CN107266599A - 金针菇多糖、提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用 - Google Patents

金针菇多糖、提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种金针菇多糖的提取方法，具体为：将粉碎过的金针菇实体依次用石油醚、75±10%乙醇进行室温浸提，所得残渣再用水于90±5℃进行热煎煮，过滤，滤液醇沉，取沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、石油醚洗涤，再经冷冻干燥即得金针菇多糖。本发明还公开了所述金针菇多糖在治疗功能性便秘药物方面的应用。本发明经试验发现：金针菇多糖能显著升高血清中的胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)及P物质含量，降低生长抑素(SS)的含量，从而有效改善功能性便秘。说明：金针菇多糖是治疗功能性便秘的理想药物。

Description

金针菇多糖、提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面 的应用
技术领域
本发明属于多糖药物技术领域，具体涉及一种金针菇多糖、提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。
背景技术
功能性便秘（functional constipation，FC）是一种常见的胃肠道疾病，由于生活规律改变、情绪抑郁、饮食因素、排便习惯不良、药物作用等因素所致的便秘，例如，外出旅行的人，由于生活规律、周围环境的改变，以及劳累等因素的影响，多会出现便秘，这种便秘则属于功能性便秘。
一般来讲，功能性便秘的临床症状为排便困难、排便时间延长等。便秘对患者的生活质量造成了极大地影响，甚至威胁到病人的生命。功能性便秘的病人，除肠道易激综合征外，均可通过生活规律化、合理饮食、调畅情志、养成良好排便习惯以及去除其他病因等手段达到治愈便秘的目的。而患有肠道易激综合征的病人，其发生的便秘虽属功能性便秘，但必须去医院做进一步的检查。目前，市场上用于治疗功能性便秘的药物多存在疗效不佳、有毒副作用，极易产生药物依赖性等缺陷。
金针菇，又名朴菇、朴蕈、金菇等，作为一种药食两用的菌类被广泛使用，具有较高的营养价值和市场价值，其销售量仅次于香菇和蘑菇。金针菇含有较丰富的营养物质，主要有蛋白质、维生素、碳水化合物和粗纤维等，是一种极富营养的食物。多糖作为金针菇中最主要的活性物之一，保健功效越来越受重视。目前，关于金针菇多糖的研究较多，主要功效在于抗疲劳、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老和提高记忆力等，尚未发现有关于金针菇多糖有治疗功能性便秘的研究与报道。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种可用于治疗功能性便秘的金针菇多糖，其治疗效果显著，且无毒副作用，不会引起耐药性。
本发明还提供了上述金针菇多糖的提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种金针菇多糖的提取方法，其将粉碎过的金针菇实体依次用石油醚、75±10%乙醇进行室温浸提（用以脱脂、脱小分子等），所得残渣再用水于90±5℃进行热煎煮，过滤，滤液醇沉，取沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、石油醚洗涤，再经冷冻干燥即得金针菇多糖。
具体的，室温浸提时浸提2－4次，每次浸提时间为1－3天；热煎煮时煎煮2－4次，每次煎煮时间为2－5 h。
本发明提供了采用上述提取方法制备得到的金针菇多糖。
本发明还提供了上述金针菇多糖的应用。本发明经试验发现：上述金针菇多糖具有治疗功能性便秘的功效，可用于制备治疗功能性便秘药物。
和现有技术相比，本发明的有益效果：
本发明采用盐酸洛哌丁胺建立大鼠便秘模型，利用金针菇多糖进行给药治疗，通过测定中药金针菇多糖对大鼠功能性便秘各项生化指标，考察其治疗功能性便秘的效果。试验结果证明：本发明金针菇多糖具有治疗功能性便秘的效果且疗效显著，无毒副作用。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。
下述实施例中，未经特殊说明，乙醇浓度均指体积浓度。
实施例1
一种金针菇多糖，其经下述步骤提取获得：取金针菇实体粉末706.21 g，先用石油醚于室温下进行三次浸提脱脂，三次加入的石油醚量分别为1500mL、800mL和500 mL，每次浸提时间均为1天。浸提结束后，过滤，滤渣干燥后称重得698.83g金针菇粉渣。然后将金针菇粉渣在室温下用75%乙醇进行三次浸提以脱除小分子，三次加入的75%乙醇量分别为2000mL、550 mL、500 mL，每次浸提时间均为1天。浸提结束后，过滤、干燥获得581.14 g残渣。按料液比1g：20 mL的比例向残渣中加水，然后于90℃热煎煮三次，每次煎煮3 h。煎煮结束后过滤，滤渣备用，滤液合并，浓缩，添加95%乙醇至终浓度为70%，常温下静置24h以醇沉，取沉淀物，分别用无水乙醇、丙酮、石油醚各淋洗3次，再经冷冻干燥(在冷冻干燥机中进行，-40℃真空冷冻干燥12 h)即得到35 g金针菇多糖。
应用试验
一、大鼠功能性便秘模型的建立。
（1）试验动物
SPF级的Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠，体重200-220g。动物购买于河南省实验动物中心，许可证号：SCXK（豫）2015-0004。
（2）试验试剂
氯化钠注射液（辰欣药业股份有限公司，批号：1611032707）；盐酸洛哌丁胺（Imodium,西安杨森制药有限公司，批号：160729316）；麻仁丸（湖北诺得胜制药有限公司，批号：20160507）；阿拉伯树胶粉：天津市科密欧化学试剂有限公司；大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒（批号：2017Z020701）、大鼠胃泌素(GAS)ELISA试剂盒（批号：2017Z020702）、大鼠P物质(SP)ELISA试剂盒（批号：2017Z020703）、大鼠生长抑素(SS)ELISA试剂盒（批号：2017Z0207040），均由深圳子科生物科技有限公司提供。
活性炭悬浮液：用电子天平称取25 g的阿拉伯树胶粉，放入500 mL的烧杯中，加入200 mL 的蒸馏水，加热搅拌，至溶液呈透明状，此时溶液沸腾。再称取12.5 g的活性炭并加入到前述的溶液中，边加热边搅拌，煮沸3次，直至成黑色糊状，待冷却后，加水定容至250mL，放入4℃冰箱保存备用。
（3）试验方法。
SPF级的Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠适应性饲养一周（温度25±2℃，光照12h/d，湿度40-45%），喂养标准饲料，自由饮水。给药前一天称量每只大鼠的体重，按体重随机分组，共分为5组，即：空白组8只，模型组8只，阳性对照组8只，金针菇多糖高剂量组8只，金针菇多糖低剂量组8只。以2 mg·kg/d的盐酸洛哌丁胺与生理盐水配制成2 mL的悬浮液。
空白组以2 mL/只灌胃生理盐水，其余各组以2 mg·kg/d的盐酸洛哌丁胺与生理盐水配制成2 mL的悬浮液给大鼠进行灌胃10天。将空白组、模型组、阳性对照组、金针菇多糖高剂量组及金针菇多糖低剂量组的24 h便粒重量进行比较，观察大鼠便秘重量、大鼠活动、毛色等指标。除空白组外，其它各组大鼠的活动减少，毛色变得无光，证明造模成功。各组大鼠的便秘重量结果见下表1。
表1 24 h便粒重量
表1中可以看出：与空白组相比，模型组、阳性对照、金针菇高剂量组和金针菇低剂量组24 h便粒重量均非常显著降低(*** P﹤0.001)，表明造模成功。
二、药物治疗。
大鼠功能性便秘模型建立成功后，将造模成功的大鼠进行给药治疗，空白组与模型组每天以1 ml/100 g灌胃生理盐水，阳性对照组每天以3 mg麻仁丸/kg灌胃给药，金针菇多糖高剂量组每天以1000 mg/kg灌胃给药，金针菇多糖低剂量组每天以600 mg/kg灌胃给药，连续给药一周。给药期间，每天收集6 h便粒，称取重量，记录数据。给药结束后，禁食不禁水12 h后，全部以2 mL灌胃活性炭悬浮液，灌胃1 h后，用10%水合氯醛对大鼠进行麻醉，将大鼠剪取幽门至下端盲肠处的小肠轻拉平铺至直线。测量剪取的小肠长度（即小肠全长）及其幽门一直到活性炭运动前端的长度（即墨汁推进长度），计算小肠推进率。腹主动脉取血，3000转离心10min，离心得到血清并检测大鼠的胃动素MTL、胃泌素GAS、生长抑素SS及P物质的含量。
数据处理：结果采用算术平均值和标准差表示，数值统计采用SPSS19.0软件单因素方差分析法(One-Way ANOVA)比较其显著性差异。测定结果见下表2至7。
表2 小肠推进率
表2中可以看出：模型组与空白组相比，模型组的大鼠小肠推进率极显著降低(*** P﹤0.001)。与模型组相比，阳性对照组和金针菇多糖低剂量组的大鼠小肠推进率极显著升高(## P﹤0.01)。
表3 6 h便粒重量
表3中可以看出：模型组与空白组相比，模型组大鼠6 h便粒重量显著性降低(*** P﹤0.001)。与模型组相比，阳性对照组和金针菇多糖低剂量组大鼠的6 h便粒重量显著性增加(# P﹤0.05）。
表4 大鼠胃动素MTL含量
表4中可以看出：模型组与空白组相比，大鼠胃动素含量极显著降低(*** P﹤0.001)。与模型组相比，阳性对照组、金针菇多糖高剂量组和低剂量组的大鼠胃动素含量显著性增加(### P﹤0.001)。
表5 大鼠胃泌素GAS含量
表5中可以看出：模型组与空白组相比，大鼠胃泌素含量极显著降低(*** P﹤0.001)。与模型组相比，阳性对照组和金针菇多糖低剂量组的大鼠胃泌素含量有极显著性增加(## P﹤0.01)。
表6 大鼠P物质含量
表6中可以看出：模型组与空白组相比，大鼠P物质含量极显著降低(** P﹤0.01)。与模型组相比，阳性对照组和金针菇多糖低剂量组的大鼠P物质含量有显著性增加(# P﹤0.05)。
表7 大鼠生长抑素SS含量
表7中可以看出：模型组与空白组相比，模型组大鼠生长抑素SS含量显著升高(* P﹤0.05)。与模型组相比，阳性对照组、金针菇多糖高剂量组和低剂量组的大鼠生长抑素SS含量显著性降低(### P﹤0.001)。
结论：金针菇多糖能显著升高大鼠血清中的胃动素MTL、胃泌素GAS及P物质含量，降低生长抑素SS含量，改善功能性便秘，其中金针菇多糖低剂量组效果最显著。说明：金针菇多糖具有显著治疗功能性便秘的作用，是治疗功能性便秘的理想药物。

Claims (4)

1.一种金针菇多糖的提取方法，其特征在于，将粉碎过的金针菇实体依次用石油醚、75±10%乙醇进行室温浸提，所得残渣再用水于90±5℃进行热煎煮，过滤，滤液醇沉，取沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、石油醚洗涤，再经冷冻干燥即得金针菇多糖。
2.如权利要求1所述金针菇多糖的提取方法，其特征在于，室温浸提时浸提2－4次，每次浸提时间为1－3天；热煎煮时煎煮2－4次，每次煎煮时间为2－5h。
3.采用权利要求1或2所述提取方法制备得到的金针菇多糖。
4.权利要求3所述金针菇多糖在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。
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