CN107216386A - 一种羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法，包括以下步骤：（1）第一次免疫抗原剂量确定：基准量：羊体重的十亿分之八的量计算；基础量对应：蛋白抗原分子量50KD，当抗原蛋白分子量小于50KD，或大于50KD时，增加调节系数调整抗原免疫剂量；（2）第二次免疫剂量是第一次的2倍；（3）第三次的免疫剂量都是第二次的2倍量；（4）第四次至最后一次免疫，其免疫剂量都是与第三次一致。本发明的优点在于：使免疫抗原量在原来教科书含糊不清的表述中得以清晰；便于精准操作；为生物科技动物抗血清制备工业化生产奠定基础；抗原的价格昂贵，可以最大程度减少抗原免疫剂量，节约生产成本；精准免疫，使抗血清效价更高。

Description

一种羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法
技术领域
本发明属于生物工程领域，具体涉及一种羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法。
背景技术
抗原和抗体是免疫学检验的两大重要因素，也是整个免疫反应的基本条件。抗原的纯化是制备特异性抗的先决条件，制得的抗体可用于纯化抗原和检测抗原。抗体有单克隆和多克隆两类。
抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清，一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。高效价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。一种抗原能否引起抗体生成反应，一方面取决于抗原分子表面有无抗原决定簇(Antigenicdeterminant)，另一方面取决于机体的免疫状态，当具备以上两个条件后，抗体生成将遵循抗体生成的一般规律——初次反应和再次反应。抗原的种类繁多，包括天然的蛋白质抗原和细胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等，不同的抗原免疫动物具有不同的特殊性。一般完全抗原免疫动物需加用佐剂，尤其在使用可溶性抗原时，以期得到高效价的抗血清；合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物质需先通过人工的方法与蛋白质载体连接后再与佐剂混合免疫动物，方可获得理想的免疫效果。使用佐剂后可增加抗原的免疫原性和延长抗原在机体内存留的时间，从而改变了抗原原有的免疫原性。
在抗血清制备的过程中，免疫原的注射剂量应考虑其抗原性的强弱、分子量大小、动物的个体状态和免疫时间。对于纯的可溶性抗原的免疫剂量，通常小鼠首次抗原剂量为50～100μg/次，大鼠为100～200μg/次，兔为100μg～1mg/次，合成免疫原为2mg(半抗原约为20～200μg)，一般需要与等量的福氏完全佐剂混合。加强免疫的剂量为首次计量的1/2，通常用不完全福氏佐剂或不用佐剂。如需制备高度特异性的抗血清，可选用低剂量抗原短程免疫法；反之，欲获得高效价的抗血清，需采用大剂量抗原长程免疫法。
目前的方法中所采用的免疫抗原的价格昂贵，抗血清效价低。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种能精准操作，节约生产成本，抗血清效价高，并能工业化生产的羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法。
为达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现的。
一种羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法，包括以下步骤：
(1)第一次免疫抗原剂量确定：
基准量：羊体重十万分之八的量计算；
基础量对应：蛋白抗原分子量50KD，
当抗原蛋白分子量小于50KD，或大于50KD时，增加调节系数调整抗原免疫剂量；
(2)第二次免疫剂量是第一次的2倍；
(3)第三次的免疫剂量都是第二次的2倍量；
(4)第四次至最后一次免疫，其免疫剂量都是与第三次一致。
进一步地，步骤(1)中，当抗原蛋白分子量小于50KD，增加调节系数的抗原量，最大至1mg。增量调节系数＝(50-抗原分子量KD)/100。
进一步地，当当50KD<抗原蛋白分子量<100KD时，减量调节系数的抗原量，最小至0.20mg。减量调节系数＝(抗原分子量KD-50)/100。
进一步地，分子量大于100KD，首次免疫量为最小免疫量0.2mg。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：
1、使免疫抗原量在原来教科书含糊不清的表述中得以清晰；
2、便于精准操作；
3、为生物科技动物抗血清制备工业化生产奠定基础；
4、抗原的价格昂贵，可以最大程度减少抗原免疫剂量，节约生产成本；
5、精准免疫，使抗血清效价更高。
具体实施方式
下面结合实例对本发明作进一步的详细说明。
第一次免疫抗原剂量：
基准量：羊体重十亿分之八的量计算，如50kg羊，基准量就是0.4mg。
基础量对应：蛋白抗原分子量50KD。
当抗原蛋白分子量小于50KD，或大于50KD时，增加调节系数调整抗原免疫剂量。
当抗原蛋白分子量小于50KD，增加调节系数的抗原量，最大至1mg。其中，增量调节系数＝(50-抗原分子量KD)/100。比如某抗原分子量为20KD，羊体重为50kg，那它的第一次免疫抗原剂量为：基准量+基准量*(50-20)/100。
当抗原蛋白分子量大于50KD，减量调节系数的抗原量，最小至0.20mg。其中，减量调节系数＝(抗原分子量KD-50)/100。比如某抗原分子量为75KD，那它的第一次免疫抗原剂量为：基准量-基准量*(抗原分子量KD-50)/100。
分子量大于100KD，首次免疫量是最小免疫量0.2mg。
第二次免疫剂量是第一次的2倍；
第三次的免疫剂量都是第二次的2倍量；
第四次至最后一次免疫，其免疫剂量都是与第三次一致。
下面通过传统免疫法与本发明的方法进行做对比试验，进一步阐述本发明的有益效果，结果如表1至表3所示：
表1：羊平均体重为45kg，基准量为0.36mg
表2：羊平均体重为45kg，基准量为0.36mg
表3：羊平均体重为45kg，基准量为0.36mg
由表1至表3可以得出，采用本发明能最大程度减少抗原免疫剂量，节约生产成本；使抗血清效价更高。
本发明按照上述实施例进行了说明，应当理解，上述实施例不以任何形式限定本发明，凡采用等同替换或等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）第一次免疫抗原剂量确定：
基准量：羊体重的十亿分之八的量计算；
基础量对应：蛋白抗原分子量50KD，
当抗原蛋白分子量小于50KD，或大于50KD时，增加调节系数调整抗原免疫剂量；
（2）第二次免疫剂量是第一次的2倍；
（3）第三次的免疫剂量都是第二次的2倍量；
（4）第四次至最后一次免疫，其免疫剂量都是与第三次一致。
2.根据权利要求1所述的羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法，其特征在于，步骤（1）中，当抗原蛋白分子量小于50KD，增加调节系数的抗原量，最大至1mg 。
3.根据权利要求2所述的羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法，其特征在于，步骤（1）中，增量调节系数=（50-抗原分子量KD）/100 。
4.根据权利要求1所述的羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法，其特征在于，步骤（1）中，当50KD <抗原蛋白分子量<100KD时，减量调节系数的抗原量，最小至0.20mg 。
5.根据权利要求4所述的羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法，其特征在于，步骤（1）中，减量调节系数=（抗原分子量KD-50）/100 。
6.根据权利要求1所述的羊抗人血清制备抗原免疫剂量的精准确定方法，其特征在于，步骤（1）中，分子量大于100KD，首次免疫量为最小免疫量0.2mg。
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