CN107208115A - 制作调味和芳香化合物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及芳族己醇的制备以及含有它们的组合物。具体而言，本文中提供的是生产己烯醇的方法，包括：a)使多不饱和脂肪酸的氢过氧化物与经修饰的氢过氧化物裂解酶接触以形成己烯醛；和b)在氢化物供体、酮还原酶和辅助因子的存在下将己烯醛还原成己烯醇，其中在基本不存在面包酵母的情况下基本上同时进行接触和还原步骤。

Description

制作调味和芳香化合物的方法
技术领域
该领域是制作调味料和芳香料的方法。
背景技术
在香料和调味料工业中有用、并且通过酶反应能进行氢过氧化物裂解的化合物中，所谓的“青香香调”包括正己醛、正己醇、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯-1-醇、(Z)-3-己烯-1-醇(也称为pipol)和(Z)-3-己烯-1-醛，它们广泛用于芳香料和调味料，特别是果味调味料，赋予新鲜的青香特征。此外，青香香调对于水果香气至关重要，并被广泛应用于香气行业。对于天然青香香调的需求的增长已经超过了其传统来源如薄荷(Mentha arvensis)油的供应。这促进了寻求获得这些材料的其他自然方法的研究工作。
青香香调化合物的合成起始于诸如亚油酸(9-(Z),12-(Z)-十八碳二烯酸)和α-亚麻酸(9-(Z),12-(Z),15-(Z)-十八碳三烯酸)的游离(多不饱和)脂肪酸。本质上，这些酸在细胞损伤后通过脂肪分解酶而从细胞膜释放。通过特定的13-脂肪氧合酶(13-LOX)的作用形成脂肪酸13-氢过氧化物，随后用特定的13-氢过氧化物裂解酶(13-HPL)裂解为C6醛和C12ω-含氧酸部分。醛可随后经历热异构化和/或被脱氢酶还原以产生其它C6产物(即青香香调)如醇和酯(Hatanaka A.(1993)Phytochemistry 34:1201-1218；Hatanaka A.et al.(1987)Chemistry and Physics of Lipids 44:431-361)。
番石榴已被确定为在该合成途径中使用的冷冻稳定的13-HPL的优良来源。番石榴13-HPL被描述为在用于生产青香香调的工业方法中使用(US 5,464,761)。在该方法中，使用新鲜制备的大豆粉作为13-LOX的来源，由亚油酸或α-亚麻酸(分别由向日葵和亚麻子油获得)制成所需的13-氢过氧化物溶液。然后将该溶液与新鲜制备的整个番石榴(Psidiumguajava)的果泥混合作为13-HPL的来源。然后通过蒸馏分离出醛产物。当需要相应的醇时，将新鲜面包酵母(baker’s yeast)加入到氢过氧化物溶液中之后与番石榴果泥混合。该酵母含有活性醇脱氢酶，当醛通过13-HPL形成时，其将醛还原成相应的醇。
发明内容
本文提供了一种生产醇的方法，包括：a)使多不饱和脂肪酸的氢过氧化物与氢过氧化物裂解酶接触以形成醛；和b)在氢化物供体、酮还原酶和辅助因子的存在下将醛还原以形成醇，其中该接触和还原步骤基本上同时进行。
本文进一步提供的是包含(Z)-3-己烯醇的组合物，其中该组合物包含约大于或等于12000mg/L的量的(Z)-3-己烯醇，并且进一步提供有总量约小于或等于400mg/L的在反应中产生的正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇，其中正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇在加工后没有被除去。
本文还提供了包含(Z,Z)-3,6-壬二烯醇的组合物，其中组合物包含(Z,Z)-3,6-壬二烯醇，其量大于或等于约0.74g/l，更特别地大于或等于约1.8g/l，甚至更特别地大于或等于约2g/l，并且其中该组合物可以包含约小于或等于约1g/lL的(Z)-3-壬烯醇，更特别地约为小于或等于0.2g/l，甚至更特别地小于或等于约0.16g/l。在一个实施方案中，该组合物不包含(Z)-3-壬烯醇。
附图说明
图1：显示了涉及经修饰的13-HPL(变体GC7)和酮还原酶ADH005的顺序(A)和同时(B)裂解和还原的比较。注意，在实验(A)中，在t＝0分钟时加入酮还原酶、异丙醇和辅助因子之前，裂解反应已经进行了5分钟。图中使用如下符号：(Z)-3-己烯醇(菱形)，(E)-2-己烯醇(正方形)，(Z)-3-己烯醛(三角形)，(E)-2-己烯醛(横条)。
图2：显示了涉及经修饰的13-HPL变体GC7和酮还原酶IEPox58的同时裂解和还原。图中使用如下符号：(Z)-3-己烯醇(菱形)，(E)-2-己烯醇(正方形)，(Z)-3-己烯醛(三角形)，(E)-2-己烯醛(横条)和正己醇(星形)。
图3：显示了分离的(Z)-3-己烯醇的气相色谱图。
具体实施方式
在一个实施方案中，本文提供的多不饱和脂肪酸的氢过氧化物选自多不饱和酸的9-氢过氧化物和多不饱和脂肪酸的13-氢过氧化物。
在一个实施方案中，醛是C6醛。
在一个实施方案中，C6醛是己醛，特别是正己醛。
在一个实施方案中，C6醛选自正己烷、(E)-2-己烯醛和(Z)-3-己烯醛，特别是(Z)-3-己烯醛。
在一个实施方案中，醛选自壬烯醛和壬二烯醛。
在一个实施方案中，醛选自(Z)-3-壬烯醛和(Z,Z)-3,6-壬二烯醛。
在另一个实施方案中，醇是选自正己醇、(E)-2-己烯醇和(Z)-3-己烯醇的C6醇，特别是(Z)-3-己烯醇。
在另一个实施方案中，醇是C9醇。
在另一个实施方案中，醇是选自(Z)-3-壬烯醇和(Z,Z)-3,6-壬二烯醇的C9醇，特别是(Z,Z)-3,6-壬二烯醇。
在一个实施方案中，(Z)-3-己烯醇与正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇的总量的比例以重量计为约30:1至至少约71:1，更特别为约30:1至约71:1。在一个实施方案中，(Z,Z)-3,6-壬二烯醇与(Z)-3-壬烯醇的比例为约4.63至约25:1。
在一个实施方案中，氢化物供体是这样一种化合物，其提供选自仲醇、伯醇、烷二醇和羟基酸或它们的酯之一的化合物的氢化物。
在一个实施方案中，仲醇选自异丙醇、异戊醇、甘油、异丁醇、丁-2-醇、丙二醇、葑醇、冰片、薄荷醇、甲基对甲苯基甲醇、对甲基苯异丙醇(8-cymenol)、辛-1-烯-3-醇、戊-2-醇、戊-3-醇、4-甲基-2-戊醇、己-2-醇、庚-2-醇、辛-2-醇、壬-2-醇、癸-2-醇、十一烷-2-醇。在一个具体实施方案中，氢化物供体是异丙醇。
在一个实施方案中，氢化物供体是从丁-1,4-二醇、丁-2,3-二醇和乙二醇中选出的烷二醇。
在另一个实施方案中，氢化物供体是从特别是乳酸钙、乳酸乙酯、乳酸丙酯和乳酸丁酯中选出的羟基酸酯。
在一个实施方案中，氢过氧化物裂解酶是从经修饰的生物体中产生的经修饰的裂解酶，该经修饰的生物体含有具有经修饰的13-hpl基因的重组表达质粒(特别的大肠杆菌生物体，变体GC7)，其描述于例如美国专利8,501,452(B2)中，其全部内容通过引用并入本文。
在一个实施方案中，氢过氧化物裂解酶是由经修饰的生物体产生的经修饰的裂解酶，该经修饰的生物体含有具有经修饰的9-氢过氧化物裂解酶的重组表达质粒，其用于生产C9醛，并且在它们还原后，生产C9醇，特别是(Z)-3-壬烯醇(如果使用亚油酸的9-氢过氧化物(9-HPOD)作为底物)，或(Z,Z)-3,6-壬二烯醇(如果使用α-亚麻酸的9-氢过氧化物(9-HPOT)作为底物)。从这些醇中可以生产出相应的乙酸酯或其它酯。特别地，裂解酶是从含有9-氢过氧化物裂解酶基因的生物体产生的，如美国专利申请公开号：US2002098570(A1)中所述，其全部内容通过引用并入本文。
氢过氧化物裂解酶优选在氢化物供体的存在下是稳定的。这是令人惊奇的，因为例如在许多情况下已知醇破坏酶的稳定性。发明人已经发现，所述氢过氧化物裂解酶在允许氢过氧化物裂解和醛还原的某些氢化物供体的存在下是稳定的。
在一个实施方案中，酮还原酶选自来自Codexis的酶ADH005(Redwood City,California)和Cambrex-IEP的IEPOx58(Wiesbaden,Germany)。
在一个实施方案中，9-和13-氢过氧化脂肪酸选自亚油酸和α-亚麻酸。
在一个实施方案中，辅助因子选自NADH和NADPH。
在一个实施方案中，辅助因子再生酶可以选自葡萄糖脱氢酶与作为辅底物的葡萄糖，甲酸脱氢酶与作为辅底物的甲酸酯，或亚磷酸脱氢酶与作为辅底物的亚磷酸酯。
本文提供的一个实施方案是包含(Z)-3-己烯醇的组合物，其中该组合物包含约大于或等于12000mg/L的量的(Z)-3-己烯醇，并且进一步提供有总量约小于或等于400mg/L，更特别地小于约170mg/L的正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇，其中该正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇在加工后没有被除去。在另一个实施方案中，该组合物包含约大于或等于12000mg/L的量的(Z)-3-己烯醇，并且进一步提供有总量约小于或等于约170至至多约400mg/L的正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇，其中该正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇在加工后没有被除去。
在一个实施方案中，接触和还原步骤在约0℃至约30℃，更特别地约10℃至约30℃的温度下进行，时间为约2分钟至约480分钟。在一个具体实施方案中，温度为约20℃，时间为约430分钟。在另一具体实施方案中，温度约为室温，时间为约5小时。通常，接触和还原步骤通过混合进行。
本文提供的化合物是目前在调味料和芳香料工业中使用的含氧化合物，即其水果和青香类型感官特征的结果。在文献中描述了许多有关制备这些化合物的合成方法的研究，已知它们是天然来源的多种调味料和芳香料的成分。
当前方法的一个好处是它不需要完整的生物体。
实施例
提供以下实施例仅用于说明目的。
实施例1
13-HPOT/D合成
向装有机械搅拌器、温度计、滴液漏斗、玻璃盖和氧气入口的5颈玻璃烧瓶中在240rpm的搅拌下加入44g亚麻籽油水解产物(约65％可氧化酸)和247.5g自来水。用冰水浴将温度调节至18℃。通过加入13.2g 30％NaOH水溶液来设定反应pH。顶空气相用纯氧O2吹扫三次。然后用pH电极快速替换玻璃盖。然后通过与柔性软管连接的烧瓶加入38.5g新鲜研磨的大豆粉。将搅拌速度提高到1000～1200rpm。通过逐滴加入30％NaOH水溶液将pH保持恒定在pH 9.2至9.4。温度保持在18～22℃。反应1小时。脂肪酸氢过氧化物浓度用0.01N的Na2S2O3溶液进行碘滴定而测定。通过HPLC来控制脂肪酸氢过氧化物的品质。通过滴定测定的总脂肪酸氢过氧化物达到至少80gL-1的13-HPOT/D(13-氢过氧基-三烯酸/13-氢过氧基-二烯酸)。
实施例2
生产13-氢过氧化物裂解酶(13-HPL)
将含有具有经修饰的13-hpl基因*的重组表达质粒的大肠杆菌细胞的0.5mL过夜培养物加入到含有100mg mL-1氨苄青霉素和2mg L-1硫胺素的100mL LB培养基的烧瓶中。培养物在37℃下以180rpm振摇培养直至达到OD600＝0.45的光密度。然后加入5-氨基-乙酰丙酸至终浓度为1mM。在30分钟内将温度降至25℃。以OD600＝0.6的光密度用0.1mM IPTG诱导培养物，并在25℃下振摇18小时。然后将大肠杆菌细胞离心并重新悬浮于pH 7.6的100mM磷酸盐缓冲液中，OD600为10，然后使用Sartorius的Labsonic P(Germany)进行超声处理。
*变体GC7，描述于例如US8501452(B2)
实施例3
顺序的13-HPOT/D裂解和(Z)-3-己烯醛还原
用裂解的大肠杆菌细胞进行粗制13-HPOT/D的裂解，产生经修饰的13-HPL变体GC#7。在10mL小瓶中加入：1.8mL的13-HPOT/D>80g L-1和含有13-HPL的0.2mL大肠杆菌裂解细胞(相当于OD600＝10的细胞悬液)。5分钟后，在搅拌下加入400μL的异丙醇、25μL的NADP(50mM)和120μL的Codexis(Redwood City,California)的酶ADH005(775U mL-1)。2分钟、5分钟、10分钟、20分钟、40分钟、60分钟后，从反应液中取出100μL样品，立即用900μL水稀释。用1体积乙酸乙酯萃取，该乙酸乙酯含有1g L-1正辛醇作为内标，用于气相色谱分析。使用装有火焰离子化检测器和DB-WAX柱(L＝30m，ID＝0.25mm，涂层＝0.25μm)的气相色谱仪，温度程序为：80℃(2分钟)，160℃(4℃min-1)，230℃(30℃min-1)，230℃(6分钟)。使用1:50的分流比，氦气通量为1.4mL min-1。1小时后，反应培养液含有7.2g L-1的(Z)-3-己烯醇、0.42g L-1的(Z)-3-己烯醛、0.17g L-1的(E)-2-己烯醇和0.02g L-1的(E)-2-己烯醛。反应动力学如图1A所示。如图1A所示，酮还原酶和辅助因子NADP在反应条件下保持足够稳定。
实施例4
a)同时的13-HPOT/D裂解和(Z)-3-己烯醛还原
在10mL小瓶中加入：1800μL的80g L-1的13-HPOT/D、4μL的1M MgSO4、25μL的50mmNADP、400μL的异丙醇、120μL的Codexis(Redwood City,California)的酮还原酶ADH005(775U mL-1)和250μL含有13-HPL(变体GC#7)的大肠杆菌裂解物(相当于OD600＝10的细胞悬液)。将反应液在室温下搅拌。在一小时内的固定时间点从反应液中取出100μL样品，用900μL的H2O稀释，并用1mL乙酸乙酯萃取，然后通过前述实施例中所述的气相色谱分析。正辛醇作为内标。1小时后，反应培养液含有7.5g L-1的(Z)-3-己烯醇、0.04g L-1的(E)-2-己烯醇。没有检测到醛。反应动力学如图1B所示。
b)同时的13-HPOT/D裂解和(Z)-3-己烯醛还原
在10mL玻璃小瓶中加入：0.9mL的80g L-1的13-HPOT/D、10μL的5.2mM的NAD储备溶液、200μL的异丙醇、23μL的Cambrex-IEP(Wiesbaden,Germany)的酮还原酶IEPOx58和200μL的13-HPL变体GC7裂解物(由OD600＝10的细胞悬液制成)。将反应液用磁棒以400rpm在10℃下搅拌至多5小时。用3体积的MTBE萃取反应液，用于GC分析，使用正辛醇作为内标。5小时后，反应培养液含有12.3g L-1的(Z)-3-己烯醇、0.02g L-1的(Z)-3-己烯醛、0.07g L-1的(E)-2-己烯醇、0.01g L-1的(E)-2-己烯醛、0.3g L-1的1-己醇。反应动力学如图2所示。
实施例5
(Z)-3-己烯醇的制备
向1L烧瓶中加入692mL的>80g L-1的13-HPOT/D、1.5mL的1M的MgSO4、155mL的异丙醇，20mL的25mM的NADP、46mL的Codexis(Redwood City,California)的酮还原酶ADH005(775U mL-1)和97mL含有变体GC#7的经修饰的13-HPL的大肠杆菌裂解细胞(相当于OD600＝7的细胞悬液)。将反应液用磁力搅拌器在室温下以800rpm搅拌40分钟。在2、5、10、20和40分钟后取出200μL等分试样，通过气相色谱法监测反应。然后将整个反应液用MTBE萃取3次。有机萃取液用水洗涤，用Na2SO4干燥，用0.45μm孔径的PTFE膜过滤，然后通过蒸发除去有机溶剂。然后使用标准蒸馏装置于70～85℃在真空(15毫巴)下蒸馏残余物。分离出的(Z)-3-己烯醇的纯度为97.8％，具有1.2％的1-己醇和0.6％的(E)-2-己烯醇作为主要杂质(图3)。产物识别通过GC-MS和NMR进一步验证。
实施例6
9-HPOT/D的合成
按如下制备α-亚麻酸的9-氢过氧化物：使用装备有机械搅拌器、温度计、滴液漏斗、玻璃盖和氧气入口和真空出口的多颈玻璃烧瓶。将370g新鲜磨碎的土豆(Charlotte或Bintje)加入到多颈玻璃烧瓶中。然后迅速加入30g亚麻子油水解产物和250g含有250μL的Tween 80(Sigma Aldrich,P4780)和370μL的Viscozym L(Novozymes)的水。温度调节至20℃～22℃，加入30％的NaOH水溶液使pH保持在5.5～5.7。将系统用氧气吹扫四次，以800rpm剧烈搅拌并在氧气下保持1小时。借助于滴定管测量耗氧量。通过用0.01N的Na2S2O3的碘滴定测定脂肪酸氢过氧化物浓度。总9-HPOT/D含量(9-氢过氧基-三烯酸/9-氢过氧基-二烯酸)应至少为30g L-1。
实施例7
生产粗制9-氢过氧化物裂解酶(9-HPL)
将含有基于pMAL-c-2X(New England Biolabs,Ipswich,MA)(9-hpl(参见例如US7037693B2)的密码子修饰的ORF于框中融合至malE的3’末端)的重组表达质粒的大肠杆菌DH5α细胞的过夜培养物加入到含有100mg mL-1氨苄青霉素和2mg L-1硫胺素的200mL无菌LB培养基的烧瓶中。在37℃下以220rpm振荡培养细胞，直至达到OD600为0.5的光密度。然后加入200μL的1M的5-氨基-乙酰丙酸至终浓度为1mM。将温度降至25℃，以0.6的OD600用0.1mMIPTG诱导培养物。然后将培养物在25℃下以180rpm再生长16小时。将细胞于4℃以4000g离心30分钟。弃去上清液，将细胞沉淀物悬浮在冰冷的100mM磷酸盐缓冲液pH 7.6中以达到45的OD600。以2mg L-1加入溶菌酶并在冰上孵育30分钟，然后使用Labsonic P(Germany)通过超声处理进行细胞破碎。
实施例8
顺序的9-HPOT/D裂解和醛的化学还原
将35g L-1总过氧化物的900μL的9-HPOT/D加入到玻璃小瓶中。然后在磁力搅拌下加入100μL的粗制9-HPL。5分钟、10分钟、15分钟和20分钟后取出100μL样品，立即在磁力搅拌下于室温在900μL的10g L-1的NaBH4水溶液中还原10分钟。经还原的样品用含有1-辛醇作为内标的2mL MTBE萃取，并使用DB-WAX柱通过GC分析。5分钟后，检测出0.2g L-1的(Z)-3-壬烯醇和0.9g L-1的(Z,Z)-3,6-壬二烯醇(表1)。
表1
实施例9
顺序的9-HPOT/D裂解和醛的生物化学还原
将35g L-1的1800μL的9-HPOT/D加入到玻璃小瓶中。然后在磁力搅拌下加入200μL的粗制9-HPL。将反应液在室温下以900rpm磁力搅拌5分钟。取两个100μL样品作为对照，用NaBH4还原并如上所述进行分析。向剩余的反应液中立即加入：120μL的10mM NADP水溶液、160μL的H2O、70μL的异丙醇、11μL的1M MgSO4和100μL的Codexis(Redwood City,California)的酮还原酶ADH005(775U mL-1)。在强磁力搅拌下加入12μL的20％NaOH将pH调节至pH 7。以不同的时间间隔除去200μL样品，用15体积的MTBE萃取，并用如上所述的使用1-辛醇作为内标的GC进行分析。生物化学还原得到0.13g L-1的(Z)-3-壬烯醇和0.59g L-1的(Z,Z)-3,6-壬二烯醇，5分钟后没有检测到游离醛。
实施例10
同时的9-HPOT/D裂解和醛的还原
将35g L-1的1620μL的9-HPOT/D加入到玻璃小瓶中。然后在搅拌下于室温加入120μL的10mM NADP、160μL的H2O、70μL的异丙醇、11μL的1M MgSO4、100μL的Codexis(RedwoodCity,California)的酮还原酶ADH005(775U mL-1)、180μL的粗制9-HPL(OD600＝45)和12μL的20％NaOH(最终pH＝7)。以不同的时间间隔除去200μL样品，用15体积的MTBE萃取，并用如上所述的使用1-辛醇作为内标的GC进行分析。生物化学还原得到0.16g L-1的(Z)-3-壬烯醇和0.68g L-1的(Z,Z)-3,6-壬二烯醇，在5分钟的还原时间后没有检测到游离醛。
实施例11
同时的9-HPOT/D裂解和醛的还原
将35g L-1的1620μL的9-HPOT/D加入到玻璃小瓶中。然后在搅拌下于室温加入40μL的10mM NAD、160μL的H2O、70μL的异丙醇、200μL的Cambrex-IEP(Wiesbaden,Germany)的酮还原酶IEPOx58、180μL的粗制9-HPL(OD600＝45)和12μL的20％NaOH(最终pH＝7)。以不同的时间间隔除去200μL样品，用15体积的MTBE萃取，并用如上所述的使用1-辛醇作为内标的GC进行分析。生物化学还原得到0.16g L-1的(Z)-3-壬烯醇和0.74g L-1的(Z,Z)-3,6-壬二烯醇，在15分钟的还原时间后没有检测到游离醛。

Claims (15)

1.一种制备醇的方法，包括：a)使多不饱和脂肪酸的氢过氧化物与氢过氧化物裂解酶接触以形成醛；和b)在氢化物供体、酮还原酶和辅助因子的存在下将醛还原以形成醇，其中该接触和还原步骤基本上同时进行。
2.根据权利要求1所述的方法，其包括a)使选自多不饱和脂肪酸的13-氢过氧化物的多不饱和脂肪酸的氢过氧化物与选自13-氢过氧化物裂解酶的经修饰的氢过氧化物裂解酶接触以形成己烯醛；和b)在氢化物供体、酮还原酶和辅助因子的存在下将己烯醛还原，其中该接触和还原步骤基本上同时进行。
3.根据权利要求1所述的方法，其包括a)使选自多不饱和脂肪酸的13-氢过氧化物的多不饱和脂肪酸的氢过氧化物与选自13-氢过氧化物裂解酶的经修饰的过氧化氢裂解酶接触以形成正己醛；和b)在氢化物供体、酮还原酶和辅助因子的存在下将己醛还原，其中该接触和还原步骤基本上同时进行。
4.根据权利要求2所述的方法，包括：a)使多不饱和脂肪酸的13-氢过氧化物与经修饰的13-氢过氧化物裂解酶接触以形成(Z)-3-己烯醛；和b)在仲醇、酮还原酶和辅助因子的存在下将(Z)-3-己烯醛还原成(Z)-3-己烯醇，其中该接触和还原步骤基本上同时进行。
5.根据权利要求3或4中任一项所述的方法，其中该13-氢过氧化物从由亚油酸和α-亚麻酸的13-氢过氧化物构成的群组中选出。
6.根据权利要求1所述的方法，其包括a)使选自多不饱和脂肪酸的9-氢过氧化物的多不饱和脂肪酸的氢过氧化物与选自9-氢过氧化物裂解酶的经修饰的氢过氧化物裂解酶接触以形成从由壬烯醛和壬二烯醛构成的群组中选出的醛；和b)在氢化物供体、酮还原酶和辅助因子的存在下将醛还原，其中该接触和还原步骤基本上同时进行。
7.根据权利要求1所述的方法，其包括a)使选自多不饱和脂肪酸的9-氢过氧化物的多不饱和脂肪酸的氢过氧化物与选自9-氢过氧化物裂解酶的经修饰的氢过氧化物裂解酶接触以形成从由(Z)-3-壬烯醛和(Z,Z)-3,6-壬二烯醛构成的群组中选出的醛；和b)在氢化物供体、酮还原酶和辅助因子的存在下将醛还原，其中该接触和还原步骤基本上同时进行。
8.根据权利要求6～7中任一项所述的方法，其中该9-氢过氧化物从由亚油酸和α-亚麻酸的9-氢过氧化物构成的群组中选出。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其中该接触和还原步骤在基本上不存在面包酵母的情况下进行。
10.一种组合物，其包含通过权利要求3的方法制备的(Z)-3-己烯醇，其中该组合物包含约大于或等于12000mg/L的量的(Z)-3-己烯醇，并且进一步提供有总量约小于或等于约170至约400mg/L的正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇，其中该正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇在加工后没有被除去。
11.根据权利要求11所述的组合物，其中(Z)-3-己烯醇与正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇的比例以重量计为约30:1至至少约71:1。
12.根据权利要求10所述的组合物，其包含(Z)-3-己烯醇，其中该组合物包含约大于或等于12000mg/L的量的(Z)-3-己烯醇，并进一步提供总量约小于或等于400mg/L的在反应中产生的正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇，其中该正己醛、(Z)-3-己烯醛、(E)-2-己烯醛、(E)-2-己烯醇和正己醇在加工后没有被除去。
13.一种组合物，其包含通过权利要求6的方法制备的(Z,Z)-3,6-壬二烯醇，其中该组合物包含(Z,Z)-3,6-壬二烯醇，其量大于或等于约0.74g/l，更特别地大于或等于约1.8g/l，甚至更特别地大于或等于约2g/l，甚至更特别地大于或等于4g/l，并且其中该组合物可以包含约小于或等于约1g/l的(Z)-3-壬烯醇，更特别地约小于或等于0.2g/l，甚至更特别地小于或等于约0.16g/l。在一个实施方案中，该组合物不包含(Z)-3-壬烯醇。
14.根据权利要求13所述的组合物，其中(Z,Z)-3,6-壬二烯醇与(Z)-3-壬烯醇的比例为约4.63至约25:1，
15.能通过权利要求1～8中任一项所述的方法获得的产品。
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