CN107190070B - 一种草木樨属的通用引物组合及应用、试剂盒 - Google Patents
一种草木樨属的通用引物组合及应用、试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107190070B CN107190070B CN201710468472.3A CN201710468472A CN107190070B CN 107190070 B CN107190070 B CN 107190070B CN 201710468472 A CN201710468472 A CN 201710468472A CN 107190070 B CN107190070 B CN 107190070B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dna
- artificial sequence
- universal primer
- melilotus
- kit
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种草木樨属的通用引物组合及应用、试剂盒，属于分子生物及分子标记技术领域。本发明提供的草木樨属的通用引物组合，能够较好的覆盖草木樨属植物品种，通用引物组合作为分子标记能应用于草木樨属植物种质鉴定和草木樨属植物育种中；将该通用引物组合制备成试剂盒能更方便的应用于草木樨属植物种质鉴定和草木樨属植物育种中；且该通用引物组合具备较高的通量；由于草木樨属植物为优良的牧草和药用植物，该试剂盒具有较大的应用价值和较好的实际效果；对草木樨属植物研究和育种等都会有巨大的推动作用。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物及分子标记技术领域，具体而言，涉及一种草木樨属的通用引物组合及应用、试剂盒。
背景技术
EST-SSR是基于表达序列标签开发的微卫星分子标记，因具有多态性高、位点特异性、共显性、操作简单等优点，已经广泛地应用于植物分子遗传图谱的构建、植物遗传多样性分析与种质鉴定、重要农艺性状基因定位与图位克隆、转基因植物鉴定和分子标记辅助选择育种等方面，具有广阔的应用前景。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种草木樨属的通用引物组合，该引物组合能在草木樨属植物种间和种内通用。
本发明的第二目的在于提供上述的通用引物组合在草木樨属植物种质鉴定中的应用。
本发明的第三目的在于提供上述的通用引物组合在草木樨属植物育种中的应用。
本发明的第四目的在于提供上述的通用引物组合在制备草木樨属植物检测试剂盒中的应用。
本发明的第五目的在于提供一种草木樨属植物检测试剂盒，该试剂盒能方便快捷的使用。
本发明的第六目的在于提供上述的草木樨属植物检测试剂盒在草木樨属植物种质鉴定中的应用。
本发明的第七目的在于提供上述的草木樨属植物检测试剂盒在草木樨属植物育种中的应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种草木樨属的通用引物组合，通用引物组合包括第1-70引物对中的至少一对引物，第1-70引物对的碱基序列分别如SEQ ID No.1-140所示。
上述的通用引物组合在草木樨属植物种质鉴定中的应用。
上述的通用引物组合在草木樨属植物育种中的应用。
上述的通用引物组合在制备草木樨属植物检测试剂盒中的应用。
一种草木樨属植物检测试剂盒，草木樨属植物检测试剂盒包括如上述的通用引物组合。
上述的草木樨属植物检测试剂盒在草木樨属植物种质鉴定中的应用。
上述的草木樨属植物检测试剂盒在草木樨属植物育种中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明提供草木樨属的通用引物组合，该引物组合是基于草木樨属植物开发的一套通用的引物组合，该引物组合作为分子标记具有较好的应用前景和较多的应用途径；可以将该引物组合应用于草木樨属植物种质鉴定、育种以及应用于制备试剂盒；试剂盒方便使用，具有较好的应用价值，且也同样能应用于草木樨属植物种质鉴定和草木樨属植物育种中，具有较好的实际应用价值。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
草木樨属(Melilotus spp.)为一年生或二年生豆科植物，全世界约有19种，其中白花草木樨(M.albus)和黄花草木樨(M.officinalis)为该属最常见的生产利用种。草木樨属植物根系发达，具有适应性广，抗逆性强，覆盖度大，繁殖速度快，种子产量高等优良特性，既是防风固沙，保持水土的优良草种，同时还是蜜源植物；草木樨属植物中含具有药用价值的香豆素，所以草木樨也是重要的药用植物，有清热解毒、健胃化湿、消炎消肿等功效，可用于脾脏病，绞肠痧，白喉，乳蛾等病症。
下面对本发明实施例的一种草木樨属的通用引物组合及应用、试剂盒进行具体说明。
一种草木樨属的通用引物组合，通用引物组合包括第1-70引物对，第1-70引物对的碱基序列分别如SEQ ID No.1-140所示。
通过开发的70对通用引物，能大范围的应用到草木樨属植物的各项研究和应用中。
上述的通用引物组合在草木樨属植物种质鉴定中的应用。
上述的引物组合在草木樨属植物中能够通用，识别出草木樨属中的物种；因此，引物可以作为区别草木樨属物种与其他物种的鉴定引物。
上述的通用引物组合在草木樨属植物育种中的应用。
上述的通用引物作为分子标记，可以直接应用于分子标记辅助育种中。利用分子标记与决定目标性状基因紧密连锁的特点，通过检测分子标记，即可检测到目的基因的存在，达到选择目标性状的目的，具有快速、准确、不受环境条件干扰的优点。可作为鉴别亲本亲缘关系，回交育种中数量性状和隐性性状的转移、杂种后代的选择、杂种优势的预测及品种纯度鉴定等各个育种环节的辅助手段。
上述的通用引物组合在制备草木樨属植物检测试剂盒中的应用。
一种草木樨属植物检测试剂盒，草木樨属植物检测试剂盒包括上述的通用引物组合。
进一步地，草木樨属植物检测试剂盒还包括PCR反应缓冲液、Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+中的至少一种。
PCR反应缓冲液在进行PCR反应过程中，提供一个温和的、稳定的反应环境，避免PCR反应环境的变化影响反应的继续进行。Taq DNA聚合酶是进行PCR反应的常用酶；复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶，以DNA为复制模板，将DNA由5′端点开始复制到3′端的酶。因此，如果对扩增的片段有保真性要求的时候，可以选用具有高保真性的Taq DNA聚合酶。
进一步地，草木樨属植物检测试剂盒还包括植物基因组DNA提取试剂。
进一步地，植物基因组DNA提取试剂包括DNA缓冲液，DNA缓冲液Tris-HCl、EDTA、NaCl、SDS和醋酸盐中的至少一种。
上述的草木樨属植物检测试剂盒在草木樨属植物种质鉴定中的应用。
上述的草木樨属植物检测试剂盒在草木樨属植物育种中的应用。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种草木樨属的通用引物组合，通用引物组合包括第1引物对，第1引物对的碱基序列分别如SEQ ID No.1-2所示。
实施例2
本实施例提供一种草木樨属的通用引物组合，通用引物组合包括第1-2引物对，第1-2引物对的碱基序列分别如SEQ ID No.1-4所示。
实施例3
本实施例提供一种草木樨属的通用引物组合，通用引物组合包括第1-70对通用引物，第1-70引物对的碱基序列分别如SEQ ID No.1-140所示。
根据实际情况，可以将得到70对通用引物组合都可以应用到草木樨属中，那么这70对引物组合中的至少一对引物组合也同样可以应用到草木樨属植物中。
本实施例还提供草木樨属的通用引物组合的筛选方法；具体方法如下：
草木樨属植物转录组测序
选取白花草木樨N46，N47，N48，N49和RPh共5份种质，每份种质取三个单株的叶片5g并液氮保存，用于提取RNA。
用上述提取的RNA进行转录组测序，根据测序结果设计EST-SSR引物；得到18182对EST-SSR引物。根据碱基重复类型(单碱基重复除外)，预期片段大小(150-200bp)和退火温度(55-60℃)作为筛选条件，对设计的18182对EST-SSR引物进行筛选，得到550对符合筛选条件的引物对。
选取白花草木樨5份种质，每份材料取18个单株的新鲜叶片混合，用SDS法提取叶片的总DNA，将提取出来的DNA用琼脂糖凝胶电泳检测其质量，对合格样品加ddH2O稀释到50ng/μL，置于-20℃冰箱保存。
用上述步骤得到的DNA样品为模板，对筛选得到的550对EST-SSR引物进行PCR验证；PCR反应结束后，对产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据电泳条带筛选，筛选条带清晰且具有多态性的片段对应的EST-SSR引物，得到206对EST-SSR引物。
然后选取白花草木樨15份种质，每份种质取4个单株，取生长良好的新鲜叶片采用上述方法提取并保存DNA。
用上述步骤得到的DNA样品为模板，对上述筛选得到的206对EST-SSR引物进行PCR验证，选取条带清晰且具有多态性的片段对应的EST-SSR引物；得到114对EST-SSR引物。
最后选用草木樨属18个种，每个种3个单株，取生长良好的新鲜叶片采用上述方法提取并保存DNA。然后再次进行PCR反应扩增，选取条带清晰且单一，同时具有较好多态性对应的引物对；得到70引物对，依次命名为第1-70通用引物对，第1-70通用引物对的碱基序列如SEQ ID No.1-140所示。
第1-70通用引物对序列信息及扩增片段重复片段信息如附表1所示。
PCR反应体系及程序：
PCR反应体系总体积为10μL，含1.0μL模板DNA，4μM正反引物各1μL，O.1μL DNA聚合酶，4.9μL的2×Reaction Mix，2μL ddH2O。初步筛选反应程序：94℃预变性3min；94℃变性30s，引物最适退火温度退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸7min；4℃保存。扩增产物用6.0％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，银染。
本实施例试验得到的引物对是EST-SSR引物，因此可以应用于草木樨属植物种质鉴定以及草木樨属植物育种尤其是草木樨属植物分子标记辅助育种中。
实施例4
本实施例提供一种草木樨属植物检测试剂盒，包括实施例3提供的通用引物组合。
实施例5
本实施例提供一种草木樨属植物检测试剂盒，包括实施例3提供的通用引物组合。
本实施例提供的试剂盒可以应用于草木樨属植物种质鉴定以及草木樨属植物育种尤其是草木樨属植物分子标记辅助育种中。
实施例6
本实施例提供一种草木樨属植物检测试剂盒，包括实施例3提供的通用引物组合。
该试剂盒还包括PCR反应缓冲液、Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+中的至少一种。
本实施例提供的试剂盒可以应用于草木樨属植物种质鉴定以及草木樨属植物育种尤其是草木樨属植物分子标记辅助育种中。
实施例7
本实施例提供一种草木樨属植物检测试剂盒，包括实施例3提供的通用引物组合。
该试剂盒包括PCR反应缓冲液、Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+。
该试剂盒植物基因组DNA提取试剂，植物基因组DNA提取试剂包括DNA缓冲液(DNAbuffer)、醋酸钾溶液、氯仿异戊醇、醋酸钠溶液、异丙醇溶液、乙醇溶液和ddH2O。
DNA buffer包括Tris-HCl、EDTA、NaCl、SDS和醋酸盐中的至少一种。
综上所述，本发明实施例提供的草木樨属的通用引物组合，能够较好的覆盖草木樨属植物品种，通用引物组合作为分子标记能应用于草木樨属植物种质鉴定和草木樨属植物育种中；将该通用引物组合制备成试剂盒能更方便的应用于草木樨属植物种质鉴定和草木樨属植物育种中；且该通用引物组合具备较高的通量；由于草木樨属植物的优良特性，该试剂盒具有较大的应用价值和较好的实际效果；对草木樨属植物研究和育种等都会有巨大的推动作用。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
附表1 第1-70通用引物对序列信息及扩增片段重复片段信息
SEQUENCE LISTING
<110> 兰州大学
<120> 草木樨属通用引物组合及应用、试剂盒
<160> 140
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ggtgtcactg atcctccagc 20
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
tggatggaaa ttggggtgag g 21
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
acgaggatcc atctagggtt ca 22
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
tggtcacaaa cattagacaa cgg 23
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
tgctgttgat gatgcttaac act 23
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
ggcggttcaa aatccggttc 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
acgcacctat cttccgttcc 20
<210> 8
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
acttctgcaa tcaatctcca aca 23
<210> 9
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
accaacagtt acaagaagtg agt 23
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
tttgtgaggg ttgcggtgat 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
tggaagtgga tgacatgccc 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
aatcacacct gggttggcaa 20
<210> 13
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
ggaagagaga gaaacagcgc a 21
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
gttccggcga agagagagaa 20
<210> 15
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
acctttgtcc cctcacaatc a 21
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
aatctctgca gcttggccat 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
agaaaacacc agcaccacca 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
gccaacaccg ttcacacttc 20
<210> 19
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 19
atcacttata gtccacagaa gtgt 24
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
gcttcgttta ggcagccaag 20
<210> 21
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
tgactttgtt tcgctgtcgc 20
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
tccaacagag cctcaaccac 20
<210> 23
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 23
ggagcccagt tcagaattcc a 21
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 24
caccaccacc cttctgcata 20
<210> 25
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 25
gtacaagagc cctctcgtcg 20
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 26
tgaagaggaa agtcggtggc 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 27
tgacttcctt cccacttgcc 20
<210> 28
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 28
cacagcagca gaagcagttg 20
<210> 29
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 29
ggagaacaca tcactctccc a 21
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 30
actgacacct tgctggatcg 20
<210> 31
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 31
acacaagcaa tcgccaactt 20
<210> 32
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 32
attggttgcc tcagacaggg 20
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 33
atgtcgaatc gttacggcca 20
<210> 34
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 34
ttgctaccgg aaccagaacc 20
<210> 35
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 35
gttttgagtc caaccaccac a 21
<210> 36
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 36
ccaaccgtgc ctgtttcaag 20
<210> 37
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 37
ggagaagagt gaaagtgaag cc 22
<210> 38
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 38
agcacctcag ctgatgaacc 20
<210> 39
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 39
atctcaaaat ctgccgccca 20
<210> 40
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 40
gtggttgaag gggaggtagc 20
<210> 41
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 41
cgtgagtcgc cggataatgt 20
<210> 42
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 42
acgcggagac aaagagagag 20
<210> 43
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 43
acgaagacag taacatggcc a 21
<210> 44
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 44
gcgctggttt tgtcattgga 20
<210> 45
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 45
tccaaactca aacaagatga acca 24
<210> 46
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 46
tgtggagagg gtttcatcag g 21
<210> 47
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 47
aatgcacata cgccgtctca 20
<210> 48
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 48
cggtggtgga ggagtaggta 20
<210> 49
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 49
ggcttcagaa acattgcggg 20
<210> 50
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 50
gttggtctcg acgcaacaac 20
<210> 51
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 51
gggtacgagg tgtggtagga 20
<210> 52
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 52
gggtttgggt aagcttcgga 20
<210> 53
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 53
acccacttga ccttttggca 20
<210> 54
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 54
ccatgctttg tcggccattt 20
<210> 55
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 55
gtcaattccg ttgtcgccag 20
<210> 56
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 56
gtcacgcccc tttcgttttt 20
<210> 57
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 57
tgagcatctt cgtgctgtgt 20
<210> 58
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 58
tcaccaaatg aatcgagtta ggt 23
<210> 59
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 59
tttggaacca taaaagtctc cttatt 26
<210> 60
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 60
tggatggaga gtgagagggg 20
<210> 61
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 61
gggaagaggg aatggagcac 20
<210> 62
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 62
tcgccatgtc tctgtcaaca 20
<210> 63
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 63
gaggagaaac ggaggcgtag 20
<210> 64
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 64
tggacttgaa tccgacggtg 20
<210> 65
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 65
tcgccaattg ccatccttct 20
<210> 66
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 66
aaagttagag cccccatgcc 20
<210> 67
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 67
ttccactcca aacccaccac 20
<210> 68
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 68
tgttgtcgag gtcccaaagg 20
<210> 69
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 69
acggtcgaag tagtccggta 20
<210> 70
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 70
gtggtggtga tggtgatggt 20
<210> 71
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 71
gacactgcct tttccggaga 20
<210> 72
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 72
ggttaagtga aacggcgctg 20
<210> 73
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 73
aaaaccgagc tgcaaagtgc 20
<210> 74
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 74
aacaggtctg cgatggatgg 20
<210> 75
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 75
gtgagaccag gtaacaccgg 20
<210> 76
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 76
tttccgctta acccaaacgc 20
<210> 77
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 77
tgcaacaaag tttgcatcat tgg 23
<210> 78
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 78
actgtcacaa cactcttgga ga 22
<210> 79
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 79
gaaattcggg aggccgagaa 20
<210> 80
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 80
tgtctgaact caaacaccat tttca 25
<210> 81
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 81
gaaaaaccaa aacgcgccac 20
<210> 82
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 82
tcggaggata gggaagggtc 20
<210> 83
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 83
acggaggagt ggagtcttgt 20
<210> 84
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 84
attggaggca ttggggatgg 20
<210> 85
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 85
acttctcgtg aatgcacagt 20
<210> 86
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 86
ttttctttct catgctttgc tagt 24
<210> 87
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 87
tcggctgctt tgtctctctt 20
<210> 88
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 88
ggacggaaca tggaggagtg 20
<210> 89
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 89
tctaatccgt ttgcgccgta 20
<210> 90
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 90
tcgaagagtt ggatgcgctt 20
<210> 91
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 91
tggatccgtt tttcttcctc tca 23
<210> 92
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 92
gaagaagttc tgcgatcggc 20
<210> 93
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 93
agcagttgag ccgtgaatca 20
<210> 94
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 94
tgttttgtat cccggggcag 20
<210> 95
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 95
cggttatgct cttttcaagg gt 22
<210> 96
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 96
cgacgaggcc ttgaattcct 20
<210> 97
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 97
gggcggtaga ggaggtagaa 20
<210> 98
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 98
aagctcaact ctacggtgcc 20
<210> 99
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 99
gagggtcttt tccgttcggt 20
<210> 100
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 100
ctcccaatcc caaagcccat 20
<210> 101
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 101
ggcgagaatt gtgtgacacg 20
<210> 102
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 102
ctggaaatcc acgtggctga 20
<210> 103
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 103
aactcaaagg acggtgggtg 20
<210> 104
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 104
aatggtccta gcccacgttg 20
<210> 105
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 105
gcagttacca gaaaagcggc 20
<210> 106
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 106
tctcttcgcg tgagtgtgaa 20
<210> 107
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 107
agagtcccac gttgttgtag t 21
<210> 108
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 108
gcagcttgca agtttctgtc a 21
<210> 109
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 109
ccaacagcaa ccagagcaac 20
<210> 110
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 110
gacgatgaag cggacgtttg 20
<210> 111
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 111
gcggattggg agagagaagg 20
<210> 112
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 112
gggtatgggt ggaggagagt 20
<210> 113
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 113
tggaggacgt aggttcaagt g 21
<210> 114
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 114
actgctaggc accaagtcaa 20
<210> 115
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 115
atggccaccc agaatgttgt 20
<210> 116
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 116
ccgtcaagaa ttgccacagc 20
<210> 117
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 117
gggatgtgag aggggagagt 20
<210> 118
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 118
ctcctcgaac cttgacctgg 20
<210> 119
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 119
tgcacaactc aaacaaacac a 21
<210> 120
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 120
tctcctcttt gctaacgccg 20
<210> 121
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 121
cgtagtcaaa atgtggttgt cca 23
<210> 122
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 122
acagcctctg caagaaaggt 20
<210> 123
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 123
ggtgaccctg tgacctgaac 20
<210> 124
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 124
ccgcctcaaa acacttctgt 20
<210> 125
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 125
agcatgaaac tgaggggaga 20
<210> 126
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 126
accgaaatga aagccgcaac 20
<210> 127
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 127
cgcacgaatt ggaaatgggt 20
<210> 128
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 128
tcctcgtaaa ctgttgaggc t 21
<210> 129
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 129
cctccaacac ttccctccat 20
<210> 130
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 130
gcactcagca ccacaatcac 20
<210> 131
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 131
acccaaaagt cccttccacc 20
<210> 132
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 132
agtgctgatg agcttttctc ca 22
<210> 133
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 133
agaaatggat gggggaagaa ca 22
<210> 134
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 134
agcctagttt ccacacacgc 20
<210> 135
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 135
gcccagattg caagctcaaa 20
<210> 136
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 136
accaaggtac cttctctctc ct 22
<210> 137
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 137
ggttggacag tgtcttggtc a 21
<210> 138
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 138
attcatgcaa tggtggctct 20
<210> 139
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 139
tttgaatggc gtgaagtgcg 20
<210> 140
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 140
tcaagcccag ttgccctaag 20
Claims (10)
1.一种草木樨属的通用引物组合，其特征在于，所述通用引物组合包括第1-70引物对中的引物，所述第1-70引物对的碱基序列分别如SEQ ID No.1-140所示。
2.如权利要求1所述的通用引物组合在草木樨属植物种质鉴定中的应用。
3.如权利要求1所述的通用引物组合在草木樨属植物育种中的应用。
4.如权利要求1所述的通用引物组合在制备草木樨属植物检测试剂盒中的应用。
5.一种草木樨属植物检测试剂盒，其特征在于，所述草木樨属植物检测试剂盒包括如权利要求1所述的通用引物组合。
6.根据权利要求5所述的草木樨属植物检测试剂盒，其特征在于，所述草木樨属植物检测试剂盒还包括PCR反应缓冲液、Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+中的至少一种。
7.根据权利要求5所述的草木樨属植物检测试剂盒，其特征在于，所述草木樨属植物检测试剂盒还包括植物基因组DNA提取试剂。
8.根据权利要求7所述的草木樨属植物检测试剂盒，其特征在于，所述植物基因组DNA提取试剂包括DNA缓冲液，所述DNA缓冲液为 Tris-HCl、EDTA、NaCl、SDS和醋酸盐中的至少一种。
9.如权利要求5-8任一项所述的草木樨属植物检测试剂盒在草木樨属植物种质鉴定中的应用。
10.如权利要求5-8任一项所述的草木樨属植物检测试剂盒在草木樨属植物育种中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710468472.3A CN107190070B (zh) | 2017-06-19 | 2017-06-19 | 一种草木樨属的通用引物组合及应用、试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710468472.3A CN107190070B (zh) | 2017-06-19 | 2017-06-19 | 一种草木樨属的通用引物组合及应用、试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107190070A CN107190070A (zh) | 2017-09-22 |
| CN107190070B true CN107190070B (zh) | 2021-04-20 |
Family
ID=59878525
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710468472.3A Active CN107190070B (zh) | 2017-06-19 | 2017-06-19 | 一种草木樨属的通用引物组合及应用、试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107190070B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111549171B (zh) * | 2020-06-12 | 2023-07-18 | 兰州大学 | 草木樨LTR-RT和miRNA-SSR分子标记引物及在种质鉴定中的应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104278084B (zh) * | 2014-09-11 | 2015-11-18 | 兰州大学 | 鉴定白花草木樨和黄花草木樨特异分子标记试剂盒及其检测方法 |
| CN105603095B (zh) * | 2016-02-23 | 2017-07-18 | 兰州大学 | 草木樨属18个物种植物条形码的目标条形码基因及其制备方法 |
| CN105695578B (zh) * | 2016-03-09 | 2019-08-09 | 兰州大学 | 一种鉴定草木樨属不同种特异引物组合及其应用 |
-
2017
- 2017-06-19 CN CN201710468472.3A patent/CN107190070B/zh active Active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Microsatellite markers for the invasive plant species white sweetclover（Melilotus alba） and yellow swectclover（Melilotus officinulis）;Winton L M et al.;《Molecular Ecology Notes》;20071231;第7卷;第1296-1298页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107190070A (zh) | 2017-09-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109468405B (zh) | 基于转录组测序开发的云锦杜鹃ssr引物对及筛选方法与应用 | |
| CN103305510A (zh) | 稻瘟病抗性基因Pi9基因特异性分子标记Pi9SNP及制备与应用 | |
| US20140053294A1 (en) | Pongamia Genetic Markers and Method of Use | |
| CN109112146A (zh) | 控制甘蓝型油菜角果长和粒重性状的基因qSLWA9的克隆与育种应用 | |
| CN109735648B (zh) | 一种筛选不同千粒重小麦的方法及其专用试剂盒 | |
| CN109536632B (zh) | 基于转录组测序开发的满山红ssr引物对及筛选方法与应用 | |
| CN108456743B (zh) | 与大豆开花期和成熟期相关的snp标记及其检测引物、方法与应用 | |
| CN111334597B (zh) | 用于检测西瓜白粉病抗性的snp位点、kasp标记及其应用 | |
| KR101151239B1 (ko) | 배추의 유전자적 다중대립인자 웅성불임 유전자 Ｍｓ의 마커 및 이의 용도 | |
| CN107190070B (zh) | 一种草木樨属的通用引物组合及应用、试剂盒 | |
| KR100842434B1 (ko) | 인삼에서 유래된 ｓｓｒ 프라이머 및 이의 용도 | |
| CN110331222B (zh) | 一种棉花育性恢复相关的分子标记及其应用 | |
| Kyaligonza et al. | Identification of F1 cassava (Manihot esculenta Crantz) progeny using microsatellite markers and capillary electrophoresis | |
| CN114410821A (zh) | 鉴定苋菜叶色性状的InDel分子标记及其应用 | |
| Jangra et al. | Early diagnosis of sex in jojoba, Simmondsia chinensis (link) schneider by sequence characterized amplified region marker | |
| KR101807623B1 (ko) | 방풍, 식방풍 및 해방풍의 엽록체 게놈 및 핵 리보솜 dna 서열의 완전 해독 기반 종 식별 마커와 프라이머 세트 및 이의 용도 | |
| CN108676796A (zh) | 水稻粒型基因OsSNB的分子标记及其应用 | |
| KR20130091434A (ko) | 벼 줄무늬잎마름병 저항성 유전자 Ｓｔｖ－ｂｉ를 가진 벼 품종 선별용 프라이머 및 이를 이용한 벼 품종 선별 방법 | |
| CN108411026B (zh) | 一种菊花托桂花型分子标记辅助选择的方法 | |
| CN109486995B (zh) | 锦绣杜鹃est-ssr标记开发及应用 | |
| Wang et al. | Development of 5Ns chromosome-specific SCAR markers for utilization in future wheat breeding programs | |
| KR101401980B1 (ko) | 역병 저항성 고추 품종을 선별하기 위한 특이 프라이머 및 이의 용도 | |
| KR20100079527A (ko) | 팥에서 분리된 ｓｓｒ 프라이머 및 이의 용도 | |
| JP5849317B2 (ja) | 栄養繁殖作物の品種識別マーカー | |
| CN105483281A (zh) | 一种用于鉴定糯玉米沪五彩花糯1号的snp分子标记及其鉴定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |