CN107260768B - 一种香菇复合多糖组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种香菇复合多糖组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107260768B CN107260768B CN201710476471.3A CN201710476471A CN107260768B CN 107260768 B CN107260768 B CN 107260768B CN 201710476471 A CN201710476471 A CN 201710476471A CN 107260768 B CN107260768 B CN 107260768B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- water
- mushroom
- adds
- refluxing extraction
- alcohol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 143
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 141
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 141
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 title claims abstract description 131
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 152
- 235000003143 Panax notoginseng Nutrition 0.000 claims abstract description 94
- 241000180649 Panax notoginseng Species 0.000 claims abstract description 94
- 241001264174 Cordyceps militaris Species 0.000 claims abstract description 73
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 57
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims abstract description 53
- 240000001080 Grifola frondosa Species 0.000 claims abstract description 48
- 235000007710 Grifola frondosa Nutrition 0.000 claims abstract description 48
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims abstract description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 231
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 220
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 160
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 100
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 97
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 75
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 70
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 69
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 66
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 55
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 44
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 claims description 38
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 37
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 33
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 30
- 238000005086 pumping Methods 0.000 claims description 30
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 24
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 24
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 22
- 241000222684 Grifola Species 0.000 claims description 19
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 17
- 125000005909 ethyl alcohol group Chemical group 0.000 claims description 14
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 14
- 229920001491 Lentinan Polymers 0.000 claims description 13
- 229940115286 lentinan Drugs 0.000 claims description 12
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 claims description 11
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 11
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 11
- 238000000643 oven drying Methods 0.000 claims description 11
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 240000000588 Hericium erinaceus Species 0.000 claims description 7
- 235000007328 Hericium erinaceus Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 2
- 241000190633 Cordyceps Species 0.000 claims 1
- 241000382353 Pupa Species 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 claims 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 4
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000036528 appetite Effects 0.000 abstract 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 48
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 10
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 9
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 9
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 9
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 9
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 9
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 9
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 9
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 7
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 6
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 6
- 102000011759 adducin Human genes 0.000 description 5
- 108010076723 adducin Proteins 0.000 description 5
- 210000002379 periodontal ligament Anatomy 0.000 description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 5
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000007888 film coating Substances 0.000 description 4
- 238000009501 film coating Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- MYKOKMFESWKQRX-UHFFFAOYSA-N 10h-anthracen-9-one;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.C1=CC=C2C(=O)C3=CC=CC=C3CC2=C1 MYKOKMFESWKQRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 241001248610 Ophiocordyceps sinensis Species 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241001269238 Data Species 0.000 description 2
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 2
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 240000008397 Ganoderma lucidum Species 0.000 description 2
- 235000001637 Ganoderma lucidum Nutrition 0.000 description 2
- 244000241838 Lycium barbarum Species 0.000 description 2
- 235000015459 Lycium barbarum Nutrition 0.000 description 2
- 244000197580 Poria cocos Species 0.000 description 2
- 235000008599 Poria cocos Nutrition 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 2
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 2
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 description 1
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 208000027219 Deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- -1 Polysaccharide compound Chemical class 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 241001558929 Sclerotium <basidiomycota> Species 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241001506047 Tremella Species 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000767 anti-ulcer Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003416 augmentation Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical group 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 238000004192 high performance gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 239000002799 interferon inducing agent Substances 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004457 myocytus nodalis Anatomy 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000024241 parasitism Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 208000007442 rickets Diseases 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/062—Ascomycota
- A61K36/066—Clavicipitaceae
- A61K36/068—Cordyceps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation or decoction
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种香菇复合多糖组合物及其制备方法和应用。一种香菇复合多糖组合物，包括重量份如下的各组分：香菇提取物0.5‑5份、灰树花提取物0.5‑5份、蛹虫草提取物0.5‑5份、中性三七多糖提取物0‑5份。本发明有助于免疫力低下者及肿瘤患者增强免疫力，改善精神萎靡、体虚乏力、食欲降低、恶心呕吐、便溏泄泻、大便干燥、烦躁失眠等症状，有效减轻放化疗及手术对肿瘤病人的危害，提高肿瘤病人的生存质量，延长肿瘤病人的生存期。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种香菇复合多糖组合物及其制备方法和应用。
背景技术
国际上，真菌多糖被称为“生物反应调节剂”，简称“BRM”，具有广泛的药理作用，如调节免疫功能、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗溃疡、抗细菌和抗凝聚的作用，提高肝功能和解毒力，提高动物耐缺氧能力和氧的利用率，降低血液的粘稠度，增加心肌收缩力，改善心律、降血糖、镇静、镇痛、平喘、止咳、化痰等功效。多糖类化合物具有较好的生物相容性，基本无毒副作用。近年来，多糖已成为药品和保健食品研究开发的重要领域。
香菇素有"山珍之王"之称，是高蛋白、低脂肪的营养保健食品。中国历代医学家对香菇均有著名论述。现代医学和营养学不断深入研究，香菇的药用价值也不断被发掘。香菇中麦角甾醇含量很高，对防治佝偻病有效；香菇含有六大酶类的40多种酶，可以纠正人体酶缺乏症；香菇中的脂肪所含脂肪酸，对人体降低血脂有益；香菇多糖(β～1,3葡聚糖)能增强细胞免疫能力，从而抑制癌细胞的生长；香菇多糖的英文名称：Lentinan(瘤停能)。香菇多糖是一种以β-D(1→3)葡聚糖残基为主链，侧链为(1→6)葡聚糖残基的葡聚糖。具有免疫增强作用，其在体内虽无直接杀伤肿瘤细胞作用，但可通过增强机体的免疫功能而发挥抗肿瘤活性。在体内能使脾脏和腹腔的NK细胞活性增强，诱生干扰素与本品剂量相关，其活性与白细胞介素类或干扰素诱导剂有协同作用。可与放疗、化疗、手术配合，主要用于不宜手术或复发的胃肠道肿瘤。本品加放疗、化疗治疗小细胞肺癌、乳腺癌、恶性淋巴瘤等。也可用于癌性胸腹水的治疗。
灰树花(舞茸)作为一种药、食两用菌，其化学成分有多糖、蛋白质等，药理作用免疫调节、抗肿瘤、抗糖尿病、抗高脂血、抗病毒等方面的药理活性。灰树花多糖是灰树花中的一种提取物，由葡聚糖、葡萄糖、木糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、丰乳糖及少量蛋白质的异聚糖复合物组成。灰树花多糖中含有一种蛋白多糖，中文名叫舞茸地复仙(舞茸D-fraction)它的蛋白和多糖的比例是7：3平均分子量是100万。多糖部分由具有β-(1-3)侧链的β-(1-6)葡聚糖和具有β-(1-6)侧链的β-(1-3)葡聚糖组成。舞茸地复仙最有抗癌防癌的作用。目前，在保健行业中，应用比较多的有灰树花多糖、灵芝多糖、香菇多糖、银耳多糖等，其中又以灰树花和香菇复合而成的复合真菌多糖为主。
蛹虫草由子座(即草部分)与菌核(即虫的尸体部分)两部分组成的复合体。季幼虫蛰居土里，菌类寄生其中，吸取营养，幼虫体内充满菌丝而死。到了夏季，自幼虫尸体之上生出幼苗，形似草，夏至前后采集而得。又名北冬虫夏草、北虫草等。虫草多糖的抗肿瘤作用：观察虫草多糖对小鼠体内培养的人体白血病U937细胞的抑制作用。结果显示由虫草多糖刺激的血液单核细胞培养基(PSCS—MNC—CM)能有效地抑制U937细胞的增生，抑制率达78-83％。
专利CN 201210412332.1一种香菇多糖胶囊,其特征在于它由以下原料药制成,香菇20-30g、枸杞10-20g、灵芝5-10g，茯苓5-10g。制备方法为：按原料药的重量比重称取各组分，分别研成细末，将香菇在90－95℃水浴煎煮，100目过滤，滤液浓缩清膏状，加枸杞、灵芝、茯苓细粉，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊中，即得。本发明的优点是:具有提高人体免疫力的功效，且药食同源，无毒副作用。但该胶囊，效果不是十分理想。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种香菇复合多糖组合物及其制备方法和应用。
本发明提供了如下的技术方案：
一种香菇复合多糖组合物，包括重量份如下的各组分：香菇提取物0.5-5份、灰树花提取物0.5-5份、蛹虫草提取物0.5-5份、中性三七多糖提取物0-5份。
在上述任一方案中优选的是，包括重量份如下的各组分：香菇提取物0.5-5份、灰树花提取物0.5-5份、蛹虫草提取物0.5-5份、中性三七多糖提取物0.5-5份。
在上述任一方案中优选的是，包括重量份如下的各组分：香菇提取物4.5份，灰树花提取物1份，蛹虫草提取物0.5份，中性三七多糖提取物0.5份。
在上述任一方案中优选的是，剂量为6.5克，香菇提取物0.5-5克，灰树花提取物0.5-5克，蛹虫草提取物0.5-5克，中性三七多糖提取物0.5-5克。
在上述任一方案中优选的是，剂量为6.5克，香菇提取物4.5克，灰树花提取物1克，蛹虫草提取物0.5克，中性三七多糖提取物0.5克。
在上述任一方案中优选的是，还包括辅料。
在上述任一方案中优选的是，所述香菇提取物收率为9-13.29％，所述灰树花提取物收率为5-8％，所述蛹虫草提取物收率为9-11％，所述中性三七多糖提取物收率为0.32-0.42％。
在上述任一方案中优选的是，所述香菇提取物中香菇多糖含量为22-31％，所述灰树花提取物中灰树花多糖含量为23-27％，所述蛹虫草提取物中蛹虫草多糖含量为51-55％，所述中性三七多糖提取物中的中性三七多糖含量为80-94％。
在上述任一方案中优选的是，所述香菇提取物的提取方法：将香菇粉碎，加入12-16倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入7-14倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入5-7倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述香菇提取物。
在上述任一方案中优选的是，所述香菇提取物的提取方法：将香菇粉碎，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至相对密度为1.06，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述香菇提取物。
在上述任一方案中优选的是，所述灰树花提取物的提取方法：灰树花加入11-13倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入6-8倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入6-8倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述灰树花提取物。
在上述任一方案中优选的是，所述灰树花提取物的提取方法：灰树花加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述灰树花提取物。
在上述任一方案中优选的是，所述蛹虫草提取物的提取方法：蛹虫草加入9-14倍量水浸泡11-13小时，回流提取7-8h，滤除溶液，药材再加入6-10倍量的水回流提取4-6h，滤除溶液，药材再加入4-6倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述蛹虫草提取物。
在上述任一方案中优选的是，所述蛹虫草提取物的提取方法：蛹虫草加入9倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述蛹虫草提取物。
在上述任一方案中优选的是，所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入9-11倍量水，沸水浴煮5-9h，收集滤液，第二次加入4-6倍量水，沸水浴5-9h，合并两次滤液，4000-5000rpm离心4-6min，取上清，70-90℃旋转浓缩至原体积的1/9-1/7，静置22-26h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，40-60℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成28-32mg/mL，4000-5000rpm离心8-12min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(3)用水洗脱，洗脱4-6倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/11-1/9的体积；
(4)将步骤(3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析35-37h，每3-5h换一次水；
(5)将步骤(4)得到的洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物。
在上述任一方案中优选的是，所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入10倍量水，沸水浴煮8h，收集滤液，第二次加入5倍量水，沸水浴8h，合并两次滤液，4500rpm离心5min，取上清，80℃旋转浓缩至原体积的1/8，静置24h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，4℃放置12h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，50℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成30mg/mL，4500rpm离心10min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(3)用水洗脱，洗脱5倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/10的体积；
(4)将步骤(3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析36h，每4h换一次水；
(5)步骤(4)得到的将洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物。
在上述任一方案中优选的是，硫酸-蒽酮法测定所述香菇提取物中，香菇多糖的含量为22.97％。
在上述任一方案中优选的是，硫酸-蒽酮法测定所述灰树花提取物中，灰树花多糖的含量为23.90％。
在上述任一方案中优选的是，硫酸-蒽酮法测定所述蛹虫草提取物中，蛹虫草多糖的含量为54.55％。
在上述任一方案中优选的是，硫酸-蒽酮法测定所述中性三七多糖提取物中，中性三七多糖的含量为93.6％。
在上述任一方案中优选的是，所述猴头菇复合多糖组合物可加入或不加辅料制备成口服剂型。
在上述任一方案中优选的是，所述口服剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液。
本发明还提供所述的香菇复合多糖组合物的制备方法，包括以下各步骤：
(1)所述香菇提取物的提取方法：将香菇粉碎，加入12-16倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入7-14倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入5-7倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述香菇提取物；
(2)所述灰树花提取物的提取方法：灰树花加入11-13倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入6-8倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入6-8倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述灰树花提取物；
(3)所述蛹虫草提取物的提取方法：蛹虫草加入9-14倍量水浸泡11-13小时，回流提取7-8h，滤除溶液，药材再加入6-10倍量的水回流提取4-6h，滤除溶液，药材再加入4-6倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述蛹虫草提取物；
(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(4.1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入9-11倍量水，沸水浴煮5-9h，收集滤液，第二次加入4-6倍量水，沸水浴5-9h，合并两次滤液，4000-5000rpm离心4-6min，取上清，70-90℃旋转浓缩至原体积的1/9-1/7，静置22-26h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，40-60℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(4.2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成28-32mg/mL，4000-5000rpm离心8-12min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(4.3)用水洗脱，洗脱4-6倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/11-1/9的体积；
(4.4)将步骤(4.3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析35-37h，每3-5h换一次水；
(4.5)步骤(4.4)得到的将洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物；
(5)将所述香菇提取物、灰树花提取物、蛹虫草提取物、中性三七多糖提取物混合得所述的猴头菇复合多糖组合物。
在上述任一方案中优选的是，步骤(1)所述香菇提取物的提取方法：将香菇粉碎，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至相对密度为1.06，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述香菇提取物。
在上述任一方案中优选的是，步骤(2)所述灰树花提取物的提取方法：灰树花加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述灰树花提取物。
在上述任一方案中优选的是，步骤(3)所述蛹虫草提取物的提取方法：蛹虫草加入9倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述蛹虫草提取物。
在上述任一方案中优选的是，步骤(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(4.1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入10倍量水，沸水浴煮8h，收集滤液，第二次加入5倍量水，沸水浴8h，合并两次滤液，4500rpm离心5min，取上清，80℃旋转浓缩至原体积的1/8，静置24h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，4℃放置12h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，50℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(4.2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成30mg/mL，4500rpm离心10min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(4.3)用水洗脱，洗脱5倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/10的体积；
(4.4)将步骤(4.3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析36h，每4h换一次水；
(4.5)步骤(4.4)得到的将洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物。
本发明所述的香菇复合多糖组合物用于增强免疫力低下者或肿瘤患者免疫力的药物的制备。
本发明产品口服推荐用量为：一天2-3次，一次1-2袋。
本发明有助于免疫力低下者及肿瘤患者增强免疫力，改善精神萎靡、体虚乏力、食欲降低、恶心呕吐、便溏泄泻、大便干燥、烦躁失眠等症状，有效减轻放化疗及手术对肿瘤病人的危害，提高肿瘤病人的生存质量，延长肿瘤病人的生存期。
附图说明
图1是本发明一种香菇复合多糖组合物及其制备方法和应用的一优选实施例的中的中性三七多糖的高效凝胶渗透色谱图。
具体实施方式
为了进一步了解本发明的技术特征，下面结合具体实施例对本发明进行详细地阐述。实施例只对本发明具有示例性的作用，而不具有任何限制性的作用，本领域的技术人员在本发明的基础上做出的任何非实质性的修改，都应属于本发明的保护范围。
本发明中使用的提取过三七总皂苷的废渣即三七总皂苷废渣，包括采用任何方式提取三七总皂苷后得到的废渣，也可以从提取三七总皂苷的原料药厂得到。实施例1：香菇复合多糖颗粒剂
包括：
加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。
本实施例所述香菇复合多糖颗粒剂的制备方法，包括以下各步骤：
(1)所述香菇提取物的提取方法：将香菇粉碎，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至相对密度为1.06，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述香菇提取物；所述香菇提取物的提取收率为13.29％，硫酸-蒽酮法测定所述香菇提取物中香菇多糖含量为22.97％；
(2)所述灰树花提取物的提取方法：灰树花加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述灰树花提取物；所述灰树花提取物的提取收率为5.91％，硫酸-蒽酮法测定所述灰树花提取物中灰树花多糖含量为23.90％；
(3)所述蛹虫草提取物的提取方法：蛹虫草加入9倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述蛹虫草提取物；所述蛹虫草提取物的提取收率为9.02％，硫酸-蒽酮法测定所述蛹虫草提取物中蛹虫草多糖含量为54.55％；
(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(4.1)三七粗多糖的提取：称取提取过三七总皂苷的废渣1kg，第一次加入10倍量水，沸水浴煮8h，收集滤液，第二次加入5倍量水，沸水浴8h。合并两次滤液，4500rpm离心5min，取上清。80℃旋转浓缩至原体积的1/8，静置24h，离心，弃沉淀，缓慢加入三倍无水乙醇，边加边搅拌，4℃放置12h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入三倍无水乙醇，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，50℃烘箱烘干，即得三七粗多糖。
(4.2)DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化粗多糖
(4.2.1)装柱：湿法装柱，柱子塞入棉花，柱内加入蒸馏水并保持一小段液位，玻璃棒按压棉花祛除气泡。用玻璃棒引导匀浆沿柱内壁缓慢倒入柱内，不能产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，用水清洗层析柱边沿。装柱时不能有断层，然后用蒸馏水平衡，柱规格为2.4×40cm。
(4.2.2)上样：三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成30mg/mL，4500rpm离心10min，上清液0.45μm滤头过滤，上样。上样时，将层析柱出液口打开，待蒸馏水下移至柱床表面时，关闭出液口，用滴管沿柱内壁加入三七多糖溶液，打开出液口，让样品液全部流入柱子内部，并用少量蒸馏水冲洗柱内壁，然后行洗脱。
(4.2.3)洗脱：用水洗脱，洗脱约5倍柱体积，流速为0.8mL/min，每管接2mL，减压浓缩至1/10的体积。
(4.2.4)透析：把透析袋剪成每段约10cm，放于蒸馏水中煮沸30min，洗三遍后再煮沸10min，蒸馏水洗干净。透析袋可以使用三次，第二次用2％NaHCO3和1mmol/L EDTA煮沸后清洗。分别将浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，约1/2体积，用透析夹夹紧透析袋两端，放于蒸馏水中透析36h，每4h换一次水。
(4.2.5)冷冻干燥：将洗脱液收集于50mL离心管，装约16mL，-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机36h，取出后加入约1mL蒸馏水溶解，摇匀。-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机24h。取出后封口于干燥器中保存。蒽酮-硫酸法测定中性三七多糖PNPS I，PNPS I(中性多糖)含量93.6％，中性三七多糖提取物得率0.42％，中性三七多糖PNPS I高效凝胶渗透色谱图如图1所示；高效凝胶渗透色谱测得数均分子量为11170，重均分子量为31590，多分散性系数D(Mw/Mn)为2.828。
(5)将所述香菇提取物、灰树花提取物、蛹虫草提取物、中性三七多糖提取物混合得所述的猴头菇复合多糖组合物，加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。
本实施例的制备方法中，得到的中性三七多糖，采用MTT法测定中性三七多糖对人牙周膜干细胞体外增殖的影响
采用常规细胞培养法培养细胞。取7代对数生长期的人牙周膜干细胞，计数后调细胞浓度，接种于96孔板，100个/孔，每孔90μl，CO2培养箱培养12小时后分别加中性三七多糖(PNPS I)以及三七粗多糖溶液各10μl，使作用于细胞的终浓度为6.72mg/ml、4.48mg/ml、2.24mg/ml、1.12mg/ml、560ug/ml、280ug/ml、140ug/ml、70ug/ml，每个浓度设6个平行孔，阴性对照为等体积MEM-ALPHA培养液，加生理盐水10μl。48小时后，加MTT溶液(5mg/ml)20μl每孔，继续培养4小时，每孔加入150μlDMSO充分溶解，用酶标仪测定各孔的A570值。计算不同浓度的A570的OD值，实验结果见表1：
表1三七多糖对人牙周膜干细胞体外增殖的影响实验结果(n＝6)
注：*P<0.05；**P<0.01
由表1中数据可知，中性三七多糖PNPSⅠ在浓度35～1120ug/ml，对人牙周膜干细胞具有明显的增殖促进作用；相对于三七粗多糖，中性三七多糖PNPSⅠ对人牙周膜干细胞的增殖促进作用更为显著。
实施例2香菇复合多糖片剂
包括：
加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，压片，包薄膜衣，分装成12000片，100片/瓶。
本实施例的香菇复合多糖片剂的制备方法与实施例1的不同之处仅在于：
(5)将所述香菇提取物、灰树花提取物、蛹虫草提取物、中性三七多糖提取物混合得所述的猴头菇复合多糖组合物，加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，压片，包薄膜衣，分装成12000片，100片/瓶。
实施例3：香菇复合多糖颗粒剂
包括：
香菇提取物 1kg
灰树花提取物 5.0kg
蛹虫草提取物 0.5kg
加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。
本实施例的香菇复合多糖颗粒剂的制备方法与实施例1相同。
实施例4：香菇复合多糖颗粒剂
包括：
加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。
本实施例所述香菇复合多糖颗粒剂的制备方法，包括以下各步骤：
(1)所述香菇提取物的提取方法：将香菇粉碎，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取5h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至相对密度为1.04，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为20h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述香菇提取物；所述香菇提取物的提取收率为13.29％，硫酸-蒽酮法测定所述香菇提取物中香菇多糖含量为22.97％；
(2)所述灰树花提取物的提取方法：灰树花加入12倍量水浸泡11小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述灰树花提取物；所述灰树花提取物的提取收率为5.91％，硫酸-蒽酮法测定所述灰树花提取物中灰树花多糖含量为23.90％；
(3)所述蛹虫草提取物的提取方法：蛹虫草加入9倍量水浸泡11小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述蛹虫草提取物；所述蛹虫草提取物的提取收率为9.02％，硫酸-蒽酮法测定所述蛹虫草提取物中蛹虫草多糖含量为54.55％；
(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法同实施例1；
(4.1)三七粗多糖的提取：称取提取过三七总皂苷的废渣1kg，第一次加入9倍量水，沸水浴煮5h，收集滤液，第二次加入4倍量水，沸水浴5h。合并两次滤液，4000rpm离心4min，取上清。70℃旋转浓缩至原体积的1/9，静置22h，离心，弃沉淀，缓慢加入2倍无水乙醇，边加边搅拌，3℃放置10h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，3℃放置10h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，40℃烘箱烘干，即得三七粗多糖。
(4.2)DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化粗多糖
(4.2.1)装柱：湿法装柱，柱子塞入棉花，柱内加入蒸馏水并保持一小段液位，玻璃棒按压棉花祛除气泡。用玻璃棒引导匀浆沿柱内壁缓慢倒入柱内，不能产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，用水清洗层析柱边沿。装柱时不能有断层，然后用蒸馏水平衡，柱规格为2.4×40cm。
(4.2.2)上样：三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成28mg/mL，4000rpm离心8min，上清液0.45μm滤头过滤，上样。上样时，将层析柱出液口打开，待蒸馏水下移至柱床表面时，关闭出液口，用滴管沿柱内壁加入三七多糖溶液，打开出液口，让样品液全部流入柱子内部，并用少量蒸馏水冲洗柱内壁，然后行洗脱。
(4.2.3)洗脱：用水洗脱，洗脱约4倍柱体积，流速为0.8mL/min，每管接2mL，减压浓缩至1/11的体积。
(4.2.4)透析：把透析袋剪成每段约10cm，放于蒸馏水中煮沸30min，洗三遍后再煮沸10min，蒸馏水洗干净。透析袋可以使用三次，第二次用2％NaHCO3和1mmol/L EDTA煮沸后清洗。分别将浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，约1/2体积，用透析夹夹紧透析袋两端，放于蒸馏水中透析35h，每3h换一次水。
(4.2.5)冷冻干燥：将洗脱液收集于50mL离心管，装约16mL，-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机36h，取出后加入约1mL蒸馏水溶解，摇匀。-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机24h。取出后封口于干燥器中保存。蒽酮-硫酸法测定中性三七多糖PNPS I，PNPS I(中性多糖)含量80％，得率0.40％；
(5)将所述香菇提取物、灰树花提取物、蛹虫草提取物、中性三七多糖提取物混合得所述的猴头菇复合多糖组合物，加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。
实施例5香菇复合多糖片剂
包括：
加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，压片，包薄膜衣，分装成12000片，100片/瓶。
本实施例所述香菇复合多糖片剂的制备方法，包括以下各步骤：
(1)所述香菇提取物的提取方法：将香菇粉碎，加入16倍量水浸泡13小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入14倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至相对密度为1.08，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述香菇提取物。所述香菇提取物的提取收率为13.29％，硫酸-蒽酮法测定所述香菇提取物中香菇多糖含量为22.97％；
(2)所述灰树花提取物的提取方法：灰树花加入13倍量水浸泡13小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入8倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入8倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述灰树花提取物。所述灰树花提取物的提取收率为5.91％，硫酸-蒽酮法测定所述灰树花提取物中灰树花多糖含量为23.90％；
(3)所述蛹虫草提取物的提取方法：蛹虫草加入14倍量水浸泡13小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入10倍量的水回流提取6h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述蛹虫草提取物。所述蛹虫草提取物的提取收率为9.02％，硫酸-蒽酮法测定所述蛹虫草提取物中蛹虫草多糖含量为54.55％；
(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(4.1)三七粗多糖的提取：称取提取过三七总皂苷的废渣1kg，第一次加入11倍量水，沸水浴煮9h，收集滤液，第二次加入6倍量水，沸水浴9h。合并两次滤液，5000rpm离心6min，取上清。90℃旋转浓缩至原体积的1/7，静置26h，离心，弃沉淀，缓慢加入4倍无水乙醇，边加边搅拌，5℃放置14h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，5℃放置14h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，60℃烘箱烘干，即得三七粗多糖。
(4.2)DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化粗多糖
(4.2.1)装柱：湿法装柱，柱子塞入棉花，柱内加入蒸馏水并保持一小段液位，玻璃棒按压棉花祛除气泡。用玻璃棒引导匀浆沿柱内壁缓慢倒入柱内，不能产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，用水清洗层析柱边沿。装柱时不能有断层，然后用蒸馏水平衡，柱规格为2.4×40cm。
(4.2.2)上样：三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成32mg/mL，5000rpm离心12min，上清液0.45μm滤头过滤，上样。上样时，将层析柱出液口打开，待蒸馏水下移至柱床表面时，关闭出液口，用滴管沿柱内壁加入三七多糖溶液，打开出液口，让样品液全部流入柱子内部，并用少量蒸馏水冲洗柱内壁，然后行洗脱。
(4.2.3)洗脱：用水洗脱，洗脱约6倍柱体积，流速为0.8mL/min，每管接2mL，减压浓缩至1/9的体积。
(4.2.4)透析：把透析袋剪成每段约10cm，放于蒸馏水中煮沸30min，洗三遍后再煮沸10min，蒸馏水洗干净。透析袋可以使用三次，第二次用2％NaHCO3和1mmol/L EDTA煮沸后清洗。分别将浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，约1/2体积，用透析夹夹紧透析袋两端，放于蒸馏水中透析37h，每5h换一次水。
(4.2.5)冷冻干燥：将洗脱液收集于50mL离心管，装约16mL，-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机36h，取出后加入约1mL蒸馏水溶解，摇匀。-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机24h。取出后封口于干燥器中保存。蒽酮-硫酸法测定中性三七多糖PNPS I，PNPS I(中性多糖)含量93.6％，得率0.42％；
(5)将所述香菇提取物、灰树花提取物、蛹虫草提取物、中性三七多糖提取物混合得所述的猴头菇复合多糖组合物，加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，压片，包薄膜衣，分装成12000片，100片/瓶。
实验例1：香菇复合多糖组合物肿瘤患者免疫功能及生存质量的影响
1资料与方法
1.1一般资料
选择36例2014年3月一2015年3月肿瘤患者作为研究对象，男性患者20例，女性患者16例，年龄18～80岁，平均年龄(67.2±5.3)岁。所有患者经病理组织学或细胞学检查均确诊为晚期恶性肿瘤，诊断标准参照《常见恶性肿瘤诊治规范》中的相关规定，并依据国际抗癌联盟(UICC)临床分期，治疗前所有患者的卡氏评分均≥60分，其中8例患者为肺癌，8例患者为胃癌，6例患者为大肠癌，6例患者为乳腺癌，5例患者为肝癌，2例患者为胰腺癌，1例患者为膀胱癌。
1.2方法
所有患者，随机分为3组，观察组12人，对照组1 12人，对照组2 12人。
观察组予实施例1香菇复合多糖组合物(单剂量为6.5g/袋，其中香菇提取物4.5g、灰树花提取物1g、蛹虫草提取物0.5g、中性三七多糖提取物0.5g)早晚各1次，一次2袋，连服3周。
对照组1予香菇复合多糖组合物(单剂量为6.5g/袋，其中香菇提取物4.5g、灰树花提取物1g、蛹虫草提取物1g，制备方法与实施例1相同)早晚各1次，一次2袋，连服3周。
对照组2予实施例1香菇复合多糖组合物(单剂量为6.5g/袋，其中香菇提取物6.2g、灰树花提取物0.1g、蛹虫草提取物0.1g、中性三七多糖提取物0.1g)早晚各1次，一次2袋，连服3周。
治疗结束后对患者治疗前后的免疫功能变化和生存质量进行观察和比较。
1.3疗效评价标准
疗效以临床症状缓解情况进行评价：治疗后疼痛消失为显著缓解；与治疗前相比疼痛有明显减轻为部分缓解；与治疗前相比疼痛减轻但疼痛仍明显为轻度缓解；与治疗前相比疼痛无减轻为无效。缓解有效率＝[(显著缓解+部分缓解)/总例数]×100％。
1.4统计学方法
采用SPSS17.0统计软件对统计所得的具体数据进行分析，所有计量资料用均t检
验，所有计量资料用均数±标准差表示，计数资料比较采用t检验，如果P<0.05，则表示结果有统计学意义。
2结果
2.1 36例患者治疗前后免疫功能变化情况比较分析
患者治疗前后免疫功能变化情况见表1，由表中数据可知，治疗后患者外周血中的T细胞亚群CD3、CD4与治疗前相比均有显著的提高(P<0.05)，CD8与治疗前相比无显著变化(P>0.05)，而NK细胞比例有显著的提高(P<0.05)。
表1患者治疗前后免疫功能变化情况比较
*治疗前后比较，P＜0.05
2.2 36例患者治疗前后生活质量变化情况比较分析
患者治疗前后KPS评分、体重变化情况见表2，由表中数据可知，治疗前后患者的体重无显著变化(P>0.05)，而KPS评分有了显著的提高(P<0.05)。
表2患者治疗前后KPS评分、体重变化情况比较
*治疗前后比较，P＜0.05
3疗效
表3患者治疗后疗效结果
4|结论
在本次研究中，治疗后患者外周血中的T细胞亚群CD3、CD4、NK与治疗前相比均有显著的提高，CD8与治疗前相比无显著变化(P>0.05)。另外患者食少纳呆、心悸自汗、疲倦乏力、气短懒言等临床症状缓解有效率分别为78.4％、79.0％、81.0％、78.8％。由此可见通过香菇复合多糖组合物治疗，患者的免疫功能和生活质量均有了显著提高，不仅能够提高患者的免疫功能，同时还能有效改善患者食少纳呆、心悸自汗、疲倦乏力、气短懒言等临床症状，提高患者的生存质量。
Claims (28)
1.一种香菇复合多糖组合物，由重量份如下的各组分组成：香菇提取物0.5-5份、灰树花提取物0.5-5份、蛹虫草提取物0.5-5份、中性三七多糖提取物0-5份。
2.根据权利要求1所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：由重量份如下的各组分组成：香菇提取物0.5-5份、灰树花提取物0.5-5份、蛹虫草提取物0.5-5份、中性三七多糖提取物0.5-5份。
3.根据权利要求1所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：由重量份如下的各组分组成：香菇提取物4.5份，灰树花提取物1份，蛹虫草提取物0.5份，中性三七多糖提取物0.5份。
4.根据权利要求1所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：剂量为6.5克，香菇提取物0.5-5克，灰树花提取物0.5-5克，蛹虫草提取物0.5-5克，中性三七多糖提取物0.5-5克。
5.根据权利要求4所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：剂量为6.5克，香菇提取物4.5克，灰树花提取物1克，蛹虫草提取物0.5克，中性三七多糖提取物0.5克。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：还包括辅料。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述香菇提取物收率为9-13.29％，所述灰树花提取物收率为5-8％，所述蛹虫草提取物收率为9-11％，所述中性三七多糖提取物收率为0.32-0.42％。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述香菇提取物中香菇多糖含量为22-31％，所述灰树花提取物中灰树花多糖含量为23-27％，所述蛹虫草提取物中蛹虫草多糖含量为51-55％，所述中性三七多糖提取物中的中性三七多糖含量为80-94％。
9.根据权利要求1至5中任一项所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述香菇提取物的提取方法：将香菇粉碎，加入12-16倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入7-14倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入5-7倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述香菇提取物。
10.根据权利要求9所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述香菇提取物的提取方法：将香菇粉碎，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至相对密度为1.06，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述香菇提取物。
11.根据权利要求1至5中任一项所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述灰树花提取物的提取方法：灰树花加入11-13倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入6-8倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入6-8倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述灰树花提取物。
12.根据权利要求11所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述灰树花提取物的提取方法：灰树花加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述灰树花提取物。
13.根据权利要求1至5中任一项所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述蛹虫草提取物的提取方法：蛹虫草加入9-14倍量水浸泡11-13小时，回流提取7-8h，滤除溶液，药材再加入6-10倍量的水回流提取4-6h，滤除溶液，药材再加入4-6倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述蛹虫草提取物。
14.根据权利要求13所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述蛹虫草提取物的提取方法：蛹虫草加入9倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述蛹虫草提取物。
15.根据权利要求1至5中任一项所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入9-11倍量水，沸水浴煮5-9h，收集滤液，第二次加入4-6倍量水，沸水浴5-9h，合并两次滤液，4000-5000rpm离心4-6min，取上清，70-90℃旋转浓缩至原体积的1/9-1/7，静置22-26h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀， 75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，40-60℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成28-32mg/mL，4000-5000rpm离心8-12min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(3)用水洗脱，洗脱4-6倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/11-1/9的体积；
(4)将步骤(3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析35-37h，每3-5h换一次水；
(5)步骤(4)得到的将洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物。
16.根据权利要求1至5中任一项所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入10倍量水，沸水浴煮8h，收集滤液，第二次加入5倍量水，沸水浴8h，合并两次滤液，4500rpm离心5min，取上清，80℃旋转浓缩至原体积的1/8，静置24h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，50℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成30mg/mL，4500rpm离心10min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(3)用水洗脱，洗脱5倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/10的体积；
(4)将步骤(3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析36h，每4h换一次水；
(5)步骤(4)得到的将洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物。
17.根据权利要求10所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：硫酸-蒽酮法测定所述香菇提取物中，香菇多糖的含量为22.97％。
18.根据权利要求12所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：硫酸-蒽酮法测定所述灰树花提取物中，灰树花多糖的含量为23.90％。
19.根据权利要求14所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：硫酸-蒽酮法测定所述蛹虫草提取物中，蛹虫草多糖的含量为54.55％。
20.根据权利要求16所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：硫酸-蒽酮法测定所述中性三七多糖提取物中，中性三七多糖的含量为93.6％。
21.根据权利要求1至5中任一项所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述香菇复合多糖组合物加入或不加辅料制备成口服剂型。
22.根据权利要求21所述的香菇复合多糖组合物，其特征在于：所述口服剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液。
23.根据权利要求1至9中任一项、11、13、15或17至22中任一项所述的香菇复合多糖组合物的制备方法，包括以下各步骤：
(1)所述香菇提取物的提取方法：将香菇粉碎，加入12-16倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入7-14倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入5-7倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述香菇提取物；
(2)所述灰树花提取物的提取方法：灰树花加入11-13倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入6-8倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入6-8倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述灰树花提取物；
(3)所述蛹虫草提取物的提取方法：蛹虫草加入9-14倍量水浸泡11-13小时，回流提取7-8h，滤除溶液，药材再加入6-10倍量的水回流提取4-6h，滤除溶液，药材再加入4-6倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述蛹虫草提取物；
(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(4.1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入9-11倍量水，沸水浴煮5-9h，收集滤液，第二次加入4-6倍量水，沸水浴5-9h，合并两次滤液，4000-5000rpm离心4-6min，取上清，70-90℃旋转浓缩至原体积的1/9-1/7，静置22-26h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀， 75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，40-60℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(4.2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成28-32mg/mL，4000-5000rpm离心8-12min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(4.3)用水洗脱，洗脱4-6倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/11-1/9的体积；
(4.4)将步骤(4.3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析35-37h，每3-5h换一次水；
(4.5)步骤(4.4)得到的将洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物；
(5)将所述香菇提取物、灰树花提取物、蛹虫草提取物、中性三七多糖提取物混合得所述的猴头菇复合多糖组合物。
24.根据权利要求23所述的香菇复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述香菇提取物的提取方法：将香菇粉碎，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至相对密度为1.06，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述香菇提取物。
25.根据权利要求23所述的香菇复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述灰树花提取物的提取方法：灰树花加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述灰树花提取物。
26.根据权利要求23所述的香菇复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：步骤(3)所述蛹虫草提取物的提取方法：蛹虫草加入9倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述蛹虫草提取物。
27.根据权利要求23所述的香菇复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：步骤(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(4.1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入10倍量水，沸水浴煮8h，收集滤液，第二次加入5倍量水，沸水浴8h，合并两次滤液，4500rpm离心5min，取上清，80℃旋转浓缩至原体积的1/8，静置24h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，4℃放置12h，抽滤得沉淀， 75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，50℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(4.2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成30mg/mL，4500rpm离心10min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(4.3)用水洗脱，洗脱5倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/10的体积；
(4.4)将步骤(4.3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析36h，每4h换一次水；
(4.5)将步骤(4.4)得到的洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物。
28.根据权利要求1至22中任一项所述的香菇复合多糖组合物用于增强免疫力低下者或肿瘤患者免疫力的药物的制备。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710476471.3A CN107260768B (zh) | 2017-06-21 | 2017-06-21 | 一种香菇复合多糖组合物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710476471.3A CN107260768B (zh) | 2017-06-21 | 2017-06-21 | 一种香菇复合多糖组合物及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107260768A CN107260768A (zh) | 2017-10-20 |
| CN107260768B true CN107260768B (zh) | 2018-06-22 |
Family
ID=60068564
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710476471.3A Active CN107260768B (zh) | 2017-06-21 | 2017-06-21 | 一种香菇复合多糖组合物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107260768B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116640234B (zh) * | 2023-06-21 | 2024-05-03 | 上海海洋大学 | 一种三七花多糖rn0d及其制备方法和用途 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101999575A (zh) * | 2010-09-16 | 2011-04-06 | 武斌 | 一种增强机体免疫力并能控制糖尿病的产品 |
| CN102961424A (zh) * | 2012-11-23 | 2013-03-13 | 云南云科药业有限公司 | 一种三七多糖提取物及其制备方法与制剂及应用 |
| CN104382961A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-04 | 黑龙江众生生物工程有限公司 | 一种增加免疫力的艾克胶囊及其制备方法 |
| CN105085704A (zh) * | 2015-09-15 | 2015-11-25 | 上海瑞丰农业科技有限公司 | 一种蛹虫草活性多糖的制备方法 |
| CN106822190A (zh) * | 2017-04-14 | 2017-06-13 | 南京圣诺生物科技实业有限公司 | 一种增强免疫力的配方、组合物及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103989699A (zh) * | 2014-05-23 | 2014-08-20 | 浙江方格药业有限公司 | 千菌花菌菇复配多糖粉及其制备方法 |
-
2017
- 2017-06-21 CN CN201710476471.3A patent/CN107260768B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101999575A (zh) * | 2010-09-16 | 2011-04-06 | 武斌 | 一种增强机体免疫力并能控制糖尿病的产品 |
| CN102961424A (zh) * | 2012-11-23 | 2013-03-13 | 云南云科药业有限公司 | 一种三七多糖提取物及其制备方法与制剂及应用 |
| CN104382961A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-04 | 黑龙江众生生物工程有限公司 | 一种增加免疫力的艾克胶囊及其制备方法 |
| CN105085704A (zh) * | 2015-09-15 | 2015-11-25 | 上海瑞丰农业科技有限公司 | 一种蛹虫草活性多糖的制备方法 |
| CN106822190A (zh) * | 2017-04-14 | 2017-06-13 | 南京圣诺生物科技实业有限公司 | 一种增强免疫力的配方、组合物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 复合真菌多糖抗肿瘤作用研究;章荣华等;《实用预防医学》;20000630;第7卷(第3期);第175页左栏第1段、第176-177页第3节"讨论" * |
| 多糖的研究进展_多糖对机体免疫功能的影响;陈小燕等;《肠胃病学和肝病学杂志》;20061031;第15卷(第5期);第540-543页 * |
| 天然药物——多糖的主要生物活性及分离纯化方法;方积年等;《中国天然药物》;20070930;第5卷(第5期);第340页右栏第2.1.1节、第342页左栏第2.3.1节 * |
| 食药用真菌多糖及复合多糖生物活性研究;张峰源等;《生命科学研究》;20060630;第10卷(第2期);第85-89页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107260768A (zh) | 2017-10-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1523988B1 (en) | Composition comprising radix codonopsis pilosulae and radix astragali for the treatment of acute lung injury | |
| CN101214342A (zh) | 具有抗肿瘤转移作用的重楼总皂苷提取物及其药物制剂 | |
| CN103494197A (zh) | 一种具有增强免疫力和辅助降血糖功能的保健食品及制备方法 | |
| CN105017438B (zh) | 一种白背三七多糖及其在制备用于免疫调节和抗肿瘤的药物和功能食品中的应用 | |
| CN101067006A (zh) | 低分子姬松茸多糖及制备方法和在抗肿瘤转移药中的应用 | |
| CN107260768B (zh) | 一种香菇复合多糖组合物及其制备方法和应用 | |
| CN102579803B (zh) | 一种治疗化疗后白细胞减少症的药物及其制备方法 | |
| CN107174592B (zh) | 一种猴头菇复合多糖组合物及其制备方法和应用 | |
| CN107519327A (zh) | 一种桑黄中药组合物及其提取方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN114848786A (zh) | 一种抗癌、增加免疫力的复方三参汤 | |
| CN100502926C (zh) | 治疗胃癌前期病变的中药混合制剂的制备方法 | |
| CN107898920A (zh) | 一种用于糖尿病的口含制品与制备方法 | |
| CN101007052A (zh) | 一种抗肿瘤药物及其制备方法 | |
| CN103463253B (zh) | 一种癌症术后防复发的真菌药物及其生产方法 | |
| CN106857994A (zh) | 一种松针保健茶及其制备方法 | |
| CN102614238A (zh) | 灵芝人参药性菌质在制备治疗肺癌的药物中的应用 | |
| CN107281212B (zh) | 一种大枣复合多糖组合物及其制备方法和应用 | |
| CN101785815A (zh) | 一种辅助降血脂、对化学性肝损伤有辅助保护功能的保健品 | |
| CN100546586C (zh) | 红豆杉多糖在制药中的应用 | |
| CN104799285A (zh) | 一种复方牛樟芝片剂及其制备方法 | |
| CN103989714A (zh) | 一种具有抗癌作用的药物组合物及其制剂 | |
| CN1903308B (zh) | 虎眼万年青有效部位及其制备方法、药物和应用 | |
| CN108324783A (zh) | 白归参灵冬甘治癌药 | |
| CN106138715A (zh) | 一种抗衰老、抗疲劳的复方制剂及其制备方法 | |
| CN101411780B (zh) | 一种具有抗恶性肿瘤作用的药物组合及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |