性基因、或是抗除草剂基因、或是荧光蛋白基因等。具体地，所述筛选基因包括但不限于：氯霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、链霉素抗性基因、奇霉素抗性基因、磺胺类抗性基因、草甘磷抗性基因、草丁膦抗性基因、bar基因、红色荧光基因DsRED、mCherry基因、青色荧光蛋白基因、黄色荧光蛋白基因、荧光素酶基因、绿色荧光蛋白基因等。

更具体地，本发明还公开了一种雄性不育系的繁殖方法，所述方法包括以下步骤：

(a)向frg1雄性不育系中转入下述载体，以获得含有下述载体的保持系，所述载体包含：育性恢复基因FRG1，所述育性恢复基因FRG1可以恢复frg1雄性不育系的雄性生育力；和花粉失活基因，所述花粉失活基因表达时，会干扰植株中含有该花粉失活基因的雄性配子的功能或形成，从而使得所述植株中产生的具有活性的雄性配子都是不含所述载体的；和筛选基因，所述筛选基因可以用于转基因种子或组织和非转基因种子或组织的分拣。

(b)将转入上述载体后形成的保持系植株自交，同时产生不含载体的frg1雄性不育系和含载体的保持系种子；或是将保持系植株的花粉赶到frg1雄性不育系植株上，使frg1雄性不育系授粉繁殖出frg1雄性不育系的种子。

上述雄性不育系的繁殖方法中，所述的花粉失活基因包括但不限于barnase基因、淀粉酶基因、DAM甲基化酶等。更具体的，所述花粉失活基因是玉米a淀粉酶基因Zm-AA，优选其核苷酸序列如SEQ ID NO:29所示。所述花粉失活基因与偏好于雄性配子表达的启动子相连。更具体地，所述偏好于雄性配子表达的启动子包括但不限于PG47启动子、Zm13启动子等。所述筛选基因可以用于将含有该表达盒的植株或载体筛选出来。所述筛选基因包括但不限于抗生素抗性基因、或是抗除草剂基因、或是荧光蛋白基因等。具体地，所述筛选基因包括但不限于：氯霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、链霉素抗性基因、奇霉素抗性基因、磺胺类抗性基因、草甘磷抗性基因、草丁膦抗性基因、bar基因、红色荧光基因DsRED、mCherry基因、青色荧光蛋白基因、黄色荧光蛋白基因、荧光素酶基因、绿色荧光蛋白基因等。

本发明还公开了一种保持系的生产方法，所述方法包括以下步骤:

(a)向frg1雄性不育系中转入下述载体，即获得了frg1雄性不育系的保持系，所述载体包含：育性恢复基因FRG1，所述育性恢复基因FRG1可以恢复frg1雄性不育系的雄性生育力；和花粉失活基因，所述花粉失活基因表达时，会干扰植株中含有该花粉失活基因的雄性配子的功能或形成，从而使得所述植株中产生的可育雄性配子都是不含所述载体的；和筛选基因，所述筛选基因可以用于转基因种子和非转基因种子的分拣。

上述保持系的生产方法中，所述的花粉失活基因包括但不限于barnase基因、淀粉酶基因、DAM甲基化酶等。更具体的，所述花粉失活基因是玉米a淀粉酶基因Zm-AA，优选其核苷酸序列如SEQ ID NO:29所示。所述花粉失活基因与偏好于雄性配子表达的启动子相连。更具体地，所述偏好于雄性配子表达的启动子包括但不限于PG47启动子、Zm13启动子等。所述筛选基因可以用于将含有该表达盒的植株或载体筛选出来。所述筛选基因包括但不限于抗生素抗性基因、或是抗除草剂基因、或是荧光蛋白基因等。具体地，所述筛选基因包括但不限于：氯霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、链霉素抗性基因、奇霉素抗性基因、磺胺类抗性基因、草甘磷抗性基因、草丁膦抗性基因、bar基因、红色荧光基因DsRED、mCherry基因、青色荧光蛋白基因、黄色荧光蛋白基因、荧光素酶基因、绿色荧光蛋白基因等。

本发明还公开了一种保持系的繁殖方法，所述方法包括以下步骤：

(a)向frg1雄性不育系中转入下述载体，即获得了frg1雄性不育系的保持系，所述载体包含：育性恢复基因FRG1，所述育性恢复基因FRG1可以恢复frg1雄性不育系的雄性生育力；和花粉失活基因，所述花粉失活基因表达时，会干扰植株中含有该花粉失活基因的雄性配子的功能或形成，从而使得所述植株中产生的可育雄性配子都是不含所述载体的；和筛选基因，所述筛选基因可以用于转基因种子和非转基因种子的分拣；和

(b)将转入上述载体后形成的保持系植株自交，即按1:1的比例繁殖获得了不含载体的frg1雄性不育系种子和含载体的保持系种子。

本发明还公开了一种种子的生产方法，所述方法包括：

(a)向frg1雄性不育系中引入下述载体，获得frg1雄性不育系的保持系，所述载体包含：育性恢复基因FRG1，所述育性恢复基因FRG1可以恢复frg1雄性不育系的雄性生育力；和花粉失活基因，所述花粉失活基因表达时，会干扰植株中含有该花粉失活基因的雄性配子的功能或形成，从而使得所述植株中产生的可育雄性配子都是不含所述载体的。

(b)将转入上述载体后的保持系植株自交；和

(c)自交后即获得含有所述载体的保持系种子和不含载体的frg1雄性不育系。

本发明上述的雄性不育系的繁殖或保持方法、保持系的生产方法或繁殖方法、种子的生产方法等中，其中步骤(a)也可以是向普通的植株中引入含有育性恢复基因FRG1、花粉失活基因和筛选基因的载体，获得含有所述载体的转基因植株后，再与frg1雄性不育系杂交，经过定向选育，获得背景为frg1雄性不育系、并且含有所述载体的保持系植株。

本发明上述的雄性不育系的繁殖方法或保持方法、保持系的生产方法或繁殖方法、种子的生产方法等中，其中所述的育性恢复基因的核苷酸序列选自下列组的序列之一：

(e)与(a)-(d)之任一所述序列互补的DNA序列。

上述育性恢复基因FRG1还可操作性的连有一个花粉特异表达的启动子，可以驱动FRG1基因在植物花粉中的表达。所述花粉特异表达的启动子选自由MS26、NP1、MSP1、PAIR1、PAIR2、ZEP1、MELL、PSS1、TDR、UDT1、GAMYB4、PTC1、API5、WDA1、CYP704B2、MS26、MS22、DPW、MADS3、OSC6、RIP1、CSA、AID1、5126或Ms45等育性调控基因的启动子构成的组之一。更具体的，所述花粉特异表达启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。上述育性恢复基因FRG1还可操作性的连有一个终止子，所述终止子可以是已经公开的任一个基因的终止子，具体地，其中一个终止子的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

本发明上述的雄性不育系的繁殖或保持方法、保持系的生产方法或繁殖方法、种子的生产方法等中，所述的花粉失活基因包括但不限于barnase基因、淀粉酶基因、DAM甲基化酶等。更具体的，所述花粉失活基因是玉米a淀粉酶基因Zm-AA，优选其核苷酸序列如SEQID NO:29所示。所述花粉失活基因与偏好于雄性配子表达的启动子相连。更具体地，所述偏好于雄性配子表达的启动子包括但不限于PG47启动子、Zm13启动子等。

本发明上述的雄性不育系的繁殖或保持方法、保持系的生产方法或繁殖方法、种子的生产方法等中，其中所述的筛选基因包括但不限于抗生素抗性基因、除草剂抗性基因或荧光基因。具体地，所述筛选基因包括但不限于：氯霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、链霉素抗性基因、奇霉素抗性基因、磺胺类抗性基因、草甘磷抗性基因、草丁膦抗性基因、bar基因、红色荧光基因DsRED、mCherry基因、青色荧光蛋白基因、黄色荧光蛋白基因、荧光素酶基因、绿色荧光蛋白基因等。

本发明还提供了一种花粉特异表达启动子，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。将SEQ ID NO:1与报告基因GUS相连，构建载体转化水稻和小麦，检测分析转基因植株中的GUS表达活性和表达模式，通过对转基因植株的根、茎、叶和花进行GUS染色分析，结果发现本发明所提供的启动子驱动GUS基因在植物花粉中表达。说明本发明所提供的SEQ ID NO:1是一个花粉特异性表达的启动子。

本发明所提供的植物花粉特异表达启动子，含有序列表中如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO:1中所列核苷酸序列具有90％以上相似性的核苷酸序列，或包含来源于SEQ ID NO:1序列上的500个及500以上连续的核苷酸片段，并且可以驱动与该启动子操作性连接的核苷酸序列在植物花粉中的表达。含有上述序列的表达载体、转基因细胞系以及宿主菌等均属于本发明的保护范围。扩增本发明所公开的SEQ ID NO:1启动子的任一核苷酸片段的引物对也在本发明的保护范围之内。

本发明所述的“启动子”是指一种DNA调控区域，其通常包含能指导RNA聚合酶II在特定编码序列的合适转录起始位点起始RNA合成的TATA盒。启动子还可包含其它识别序列，这些识别序列通常位于TATA盒的上游或5’端，通常被称为上游启动子元件，起调控转录效率的作用。本领域技术人员应该知晓，虽然已经鉴定了针对本发明公开的启动子区域的核苷酸序列，但是分离和鉴定处于本发明鉴定的特定启动子区域的TATA盒上游区域的其它调控元件也在本发明的范围内。因此，本文公开的启动子区域通常被进一步界定为包含上游调控元件，例如用于调控编码序列的组织表达性和时间表达功能的那些元件、增强子等。以相同的方式，可以鉴定、分离出使得能在目标组织(例如雄性组织)中进行表达的启动子元件，将其与其它核心启动子一起使用，以验证雄性组织优先的表达。核心启动子指起始转录所需的最小限度的序列，例如被称为TATA盒的序列，这是编码蛋白质的基因的启动子通常都具有的。因此，可选地，FRG1基因的上游启动子可与其自身的或来自其它来源的核心启动子关联使用。

核心启动子可以是任何一种已知的核心启动子，例如花椰菜花叶病毒35S或19S启动子(美国专利No.5,352,605)、泛素启动子(美国专利No.5,510,474)、IN2核心启动子(美国专利No.5,364,780)或玄参花叶病毒启动子。

所述基因启动子的功能可以通过以下方法进行分析：将启动子序列与报告基因可操作性连接，形成可转化的载体，再将该载体转入植株中，在获得转基因后代中，通过观察报告基因在植物各个组织器官中的表达情况来确认其表达特性；或者将上述载体亚克隆进用于瞬时表达实验的表达载体，通过瞬时表达实验来检测启动子或其调控区的功能。

用来测试启动子或调控区域功能的适当表达载体的选择将取决于宿主和将该表达载体引入宿主的方法，这类方法是本领域普通技术人员所熟知的。对于真核生物，在载体中的区域包括控制转录起始和控制加工的区域。这些区域被可操作地连接到报告基因，所述报告基因包括YFP、UidA、GUS基因或荧光素酶。包含位于基因组片段中的推定调控区的表达载体可以被引入完整的组织，例如阶段性花粉，或引入愈伤组织，以进行功能验证。

此外，本发明的启动子还可与并非FRG1基因的核苷酸序列相连，以表达其它异源核苷酸序列。本发明的启动子核苷酸序列及其片段和变体可与异源核苷酸序列一起组装在一个表达盒中，用于在目的植株中表达，更具体地，在该植株的雄性器官中表达。所述表达盒有合适的限制性酶切位点，用于插入所述启动子和异源核苷酸序列。这些表达盒可用于对任何植株进行遗传操作，以获得想要的相应表型。

本发明所公开的花粉特异表达启动子，可用于驱动下列异源核苷酸序列的表达，以使转化的植株获得雄性不育的表型，所述异源核苷酸序列可编码促使碳水化合物降解的酶或修饰酶、淀粉酶、脱支酶和果胶酶，更具体的如barnase基因、玉米a淀粉酶基因、生长素基因、rot B、细胞毒素基因、白喉毒素、DAM甲基化酶，或是显性的雄性不育基因。

在某些实施方式中，本发明中所提到的可操作性地连接在本发明启动子下游的核苷酸序列，其中所述的“核苷酸序列”可以是操作性连接于本文所公开的启动子之后的结构基因、调节基因、结构基因的反义基因、调节基因的反义基因或者能够干扰内源基因表达的小RNA。

本发明还提供了一个转录终止子序列，所述转录终止子的核苷酸序列如SEQ IDNO:3所示，具有终止基因转录表达的功能。

本发明还提供了一种表达盒、载体或工程菌株，所述表达盒、载体或工程菌株中包含了本发明所提供的花粉特异表达启动子SEQ ID NO:1。具体地，可以将本发明所提供的育性恢复基因FRG1的核苷酸序列构建到本发明所提供的启动子SEQ ID NO:1的下游，从而驱动该育性基因在转化受体植株中的表达。

本发明的所提供的花粉特异表达启动子可用于外源基因在花粉中的特异性表达，从而避免该外源基因在植物其他组织中持续表达所带来的不利影响，还可以用于植物花粉生长发育相关基因的功能分析和鉴定；可用于雄性不育系和保持系的创建；并可应用于花粉败育实验中，从而避免由植物转基因漂移或花粉逃逸所带来的生物安全问题，对植物雄性不育系和保持系的创造具有重要意义。

本发明所提供的FRG1基因的核苷酸序列和启动子序列或表达盒可被插入载体、质粒、酵母人工染色体、细菌人工染色体或其他适合转化进宿主细胞中的任何载体中。优选的宿主细胞是细菌细胞，尤其是用于克隆或储存多核苷酸、或用于转化植物细胞的细菌细胞，例如大肠杆菌、根瘤土壤杆菌和毛根土壤杆菌。当宿主细胞是植物细胞时，表达盒或载体可插入至被转化的植物细胞的基因组中。插入可以是定位的或随机的插入。

本发明所述的将核苷酸序列、载体或表达盒转入植株或引入植株或对植株进行转化，均指通过常规的转基因方法，将核苷酸序列、载体或表达盒转入到受体细胞或受体植株中。植物生物技术领域技术人员已知的任何转基因方法均可被用于将重组表达载体转化进植物细胞中，以产生本发明的转基因植物。转化方法可包括直接和间接的转化方法。合适的直接方法包括聚乙二醇诱导的DNA摄入、脂质体介导的转化、使用基因枪导入、电穿孔、以及显微注射。所述转化方法也包括农杆菌介导的植物转化方法等。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：本发明提供了一种育性恢复基因FRG1及其启动子，及将该基因用于frg1雄性不育系的繁殖和保持的方法。本发明所提供的育性恢复基因、核雄性不育系的育性保持和不育系的繁殖方法，对作物的杂交育种生产来说，具有重大的生产推广价值和应用价值，本发明提供的育性恢复基因还解决了小麦兰州核雄性不育系或其等位不育系的繁殖和保持问题，对于突破并改良现有的“三系”和“两系”杂交技术具有重要意义。

参考文献：

周宽基,周文麟,王淑英(1996)4E-ms小麦雄性核不育、保持体系的建立.中国农业科学29:93The International Barley Genome Sequencing Consortium(2012)Aphysical,genetic and functional sequence assembly of the barley genome.Nature491:711

The International Wheat Genome Sequencing Consortium(IWGSC)(2014)Achromosome-based draft sequence of the hexaploid bread wheat(Triticumaestivum)genome.Science 345:1251788

Jia J,Zhao S,Kong X,et al.(2013)Aegilops tauschii draft genomesequence reveals a gene repertoire for wheat adaptation.Nature 496:91

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Zhang ZB,Xu P(2002)Reviewed on wheat genome.Hereditas 24:389

附图说明

图1是EeFRG1基因与小麦中同源基因的基因组DNA序列比对。

图2是EeFRG1基因与小麦中同源基因的CDS序列比对。

图3是EeFRG1基因与小麦中同源基因的蛋白序列比对。

图4是EeFRG1基因与近缘种中同源基因的基因组DNA序列比对。

图5是EeFRG1基因与近缘种中同源基因的CDS序列比对。

图6是EeFRG1基因与近缘种中同源基因的蛋白序列比对。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1、长穗偃麦草FRG1基因的克隆

小麦兰州核雄性不育突变体是典型的单基因控制的隐性突变。4AgS-ms双端体异附加系是在兰州核雄性不育突变体中附加了半条长穗偃麦草的4Ag染色体(4AgS)(周宽基等，1996)，附加的4AgS染色体能够恢复突变体雄性不育的表型，表明长穗偃麦草4AgS染色体中含有育性恢复基因Fertility Restoration gene1(FRG1)。

4AgS-ms双端体异附加系中4AgS染色体的长度比小麦所有染色体都显著短，测量后估计其大小约为最长小麦染色体的1/4，大概250Mb左右。利用流式细胞仪分离长穗偃麦草4AgS染色体，采用二代和三代测序相结合的策略拼接4AgS参考基因组。结合4AgS-ms双端体异附加系单核期花药的转录组测序，获得了8个候选基因。

将8个候选基因的基因组DNA序列构建到pAHC20载体上，利用基因枪法，转化4Ag-ms单体异附加系植株幼胚。对T0代转基因植株中，不带有4Ag染色体的植株(即兰州核不育纯合突变背景)进行花粉育性观察，结果只有连有基因ID为CUFF.199的基因组DNA序列的载体能够恢复兰州核不育突变体雄性不育的表型。因此，基因ID为CUFF.199所对应的基因为长穗偃麦草中的育性恢复基因(Fertility Restoration Gene1，FRG1)，其基因组DNA序列如SEQ ID NO:2所示，CDS序列如SEQ ID NO:35所示，蛋白序列如SEQ ID NO:4所示，启动子序列如SEQ ID NO:1所示，终止子序列如SEQ ID NO:3所示。

以4AgS-ms双端体异附加系DNA为模板，扩增FRG1基因启动子2265bp，序列如SEQID NO:1所示，扩增产物通过In-fusion方法连入pAHC20-GUS载体，获得pAHC20-pFRG1-GUS表达载体。

利用基因枪法将pAHC20-pFRG1-GUS质粒转化小麦幼胚，获得16株转基因阳性植株。对转基因阳性植株的根、茎、叶和不同发育时期的花进行GUS染色分析，发现FRG1基因启动子能驱动GUS在小麦花粉中特异表达，说明FRG1基因启动子为花粉特异表达型启动子。

实施例2、EeFRG1在小麦中的同源基因

利用EeFRG1基因(SEQ ID NO:2)在IWGSC(International Wheat GenomeSequencing Consortium)数据库中进行比对，找到两个同源基因，命名为TaFRG1-1和TaFRG1-2，其基因组DNA序列分别如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:8所示，根据EeFRG1基因推定的CDS序列分别如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9所示，蛋白序列分别如SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:10所示。

利用Clustal Omega，将TaFRG1-1基因的基因组DNA序列、CDS序列和蛋白序列分别与EeFRG1基因进行比对，结果如图1-3所示，TaFRG1-1基因与EeFRG1基因基因组DNA序列一致性为88.5％，CDS序列的一致性为95.0％，蛋白序列一致性为95.9％。

利用Clustal Omega，将TaFRG1-2基因的基因组DNA序列、CDS序列和蛋白序列分别与EeFRG1基因进行比对，结果如图1-3所示，TaFRG1-2基因与EeFRG1基因基因组DNA序列一致性为88.9％，CDS序列的一致性为95.2％，蛋白序列一致性为95.0％。

由于TaFRG1-1基因和TaFRG1-1基因与EeFRG1基因蛋白序列同源性均达到95％以上，推测很可能具有与EeFRG1基因类似的功能。为了证实这种推测，我们分别构建了pAHC20-pEeFRG1-gTaFRG1-1-tEeFRG1和pAHC20-pEeFRG1-gTaFRG1-2-tEeFRG1载体，用EeFRG1基因的启动子分别驱动TaFRG1-1基因和TaFRG1-2基因表达。将pAHC20-pEeFRG1-gTaFRG1-1-tEeFRG1和pAHC20-pEeFRG1-gTaFRG1-2-tEeFRG1载体分别转化4Ag-ms单体异附加系植株幼胚，分别获得22株和26株转基因阳性植株，通过PCR鉴定分别发现11株和12株转基因阳性植株不带有4Ag染色体，但花粉均发育正常、表现为可育，表明TaFRG1-1基因和TaFRG1-2基因的核酸和蛋白序列的确具有与EeFRG1基因类似的功能。

实施例3、EeFRG1基因与乌拉尔图小麦、粗山羊草、高粱、玉米、粟中的同源基因的序列比对

将EeFRG1基因的蛋白序列在NCBI等数据库中查找，获得了乌拉尔图小麦、粗山羊草、高粱、玉米、粟基因组中预测的同源蛋白，其中玉米中包含两个EeFRG1的同源基因，分别命名为ZmFRG1-1和ZmFRG1-2。其中，在乌拉尔图小麦中该育性基因TuFRG1的基因组DNA序列如SEQ ID NO:11所示，CDS序列如SEQ ID NO:12所示，蛋白序列如SEQ ID NO:13所示；在粗山羊草中该育性基因AetFRG1的基因组DNA序列如SEQ ID NO:14所示，CDS序列如SEQ IDNO:15所示，其蛋白序列如SEQ ID NO:16所示；在高粱中该育性基因SbFRG1的基因组DNA序列如SEQ ID NO:17所示，CDS序列如SEQ ID NO:18所示，其蛋白序列如SEQ ID NO:19所示；在玉米中存在两个TaFRG1基因的同源基因，分别命名为ZmFRG1-1和ZmFRG1-2，ZmFRG1-1的基因组DNA序列如SEQ ID NO:20所示，CDS序列如SEQ ID NO:21所示，其蛋白序列如SEQ IDNO:22所示,ZmFRG1-2的基因组DNA序列如SEQ ID NO:23所示，CDS序列如SEQ ID NO:24所示，其蛋白序列如SEQ ID NO:25所示；在粟中该育性基因SiFRG1的基因组DNA序列如SEQ IDNO:26所示，CDS序列如SEQ ID NO:27所示，其蛋白序列如SEQ ID NO:28所示。

将EeFRG1基因的蛋白序列分别与这些同源基因的蛋白序列进行比对，结果显示来自不同植物的同源蛋白都具有非常相似的保守序列(图4-图6)。利用Clustal Omega进行序列比对，EeFRG1基因的蛋白序列与乌拉尔图小麦、粗山羊草、高粱、粟基因组中预测的同源蛋白序列一致性分别为96.4％、95.5％、59.0％、60.9％、与玉米中两个同源蛋白的序列一致性分别为58.1％和50.8％。上述结果表明该蛋白在植物花的雄性器官发育过程中生物学功能保守，起着非常重要的作用。

实施例4、EeFRG1及其同源基因在新一代小麦杂交育种技术中的应用

FRG1及其同源基因可以用于新一代杂交育种技术，该技术的核心思想是：以frg1隐性核雄性不育突变体为转化受体材料，通过将紧密连锁的3个目标基因转化至不育突变体中，其中，育性恢复基因FRG1可使转化受体育性恢复，花粉失活基因可使含有外源基因的花粉失活，即失去授精能力，种子标记基因可以用于转基因种子和非转基因种子的分拣，分拣出的非转基因种子即为不育系，而转基因种子用作保持系。通过保持系给不育系授粉杂交，可以在不育系上结实，由此繁殖不育系。而保持系通过自交可以源源不断地得以繁殖。由于该技术利用生物技术生产非转基因产品，解决了小麦等作物在杂交制种过程中面临的瓶颈问题，即三系法资源利用率低而两系法中不育系育性不稳定的问题。

根据以上原理，发明人首先分别对表达载体内的ZmBT1-ZmAA、FRG1和mCherryW三个表达盒单独进行了小麦转化，并进一步对各个表达盒的功能进行了验证。结果表明各个表达盒单独转化小麦时，都能够工作良好，达到预期的设计效果。其中FRG1表达盒中只要包含的是有功能的FRG1基因即可，例如EeFRG1,TaFRG1-1,TaFRG1-2,TuFRG1,AetFRG1,SbFRG1,SiFRG1,ZmFRG1-1或ZmFRG1-2等均可恢复frg1雄性不育突变体的育性。

进一步,发明人通过装配下述DNA元件，构建了pAHC20-FRG1-AA-mCherryW载体：

1)以pAHC20载体为基础；

2)FRG1基因表达盒，有功能的FRG1基因连接于EeFRG1基因启动子(如SEQ ID NO:1)的下游、EeFRG1基因终止子(如SEQ ID NO:3)的上游，FRG1基因可以是EeFRG1,TaFRG1-1,TaFRG1-2,TuFRG1,AetFRG1,SbFRG1,SiFRG1,ZmFRG1-1或ZmFRG1-2，序列如SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：26所示；

3)基因表达盒PG47：ZmBT1-ZmAA-IN2-1，目标基因为ZmAA，转运肽为ZmBT1，ZmBT1-ZmAA(其核苷酸序列如SEQ ID NO：29所示)的开放读码框连接于启动子PG47(其核苷酸序列如SEQ ID NO：30所示)的下游、终止子IN2-1(其核苷酸序列如SEQ ID NO：31所示)的上游。

4)基因表达盒CaMV35S增强子-LTP2：mCherryW-PINII，mCherryW基因(SEQ ID NO：32)的开放读码框连接于CaMV35S增强子-LTP2启动子(SEQ ID NO：33)和PINII终止子(SEQID NO：34)之间，重组成mCherryW的基因表达盒(CaMV35S增强子-LTP2：mCherryW-PINII)；

利用基因枪法将质粒pAHC20-FRG1-AA-mCherryW转化4Ag-ms单体异附加系植株幼胚，经过筛选、分化、壮苗生根、PCR鉴定等过程，得到基因型为兰州核不育位点纯合突变、无长穗偃麦草4Ag染色体、且转基因为单拷贝的转基因阳性植株。

对上述植株进行花粉活性检测，在非转基因植株中，不育花粉的比例小于2％，而转基因植株中不育花粉的比例为50％左右，表明本发明所提供的载体能够达到预期的花粉失活功能。

对植株所结T1代种子进行荧光分离比例调查，结果表明这些种子均显示1:1分离比，即携带外源基因的荧光种子和不携带外源基因的非荧光种子表现为1:1分离，表明本发明所提供的载体各元件作为整体表达良好，可以实现创制和繁殖不育系的目的。

SEQUENCE LISTING

<110> 未名兴旺系统作物设计前沿实验室（北京）有限公司

北京大学

<120> 雄性育性的保持方法及其应用

<130>

<160> 35

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 2265

<212> DNA

<213> 长穗偃麦草（Elytrigia elongata）

<400> 1

gctttgccta catactctag agaagttcaa cccatgatcc ataagcaagc tctcaattgc 60

tgttttgagt gtcaaagatg tggtgtttgc aacatataaa atacgaagaa acctctcaac 120

cacccttcct attttaggta cacatcactt gattcatgga caagtattga gaaacaacta 180

tcacctagct ctttcatcat gcgcctagta gtttctttgg cacaagggtt gatgaggtat 240

gtttgtatat cttgagctat cattttattg ttccttgaag cattcttgag aaccaccttg 300

ttcacttctt cagaaatctc tactagccat tgtataagct caaggaaatt acctttatgc 360

agtgaaactt ctttccatca tgtccacgaa aagctaaccc ttgatgcaaa agaaaccttg 420

gacattaaaa ggaatatgtc aagccagcta tatataaaac cttgtcttgt ttggtggttg 480

aaaaaatgac tctatgattg ttgtttttgg tgcaatgaag aaattgtatt tctcttgtgc 540

tttgttgtgt gcactgttga ttccaccaac atgtttcaaa aaactatcct tgtgattcta 600

atttctaaat cacccgttca caaaaaatct ccacaaacat gcaaattgtc cttgaaaaga 660

taacatacaa gtagaaagca tcatcttttt tactatactc aagccaacta taaggcttaa 720

accatttagc tacaaatatc gatgcacacc tccggtgggg tgttgtggaa aagcatgtta 780

ttttggccga taagcccctt ttacagtgta tcctcttcta attctattca gatcattaac 840

atcagctgtg attgacatcc tcttcccaag attagattca cgcaattgaa catcataaac 900

cacatcttca atgtcatcct cttcctatat attttcagat tattggcttg cttcgttctc 960

aatatcaggt tctatgaatg gacttctgtt gatgccacta ataatttgta gttgttgtgg 1020

aatataaatt gaacgggagc tcatggtgct atgaacttga ttggatgaga aattgttcta 1080

cagctccact tgctgctcaa cctaaataca tgcttggatt tcttcccagc tctagcacat 1140

aaagttttca aattaatgtt tccaccacat aaagttttga aatccacaaa tacttttttt 1200

agtacatgaa catttttcta atatacggtg aagatttttc atatacaaac tgatcgtttt 1260

aatatatggt aaaaattggt gtaatatatg ctgaaatgtt ttcaaataca tattgaatat 1320

atttataata aatggtgagc atttctgtaa tacatgatga ccattttaaa aatacatatc 1380

gaacatttca taatatacga tgaacagttt tataatactc gatgaacata ttttggagtt 1440

ctgaacaatt ttttttcaaa aacacaagcc attttccagg aaaaaacaaa agcaaaagaa 1500

atgagaaacc caaaaaacaa aaaagcaaag cagaacaaaa caaaacaaaa caaaacagag 1560

aaatctacac ggaaaatgaa acagaaaaag taaagaaaga acccgaactg ggccaggcaa 1620

tgtttgcaac ggcctcgctc ttcctgaaca agaaggtcag tccatgggct gcttccagta 1680

cacgggcctc gctgtgtggc aacacgccat gtaatagttt tcgcgggaat ccaacgtcgg 1740

tctggtgact tctggtgcct accagaactc tccacaagct cccacaggac ccacgcagcc 1800

gtctgatcag atcagcacga agcacgaact ttgaagcgcg gcgatatttt ctctccccag 1860

cctccgcctc gcccgacgac gctgcgctgc agcaccattt caatttcaaa atcaaaatcg 1920

aaaacggaaa agctttctcg catcccgagg agaggcggtt acgcgcgcca gaggagcacg 1980

agagaggcca ccccacccac ccccgccctc acgtgccgcg ctcgcacccc ccgcggccgc 2040

atccgggccg tccgcgcgga cagctggccg cgccccaccc gaaccgacgc ccaggatcga 2100

gcgagagcgg cgcgcccgag gcttggctta gcgtccacgg ctcctccggc tatataaccc 2160

gcccgccacc cgctccccct ccggcattcc attccgccac cgcaccccca ctccaccaca 2220

aaccctagcg agcgagcgag agggagagac cgccccgccc cgccg 2265

<210> 2

<211> 1878

<212> DNA

<213> 长穗偃麦草（Elytrigia elongata）

<400> 2

atggagagat cccggcgcct gctgctcgtg gcgggcctgc tggcggcgct gctcccggcg 60

gcggcggccg cgttcgggcc gcagccgggg gcgccgtgcg agcccacgct gctggcgacg 120

caggtggcgc tcttctgcgc gcccgacatg cccaccgcgc agtgctgcga gcccgtcgtc 180

gccgccgtcg acctcggcgg cggcgtcccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ggagccgcag 240

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ccttccctcc ctccctctac gtgccgattt tctgtgctcg ctttcctgct tacctagtag 420

tacgtagttt cccatggctt ctcgagtcgc tatagtgctc cgatttgggt cggtttcctc 480

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cgagcgacct gcgcagcgcg cgcacggcct agctagcttc ttcataccgc tgtaccttga 600

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gatttgagga gcactttgtt tcaaactgca acgcagcttt gctttctgca gtatcttctg 960

ccttgttttg ttctgtgcag tacctcttgc ttggtcaaaa ctgaaaacgc ttgctgtttg 1020

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gccttcctat ttcgtgaaaa aaggttgggt caaatcaaat ggatcgccta ttggcagagc 1200

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cgcaggaccc gctcccccgg ccgccgtcgt cagcagcccc ccacccccgc caccgtccgc 1500

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ggatcggttt tcgcagacga cgcaccgcca ccgccgccgt cgaccgagaa gccagcgtcc 1680

ccgccgcccc aggagcacga cggcgccgcc ccccgcgcca aggccgcccc cgcccaggcg 1740

gctacctccc cgctcgcgcc cgctgccgcc accgccccgc cgccccaggc gccgcactcc 1800

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ctctacatca tcctctga 1878

<210> 3

<211> 628

<212> DNA

<213> 长穗偃麦草（Elytrigia elongata）

<400> 3

gtggccgacc ccgaggccat ggtccgtcca gttgcagtag agtgctcgtc gtcttgttcc 60

gtttcatgct tgtcgccatt tgaggttcgt ttctgcagtc cggtcgaaga agacggtgga 120

ttttgagtag tagtagtagc tatcgttggc aggagtatgg agttcatgtg tcctcggtcg 180

cctagttttg gtctcaagta gtactgtctg tccgccgtgt ttgggtgttt gcgattcctc 240

tggttagatg aaccactgct atgtgatcga tcgatatgat ctgaatggaa tggatcaagt 300

tttgcgttct gctgatgatg tgatatgctt cttcgtatat actcatgctc gacctatcta 360

tgttctccca tttgaatttg tggagcaaca gtttggcatg cttttgctct gctatgaatg 420

aatgcttctt gcatgcatct tgtctttgct taatttgaac tgtagaacgg atgcagttct 480

gatttcttca tatgcatatg ctctgtatgt gttcatctct tcgaatttat tatgtagcaa 540

cagtttgtag cttttcattc tgctatgaat gaatgcctct tgcatgttgt ctttgcttaa 600

tttgtactag cagaatgcag accttgcg 628

<210> 4

<211> 220

<212> PRT

<213> 长穗偃麦草（Elytrigia elongata）

<400> 4

Met Glu Arg Ser Arg Arg Leu Leu Leu Val Ala Gly Leu Leu Ala Ala

1 5 10 15

Leu Leu Pro Ala Ala Ala Ala Ala Phe Gly Pro Gln Pro Gly Ala Pro

20 25 30

Cys Glu Pro Thr Leu Leu Ala Thr Gln Val Ala Leu Phe Cys Ala Pro

35 40 45

Asp Met Pro Thr Ala Gln Cys Cys Glu Pro Val Val Ala Ala Val Asp

50 55 60

Leu Gly Gly Gly Val Pro Cys Leu Cys Arg Val Ala Ala Glu Pro Gln

65 70 75 80

Leu Val Met Ala Gly Leu Asn Ala Thr His Leu Leu Thr Leu Tyr Ser

85 90 95

Ser Cys Gly Gly Leu Arg Pro Gly Gly Ala His Leu Ala Ala Ala Cys

100 105 110

Glu Gly Pro Ala Pro Pro Ala Ala Val Val Ser Ser Pro Pro Pro Pro

115 120 125

Pro Pro Ser Ala Ala Pro Arg Arg Lys Gln Pro Ala His Asp Ala Pro

130 135 140

Pro Pro Pro Pro Ser Thr Glu Lys Pro Ala Ser Pro Pro Pro Gln Glu

145 150 155 160

His Asp Gly Ala Ala Pro Arg Ala Lys Ala Ala Pro Ala Gln Ala Ala

165 170 175

Thr Ser Pro Leu Ala Pro Ala Ala Ala Thr Ala Pro Pro Pro Gln Ala

180 185 190

Pro His Ser Ala Ala Ala Thr Ala Ser Ser Lys Ala Ala Phe Phe Phe

195 200 205

Val Ala Thr Ala Met Leu Gly Leu Tyr Ile Ile Leu

210 215 220

<210> 5

<211> 1857

<212> DNA

<213> 小麦（Triticum aestivuml）

<400> 5

atggagagat cccgccgcct gctgctggtg gcgggcctgc tcgccgcgct gctcccggcg 60

gcggcggccg ccttcgggca gcagccgggg gcgccgtgcg agcccacgct gctggcgacg 120

caggtggcgc tcttctgcgc gcccgacatg cccaccgcgc agtgctgcga gcccgtcgtc 180

gccgccgtcg acctcggcgg cggggtcccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ggagccgcag 240

ctcgtcatgg cgggcctcaa cgccacccac ctcctcacgc tctacagctc ctgcggcggc 300

ctccgtcccg gcggcgccca cctcgccgcc gcctgcgaag gtacgcgcac gttcaccgcc 360

ctccgtccct ccctctctct gtctacgtgc agattttctg tgctctcttt cctgcttgcc 420

tagtacgtag tgttccatgg cctctcgggc cgctagcgct ccgatttgcg ttggtttcct 480

tgctgttctg ccggatctgt tggcacggcg cgcggcgtcg ggttctcgcc gtctcccgtg 540

gcgagcgacc tgcgcagcgc gcgcggcctg gctagcttca taccgctgta ccttgagata 600

cacggagcga tttagggtct actctgagta tttcgtcatc gtaggatgca tgtgccgctc 660

gcgattgttt catcgatttg agatctgtgc ttgttcccgc gagttaagat ggatctagcg 720

ccgtacgcag atgcagagtc tgttgctcga gttaccttat ctaccgtcgt tcgactatgg 780

tatttgcctg cttccttttg gctgggttta tcgtgcagta gtagtagaca tgtggacgcg 840

ttcttcttat tttgtgccga ccatcgtcga gatacttttc ctgctacagc gtttcatcgc 900

ctgcaccatc ccgttcgtga tagcactttt gtgtcaaacc gcaacgcagc tttgctttct 960

gcggtatctt ctgccttgtt tgtcgccttg cttggtcaaa actgagaact cttgctgttt 1020

gatcgaccga gggcagaggc agagcaagag cctgccgtgc ttttggctct gcagtgcgtc 1080

gtctctgcct cctttgccaa acatttccat gttgatcctc tgggggcact gctttttcgc 1140

atgcggtttc cgtagccttc ctctttcatg aaaaaaggtt tgggtcaaat caaatggatc 1200

gcctattggc agagcagcag cagatagctg gctgtctcac agctttggca gaatcggtct 1260

gttgcctgcc accgtgtctc ttatcttgcc tgccaccgtg tctcttttct tgttgcgcac 1320

gtcgtcacct cctcctactt cttttccagt tttgtttact tttgatgaaa tacggacgaa 1380

cggctggtaa tcattaactt tggttgctgt tgttactgtg gattttggac gcaggacccg 1440

ctcccccggc cgccgtcgtc agcagccccc cgcccccgcc accgtcgacc gcacctcgcc 1500

gcaagcagcc agcgcgtgcg tacctctccc tctcgcccgc atctcgctcc gtattaactg 1560

attgtgtctg catactgacg tgtgctttgg ctttggatct gtttcgcaga cgacgcacca 1620

ccgccgccgc cgccgtccag cgacaagccg tcgtccccgc cgccgtccca ggaacacgac 1680

ggcgccgctc cccacgccaa ggccgccccc gcccaggcgg ctacctcccc gctcgcgccc 1740

gctgctgcca tcgccccgcc gccccaggcg ccacactccg ccgcgcccac ggcgtcatcc 1800

aaggcggcct tcttcttcgt cgccacggcc atgctcggcc tctacatcat cctctga 1857

<210> 6

<211> 669

<212> DNA

<213> 小麦（Triticum aestivuml）

<400> 6

atggagagat cccgccgcct gctgctggtg gcgggcctgc tcgccgcgct gctcccggcg 60

gcggcggccg ccttcgggca gcagccgggg gcgccgtgcg agcccacgct gctggcgacg 120

caggtggcgc tcttctgcgc gcccgacatg cccaccgcgc agtgctgcga gcccgtcgtc 180

gccgccgtcg acctcggcgg cggggtcccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ggagccgcag 240

ctcgtcatgg cgggcctcaa cgccacccac ctcctcacgc tctacagctc ctgcggcggc 300

ctccgtcccg gcggcgccca cctcgccgcc gcctgcgaag gacccgctcc cccggccgcc 360

gtcgtcagca gccccccgcc cccgccaccg tcgaccgcac ctcgccgcaa gcagccagcg 420

cacgacgcac caccgccgcc gccgccgtcc agcgacaagc cgtcgtcccc gccgccgtcc 480

caggaacacg acggcgccgc tccccacgcc aaggccgccc ccgcccaggc ggctacctcc 540

ccgctcgcgc ccgctgctgc catcgccccg ccgccccagg cgccacactc cgccgcgccc 600

acggcgtcat ccaaggcggc cttcttcttc gtcgccacgg ccatgctcgg cctctacatc 660

atcctctga 669

<210> 7

<211> 222

<212> PRT

<213> 小麦（Triticum aestivuml）

<400> 7

Met Glu Arg Ser Arg Arg Leu Leu Leu Val Ala Gly Leu Leu Ala Ala

1 5 10 15

Leu Leu Pro Ala Ala Ala Ala Ala Phe Gly Gln Gln Pro Gly Ala Pro

20 25 30

Cys Glu Pro Thr Leu Leu Ala Thr Gln Val Ala Leu Phe Cys Ala Pro

35 40 45

Asp Met Pro Thr Ala Gln Cys Cys Glu Pro Val Val Ala Ala Val Asp

50 55 60

Leu Gly Gly Gly Val Pro Cys Leu Cys Arg Val Ala Ala Glu Pro Gln

65 70 75 80

Leu Val Met Ala Gly Leu Asn Ala Thr His Leu Leu Thr Leu Tyr Ser

85 90 95

Ser Cys Gly Gly Leu Arg Pro Gly Gly Ala His Leu Ala Ala Ala Cys

100 105 110

Glu Gly Pro Ala Pro Pro Ala Ala Val Val Ser Ser Pro Pro Pro Pro

115 120 125

Pro Pro Ser Thr Ala Pro Arg Arg Lys Gln Pro Ala His Asp Ala Pro

130 135 140

Pro Pro Pro Pro Pro Ser Ser Asp Lys Pro Ser Ser Pro Pro Pro Ser

145 150 155 160

Gln Glu His Asp Gly Ala Ala Pro His Ala Lys Ala Ala Pro Ala Gln

165 170 175

Ala Ala Thr Ser Pro Leu Ala Pro Ala Ala Ala Ile Ala Pro Pro Pro

180 185 190

Gln Ala Pro His Ser Ala Ala Pro Thr Ala Ser Ser Lys Ala Ala Phe

195 200 205

Phe Phe Val Ala Thr Ala Met Leu Gly Leu Tyr Ile Ile Leu

210 215 220

<210> 8

<211> 1893

<212> DNA

<213> 小麦（Triticum aestivuml）

<400> 8

atggagagat cccgcggcct gctgctggcg gcgggcctgc tggcggcgct gctgccggcg 60

gcggcggccg cgttcgggca gcagccgggg gcgccgtgcg agcccacgct gctggcgacg 120

caggtggcgc tcttctgcgc gcccgacatg cccacggccc agtgctgcga gcccgtcgtc 180

gccgccgtcg acctcggcgg cggggtgccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ggagccgcag 240

ctcgtcatgg cgggcctcaa cgccacccac ctcctcacgc tctacggctc ctgcggcggc 300

ctccgtcccg gcggcgccca cctcgccgcc gcctgcgaag gtacgtcgcg cacgttcacc 360

gcctccctcc ctccctcgct ctctctctct ctctctctct ctctctacgt gccgattctc 420

tgtgttcgct tccctgctta cctagcacgt agttttccat ggcttctcga ctcgctggtc 480

ctccgatttg ggtcggttaa tttcctcgct gtactaccgg atctgtcggc acggcgcgcg 540

gcgtcgggtt ctcgccgtct cccgtggcga gcgacctgcg cagcgcgcgc gcggcctagc 600

tagcttcata ccgctgtacc ttcagataca cggagcgatt tagggtctac tctgagtatt 660

tcgtcatcgt aggatgcatg tggcagtcgc gattgtttca tcgattttag atctgtgctt 720

gttcccgcga gttaagatgg atctagcgcc gtacgcagac gcagatggtc ttgctgtctc 780

tgttgctcga gttatcttat ctactgtcgt tcgagtatat ttgcctgctt ccttttgatc 840

tgtgtttatc gtgcagtagc agtagccatg tccacgcctt cttgtttcga ggcgatcatc 900

gtcgagatag cgctttgttt caaaccgcaa cgcagccttt gctttctgcg gtatcttctg 960

ccttgttttt gttctgtgca gtacgtcttg cttggtcaaa agtaaaaact cttgctgttc 1020

gatcgaccga ggcctgatgc agagcaagag ctggccgtgc ttttcgctct gcagtgcatc 1080

gcctctgcct ctttggccaa acatttccat gttgatcctc tggtgtggta ctactttttt 1140

gcatgcggtt tgcgtagcct tcctctttcg tgaaaaaagg tcgggtcgcc tattggcaga 1200

gcagcagcag cagcaacaga tagctggctg tctcgcagct ttgacagaac cggtctgtgg 1260

ccatctgtcg ccgcctgcca ccgtttccct gatgtttgtt tctctcgtct catctcgcct 1320

gccactgttt cttttcttgt tgcgcacgtc gtcacctcct cctacttttt tttccagttt 1380

tgtttacttt tgagatacgg acgaacggct ggtaattact aactttggtt gctgttgtta 1440

ctgtggattt tggacgcagg acccgctccc ccggccgcca tcgtcagcag ccccccgccc 1500

ccgccaccac cgtccgccgc acctcgccgc aagcagccag cgcgtacgaa cctctccctc 1560

cctctctctc gcctgcatct cgctctgtat tagctgattg tgtttactta ctgacgtgtg 1620

ctttggcttt ggatctgttt cgcagacgac gcaccgccgc cgccgccgcc gtctagcgag 1680

aagccgtcgt ccccgccgcc gtcccaggag cacgacggcg ccgccccccg cgccaaggcc 1740

gcgcccgccc aggcgaccac ctccccgctc gcgcccgctg ccgccatcgc cccgccgccc 1800

caggcgccac actccgcggc gcccacggcg tcgtccaagg cggccttctt cttcgtcgcc 1860

acggccatgc tcggcctcta catcatcctc tga 1893

<210> 9

<211> 672

<212> DNA

<213> 小麦（Triticum aestivuml）

<400> 9

atggagagat cccgcggcct gctgctggcg gcgggcctgc tggcggcgct gctgccggcg 60

gcggcggccg cgttcgggca gcagccgggg gcgccgtgcg agcccacgct gctggcgacg 120

caggtggcgc tcttctgcgc gcccgacatg cccacggccc agtgctgcga gcccgtcgtc 180

gccgccgtcg acctcggcgg cggggtgccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ggagccgcag 240

ctcgtcatgg cgggcctcaa cgccacccac ctcctcacgc tctacggctc ctgcggcggc 300

ctccgtcccg gcggcgccca cctcgccgcc gcctgcgaag gacccgctcc cccggccgcc 360

atcgtcagca gccccccgcc cccgccacca ccgtccgccg cacctcgccg caagcagcca 420

gcgcacgacg caccgccgcc gccgccgccg tctagcgaga agccgtcgtc cccgccgccg 480

tcccaggagc acgacggcgc cgccccccgc gccaaggccg cgcccgccca ggcgaccacc 540

tccccgctcg cgcccgctgc cgccatcgcc ccgccgcccc aggcgccaca ctccgcggcg 600

cccacggcgt cgtccaaggc ggccttcttc ttcgtcgcca cggccatgct cggcctctac 660

atcatcctct ga 672

<210> 10

<211> 223

<212> PRT

<213> 小麦（Triticum aestivuml）

<400> 10

Met Glu Arg Ser Arg Gly Leu Leu Leu Ala Ala Gly Leu Leu Ala Ala

1 5 10 15

Leu Leu Pro Ala Ala Ala Ala Ala Phe Gly Gln Gln Pro Gly Ala Pro

20 25 30

Cys Glu Pro Thr Leu Leu Ala Thr Gln Val Ala Leu Phe Cys Ala Pro

35 40 45

Asp Met Pro Thr Ala Gln Cys Cys Glu Pro Val Val Ala Ala Val Asp

50 55 60

Leu Gly Gly Gly Val Pro Cys Leu Cys Arg Val Ala Ala Glu Pro Gln

65 70 75 80

Leu Val Met Ala Gly Leu Asn Ala Thr His Leu Leu Thr Leu Tyr Gly

85 90 95

Ser Cys Gly Gly Leu Arg Pro Gly Gly Ala His Leu Ala Ala Ala Cys

100 105 110

Glu Gly Pro Ala Pro Pro Ala Ala Ile Val Ser Ser Pro Pro Pro Pro

115 120 125

Pro Pro Pro Ser Ala Ala Pro Arg Arg Lys Gln Pro Ala His Asp Ala

130 135 140

Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Ser Glu Lys Pro Ser Ser Pro Pro Pro

145 150 155 160

Ser Gln Glu His Asp Gly Ala Ala Pro Arg Ala Lys Ala Ala Pro Ala

165 170 175

Gln Ala Thr Thr Ser Pro Leu Ala Pro Ala Ala Ala Ile Ala Pro Pro

180 185 190

Pro Gln Ala Pro His Ser Ala Ala Pro Thr Ala Ser Ser Lys Ala Ala

195 200 205

Phe Phe Phe Val Ala Thr Ala Met Leu Gly Leu Tyr Ile Ile Leu

210 215 220

<210> 11

<211> 1837

<212> DNA

<213> 乌拉尔图小麦（Triticum urartu）

<400> 11

atggagagat cccgccgcct gctgctggtg gcgggcctgc tcgccgcgct gctcccggcg 60

gcggcggccg ccttcgggcc gcagccgggg gcgccgtgcg agcccacgct gctggcgacg 120

caggtggcgc tcttctgcgc gcccgacatg cccaccgcgc agtgctgcga gcccgtcgtc 180

gccgccgtcg acctcggcgg cggggtcccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ggagccgcag 240

ctcgtcatgg cgggcctcaa cgccacccac ctcctcacgc tctacagctc ctgcggcggc 300

ctccgtcccg gcggcgccca cctcgccgcc gcctgcgaag gtacgcgcac gttcaccgcc 360

ctccgtccct ccctctctct gtctacgtgc agattttctg tgctctcttt cctgcttgcc 420

tagtacgtag tgttccatgg cctctcgggc cgctagcgct ccgatttgcg ttggtttcct 480

tgctgttctg ccggatctgt cggcacggcg cgcggcgtcg ggttctcgcc gtctcccgtg 540

gcgagcgacc tgcgcagcgc gcgcgcggcc tagctagctt cataccgctg taccttgaga 600

tacacggagc gatttagggt ctactctgag tatttcgtca tcgtatgatg catgtgccgc 660

tcgcgattgt ttcatcgatt tgagatctgt gcttgttccc gcgagttaag atggatctag 720

cgccgtacgc agatgcagag tctgttgctc gagttatctt atctactgtc gttcgactat 780

ggtatttgcc tgcttccttt tggctgggtt tatcgtgcag tggtagtaga catgtggacg 840

cgttcttctt attttgtgcc gaccatcgtc gagatacttt tcctgctaca gcgtttcatc 900

gcctgcacca tcccgttcgt gatagcactt ttgtgtcaaa ccgcaacgca gctttgcttt 960

ctgcggtatc ttctgccttg tttgtcgcct tgcttggtca aaactgagaa ctcttgctgt 1020

ttgatcgacc gaggacaatc gcctgccgtg cttttggctc tgcagtgcgt cgtctctgcc 1080

tcctttgcca aacgtttcca tgggggcact gcttttttgc atgcggtttc cgtagccttc 1140

ctctttcgtg aaaaaaggtt tgggtcaaat caaatggatc gcctattggc agagcagcag 1200

cagatagctg gctgtctcac agctttggca gaatcggtct gttgcctgcc accgtgtctc 1260

ttatcttgcc tgccactgtg tctcttttct tgttgcgcac gtcgtcacct cctcctactt 1320

tttttccagt tttgtttact tttgatgaaa tacggacgaa cggctggtaa ttattaactt 1380

tggttgctgt tgttactgtg gattttggac gcaggacccg ctcccccggc cgccgtcgtc 1440

agcagccccc cgcccccgcc accgtcgacc gcacctcgcc gcaagcagcc agcgcgtgcg 1500

tacctctccc tctcgcccgc atctcgctcc gtattagctg attgtgtctg catactgacg 1560

tgtgctttgg ctttggatct gtttcgcaga cgacgcacca ccgccgccgc cgccgtccag 1620

cgacaagccg tcgtccccgc cgccgtccca ggagcacgac ggcgccgctc cccacgcaaa 1680

ggccgccccc gcccaggcgg ctacctcccc gctcgcgccc gctgctgcca ttgccccgcc 1740

gccccaggcg ccacactccg ccgcgcccac ggcgtcatcc aaggcggcct tcttcttcgt 1800

cgccacggcc atgctcggcc tctacatcat cctctga 1837

<210> 12

<211> 669

<212> DNA

<213> 乌拉尔图小麦（Triticum urartu）

<400> 12

atggagagat cccgccgcct gctgctggtg gcgggcctgc tcgccgcgct gctcccggcg 60

gcggcggccg ccttcgggcc gcagccgggg gcgccgtgcg agcccacgct gctggcgacg 120

caggtggcgc tcttctgcgc gcccgacatg cccaccgcgc agtgctgcga gcccgtcgtc 180

gccgccgtcg acctcggcgg cggggtcccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ggagccgcag 240

ctcgtcatgg cgggcctcaa cgccacccac ctcctcacgc tctacagctc ctgcggcggc 300

ctccgtcccg gcggcgccca cctcgccgcc gcctgcgaag gacccgctcc cccggccgcc 360

gtcgtcagca gccccccgcc cccgccaccg tcgaccgcac ctcgccgcaa gcagccagcg 420

cacgacgcac caccgccgcc gccgccgtcc agcgacaagc cgtcgtcccc gccgccgtcc 480

caggagcacg acggcgccgc tccccacgca aaggccgccc ccgcccaggc ggctacctcc 540

ccgctcgcgc ccgctgctgc cattgccccg ccgccccagg cgccacactc cgccgcgccc 600

acggcgtcat ccaaggcggc cttcttcttc gtcgccacgg ccatgctcgg cctctacatc 660

atcctctga 669

<210> 13

<211> 222

<212> PRT

<213> 乌拉尔图小麦（Triticum urartu）

<400> 13

Met Glu Arg Ser Arg Arg Leu Leu Leu Val Ala Gly Leu Leu Ala Ala

1 5 10 15

Leu Leu Pro Ala Ala Ala Ala Ala Phe Gly Pro Gln Pro Gly Ala Pro

20 25 30

Cys Glu Pro Thr Leu Leu Ala Thr Gln Val Ala Leu Phe Cys Ala Pro

35 40 45

Asp Met Pro Thr Ala Gln Cys Cys Glu Pro Val Val Ala Ala Val Asp

50 55 60

Leu Gly Gly Gly Val Pro Cys Leu Cys Arg Val Ala Ala Glu Pro Gln

65 70 75 80

Leu Val Met Ala Gly Leu Asn Ala Thr His Leu Leu Thr Leu Tyr Ser

85 90 95

Ser Cys Gly Gly Leu Arg Pro Gly Gly Ala His Leu Ala Ala Ala Cys

100 105 110

Glu Gly Pro Ala Pro Pro Ala Ala Val Val Ser Ser Pro Pro Pro Pro

115 120 125

Pro Pro Ser Thr Ala Pro Arg Arg Lys Gln Pro Ala His Asp Ala Pro

130 135 140

Pro Pro Pro Pro Pro Ser Ser Asp Lys Pro Ser Ser Pro Pro Pro Ser

145 150 155 160

Gln Glu His Asp Gly Ala Ala Pro His Ala Lys Ala Ala Pro Ala Gln

165 170 175

Ala Ala Thr Ser Pro Leu Ala Pro Ala Ala Ala Ile Ala Pro Pro Pro

180 185 190

Gln Ala Pro His Ser Ala Ala Pro Thr Ala Ser Ser Lys Ala Ala Phe

195 200 205

Phe Phe Val Ala Thr Ala Met Leu Gly Leu Tyr Ile Ile Leu

210 215 220

<210> 14

<211> 1885

<212> DNA

<213> 粗山羊草（Aegilops tauschii Coss）

<400> 14

atggagagat cccgcggcct gctgctggtg gcgggcctgc tggcggcgct gctgccggcg 60

gcggcggccg cgttcgggca gcagccgggg gcgccgtgcg agcccacgct gctggcgacg 120

caggtggcgc tcttctgcgc gcccgacatg cccacggccc agtgctgcga gcccgtcgtc 180

gccgccgtcg acctcggcgg cggggtgccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ggagccgcag 240

ctcgtcatgg cgggcctcaa cgccacccat ctcctcacgc tctacggctc ctgcggcggc 300

ctccgtcctg gcggcgccca cctcgccgcc gcctgcgaag gtacgtcgcg cacgttcacc 360

gcctccctcc ctccctcgct ctctctctct ctctctctac gtgccgattc tctgtgttcg 420

cttccctgct tacctagcac gtagttttcc atggcttctc gactcgctgg tcctccgatt 480

tgggtcggtt aatttcctcg ctgtactacc ggatctgtcg gcacggcgcg cggcgtcggg 540

ttctcgccgt ctcccgtggc gagcgacctg cgcagcgcgc gcgcggccta gctagcttca 600

taccgctgta ccttcagata cacggagcga tttagggtct actctgagta tttcgtcatc 660

gtaggatgca tgtggcagtc gcgattgttt catcgatttt agatctgtgc ttgttcccgc 720

gagttaagat ggatctagcg ccgtacgcag acgcagatgg tcttgctgtc tctgttgctc 780

gagttatctt atctactgtc gttcgagtat atttgcctgc ttccttttga tctgtgttta 840

tcgtgcagta gcagtagcca tgtccacgcc ttcttgtttc gaggcgatca tcgtcgagat 900

agcgctttgt ttcaaaccgc aacgcagcct ttgctttctg cggtatcttc tgccttgttt 960

ttgttctgtg cagtacgtct tgcttggtca aaagtaaaaa ctcttgctgt tcgatcgacc 1020

gaggcctgat gcagagcaag agctggccgt gcttttcgct ctgcagtgca tcgcctctgc 1080

ctctttggcc aaacatttcc atgttgatcc tctggtgtgg tactactttt ttgcatgcgg 1140

tttgcgtagc cttcctcttt cgtgaaaaaa ggtcgggtcg cctattggca gagcagcagc 1200

agcagcaaca gatagctggc tgtctcgcag ctttgacaga accggtctgt ggccatctgt 1260

cgccgcctgc caccgtttcc ctgatgtttg tttctctcgt ctcatctcgc ctgccactgt 1320

ttcttttctt gttgcgcacg tcgtcacctc ctcctacttt tttttccagt tttgtttact 1380

tttgagatac ggacgaacgg ctggtaatta ctaactttgg ttgctgttgt tactgtggat 1440

tttggacgca ggacccgctc ccccggccgc catcgtcagc agccccccgc ccccgccacc 1500

accgtccgcc gcacctcgcc gcaagcagcc agcgcgtacg aacctctccc tccctctctc 1560

tcgcctgcat ctcgctctgt attagctgat tgtgtttact tactgacgtg tgctttggct 1620

ttggatctgt ttcgcagacg acgcaccgcc gccgccgccg ccgtctagcg agaagccgtc 1680

gtccccgccg ccgtcccagg agcacgacgg cgccgccccc cgcgccaagg ccgcgcccgc 1740

ccaggcgacc acctccccgc tcgcgcccgc tgccgccatc gccccgccgc cccaggcgcc 1800

acactccgcg gcgcccacgg cgtcgtccaa ggcggccttc ttcttcgtcg ccacggccat 1860

gctcggcctc tacatcatcc tctga 1885

<210> 15

<211> 672

<212> DNA

<213> 粗山羊草（Aegilops tauschii Coss）

<400> 15

atggagagat cccgcggcct gctgctggtg gcgggcctgc tggcggcgct gctgccggcg 60

gcggcggccg cgttcgggca gcagccgggg gcgccgtgcg agcccacgct gctggcgacg 120

caggtggcgc tcttctgcgc gcccgacatg cccacggccc agtgctgcga gcccgtcgtc 180

gccgccgtcg acctcggcgg cggggtgccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ggagccgcag 240

ctcgtcatgg cgggcctcaa cgccacccat ctcctcacgc tctacggctc ctgcggcggc 300

ctccgtcctg gcggcgccca cctcgccgcc gcctgcgaag gacccgctcc cccggccgcc 360

atcgtcagca gccccccgcc cccgccacca ccgtccgccg cacctcgccg caagcagcca 420

gcgcacgacg caccgccgcc gccgccgccg tctagcgaga agccgtcgtc cccgccgccg 480

tcccaggagc acgacggcgc cgccccccgc gccaaggccg cgcccgccca ggcgaccacc 540

tccccgctcg cgcccgctgc cgccatcgcc ccgccgcccc aggcgccaca ctccgcggcg 600

cccacggcgt cgtccaaggc ggccttcttc ttcgtcgcca cggccatgct cggcctctac 660

atcatcctct ga 672

<210> 16

<211> 223

<212> PRT

<213> 粗山羊草（Aegilops tauschii Coss）

<400> 16

Met Glu Arg Ser Arg Gly Leu Leu Leu Val Ala Gly Leu Leu Ala Ala

1 5 10 15

Leu Leu Pro Ala Ala Ala Ala Ala Phe Gly Gln Gln Pro Gly Ala Pro

20 25 30

Cys Glu Pro Thr Leu Leu Ala Thr Gln Val Ala Leu Phe Cys Ala Pro

35 40 45

Asp Met Pro Thr Ala Gln Cys Cys Glu Pro Val Val Ala Ala Val Asp

50 55 60

Leu Gly Gly Gly Val Pro Cys Leu Cys Arg Val Ala Ala Glu Pro Gln

65 70 75 80

Leu Val Met Ala Gly Leu Asn Ala Thr His Leu Leu Thr Leu Tyr Gly

85 90 95

Ser Cys Gly Gly Leu Arg Pro Gly Gly Ala His Leu Ala Ala Ala Cys

100 105 110

Glu Gly Pro Ala Pro Pro Ala Ala Ile Val Ser Ser Pro Pro Pro Pro

115 120 125

Pro Pro Pro Ser Ala Ala Pro Arg Arg Lys Gln Pro Ala His Asp Ala

130 135 140

Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Ser Glu Lys Pro Ser Ser Pro Pro Pro

145 150 155 160

Ser Gln Glu His Asp Gly Ala Ala Pro Arg Ala Lys Ala Ala Pro Ala

165 170 175

Gln Ala Thr Thr Ser Pro Leu Ala Pro Ala Ala Ala Ile Ala Pro Pro

180 185 190

Pro Gln Ala Pro His Ser Ala Ala Pro Thr Ala Ser Ser Lys Ala Ala

195 200 205

Phe Phe Phe Val Ala Thr Ala Met Leu Gly Leu Tyr Ile Ile Leu

210 215 220

<210> 17

<211> 1750

<212> DNA

<213> 高粱（Sorghum bicolor）

<400> 17

atggagcgcc gcctccacca cctcgcgctg ctgctcggcc tcctcgcctg ggcggcggcg 60

gccgccacca cgggagccga ggcgcagccg gcggtgtgcg acccctccat catcgccacc 120

cagatcgcgc tcttctgcat gccggacatg cccacggcgc cctgctgcga gcccatcatc 180

gcctccgtcg acctcggcgg cggcatcccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ccaaccgcag 240

ctcgtcctcg cccgcctcaa cgccacccac ctcctcgcgc tctacgcctc ctgcggagga 300

cagcacaccg ggggcgccca cctcgccgcc gcctgccaag gtacatcacg cgttcgcctc 360

tctctctctc tctctctctc tctctctctc tctctctctc tctctctctc tctctctcgt 420

gcgagtgtga gtgtgtatgt ttggctgtgt gcgtgaggtg agggtgtgtg tttgctcgga 480

tccagtggtg gtttggcgag atcctagtgt actgtctgtg cttgccgatt tggttcttga 540

ctcttgagcc ttttgcgtgc gtttatgatg gtatatatat ttcggtgcga gttctcgcct 600

tccactgtgg cgacgaaccg tacgtactga tcaagtttgt tcgaacttaa ttttgcttca 660

tgtcgtcgtc tctttcgagt cgcaagaccg ctactactag tgggcatatt ttgggtgaga 720

ttacccgttg ctccgtacgc gcgcggctcc tggtctttgt agaccttttc tctttggttt 780

ggatttcgtt cgttttgttc tggatttcga aaaaaagttt gttcgtcttg gttccccact 840

ctgggcttaa ttttccccat ggatcacctg atgttttgac ccgtttctga tgtttttttt 900

ttgctaaaaa gtatttgtgc ttatcaagca ggtctgcgtt tctttttcgc ctcttccttt 960

ttgcgttctt gtctgcttgt tcctgttgcg tgaaaagttt cctggcctga attttgaaca 1020

gagagagagc aactgccctc tgggcttctg gcttttgcag cagcaggcca gctgcacaac 1080

ctgcagcagc gctgcagcct ttcaggattt cggcaaagac catcccattc ttttgcccgt 1140

ttgttttctt ggcccgcacg aaatagcgcc acgtcgcatg cttttctacc cgaaagacga 1200

tactgccctt gcactaatta tctttccgtt gttttccttt tgtggacgtg aaattattgc 1260

atctctggac taacgccgtt aaactctcgt gctgtttgcc tgcaggtccg tcacctcccg 1320

ccgccaccat tcccgtgatc gccccgccgc cgcccgccgc gccccgccac aagcagccaa 1380

cacgtacgaa cccgctgtca cctcctcgat ctgctctgtg ctatttctgc tttaactttt 1440

cgcgtgttct ctgtttgatc cgtgcgggac gggacggtgt cttatgtttc tgttgcgatg 1500

atgtttcgca ggcgaggccc ctcccccgcc gctgcggggc gagaagccgt ccccgtcgcc 1560

ccagcagcag cctggcgccg ccgccgccca cggcaaggcc atccccgcca gcccggccgc 1620

ctccttctcc cagctggcgc cggccgccgc gcccacgacg cccacgccac cgcactccgg 1680

ctccgacccc atcgtcgcct ccgccgcgct cctcgtcttc ttcatcgccg tcctcatcat 1740

cctcgactga 1750

<210> 18

<211> 657

<212> DNA

<213> 高粱（Sorghum bicolor）

<400> 18

atggagcgcc gcctccacca cctcgcgctg ctgctcggcc tcctcgcctg ggcggcggcg 60

gccgccacca cgggagccga ggcgcagccg gcggtgtgcg acccctccat catcgccacc 120

cagatcgcgc tcttctgcat gccggacatg cccacggcgc cctgctgcga gcccatcatc 180

gcctccgtcg acctcggcgg cggcatcccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ccaaccgcag 240

ctcgtcctcg cccgcctcaa cgccacccac ctcctcgcgc tctacgcctc ctgcggagga 300

cagcacaccg ggggcgccca cctcgccgcc gcctgccaag gtccgtcacc tcccgccgcc 360

accattcccg tgatcgcccc gccgccgccc gccgcgcccc gccacaagca gccaacacgc 420

gaggcccctc ccccgccgct gcggggcgag aagccgtccc cgtcgcccca gcagcagcct 480

ggcgccgccg ccgcccacgg caaggccatc cccgccagcc cggccgcctc cttctcccag 540

ctggcgccgg ccgccgcgcc cacgacgccc acgccaccgc actccggctc cgaccccatc 600

gtcgcctccg ccgcgctcct cgtcttcttc atcgccgtcc tcatcatcct cgactga 657

<210> 19

<211> 218

<212> PRT

<213> 高粱（Sorghum bicolor）

<400> 19

Met Glu Arg Arg Leu His His Leu Ala Leu Leu Leu Gly Leu Leu Ala

1 5 10 15

Trp Ala Ala Ala Ala Ala Thr Thr Gly Ala Glu Ala Gln Pro Ala Val

20 25 30

Cys Asp Pro Ser Ile Ile Ala Thr Gln Ile Ala Leu Phe Cys Met Pro

35 40 45

Asp Met Pro Thr Ala Pro Cys Cys Glu Pro Ile Ile Ala Ser Val Asp

50 55 60

Leu Gly Gly Gly Ile Pro Cys Leu Cys Arg Val Ala Ala Gln Pro Gln

65 70 75 80

Leu Val Leu Ala Arg Leu Asn Ala Thr His Leu Leu Ala Leu Tyr Ala

85 90 95

Ser Cys Gly Gly Gln His Thr Gly Gly Ala His Leu Ala Ala Ala Cys

100 105 110

Gln Gly Pro Ser Pro Pro Ala Ala Thr Ile Pro Val Ile Ala Pro Pro

115 120 125

Pro Pro Ala Ala Pro Arg His Lys Gln Pro Thr Arg Glu Ala Pro Pro

130 135 140

Pro Pro Leu Arg Gly Glu Lys Pro Ser Pro Ser Pro Gln Gln Gln Pro

145 150 155 160

Gly Ala Ala Ala Ala His Gly Lys Ala Ile Pro Ala Ser Pro Ala Ala

165 170 175

Ser Phe Ser Gln Leu Ala Pro Ala Ala Ala Pro Thr Thr Pro Thr Pro

180 185 190

Pro His Ser Gly Ser Asp Pro Ile Val Ala Ser Ala Ala Leu Leu Val

195 200 205

Phe Phe Ile Ala Val Leu Ile Ile Leu Asp

210 215

<210> 20

<211> 1690

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays L.）

<400> 20

atggagctcc gcctctacca cctcgcgctg ctgctcggcc tcgtcgcctg ggcggcggct 60

gctgccacgg gagccgaggc gcagccggtg tgcgacccct ccatcatcgc cacccagatc 120

gcgctcttct gcatgccgga catgcccacg gcgccctgct gcgagccgat catcgcctcc 180

gtcgacctcg gcggcggcgt cccctgcctc tgccgcgtcg ccgcccaacc gcagctcgtc 240

ctcgcccgcc tcaacgccac ccacctcctc gcgctctacg cttcctgcgg aggacaacac 300

accgtgggcg ctcacctcgc tgccgcctgc caaggtacat cacggtcgca ctctctctct 360

ctctctctct ctctctgtgc gtgcgtgacc tgtgcgcgtg agtgcggtgt gtgcgcgagg 420

gtgtgtgttc gctcggatcg agtggtggtc tgccgtgatc ctagtgtact gttctactgt 480

gtcttcggat ttggtttttg agcttttggc gtgcgttttt gtgtcatggt atttcgttgc 540

gagttcccgt cttccgctgt ggcgacgaac ccgtaccgta cgtcttgata aagtttgttc 600

gatttttctt cgcaagagcg ctactactgg gtgggcatat ttggggcgag atcaccagtg 660

gctccatagt ccatacgcgc gcgactcgtg ttttttagcc tattctattt ggcctgaatt 720

ttgaaaaagt ttgttcgttt aattggttgc cttctctggg cttgttttgc cccattgatc 780

acgtgacccg tttctgatgt ttttgcttac tgaaatatac atttgcttta gtattaagcg 840

acgcacggac gctgcgtttc tttttcactt attccttttt gcgtcattgt ctgcttgttc 900

tttgttgctc gaaagtttgc tggcctgaat tctgaacata gagagtaact gccctctggg 960

ctctggcctc tgcaggagca ggctgcaagc cggttgcaga acctgcagca gcgctgcagc 1020

ctttcaggat gccggcaaag accagccccg tttctcttgc ccgtttgttt tcttggcccg 1080

cacgaaatgg cgccgcgtcg catgcttttc tacgcgagag acgatactgc ccttgcacta 1140

attatcactc ttgttgtttt atttttgaac gtgaaattat tgcatgtctg ggcggactat 1200

aacgctgtta aaaacttaaa atcacgtgct attgcctgca ggtccgtcac ctcccgccac 1260

cgttcctgtt atcgccccgc cgccgcccgc cgcgccccgc ctcaagcagc caacacgtac 1320

gaagccgctg tcacctagtc tgctctgtgc tatttccgct ttaacttttc gcgcgctctg 1380

tttgattgat gcgagaattg gactaatccg tgctgtgcat aattttctgt tgcgatgttt 1440

ggcaggcgag gcccctcccc ctccgccaca aagcgagaag ccgtccccgt cgccccagca 1500

gcagcctggc gtcgccgccg cccacggcaa ggccatcccc accagttcgg ccgccaactt 1560

ctccacgctg gcgccggccg ccgcgcccac gactcccacg ccaccacact ctggctccga 1620

caacgggtgc gtcgtcgtct cctccacgat tgtcatcttc gtcatcgccg ttatcaccat 1680

cctcgaatga 1690

<210> 21

<211> 654

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays L.）

<400> 21

atggagctcc gcctctacca cctcgcgctg ctgctcggcc tcgtcgcctg ggcggcggct 60

gctgccacgg gagccgaggc gcagccggtg tgcgacccct ccatcatcgc cacccagatc 120

gcgctcttct gcatgccgga catgcccacg gcgccctgct gcgagccgat catcgcctcc 180

gtcgacctcg gcggcggcgt cccctgcctc tgccgcgtcg ccgcccaacc gcagctcgtc 240

ctcgcccgcc tcaacgccac ccacctcctc gcgctctacg cttcctgcgg aggacaacac 300

accgtgggcg ctcacctcgc tgccgcctgc caaggtccgt cacctcccgc caccgttcct 360

gttatcgccc cgccgccgcc cgccgcgccc cgcctcaagc agccaacacg cgaggcccct 420

ccccctccgc cacaaagcga gaagccgtcc ccgtcgcccc agcagcagcc tggcgtcgcc 480

gccgcccacg gcaaggccat ccccaccagt tcggccgcca acttctccac gctggcgccg 540

gccgccgcgc ccacgactcc cacgccacca cactctggct ccgacaacgg gtgcgtcgtc 600

gtctcctcca cgattgtcat cttcgtcatc gccgttatca ccatcctcga atga 654

<210> 22

<211> 217

<212> PRT

<213> 玉米（Zea mays L.）

<400> 22

Met Glu Leu Arg Leu Tyr His Leu Ala Leu Leu Leu Gly Leu Val Ala

1 5 10 15

Trp Ala Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala Glu Ala Gln Pro Val Cys Asp

20 25 30

Pro Ser Ile Ile Ala Thr Gln Ile Ala Leu Phe Cys Met Pro Asp Met

35 40 45

Pro Thr Ala Pro Cys Cys Glu Pro Ile Ile Ala Ser Val Asp Leu Gly

50 55 60

Gly Gly Val Pro Cys Leu Cys Arg Val Ala Ala Gln Pro Gln Leu Val

65 70 75 80

Leu Ala Arg Leu Asn Ala Thr His Leu Leu Ala Leu Tyr Ala Ser Cys

85 90 95

Gly Gly Gln His Thr Val Gly Ala His Leu Ala Ala Ala Cys Gln Gly

100 105 110

Pro Ser Pro Pro Ala Thr Val Pro Val Ile Ala Pro Pro Pro Pro Ala

115 120 125

Ala Pro Arg Leu Lys Gln Pro Thr Arg Glu Ala Pro Pro Pro Pro Pro

130 135 140

Gln Ser Glu Lys Pro Ser Pro Ser Pro Gln Gln Gln Pro Gly Val Ala

145 150 155 160

Ala Ala His Gly Lys Ala Ile Pro Thr Ser Ser Ala Ala Asn Phe Ser

165 170 175

Thr Leu Ala Pro Ala Ala Ala Pro Thr Thr Pro Thr Pro Pro His Ser

180 185 190

Gly Ser Asp Asn Gly Cys Val Val Val Ser Ser Thr Ile Val Ile Phe

195 200 205

Val Ile Ala Val Ile Thr Ile Leu Glu

210 215

<210> 23

<211> 1600

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays L.）

<400> 23

atggaatgcc gcctccacca cctcgcgctg ctgctcggcc tcctcgtctg ggcggcggcg 60

gccgccacgg gaggcggggc gcagccggtg tgcgagccct ccatcatcgc cacccagatc 120

gcgctcttct gcatgccgga catgcccaca gcgccctgct gtgagccgat catcgcttcc 180

atcgacctcg gcggcggcgt cccctgccta tgccgcgtcg ccgcccagcc gcagctcgtc 240

ctcgcccgcc tcaacgccac ccaccacctc gcgctctacg cctcctgcgg aggacaacac 300

actatgggcg cccacctcgc cgccgcctgc caacaaggta catcatgttc gtctctcttt 360

atctctctct gtgtgtgaga gagagtgtgt gtgtggcctg tgcgcgtgag tgcgcaagtg 420

tgtgtacgct cggatccagt ggtggtttgg ctagtgtact gtactactgt gtctgtggct 480

atgtgccttc agatttggtt cttagctttt tgcgttcgtc tttgcttgat ggtgtttcgt 540

tgcgagtttc cgtacgtatt ccgctgtggc gacgaactcg tacgtcttga tcaaagtttg 600

ttcgattttt ttgctacatt attcgtctct ttcgggtcgc aagagcggta ctactagtgg 660

gcatgtttcg ggtgagattg cccgagcgac cgagtctccg tacgcgcgcg actgctgtgg 720

tttttgaggt cttcctcttt gtctgtggtt ccccttcccc gcaccccacc ccatgaatca 780

ggtatgattt aacccgtttc tgatgttttt tttgccctta agcagagctc cgaacgcagg 840

aacgctgttt tttttttttt gccctttagg gtttcctggc ctgaactctc aacagagaga 900

gggagagcaa ctgccctctg ccctttgcag cagcaggctg gccagctgca caacctgcac 960

tcctgcaggc agcagcgctt gcagcctctc agaggattcc ggcaaagacc caccccgttt 1020

ctcttgctcc atttgttttc ttggcccgca cgaaatggcg ccgcgggcgc atgctgctgt 1080

atacgacact gcccttgcac tagttatctt ttgtgttttg tgtacaggaa acgtttctgc 1140

tgttctcctt ttgagcccga aaactattgc atgtctggag agtggagact aacgccgtta 1200

aactctcgtt ctttctttgc ccccagctcc gtcacctccc gccaccgtcc tcgtgctcgc 1260

cccgccgccg ccacaagcag ccaacacgta cgtacgaacc cgctgtcacc tactctgctc 1320

tgtgctattt cttctgcttt aacttatttt agtgttccgt ttgattcatg cgagagttgg 1380

gctactaatc cgtgccgcgc ggcaatgttt ctgccgtgcc gtgtgctgtt tcgcaggcga 1440

gacgacccct cccccgctgc agccgagcaa gaagccgtcc cctacagggg ccaccgccgc 1500

cgcccacggc ctggccaacc ccacgccagc ccggccgccg cgcccacgat gcccccgccc 1560

ccgccaccgc actccggctc cgacaagggc tgcgtcgtag 1600

<210> 24

<211> 576

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays L.）

<400> 24

atggaatgcc gcctccacca cctcgcgctg ctgctcggcc tcctcgtctg ggcggcggcg 60

gccgccacgg gaggcggggc gcagccggtg tgcgagccct ccatcatcgc cacccagatc 120

gcgctcttct gcatgccgga catgcccaca gcgccctgct gtgagccgat catcgcttcc 180

atcgacctcg gcggcggcgt cccctgccta tgccgcgtcg ccgcccagcc gcagctcgtc 240

ctcgcccgcc tcaacgccac ccaccacctc gcgctctacg cctcctgcgg aggacaacac 300

actatgggcg cccacctcgc cgccgcctgc caacaagctc cgtcacctcc cgccaccgtc 360

ctcgtgctcg ccccgccgcc gccacaagca gccaacacgt acgtacgaac ccgcgagacg 420

acccctcccc cgctgcagcc gagcaagaag ccgtccccta caggggccac cgccgccgcc 480

cacggcctgg ccaaccccac gccagcccgg ccgccgcgcc cacgatgccc ccgcccccgc 540

caccgcactc cggctccgac aagggctgcg tcgtag 576

<210> 25

<211> 191

<212> PRT

<213> 玉米（Zea mays L.）

<400> 25

Met Glu Cys Arg Leu His His Leu Ala Leu Leu Leu Gly Leu Leu Val

1 5 10 15

Trp Ala Ala Ala Ala Ala Thr Gly Gly Gly Ala Gln Pro Val Cys Glu

20 25 30

Pro Ser Ile Ile Ala Thr Gln Ile Ala Leu Phe Cys Met Pro Asp Met

35 40 45

Pro Thr Ala Pro Cys Cys Glu Pro Ile Ile Ala Ser Ile Asp Leu Gly

50 55 60

Gly Gly Val Pro Cys Leu Cys Arg Val Ala Ala Gln Pro Gln Leu Val

65 70 75 80

Leu Ala Arg Leu Asn Ala Thr His His Leu Ala Leu Tyr Ala Ser Cys

85 90 95

Gly Gly Gln His Thr Met Gly Ala His Leu Ala Ala Ala Cys Gln Gln

100 105 110

Ala Pro Ser Pro Pro Ala Thr Val Leu Val Leu Ala Pro Pro Pro Pro

115 120 125

Gln Ala Ala Asn Thr Tyr Val Arg Thr Arg Glu Thr Thr Pro Pro Pro

130 135 140

Leu Gln Pro Ser Lys Lys Pro Ser Pro Thr Gly Ala Thr Ala Ala Ala

145 150 155 160

His Gly Leu Ala Asn Pro Thr Pro Ala Arg Pro Pro Arg Pro Arg Cys

165 170 175

Pro Arg Pro Arg His Arg Thr Pro Ala Pro Thr Arg Ala Ala Ser

180 185 190

<210> 26

<211> 1856

<212> DNA

<213> 粟（Setaria italica）

<400> 26

atggagcgcc ccctccgcca cctcgcgctg ctgctcggcc tcctcgcctg ggcggcggcg 60

gccgccaccg gggccgcggc gcagcctgcg tgcgagccct ccaacctcgc cacgcagatc 120

acgctcttct gcatgcccga catgcccacg gcgccctgct gcgagccggt cgtcgcctcc 180

gtagacctcg gcggcggcgt cccctgcctc tgccgcgtcg ccgcccagcc gcagctcgtc 240

ctcgcccgcc tcaacgcctc ccacctcctc gcgctctaca ccgcctgcgg gggactgcgc 300

accgggggcg cccacctcgc cgccgcctgc caaggtacgt gacaccagcg cccgcgcctc 360

tcctctctct agatctgcgt ctgtgccgtg gccgtgcgcg agatgggtgt gctaggtgcg 420

agatgtgtgt gttctgcagc tttctggttt ggctcttgag cgagctgttc gtggttgcgc 480

tcttgggtaa cggtgttttg ttgcgagttc ccgtcttcct ctgtggcgac gaacccgtac 540

gtcttgttcc agtacgttcg aacatttttt tttgcttcgt tttcttctct cctccgtatt 600

ttggctatgg ttctcgcgtc acatgaatgc tactagttgg gcacatttcg ggatagattt 660

acccgtacgt cctgttctgg tttgttcgaa cacttttcct tcgttttctt ttctcttccg 720

aattttggtt gtgttttcgg gacacgcgag cgctactact agttgggcaa atttggggtc 780

agatgtaccc gtggctccgt acgcgcgcac gtctcctgat ttatttgtgc gtttcctttt 840

ctcaagcgat ttctctgtgc cttttcgttt tggtttggaa gcaaattctc tgggtttcaa 900

ggcgttggtt ccgatctctg ggcttttagc catgcatctc ctgatgattt gacccgtttc 960

agtggagtgg aatctgttca actgcccaag cgaggtcgaa aggctgggtt tctttgccca 1020

agcgaggtcg aaaggctggg tttctttttg ctttttcacc gcttcctttt tttgtttttg 1080

tctccttgtt tccgttgcgt cgaaaggctt gctgcgttcc agccttctga acagagagag 1140

caaccgccct ctgatcctct gcagcggaca gctgcacagc ctgcacagca gcgctgcagc 1200

ctttcaggca agaccaagcc cgttcggcac cgtttctctc tcccgcttgg tttcttggcc 1260

ctcacgaaat ggcgcctcgg cgcatgcttt ttctgcccaa aagacgatac tacccctgca 1320

ataaatatct tctgttattt ttgccgtttt aatctgtgaa ttattacaag cctggactaa 1380

cggcgttaac ctctcgtgtt tcgtgcctgc aggtccgtca ccccctgcca ccgtccccgt 1440

catcgccccg ccgccgcccg ccgcccctcg ccacaggctg ccagcacgta cgaacccgcc 1500

cgcacccgct ctgctcctgc tactttccgc tttaactttt cgcgtgctct gtttgatcga 1560

tgcgagagtt gaactaatgc atgtgctggt ttctgtttct cttgtgctgt tgcgcaggcg 1620

gcgaggcccc tccccctccg gcgacgagcg agaagccgtc cccaccaccc cagcagcagc 1680

ctggcgccgc cgccgcccac ggcaaggcca tccccgccag cccggccgcc tcctcgccgc 1740

tggcgccggc agccgcgccc acgacgccca cgccgccaac ctccggctcc gacggcaggt 1800

gcagctgcac cccggtcatc ctcttcctcc tcaccgccat catcgtcctc tactga 1856

<210> 27

<211> 648

<212> DNA

<213> 粟（Setaria italica）

<400> 27

atggagcgcc ccctccgcca cctcgcgctg ctgctcggcc tcctcgcctg ggcggcggcg 60

gccgccaccg gggccgcggc gcagcctgcg tgcgagccct ccaacctcgc cacgcagatc 120

acgctcttct gcatgcccga catgcccacg gcgccctgct gcgagccggt cgtcgcctcc 180

gtagacctcg gcggcggcgt cccctgcctc tgccgcgtcg ccgcccagcc gcagctcgtc 240

ctcgcccgcc tcaacgcctc ccacctcctc gcgctctaca ccgcctgcgg gggactgcgc 300

accgggggcg cccacctcgc cgccgcctgc caaggtccgt caccccctgc caccgtcccc 360

gtcatcgccc cgccgccgcc cgccgcccct cgccacaggc tgccagcacg cggcgaggcc 420

cctccccctc cggcgacgag cgagaagccg tccccaccac cccagcagca gcctggcgcc 480

gccgccgccc acggcaaggc catccccgcc agcccggccg cctcctcgcc gctggcgccg 540

gcagccgcgc ccacgacgcc cacgccgcca acctccggct ccgacggcag gtgcagctgc 600

accccggtca tcctcttcct cctcaccgcc atcatcgtcc tctactga 648

<210> 28

<211> 215

<212> PRT

<213> 粟（Setaria italica）

<400> 28

Met Glu Arg Pro Leu Arg His Leu Ala Leu Leu Leu Gly Leu Leu Ala

1 5 10 15

Trp Ala Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala Ala Ala Gln Pro Ala Cys Glu

20 25 30

Pro Ser Asn Leu Ala Thr Gln Ile Thr Leu Phe Cys Met Pro Asp Met

35 40 45

Pro Thr Ala Pro Cys Cys Glu Pro Val Val Ala Ser Val Asp Leu Gly

50 55 60

Gly Gly Val Pro Cys Leu Cys Arg Val Ala Ala Gln Pro Gln Leu Val

65 70 75 80

Leu Ala Arg Leu Asn Ala Ser His Leu Leu Ala Leu Tyr Thr Ala Cys

85 90 95

Gly Gly Leu Arg Thr Gly Gly Ala His Leu Ala Ala Ala Cys Gln Gly

100 105 110

Pro Ser Pro Pro Ala Thr Val Pro Val Ile Ala Pro Pro Pro Pro Ala

115 120 125

Ala Pro Arg His Arg Leu Pro Ala Arg Gly Glu Ala Pro Pro Pro Pro

130 135 140

Ala Thr Ser Glu Lys Pro Ser Pro Pro Pro Gln Gln Gln Pro Gly Ala

145 150 155 160

Ala Ala Ala His Gly Lys Ala Ile Pro Ala Ser Pro Ala Ala Ser Ser

165 170 175

Pro Leu Ala Pro Ala Ala Ala Pro Thr Thr Pro Thr Pro Pro Thr Ser

180 185 190

Gly Ser Asp Gly Arg Cys Ser Cys Thr Pro Val Ile Leu Phe Leu Leu

195 200 205

Thr Ala Ile Ile Val Leu Tyr

210 215

<210> 29

<211> 1487

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 29

atggcggcga caatggcagt gacgacgatg gtgacgagga gcaaggagag ctggtcgtca 60

ttgcaggtcc cggcggtggc attcccttgg aagccacgag gtggcaagac cggcggcctc 120

gagttccctc gccgggcgat gttcgccagc gtcggcctca acgtgtgccc gggcgtcccg 180

gcggggcgcg acccgcggga gcccgatccc aaggtcgtcc gggcggcctg cggcctggtc 240

caggcacaag tcctcttcca ggggtttaac tgggagtcgt gcaagcagca gggaggctgg 300

tacaacaggc tcaaggccca ggtcgacgac atcgccaagg ccggcgtcac gcacgtctgg 360

ctgcctccac cctcgcactc cgtctcgcca caaggctaca tgccaggccg cctatacgac 420

ctggacgcgt ccaagtacgg cacggcggcg gagctcaagt ccctgatagc ggcgttccac 480

ggcaggggcg tgcagtgcgt ggcggacatc gtcatcaacc accggtgcgc ggaaaagaag 540

gacgcgcgcg gcgtgtactg catcttcgag ggcgggactc ccgacgaccg cctggactgg 600

ggccccggga tgatctgcag cgacgacacg cagtactcgg acgggacggg gcaccgcgac 660

cgggcgaggg gttcgcggcg gcgcccgaca tcgaccacct caacccgcgc gtgcagcggg 720

agctctccgc ctggctcaac tggctcaggt ccgacgccgt ggggttcgac ggctggcgcc 780

tcgacttcgc caagggctac tcgccggccg tcgccagaat gtacgtggag agcacggggc 840

cgccgagctt cgtcgtcgcg gagatatgga actcgctgag ctacagcggg gacggcaagc 900

cggcgcccaa ccaggaccag tgccggcagg agctgctgga ctggacgcgg gccgtcggcg 960

ggcccgccat ggcgttcgac ttccccacca agggcctgct gcaggcgggc gtgcaggggg 1020

agctgtggcg gctgcgcgac agctccggca acgcggccgg cctgatcggg tgggcgcccg 1080

agaaggccgt caccttcgtc gacaaccatg acaccgggtc gacgcagaag ctctggccgt 1140

tcccatccga caaggtcatg cagggctacg cctacatcct cacccatcca ggagtcccct 1200

gcattttcta cgaccacatg ttcgactgga acctgaagca ggagatatcc acgctgtctg 1260

ccatcagggc gcggaacggc atccgcgccg ggagcaagct gcggatcctc gtggcggacg 1320

cggacgcgta cgtggccgtc gtcgacgaga aggtcatggt gaagatcggg acaaggtacg 1380

gcgtgagcag cgtggtcccg tcggatttcc acccggcggc gcacggcaag gactactgcg 1440

tctgggagaa agcgagcctc cgcgtcccgg cggggcgcca cctctag 1487

<210> 30

<211> 2736

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays）

<400> 30

tgcaccggac actgtctggt ggcataccag acagtccggt gtgccagatc agggcaccct 60

tcggttcctt tgctcctttg cttttgaacc ctaactttga tcgtttattg gtttgtgttg 120

aacctttatg cacctgtgga atatataatc tagaacaaac tagttagtcc aatcatttgt 180

gttgggcatt caaccaccaa aattatttat aggaaaaggt taaaccttat ttccctttca 240

atctccccct ttttggtgat tgatgccaac acaaaccaaa gaaaatatat aagtgcagaa 300

ttgaactagt ttgcataagg taagtgcata ggttacttag aattaaatca atttatactt 360

ttacttgata tgcatggttg ctttctttta ttttaacatt ttggaccaca tttgcaccac 420

ttgttttgtt ttttgcaaat ctttttggaa attctttttc aaagtctttt gcaaatagtc 480

aaaggtatat gaataagatt gtaagaagca ttttcaagat ttgaaatttc tccccctgtt 540

tcaaatgctt ttcctttgac taaacaaaac tccccctgaa taaaattctc ctcttagctt 600

tcaagagggt tttaaataga tatcaattgg aaatatattt agatgctaat tttgaaaata 660

taccaattga aaatcaacat accaatttga aattaaacat accaatttaa aaaatttcaa 720

aaagtggtgg tgcggtcctt ttgctttggg cttaatattt ctcccccttt ggcattaatc 780

gccaaaaacg gagactttgt gagccattta tactttctcc ccattggtaa atgaaatatg 840

agtgaaagat tataccaaat ttggacagtg atgcggagtg acggcgaagg ataaacgata 900

ccgttagagt ggagtggaag ccttgtcttc gccgaagact ccatttccct ttcaatctac 960

gacttagcat agaaatacac ttgaaaacac attagtcgta gccacgaaag agatatgatc 1020

aaaggtatac aaatgagcta tgtgtgtaat gtttcaatca aagtttcgag aatcaagaat 1080

atttagctca ttcctaagtt tgctaaaggt tttatcatct aatggtttgg taaagatatc 1140

gactaattgt tctttggtgc taacataagc aatctcgata tcaccccttt gttggtgatc 1200

cctcaaaaag tgataccgaa tgtctatgtg cttagtgcgg ctgtgttcaa cgggattatc 1260

cgccatgcag atagcactct cattgtcaca taggagaggg actttgctca atttgtagcc 1320

atagtcccta aggttttgcc tcatccaaag taattgcaca caacaatgtc ctgcggcaat 1380

atacttggct tcggcggtag aaagagctat tgagttttgt ttctttgaag tccaagacac 1440

cagggatctc cctagaaact gacaagtccc tgatgtgctc ttcctatcaa ttttacaccc 1500

tgcccaatcg gcatctgaat atcctattaa atcaaaggtg gatcccttgg ggtaccaaag 1560

accaaattta ggagtgtaaa ctaaatatct catgattctt ttcacggccc taaggtgaac 1620

ttccttagga tcggcttgga atcttgcaca catgcatata gaaagcatac tatctggtcg 1680

agatgcacat aaatagagta aagatcctat catcgaccgg tatacctttt ggtctacgga 1740

tttacctccc gtgtcgaggt cgagatgccc attagttccc atgggtgtcc tgatgggctt 1800

ggcatccttc attccaaact tgttgagtat gtcttgaatg tactttgttt ggctgatgaa 1860

ggtgccatct tggagttgct tgacttgaaa tcctagaaaa tatttcaact tccccatcat 1920

agacatctcg aatttcggaa tcatgatcct actaaactct tcacaagtag atttgttagt 1980

agacccaaat ataatatcat caacataaat ttggcataca aacaaaactt ttgaaatggt 2040

tttagtaaag agagtaggat cggctttact gactctgaag ccattagtga taagaaaatc 2100

tcttaggcat tcataccatg ctgttggggc ttgcttgagc ccataaagcg cctttgagag 2160

tttataaaca tggttagggt actcactatc ttcaaagccg agaggttgct caacatagac 2220

ctattcaccc catttgatca cttttttggt ccttcaggat ctaatagtta tgtataattt 2280

agagtctctt gtttaatggc cagatatttc taattaatct aagaatttat gatatttttt 2340

aattttttat catgtctgat gagaattaac ataaaggctc aattgggtcc tgaattaata 2400

atagagtgaa aattaatcca gaggctctat tagaaccttc aattagtaat accaagatat 2460

atataagata gtagagtata gtttaaatgt tggcattgtt cattctttct tttgttattt 2520

aatttatgct ttccacggtg gttagtggtt acttctgaag ggtccaaata atgcatgaag 2580

agtttgagga caagaagtct gccctaaaaa tagcgatgca aaggcatggt gtccaagcca 2640

tacatatagc gcactaattt tatcagcaga acaatggtat ttataggtcc tagtgcccag 2700

gcaacaagag acacgaataa agcatcgatc acgaca 2736

<210> 31

<211> 344

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays）

<400> 31

tgacaaagca gcattagtcc gttgatcggt ggaagaccac tcgtcagtgt tgagttgaat 60

gtttgatcaa taaaatacgg caatgctgta agggttgttt tttatgccat tgataataca 120

ctgtactgtt cagttgttga actctatttc ttagccatgc caagtgcttt tcttattttg 180

aataacatta cagcaaaaag ttgaaagaca aaaaaaaaaa cccccgaaca gagtgctttg 240

ggtcccaagc tactttagac tgtgttcggc gttcccccta aatttctccc cctatatctc 300

actcacttgt cacatcagcg ttctctttcc cctatatctc cacg 344

<210> 32

<211> 711

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 32

atggtgtcca agggcgagga ggacaacatg gccatcatca aggagttcat gcgcttcaag 60

gtgcacatgg agggctccgt gaacggccac gagttcgaga tcgagggcga gggcgagggc 120

cgcccctacg agggcaccca aaccgccaag ctcaaggtga ccaagggtgg ccccctcccc 180

ttcgcctggg acatcctctc cccacaattc atgtacggct ccaaggccta cgtgaagcac 240

cccgccgaca tccccgacta cctcaagctc tccttccccg agggcttcaa gtgggagcgc 300

gtgatgaact tcgaggacgg cggcgtggtg accgtgaccc aagactcctc cctccaagac 360

ggcgagttca tctacaaggt gaagctccgc ggcaccaact tcccctccga cggccccgta 420

atgcaaaaga agaccatggg ctgggaggcc tcctccgagc ggatgtaccc cgaggacggc 480

gccctcaagg gcgagatcaa gcaaaggctc aagctcaagg acggcggcca ctacgacgcc 540

gaggtgaaga ccacctacaa ggccaagaag cccgtgcaac tccccggcgc ctacaacgtg 600

aacatcaagc tcgacatcac ctcccacaac gaggactaca ccatcgtgga gcaatacgag 660

cgcgccgagg gccgccactc caccggcggc atggacgagc tgtacaagtg a 711

<210> 33

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 33

cgtcaacatg gtggagcacg acacgcttgt ctactccaaa aatatcaaag atacagtctc 60

agaagaccaa agggcaattg agacttttca acaaagggta atatccggaa acctcctcgg 120

attccattgc ccagctatct gtcactttat tgtgaagata gtggaaaagg aaggtggctc 180

ctacaaatgc catcattgcg ataaaggaaa ggccatcgtt gaagatgcct ctgccgacag 240

tggtcccaaa gatggacccc cacccacgag gagcatcgtg gaaaaagaag acgttccaac 300

cacgtcttca aagcaagtgg attgatgtga tgaattcaac cgtctcttcg tgagaataac 360

cgtggcctaa aaataagccg atgaggataa ataaaatgtg gtggtacagt acttcaagag 420

gtttactcat caagaggatg cttttccgat gagctctagt agtacatcgg acctcacata 480

cctccattgt ggtgaaatat tttgtgctca tttagtgatg ggtaaatttt gtttatgtca 540

ctctaggttt tgacatttca gttttgccac tcttaggttt tgacaaataa tttccattcc 600

gcggcaaaag caaaacaatt ttattttact tttaccactc ttagctttca caatgtatca 660

caaatgccac tctagaaatt ctgtttatgc cacagaatgt gaaaaaaaac actcacttat 720

ttgaagccaa ggtgttcatg gcatggaaat gtgacataaa gtaacgttcg tgtataagaa 780

aaaattgtac tcctcgtaac aagagacgga aacatcatga gacaatcgcg tttggaaggc 840

tttgcatcac ctttggatga tgcgcatgaa tggagtcgtc tgcttgctag ccttcgccta 900

ccgcccactg agtccgggcg gcaactacca tcggcgaacg acccagctga cctctaccga 960

ccggacttga atgcgctacc ttcgtcagcg acgatggccg cgtacgctgg cgacgtgccc 1020

ccgcatgcat ggcggcacat ggcgagctca gaccgtgcgt ggctggctac aaatacgtac 1080

cccgtgagtg ccctagctag aaacttacac ctgcaactgc gagagcgagc gtgtgagtgt 1140

agccgagta 1149

<210> 34

<211> 310

<212> DNA

<213> 马铃薯（Solanum tuberosum）

<400> 34

ctagacttgt ccatcttctg gattggccaa cttaattaat gtatgaaata aaaggatgca 60

cacatagtga catgctaatc actataatgt gggcatcaaa gttgtgtgtt atgtgtaatt 120

actagttatc tgaataaaag agaaagagat catccatatt tcttatccta aatgaatgtc 180

acgtgtcttt ataattcttt gatgaaccag atgcatttca ttaaccaaat ccatatacat 240

ataaatatta atcatatata attaatatca attgggttag caaaacaaat ctagtctagg 300

tgtgttttgc 310

<210> 35

<211> 663

<212> DNA

<213> 长穗偃麦草（Elytrigia elongata）

<400> 35

atggagagat cccggcgcct gctgctcgtg gcgggcctgc tggcggcgct gctcccggcg 60

gcggcggccg cgttcgggcc gcagccgggg gcgccgtgcg agcccacgct gctggcgacg 120

caggtggcgc tcttctgcgc gcccgacatg cccaccgcgc agtgctgcga gcccgtcgtc 180

gccgccgtcg acctcggcgg cggcgtcccc tgcctctgcc gcgtcgccgc ggagccgcag 240

ctcgtcatgg cgggcctcaa cgccacccac ctcctcacgc tctacagctc ctgcggcggc 300

ctccgccccg gcggcgccca cctcgccgcc gcctgcgaag gacccgctcc cccggccgcc 360

gtcgtcagca gccccccacc cccgccaccg tccgccgcac ctcgccgcaa gcagccagcg 420

cacgacgcac cgccaccgcc gccgtcgacc gagaagccag cgtccccgcc gccccaggag 480

cacgacggcg ccgccccccg cgccaaggcc gcccccgccc aggcggctac ctccccgctc 540

gcgcccgctg ccgccaccgc cccgccgccc caggcgccgc actccgccgc ggcgacggcg 600

tcgtccaagg cggccttctt cttcgtcgcc acggccatgc tcggcctcta catcatcctc 660

tga 663

Claims

1.一种育性恢复基因在调控小麦育性中的应用，其特征在于所述育性恢复基因的核苷酸序列选自下列组的序列之一：

(a)如SEQ ID NO：5、6、8或9所示的核苷酸序列；

(b) 其编码氨基酸序列如SEQ ID NO:7或10所示的氨基酸序列。

2.一种表达盒、表达载体或工程菌在调控小麦育性中的应用，其特征在于所述表达盒、表达载体、工程菌含有如下所示的核苷酸序列之一：

(a)如SEQ ID NO：5、6、8或9所示的核苷酸序列；

(b) 其编码氨基酸序列如SEQ ID NO:7或10所示的氨基酸序列。

3.一种调控小麦育性的方法，所述方法通过抑制或突变植株中的育性恢复基因，影响其表达水平，进而调控植物育性，其特征在于：所述育性恢复基因FRG1的核苷酸序列选自下列组的序列之一：

(a)如SEQ ID NO：5、6、8或9所示的核苷酸序列；

(b) 其编码氨基酸序列如SEQ ID NO:7或10所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述的突变包括在育性恢复基因的核苷酸序列上进行取代、缺失或添加一个或多个核苷酸。

5.根据权利要求3-4之任一所述的方法，其中所述的“突变”包括但不限于以下方法，如用物理或化学的方法所导致的基因突变，化学方法包括用EMS等诱变剂处理所导致的诱变，或是通过RNAi等基因沉默手段或者通过基因编辑等方法，所述基因定点突变的方法包括但不限于ZFN、TALEN 、CRISPR/Cas9基因编辑方法。

6.根据权利要求3-4所述的方法，其特征在于所述方法包括用FRG1基因的核苷酸序列互补由FRG1基因突变所导致的雄性不育表型，使frg1雄性不育系恢复成可育。

7.权利要求3-6之任一所述的方法在调控小麦育性中的应用。

8.一种雄性不育系的生产或繁殖方法，所述方法包括以下步骤：

(a)向frg1雄性不育系中转入下述载体，以获得含有下述载体的保持系，所述载体包含：育性恢复基因FRG1，所述育性恢复基因FRG1可以恢复frg1雄性不育系的雄性生育力；花粉失活基因，所述花粉失活基因表达时，会干扰植株中含有该花粉失活基因的雄性配子的功能或形成，从而使得所述植株中产生的可育雄性配子都是不含所述载体的；筛选基因，所述筛选基因可以用于转基因种子和非转基因种子的分拣；

(b)将转入上述载体后形成的保持系植株自交，同时产生不含载体的frg1雄性不育系种子和含载体的保持系种子；或是用保持系植株的花粉给frg1不育系植株授粉上，使frg1不育系授粉繁殖出frg1不育系种子，

其中所述的育性恢复基因FRG1的核苷酸序列选自下列组的序列之一：

(a)如SEQ ID NO：5、6、8或9所示的核苷酸序列；

(b) 其编码氨基酸序列如SEQ ID NO:7或10所示的氨基酸序列。

9.根据权利要求8所述的生产或繁殖方法，其中所述的育性恢复基因FRG1由一个花粉特异性表达的启动子驱动表达，该花粉特异性表达的启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

10.根据权利要求8-9之任一所述的生产或繁殖方法，其中所述的花粉失活基因包括但不限于barnase基因、淀粉酶基因、DAM甲基化酶。

11.根据权利要求10所述的生产或繁殖方法，其中花粉失活基因是玉米a淀粉酶基因。

12.根据权利要求11所述的生产或繁殖方法，其中花粉失活基因的核苷酸序列如SEQID NO:6所示。

13.根据权利要求12所述的生产或繁殖方法，其中所述的花粉失活基因与偏好于雄性配子表达的启动子相连。

14.根据权利要求13所述的生产或繁殖方法，其中偏好于雄性配子表达的启动子是PG47启动子或Zm13启动子。

15.根据权利要求8所述的生产或繁殖方法，其中所述的筛选基因包括但不限于抗生素抗性基因、抗除草剂基因或荧光蛋白基因。

16.根据权利要求15所述的生产或繁殖方法，其中筛选基因包括但不限于：氯霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、链霉素抗性基因、奇霉素抗性基因、磺胺类抗性基因、草甘磷抗性基因、草丁膦抗性基因、bar基因、红色荧光基因DsRED、mCherry基因、青色荧光蛋白基因、黄色荧光蛋白基因、荧光素酶基因、绿色荧光蛋白基因。

17.一种保持系的生产或繁殖方法，所述方法包括以下步骤:

(a)向frg1雄性不育系中转入下述载体，即获得了frg1雄性不育系的保持系，所述载体包含：育性恢复基因FRG1，所述育性恢复基因FRG1可以恢复frg1雄性不育系的雄性生育力；花粉失活基因，所述花粉失活基因表达时，会干扰植株中含有该花粉失活基因的雄性配子的功能或形成，从而使得所述植株中产生的可育雄性配子都是不含所述载体的；筛选基因，所述筛选基因可以用于转基因种子和非转基因种子的分拣；

(b)将转入上述载体后形成的保持系植株自交，同时产生不含载体的frg1雄性不育系种子和含载体的保持系种子，

(a)如SEQ ID NO：5、6、8或9所示的核苷酸序列；

(b) 其编码氨基酸序列如SEQ ID NO:7或10的氨基酸序列。

18.根据权利要求17所述的生产或繁殖方法，其中所述的育性恢复基因FRG1由一个花粉特异性表达的启动子驱动表达，该花粉特异性表达的启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

19.根据权利要求17-18之任一所述的生产或繁殖方法，其中所述的花粉失活基因包括但不限于barnase基因、淀粉酶基因、DAM甲基化酶。

20.根据权利要求19所述的生产或繁殖方法，其中花粉失活基因是玉米a淀粉酶基因。

21.根据权利要求20所述的生产或繁殖方法，其中花粉失活基因的核苷酸序列如SEQID NO:6所示。

22.根据权利要求21所述的生产或繁殖方法，其中花粉失活基因与偏好于雄性配子表达的启动子相连。

23.根据权利要求22所述的生产或繁殖方法，其中偏好于雄性配子表达的启动子是PG47启动子或Zm13启动子。

24.根据权利要求17所述的生产或繁殖方法，其中所述的筛选基因包括但不限于抗生素抗性基因、抗除草剂基因、荧光蛋白基因。

25.根据权利要求24所述的生产或繁殖方法，其中筛选基因包括但不限于：氯霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、链霉素抗性基因、奇霉素抗性基因、磺胺类抗性基因、草甘磷抗性基因、草丁膦抗性基因、bar基因、红色荧光基因DsRED、mCherry基因、青色荧光蛋白基因、黄色荧光蛋白基因、荧光素酶基因、绿色荧光蛋白基因。