CN107247028A - 一种提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法 - Google Patents
一种提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107247028A CN107247028A CN201710127597.XA CN201710127597A CN107247028A CN 107247028 A CN107247028 A CN 107247028A CN 201710127597 A CN201710127597 A CN 201710127597A CN 107247028 A CN107247028 A CN 107247028A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- feed
- enzyme
- enzyme activity
- reaction
- fiber element
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 42
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 42
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000000835 fiber Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 claims abstract description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 11
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 4
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims description 3
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 claims description 2
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 claims description 2
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims 1
- VLXBWPOEOIIREY-UHFFFAOYSA-N dimethyl diselenide Natural products C[Se][Se]C VLXBWPOEOIIREY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WQOXQRCZOLPYPM-UHFFFAOYSA-N dimethyl disulfide Chemical compound CSSC WQOXQRCZOLPYPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 claims 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 abstract description 32
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 abstract description 20
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 abstract description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 abstract description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract 1
- LWFUFLREGJMOIZ-UHFFFAOYSA-N 3,5-dinitrosalicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=CC([N+]([O-])=O)=C1O LWFUFLREGJMOIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 5
- LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N ac1ldcw0 Chemical compound Cl.C1CN(C)CCN1C1=C(F)C=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN3CCSC1=C32 LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 1
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940040526 anhydrous sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- 229940101006 anhydrous sodium sulfite Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L potassium sodium L-tartrate Chemical compound [Na+].[K+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011006 sodium potassium tartrate Nutrition 0.000 description 1
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 229910052718 tin Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 1
- LEONUFNNVUYDNQ-UHFFFAOYSA-N vanadium atom Chemical compound [V] LEONUFNNVUYDNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/3103—Atomic absorption analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法,是在常规的纤维素酶检测方法基础上,对饲料进行除金属和除糖的预处理。具体是将粉碎的饲料与金属沉降剂投入缓冲液中进行提取,过滤后滤液中加入除糖剂反应,反应结束后过滤,得酶液;然后滤纸粉碎至棉花状,加入酶液37℃进行酶解反应,反应结束后加入DNS试剂,煮沸灭活酶,过滤,取滤液在540nm测其吸光度,与标准曲线对照得单糖浓度,按照特定公式计算得出酶活力。本发明的方法相较于现有检测方法,准确率大大提高,而且所需样品量少,重复性好,操作简单方便,有效改善了饲料中纤维素酶定量检测不准确的问题。
Description
技术领域
本发明涉及纤维素酶检测技术领域,具体涉及一种饲料中总纤维素酶活力的方法。
背景技术
随着我国畜牧业的发展和生物技术的不断进步,饲用复合酶已广泛用于饲料工业中。由于酶制剂能够消除饲料中的某些抗营养因子的负面作用,提高饲料消化率,改善动物生产性能,降低生产成本,因此日益受到饲料界的重视。饲用复合酶种类繁多,大部分包含纤维素酶,目前饲料用纤维素酶检测方法有《NY/T 912-2004饲料添加剂纤维素酶活力测定》及《GB/T 23881-2009饲用纤维素酶活性的测定滤纸法》,前者是测体系中内切葡聚糖酶活性,后者是测总纤维素酶活性,但由于饲料成分较复杂,含有各种金属离子对酶制剂有激活或抑制作用、糖类及其他成分造成纤维素酶活性检测过程中背景值非常高,再加上纤维素酶本身添加量较少,导致饲料中纤维素酶活性检测值不准确。因此,需要一种提高灵敏度和准确性高的检测方法。
发明内容
为了解决现有技术中的上述问题,本发明提供了一种提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法。
研究发现,饲料中含有的一些金属离子及糖类会对纤维素酶的检测产生一定影响。农业部1224号公告中可添加到饲料中的常量元素和微量元素,部分元素对纤维素酶有激活作用,部分有抑制作用,不管是激活还是抑制,都会造成饲料中纤维素酶检测值与理论添加值间的差异,这种正向或反向的差异都会增加实测值与理论值的差异。饲料本身含有各种聚糖、寡糖及单糖,这些糖特别是具有还原性的单糖,比如葡萄糖在酶解过程中会与DNS试剂发生反应,造成检测背景值偏高,大幅降低检出限,使得饲料中纤维素酶较难检出。
因此,本发明通过沉降饲料中的金属元素,以及减少饲料原料中的糖类,主要是一些单糖,达到提高准确性的目的。
本发明提供的提高饲料中纤维素酶活力检测准确性的方法,是在常规的纤维素酶检测方法基础上,对饲料进行除金属和除糖的预处理,并优化酶解反应过程,包括优化底物形状、优化酶解反应体系中各参数比例。
其中,常规的纤维素酶检测方法是指在本发明申请日以前基于还原糖与DNS试剂反应显色原理的检测技术,例如可以参照NY/T 912-2004及GB/T 23881-2009等。
优选地,饲料预处理步骤为:将粉碎的饲料与金属沉降剂投入缓冲液中进行提取,过滤后滤液中加入除糖剂反应,反应结束后过滤,得酶液。
优选地,所述金属沉降剂为含二甲基二硫代氨基甲酸钠的复合螯合剂,能够沉降铬、镍、铜、锌、锰、镉、钒、铁、锡等多种金属离子,减少金属离子对酶活的影响。
优选地,所述除糖剂为一种毕赤酵母,能够分解利用掉可与DNS发生反应的单糖,大大降低背景噪音,提高检测准确性。
本发明还提供了一种提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法,包括以下步骤:
(1)处理酶液:将粉碎的饲料与金属沉降剂投入缓冲液中进行提取,过滤后滤液中加入除糖剂反应,反应结束后过滤,得酶液;
(2)酶活测定:滤纸粉碎,加入酶液37℃进行酶解反应,反应结束后加入DNS试剂,煮沸灭活酶,过滤,取滤液在540nm测其吸光度,与标准曲线对照得单糖浓度,按照以下公式(1)计算得出酶活力:
X=A×l/0.5×n÷m=(ax+b)×0.5×l/0.5×n÷m....(1)
式中:
X—样品中总纤维素酶活力,u/g(或u/mL);
A—根据吸光度在标准曲线上查得或计算出的还原糖量,mg;
1/0.5—换算成酶液1ml;
n—酶样的稀释倍数;
m—称样量,g;
所述标准曲线由已知梯度浓度的葡萄糖与DNS试剂反应后在540nm测定吸光度值,每个葡萄糖浓度值对应一个吸光度值,形成标准曲线。
优选地,所述滤纸粉碎后还包括对其烘干的步骤,烘干条件为105℃烘干至恒重,含水量低于5%。对滤纸进行粉碎和烘干处理,大大提高了方法重现性。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明通过去除检测样品中的金属离子和糖,大大提高了检测准确性,通过对滤纸进行特殊的粉碎烘干处理,提高了重现性。使用本发明的检测方法,可以准确检测出饲料中含有的真实纤维素酶含量,检测误差远低于常规标准方法。
附图说明
图1为实施例1标准曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明,以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施,但所举实施例不作为对本发明的限定。
实施例1
1 试剂
除特殊说明外,所有的试剂均为分析纯,水均符合GB/T6682中规定的二级水。
1.1 DNS试剂
称取3,5-二硝基水杨酸3.15g,加水500mL在磁力搅拌器上加热搅拌,至45℃,然后逐步加入100mL氢氧化钠溶液,同时不断搅拌,直到溶液清澈透明(注意:在氢氧化钠加入的过程中,溶液温度不得低于45℃,不得高于48℃),再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g,保持在46℃左右。直到全部溶解,加入苯酚2.5mL,再加入无水亚硫酸钠2.5g,保温45℃搅拌,直到加入物质完全溶解,停止加热,冷却至室温后,用水定容至1000mL。用滤纸过滤,取滤液储存在棕色瓶中,避光保存,室温下存放7d后可以使用,有效期为2个月。
1.2 乙酸-乙酸钠缓冲溶液0.1mol/L,pH值5.5,适用于饲用纤维素酶:
称取无水乙酸钠8.2g,用水溶解,再用冰乙酸调节pH至5.5,加水定容至1000ml,摇匀。
1.3 葡萄糖标准贮备溶液(10mg/mL)
称取于(103士2)℃下烘干至恒重的无水葡萄糖1g,精确至0.1mg,用水溶解并定容至100mL。
1.4 葡萄糖标准使用溶液
分别吸取葡萄糖标准贮备溶液0、0.125、0.25、0.5、1.00、1.50、2.00mL于10mL容量瓶中,用水定容至10mL,盖塞,摇匀备用。上述系列浓度应根据需要自行调整。
1.5 快速定性滤纸:杭州沃华滤纸有限公司,双圈定性滤纸,带WhatmanR标识,直径15cm。
2 仪器
2.1 分光光度计:能检测350~800nm的吸光度范围;
2.2 pH计:精确至0.01;
2.3 恒温水浴锅:温度控制范围在30~60℃之间,精确度为0.1℃;
2.4 分析天平:感量0.1mg;
2.5 磁力搅拌器;
2.6 秒表:每小时误差不超过5S;
2.7 电磁振荡器;
2.8 具塞刻度试管25mL;
2.9 移液器:精度为1μL。
2.10 粉碎机
3 绘制标准曲线
按表l规定的量,分别吸取葡萄糖标准使用溶液,缓冲溶液和DNS试剂于各管中混匀。
将标准管同时置于沸水浴中加热10min。取出,迅速冷却至室温,混匀。用10mm比色杯,在分光光度计波长540nm处测量吸光度。以葡萄糖量为横坐标,以吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,获得线性回归方程。
表1葡萄糖标准曲线
4 样品的测定
4.1 样品前处理
将配合饲料样品粉碎通过0.45mm标准筛,称取5g于三角瓶中,称取0.2g金属沉降剂,用25mL缓冲液于20℃水浴摇床提取30min,静止过滤,取滤液9.9mL,加入0.1mL除糖剂,于20℃处理4h,过滤取滤液备用。
4.2 滤纸的制备
先将滤纸撕成小片,再用粉碎机粉碎成棉花状,粉碎后105℃烘箱烘2h至恒重,置于(硅胶)干燥器中待用,水分控制在5%以内。
4.3 测定步骤
取四支25mL刻度具塞试管,称取滤纸粉0.05g放入每支试管的底部,加入1.8ml缓冲液,使管内溶液浸没滤纸。于37℃水浴中预热5min,加入0.20mL酶液于三支样品管中,精确反应60min,向四支试管中加入DNS试剂2.5mL。再于空白管中补加酶液0.20ml。沸水煮沸10min,取出,冷却至室温,摇匀,四层纱布过滤,取滤液比色。
5 试样酶活力的计算
试样酶活力按式(l)计算:
X=A×l/0.5×n÷m=(ax+b)×0.5×l/0.5×n÷m....................(1)
式中:
X—样品的外切酶活力,u/g(或u/mL);
A—根据吸光度在标准曲线上查得(或计算出)的还原糖量,mg;
1/0.5—换算成酶液1ml;
n—酶样的稀释倍数;
m—称样量,g。
6 允许差
同一试样两次测试结果的绝对差值,不得超过算术平均值的10%。
7 检测结果
7.1 标准曲线
标准曲线参见图1。
7.2 样品中纤维素酶检测结果
表2:不同方法检测饲料中总纤维素酶活性
备注:复合酶中含有纤维素酶,理论值根据复合酶中纤维素酶活性为1000U/g,添加量为300g/T进行计算所得。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳实施例,本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换,均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。
Claims (6)
1.一种提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法,其特征在于,在常规的纤维素酶检测方法基础上,对饲料进行除金属和除糖的预处理。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,预处理步骤为:将粉碎的饲料与金属沉降剂投入缓冲液中进行提取,过滤后滤液中加入除糖剂反应,反应结束后过滤,得酶液;
所述缓冲液为0.1mol/L、pH值5.5的乙酸-乙酸钠缓冲溶液。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述金属沉降剂为含二甲基二硫代氨基甲酸钠的复合螯合剂。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述除糖剂为毕赤酵母。
5.一种提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)处理酶液:将粉碎的饲料与金属沉降剂投入缓冲液中进行提取,过滤后滤液中加入除糖剂反应,反应结束后过滤,得酶液;
(2)酶活测定:滤纸粉碎,加入酶液37℃进行酶解反应,反应结束后加入DNS试剂,煮沸灭活酶,过滤,取滤液在540nm测其吸光度,与标准曲线对照得单糖浓度,按照以下公式(1)计算得出酶活力:
X=A×l/0.5×n÷m=(ax+b)×0.5×l/0.5×n÷m....(1)
式中:
X—样品的总纤维素酶活力,u/g(或u/mL);
A—根据吸光度在标准曲线上查得或计算出的还原糖量,mg;
1/0.5—换算成酶液1ml;
n—酶样的稀释倍数;
m—称样量,g;
所述标准曲线由已知梯度浓度的葡萄糖与DNS试剂反应后在540nm测定吸光度值,每个葡萄糖浓度值对应一个吸光度值,形成标准曲线。
6.根据权利要求5所述的提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法,其特征在于,所述滤纸粉碎后还包括对其烘干的步骤,烘干条件为105℃烘干至恒重,含水量低于5%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710127597.XA CN107247028B (zh) | 2017-03-06 | 2017-03-06 | 一种提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710127597.XA CN107247028B (zh) | 2017-03-06 | 2017-03-06 | 一种提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107247028A true CN107247028A (zh) | 2017-10-13 |
CN107247028B CN107247028B (zh) | 2020-01-21 |
Family
ID=60016561
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710127597.XA Active CN107247028B (zh) | 2017-03-06 | 2017-03-06 | 一种提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107247028B (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108414467A (zh) * | 2018-05-25 | 2018-08-17 | 中科广化(重庆)新材料研究院有限公司 | 一种溶液中二甲基二硫代氨基甲酸钠含量的紫外分光光度计测定方法 |
CN109946459A (zh) * | 2017-12-20 | 2019-06-28 | 广州中国科学院先进技术研究所 | 一种测定工业用纤维素酶酶活力的方法 |
CN113457741A (zh) * | 2021-06-03 | 2021-10-01 | 四川农业大学 | 多酶活性的三层FeOx@ZnMnFeOy@Fe-Mn双金属有机凝胶的制备及应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS55159751A (en) * | 1979-05-31 | 1980-12-12 | Q P Corp | Preparation of white of egg in bag to be coagulated by heat |
CN102108377A (zh) * | 2009-12-25 | 2011-06-29 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 | 一种检测土壤精氨酸脱胺酶活性的方法 |
CN103776779A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-05-07 | 上海市农业科学院 | 一种配合饲料中纤维素酶的检测方法 |
CN106219712A (zh) * | 2016-09-19 | 2016-12-14 | 珠海立德环保科技有限公司 | 一种工业废水重金属去除剂及其制备方法 |
-
2017
- 2017-03-06 CN CN201710127597.XA patent/CN107247028B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS55159751A (en) * | 1979-05-31 | 1980-12-12 | Q P Corp | Preparation of white of egg in bag to be coagulated by heat |
CN102108377A (zh) * | 2009-12-25 | 2011-06-29 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 | 一种检测土壤精氨酸脱胺酶活性的方法 |
CN103776779A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-05-07 | 上海市农业科学院 | 一种配合饲料中纤维素酶的检测方法 |
CN106219712A (zh) * | 2016-09-19 | 2016-12-14 | 珠海立德环保科技有限公司 | 一种工业废水重金属去除剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
何凤琴等: "《中华人民共和国国家标准 GB/T23881-2009 饲用纤维素酶活性的测定滤纸法》", 1 October 2009, 中华人民共和国国家治理监督检验检疫总局 * |
李振华等: "酶洗加工中影响纤维素酶活力的因素分析", 《印染》 * |
杨海锋等: "饲料中纤维素酶活力检测方法研究", 《上海农业学报》 * |
王琼等: "超低浓度马来酸催化水解纤维素的机理研究", 《可再生能源》 * |
王靖等: "毕赤酵母发酵不同单糖产乙醇的研究", 《湖北农业科学》 * |
赵玉蓉等: "金属离子对饲料酶活性的影响", 《饲料研究》 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109946459A (zh) * | 2017-12-20 | 2019-06-28 | 广州中国科学院先进技术研究所 | 一种测定工业用纤维素酶酶活力的方法 |
CN108414467A (zh) * | 2018-05-25 | 2018-08-17 | 中科广化(重庆)新材料研究院有限公司 | 一种溶液中二甲基二硫代氨基甲酸钠含量的紫外分光光度计测定方法 |
CN113457741A (zh) * | 2021-06-03 | 2021-10-01 | 四川农业大学 | 多酶活性的三层FeOx@ZnMnFeOy@Fe-Mn双金属有机凝胶的制备及应用 |
CN113457741B (zh) * | 2021-06-03 | 2023-04-11 | 四川农业大学 | 多酶活性的三层FeOx@ZnMnFeOy@Fe-Mn双金属有机凝胶的制备方法及应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN107247028B (zh) | 2020-01-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102565153B (zh) | 具有对检测样品进行前处理功能的电极式尿糖测试条 | |
CN107247028A (zh) | 一种提高饲料中总纤维素酶活力检测准确性的方法 | |
CN107422009B (zh) | 一种方便检测葡萄糖的非酶电化学生物传感方法 | |
CN104597258A (zh) | 基于核酸适配体的比色法检测17β-雌二醇的方法 | |
CN102229974B (zh) | 饲料复合酶质量检测与评价方法 | |
CN101586145A (zh) | 一种检测土壤木聚糖酶活性的分析方法 | |
Alexander Essers | Further improving the enzymic assay for cyanogens in cassava products | |
Peris-Tortajada | Measuring starch in food | |
CN101586146B (zh) | 一种检测土壤纤维素酶活性的分析方法 | |
CN108469421A (zh) | 一种土壤有效磷含量的测定方法 | |
CN102297861A (zh) | 一种土壤碱解性氮的测定方法 | |
CN104020169A (zh) | 一种有机肥料中可溶性有机质含量的化学检测方法 | |
CN103776779A (zh) | 一种配合饲料中纤维素酶的检测方法 | |
CN104293882A (zh) | 一种定量快速筛选抑制黄曲霉毒素产生的活性物质的方法 | |
CN103760157A (zh) | 一种食品总糖含量的测定方法 | |
CN102749293A (zh) | 可见分光光度法测定食品中苯甲酸含量的方法 | |
CN110530811A (zh) | 固体食品样品中Cd金属元素的分析检测方法 | |
CN101887055B (zh) | 一种无汞检测铵试纸的制备方法 | |
CN104807764A (zh) | 碱性木聚糖酶活力测定的方法 | |
CN110514609A (zh) | 固体食品样品中铅金属元素的分析检测方法 | |
CN106198513B (zh) | 一种木聚糖试纸及其制备方法 | |
CN109061162A (zh) | 一种高通量测定淀粉水解酶抑制活性的方法 | |
CN103243148A (zh) | 一种检测β-葡聚糖酶酶活的方法 | |
CN103743734A (zh) | 禾谷类作物籽粒中β-葡聚糖含量的测定方法 | |
AU2020104024A4 (en) | Analyzing method for detecting activity of cellulase in soil |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
TA01 | Transfer of patent application right | ||
TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20180823 Address after: 430074 5, lingjiashan Road, East Lake Development Zone, Wuhan, Hubei. Applicant after: Wuhan Sunhy Biology Co., Ltd. Address before: 641300 Anyue Industrial Park, Ziyang economic and Technological Development Zone, Ziyang, Sichuan Applicant before: Sichuan Xinyang Shanye Biotechnology Co., Ltd. Applicant before: Wuhan Sunhy Biology Co., Ltd. |
|
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |