KR20100079527A - 팥에서 분리된 ｓｓｒ 프라이머 및 이의 용도 - Google Patents

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서득용
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하태정
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    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Abstract

본 발명은 팥에서 분리한 SSR 프라이머 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 서열번호 1 내지 서열번호 12로 이루어진 군에서 선택되는 2개의 염기서열을 갖는 SSR 프라이머쌍 및 이를 이용하여 PCR을 수행하는 것을 포함하는 팥의 DNA 다형성 검출 방법에 관한 것이다.
본 발명에서 제공되는 SSR 프라이머쌍은 팥의 DNA 다형성을 효과적으로 검출하여 팥의 DNA 프로파일을 작성하는데 매우 유용하게 이용될 수 있다. 이를 통해 팥의 유전자원을 효율적으로 평가함으로써 신규 유전자원 도입시 기존 보유자원과의 중복성 분석 및 신규성 확립을 효과적으로 수행할 수 있으며, 팥의 품종을 판별할 수 있다.
팥, SSR 프라이머, 다형성, 품종 동정

Description

팥에서 분리된 ＳＳＲ 프라이머 및 이의 용도{SSR primer derived from azuki-bean and use thereof}
본 발명은 팥에서 분리한 SSR 프라이머 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 서열번호 1 내지 서열번호 12로 이루어진 군에서 선택되는 2개의 염기서열을 갖는 SSR 프라이머쌍 및 이를 이용하여 PCR을 수행하는 것을 포함하는 팥의 DNA 다형성 검출 방법에 관한 것이다.
현재까지 분자 생물학의 발전으로 핵산(DNA) 수준에서 유전자원의 다양성(bio-diversity) 연구를 가능케 하는 핵산지문 분석방법 및 다양한 NDA 마커들이 개발되어 있다. 이를 통해 유용형질 탐색, 생물의 종 판별, 품종 분류 동정 및 집단 개체군의 유연관계 분석을 DNA 수준에서 간단하고, 신속하게 수행할 수 있게 되었다. 지금까지 개발된 PCR(polymerase chain reaction)을 이용한 지문분석법에는 RAPD(randomly amplifed polymorphic DNAs)방법, AFLP(Amplified fragment length polymorphic DNA) 방법, SSR(Simple sequence repeat) 방법 등이 있다. 상기방법 중 RAPD와 AFLP 방법은 재현성이 떨어지거나, 분석이 복잡한 단점을 가 지고 있다. 이에 반해, SSR 방법은 DNA 반복 배열인 초위성체(microsatellite) 영역의 염기배열 정보를 근거로 PCR 프라이머를 제작하여 이용하는 방법으로서, 분석이 용이하고, 높은 재현성을 가지는 장점으로 생물종의 동정에 많이 이용되고 있다.
대표적인 작물인 벼에서는 벼 게놈에 반복되는 SSR을 PCR 기술로 증폭하여 벼 품종의 유전자형을 동정하는 초위성체 마커들이 개발되었다(대한민국 특허출원번호 제2001-34003호). 이외에도, 보리, 콩, 밀, 팥 등에서도 많은 SSR 마커들이 개발되었다. 일본에서는 팥 재배종으로부터 SSR마커를 제작하여(Wang, 2004) 일본내 5개 지역에서 수집한 팥의 지역별로 구분이 가능한지 연구하였고, 이 SSR 마커를 팥 연관지도 작성에 사용하였으며(Han, 2005), 이 SSR 마커는 재배종 팥과 야생종 팥을 교배하여 후대에 유전자의 이동에 관한 결과에 사용되었다(Chaitieng, 2006). 그러나 국내에서는 아직 팥에서 품종판별을 위한 SSR 마커가 전혀 개발된 바 없다.
이에 본 발명자들은 팥의 품종간 차이를 효율적으로 평가할 수 있는 SSR 마커를 찾기 위하여 보고된 모든 자료로부터 팥 SSR마커의 염기서열을 찾아서 합성하여 실험한 결과, 다양한 팥 계통들에서 다형성 변이를 많이 나타내는 SSR 프라이머쌍을 개발함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명은 팥의 품종을 효율적으로 평가할 수 있는 SSR 마커 및 이의 용도를 제공하고자 한다.
본 발명은 서열번호 1 내지 서열번호 12로 이루어진 군에서 선택되는 2개의 염기서열을 갖는 SSR(simple sequence repeat) 프라이머쌍을 그 특징으로 한다.
또한 본 발명은,
(a) 분석하고자 하는 팥 품종으로부터 게놈 DNA를 추출하는 단계;
(b) 추출된 게놈 DNA를 주형으로 하고 상기 SSR 프라이머쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및
(c) PCR 산물을 전기영동하는 단계를 포함하는 팥의 DNA 다형성 검출 방법을 그 특징으로 한다.
또한 본 발명은,
(a) 분석하고자 하는 팥 및 대조군 팥 품종으로부터 게놈 DNA를 추출하는 단계;
(b) 추출된 게놈 DNA를 주형으로 하고 상기 SSR 프라이머쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계;
(c) PCR 산물을 전기영동하는 단계; 및
(d) 상기 팥 및 대조군 팥의 전기영동 결과를 비교하는 단계를 포함하는 팥의 품종 동정 방법을 그 특징으로 한다.
본 발명에서 제공되는 SSR 프라이머쌍은 팥의 DNA 다형성을 효과적으로 검출하여 팥의 DNA 프로파일을 작성하는데 매우 유용하게 이용될 수 있다. 이를 통해 팥의 유전자원을 효율적으로 평가함으로써 신규 유전자원 도입시 기존 보유자원과의 중복성 분석 및 신규성 확립을 효과적으로 수행할 수 있으며, 팥의 품종을 판별할 수 있다.
본 발명은 서열번호 1 내지 서열번호 12로 이루어진 군에서 선택되는 2개의 염기서열을 갖는 SSR(simple sequence repeat) 프라이머쌍을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 SSR 프라이머쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 것을 포함하는 팥의 DNA 다형성 검출 방법 및 팥의 품종 동정 방법을 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 팥의 유전적 다형성을 특이적으로 분석할 수 있는 SSR 마커를 제공하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에서는 팥의 SSR 마커를 Wang et al.(Theor. Appl. Genet. (2004) 109:352-360)과 Han et al.(Theor. Appl. Genet. (2005) 111:1278-1287)이 보고한 염기서열 정보로부터 획득하고, SSR 마커를 합성하여 사용하였다. 상기 프라이머쌍을 사용하여 현재까지 품종으로 등록된 7개의 팥 품종들의 PCR을 통한 DNA 프 로파일링을 수행함으로써 다형성 변이를 많이 나타내는 6쌍의 SSR 프라이머쌍을 선발하였다.
본 발명에서 제공하는 SSR 마커는 PCR 프라이머쌍을 말하며, 정방향 프라이머와 역방향 프라이머를 포함한다. 본 발명에서 제공되는 SSR 프라이머쌍은 서열번호 1 내지 서열번호 12로 이루어진 군에서 선택되는 2개의 염기서열을 가진다. 바람직하게는 CEDG-48(서열번호 1과 2로 표시되는 프라이머쌍), CEDG-68(서열번호 3과 4로 표시되는 프라이머쌍), CEDG-92(서열번호 5와 6으로 표시되는 프라이머쌍), CEDG-141(서열번호 7과 8로 표시되는 프라이머쌍), CEDG-173(서열번호 9와 10으로 표시되는 프라이머쌍), CEDG-214(서열번호 11과 12로 표시되는 프라이머쌍)로 이루어진 군에서 선택된다. 본 발명에서 제공되는 프라이머쌍 및 이들에 의해 증폭되는 초위성체의 크기의 범위, Tm(℃) 및 초위성체가 존재하는 염색체 대립인자에 대한 정보를 하기 표 1에 기재하였다.
Figure 112008090959914-PAT00001
Fa : 정방향 프라이머 Rb : 역방향 프라이머
본 발명에서 제공되는 SSR 프라이머쌍은 팥에서 DNA 다형성을 검출하고 유전적 다양성을 분석하는데 유용하게 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 SSR 프라이머를 이용하여 팥의 유전자원과 품종을 효율적으로 평가 또는 보존할 수 있다. 따라서 본 발명은 상기 SSR 프라이머쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 것을 포함하는 팥의 DNA 다형성 검출 방법을 제공한다.
구체적으로 팥의 DNA 다형성 검출 방법은
(a) 분석하고자 하는 팥 품종으로부터 게놈 DNA를 추출하는 단계;
(b) 추출된 게놈 DNA를 주형으로 하고 상기 SSR 프라이머쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및
(c) PCR 산물을 전기영동하는 단계를 포함한다.
상기 (a)단계에서 게놈 DNA의 추출은 당업계에서 통상적으로 사용되는 페놀/클로로포름 추출법, SDS 추출법(Tai et al., Plant Mol. Biol. Reporter, 8: 297-303), CTAB 분리법(Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide; Murray et al., Nuc. Res., 4321-4325, 1980) 또는 상업적으로 판매되는 DNA 추출 키트를 이용하여 수행할 수 있다.
또한 상기 (b)단계에서 PCR은 PCR 반응에 필요한 당업계에 공지된 여러 성분을 포함하는 PCR 반응 혼합액을 이용하여 수행될 수 있다. 상기 PCR 반응 혼합액에는 분석하고자 하는 팥에서 추출된 게놈 DNA와 본 발명에서 제공되는 SSR 프라이머쌍 이외에 적당량의 DNA 중합효소, dNTP, PCR 완충용액 및 물(dH2O)을 포함한다. 상기 PCR 완충용액은 트리스-HCl(Tris-HCl), MgCl2, KCl 등을 포함한다. 이 때 MgCl2 농도는 증폭의 특이성과 수량에 크게 영향을 주며, 바람직하게는 1.5 ~ 2.5mM의 범위로 사용될 수 있다. 일반적으로 Mg2+가 과량인 경우는 비 특이적인 PCR 증폭산물이 증가하고, Mg2+가 부족한 경우 PCR산물의 산출율이 감소한다. 상기 PCR 완충용액에는 적당량의 트리톤 X-100(Triton X-100)이 추가로 포함될 수도 있다. 또한 PCR은 94 ~ 95℃에서 주형 DNA를 전변성시킨후, 변성(denaturation); 결합(annealing); 및 증폭(extension)의 사이클을 거친 후, 최종적으로 72℃에서 연장(elongation)시키는 일반적인 PCR 반응 조건에서 수행될 수 있다. 상기에서 변성 및 증폭은 94 ~ 95℃ 및 72℃에서 각각 수행될 수 있다. 결합시의 온도는 프라이머의 종류에 따라 달라질 수 있다. 바람직하게는 55 ~ 60℃이다. 각 단계의 시간과 싸이클 수는 당업계에 일반적으로 행해지는 조건에 따라 정해질 수 있다. 본 발명에 따른 SSR 프라이머쌍을 이용한 PCR 수행시의 최적의 반응조건은 다음과 같다. 94℃에서 5분간 주형 DNA를 전변성시킨 후, 94℃에서 30초; 55℃에서 30초; 및 72℃에서 60초를 35 싸이클 반복 수행한 후, 최종적으로 72℃에서 5분간 반응시킨다.
상기 (c) 단계에서는 당업계에서 널리 공지된 방법에 따라 PCR 산물의 DNA를 크기별로 분리할 수 있다. 바람직하게는 아가로스 겔(agarose gel) 또는 폴리아크릴아마이드 겔(polyacrylamide gel) 전기영동 또는 형광분석장치(ABI prism 3100 genetic analyzer-electropherogram)에 의해 확인할 수 있다. PCR 증폭 결과는 바람직하게는 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동, 보다 바람직하게는 변성 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동에 의해 확인할 수 있다. 전기영동 후 실버 염색(silver staining)과 형광염색으로 전기영동 결과를 분석할 수 있다. 일반적인 PCR 수행 및 그 결과 분석 방법에 대해서는 당업계에 잘 알려져 있다.
아울러, 본 발명은 상기 SSR 프라이머 쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 것을 포함하는 팥의 품종 동정 방법을 제공한다.
구체적으로 팥의 품종 동정 방법은
(a) 분석하고자 하는 팥 및 대조군 팥 품종으로부터 게놈 DNA를 추출하는 단계;
(b) 추출된 게놈 DNA를 주형으로 하고 상기 SSR 프라이머쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계;
(c) PCR 산물을 전기영동하는 단계; 및
(d) 상기 팥 및 대조군 팥의 전기영동 결과를 비교하는 단계를 포함한다.
(a) 내지 (c) 단계의 게놈 DNA 추출, PCR 수행 및 PCR 산물의 크기별 분리는 상기에서 기재한 바와 같으며, 상기 (d) 단계에서 팥 및 대조군 팥 품종에 대한 비교는 동일한 조합의 SSR 프라이머쌍에 대한 시료가 되는 팥과 대조군 팥 품종의 각각의 PCR 산물의 크기를 서로 비교하는 방법으로 수행된다. 각 SSR 프라이머쌍에 대한 크기 비교 결과를 종합하여 시료가 되는 팥과 대조군 팥 품종의 결과와 모두 일치하면 시료가 되는 팥은 대조군 팥 품종과 동일한 품종으로 동정할 수 있다. 이와 같은 품종의 동정 방법은 신규 유전자원 도입시 중복여부 판단 및 원산지 확인을 통한 원산지 표시 위반 여부의 판정 등 품종의 동정이 필요한 경우에 유용하게 이용될 수 있다.
대조군 팥 품종에 대한 게놈 DNA 추출, PCR 수행 및 PCR 산물의 크기별 분리는 시료가 되는 팥과 동시에 수행될 수도 있으나, 시료가 되는 팥 보다 이전에 수행되어 동정의 기준표(reference)로 작성될 수도 있다. 이러한 기준표를 이용하면 시료가 되는 팥에 대한 게놈 DNA 추출, PCR 수행 및 PCR 산물의 크기별 분리만을 수행하여 기준표와 비교할 수 있어 유용하게 이용할 수 있다.
또한 본 발명은 본 발명에 따른 SSR 프라이머쌍을 포함하는 팥의 DNA 다형성 검출용 키트를 제공한다. 이외에 PCR 반응을 용이하게 수행할 수 있기 위해 DNA 중합효소 및 상기에서 기재한 조성의 PCR 반응 완충용액이 추가로 포함될 수 있으며, PCR 산물의 증폭 여부를 확인할 수 있는 전기영동 수행에 필요한 구성성분들이 본 발명의 키트에 추가로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 SSR 프라이머쌍을 포함하는 팥의 품종 동정용 키트를 제공한다. 품종 동정 방법은 상기에서 기재한 바와 같다. 이외에 PCR 반응을 용이하게 수행할 수 있기 위해 DNA 중합효소 및 상기에서 기재한 조성의 PCR 반응 완충용액이 추가로 포함될 수 있으며, PCR 산물의 증폭 여부를 확인할 수 있는 전기영동 수행에 필요한 구성성분 또는 공지된 품종에 대한 동정 기준표들이 본 발명의 키트에 추가로 포함될 수 있다.
본 발명에 적용될 수 있는 팥은 Vigna angularis(Willd.) Ohwi and Ohashi 및 이들의 변종일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 : 게놈 DNA 추출
품종으로 등록되어 있는 하기 표 2의 팥으로부터 SDS를 이용한 방법(Tai et al., Plant Mol. Biol. Reporter, 8: 297-303, 1990)에 따라 게놈 DNA를 추출하였다. 이를 상세히 설명하면 다음과 같다.
생육 1개월째의 어린 팥 식물체로부터 0.5 g의 잎 조직을 채취하여 1.5 ㎖ 튜브에 넣고 액체질소로 급냉시켰다. 이후, 즉시 플라스틱 막대로 잎을 곱게 마쇄하였다. 마쇄된 잎이 녹기 전에 추출 완충용액(200 mM Tris-HCl(pH 8.0), 200 mM NaCl, 25 mM EDTA, 0.5% SDS) 750 ㎕를 첨가하고, 혼합액을 65℃에서 30분간 보관하였다. 여기에 동량의 페놀(phenol):클로로포름(chloroform):이소아밀알코올(isoamylalchol)(25:24:1) 용액을 추가로 첨가한 후, 약 15분간 교반하였다. 이를 13,000 rpm에서 15분간 원심분리하였고, 상등액을 취하여 새 튜브에 옮겼다. 상기 튜브에 동량의 이소프로판올(-20℃)을 첨가하고, -20℃에서 1시간 보관하였다. 이후, 13,000 rpm에서 15분간 원심분리하였다. 상등액을 버린 후 침전된 DNA를 70% 에탄올로 세척하였다. DNA를 건조시킨 후, 약300 ㎕의 RNase (50 ㎍/㎖)를 함유하는 TE 완충용액(10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA, pH 7.4)을 첨가하여 충분히 녹인 후, 37℃에서 1시간동안 보관하였다.
품종명 육성년도 수집국 (원산지) 형 (Type)
중원팥 1983 대한민국 Vigna angularis (Willd.) Ohwi and Ohashi
충주팥 1984 대한민국 Vigna angularis (Willd.) Ohwi and Ohashi
중부팥 1992 대한민국 Vigna angularis (Willd.) Ohwi and Ohashi
칠보팥 1996 대한민국 Vigna angularis (Willd.) Ohwi and Ohashi
경원팥 2002 대한민국 Vigna angularis (Willd.) Ohwi and Ohashi
연금팥 2006 대한민국 Vigna angularis (Willd.) Ohwi and Ohashi
새길팥 2007 대한민국 Vigna angularis (Willd.) Ohwi and Ohashi
실시예 2 : SSR 프라이머쌍을 이용한 PCR
상기 실시예 1에서 추출된 게놈 DNA를 PCR을 통한 증폭을 하기위해 프라이머로서 CEDG-48(서열번호 1과 2로 표시되는 프라이머쌍), CEDG-68(서열번호 3과 4로 표시되는 프라이머쌍), CEDG-92(서열번호 5와 6으로 표시되는 프라이머쌍), CEDG-141(서열번호 7과 8로 표시되는 프라이머쌍), CEDG-173(서열번호 9와 10으로 표시되는 프라이머쌍), CEDG-214(서열번호 11과 12로 표시되는 프라이머쌍)을 선별하였다(표 1 참조). 상기 프라이머 쌍을 이용하여, 상기 표 2에 기재된 7점의 팥 품종에 대하여 PCR을 통한 DNA 프로파일링(profiling) 분석을 수행하였다.
각각의 PCR 반응 혼합물 (20㎕)의 조성은 다음과 같다: 실시예 1의 방법에 의해 분리한 7종의 팥 주형 DNA 각 10ng 총 70ng, 정방향 프라이머 0.2μM, 역방향 프라이머 0.2μM, 1X PCR 반응액 (10mM Tris-HCl (pH 8.8), 1.5mM MgCl2, 50mM KCl, 0.1% Triton X-100), 1 unit DNA 중합효소. PCR 반응 조건은 94℃에서 5분간 주형 DNA를 전변성시킨 후, 94℃에서 30초; 55℃에서 30초; 및 72℃에서 60초를 35 싸이클 반복 수행한 후, 최종적으로 72℃에서 5분간 반응시킨다.
각기 다르게 증폭된 PCR 산물 단편의 크기를 분석하기 위해 폴리아크릴아마이드 겔(polyacrylamide gel) 전기영동을 이용하여 분석하였다. 폴리아크릴아미이드 농도는 0.6%를 사용하여 분리하였으며, genet bio사의 형광 염색을 이용하여 염색시킨 후 증폭 결과를 확인하였다. 증폭된 초성위체의 크기를 비교하기 위하여, 증폭된 부분을 1 로 표시한 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 또한 상기 증폭 결과를 나타낸 전기 영동 사진을 도 1 내지 도 6에 나타내었다.
Figure 112008090959914-PAT00002
상기 표 3에서와 같이 본 발명의 프라이머쌍에 의해 증폭된 SSR을 포함하는 부위의 크기가 7 품종의 팥 샘플에서 다형성을 보였으며, 이에 본 발명의 프라이머쌍에 의해 증폭된 부위에 위치하는 SSR은 다형성을 가짐을 알 수 있었다. 이 때 각각의 SSR의 다형성을 보이는 대립인자 수 역시 표 1에 기재된 바와 같다.
도 1은 각 팥 주형 DNA를 CEDG-48 프라이머쌍으로 증폭한 PCR 산물을 분석한 전기영동 사진이다.
도 2는 각 팥 주형 DNA를 CEDG-68 프라이머쌍으로 증폭한 PCR 산물을 분석한 전기영동 사진이다.
도 3은 각 팥 주형 DNA를 CEDG-92 프라이머쌍으로 증폭한 PCR 산물을 분석한 전기영동 사진이다.
도 4는 각 팥 주형 DNA를 CEDG-141 프라이머쌍으로 증폭한 PCR 산물을 분석한 전기영동 사진이다.
도 5는 각 팥 주형 DNA를 CEDG-173 프라이머쌍으로 증폭한 PCR 산물을 분석한 전기영동 사진이다.
도 6은 각 팥 주형 DNA를 CEDG-214 프라이머쌍으로 증폭한 PCR 산물을 분석한 전기영동 사진이다.
<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT: RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> SSR primer derived from azuki-bean and use thereof <160> 12 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-48 primer(forward) <400> 1 tctcttcctc tatggcttgg 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-48 primer(reverse) <400> 2 gctcctcttt ttgctgcatc 20 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-68 primer(forward) <400> 3 tctccatagg aacccctgaa ag 22 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-68 primer(reverse) <400> 4 tgggatcagt gaattcgcca g 21 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-92 primer(forward) <400> 5 tcttttggtt gtagcaggat gaac 24 <210> 6 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-92 primer(reverse) <400> 6 tacaagtgat atgcaacggt tagg 24 <210> 7 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-141 primer(forward) <400> 7 ccaggcatcc atgatgacc 19 <210> 8 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-141 primer(reverse) <400> 8 gaagttgttg gtaatggttg cctc 24 <210> 9 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-173 primer(forward) <400> 9 gataagagat gcatcactc 19 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-173 primer(reverse) <400> 10 cttctcttcc atcacatctg 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-214 primer(forward) <400> 11 cactcactgc aaagagcaac 20 <210> 12 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CEDG-214 primer(reverse) <400> 12 ctacctatct gagggacac 19

Claims (7)

  1. 서열번호 1 내지 서열번호 12로 이루어진 군에서 선택되는 2개의 염기서열을 갖는 SSR(simple sequence repeat) 프라이머쌍.
  2. 제1항에 있어서, 서열번호 1과 2로 표시되는 프라이머쌍; 서열번호 3과 4로 표시되는 프라이머쌍; 서열번호 5와 6으로 표시되는 프라이머쌍; 서열번호 7과 8로 표시되는 프라이머쌍; 서열번호 9와 10으로 표시되는 프라이머쌍; 및 서열번호 11과 12로 표시되는 프라이머쌍으로 이루어진 군에서 선택된 SSR 프라이머쌍.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 팥(Vigna angularis (Willd.) Ohwi and Ohashi)으로부터 유래된 것을 특징으로 하는 SSR 프라이머쌍.
  4. (a) 분석하고자 하는 팥 품종으로부터 게놈 DNA를 추출하는 단계;
    (b) 추출된 게놈 DNA를 주형으로 하고 제1항 또는 제2항의 SSR 프라이머쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및
    (c) PCR 산물을 전기영동하는 단계를 포함하는 팥의 DNA 다형성 검출 방법.
  5. (a) 분석하고자 하는 팥 및 대조군 팥 품종으로부터 게놈 DNA를 추출하는 단계;
    (b) 추출된 게놈 DNA를 주형으로 하고 제1항 또는 제2항의 SSR 프라이머쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계;
    (c) PCR 산물을 전기영동하는 단계; 및
    (d) 상기 팥 및 대조군 팥의 전기영동 결과를 비교하는 단계를 포함하는 팥의 품종 동정 방법.
  6. 제 1 항 또는 제 2 항의 SSR 프라이머쌍을 포함하는 팥의 DNA 다형성 검출용 키트.
  7. 제 1 항 또는 제 2 항의 SSR 프라이머쌍을 포함하는 팥의 품종 동정용 키트.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101331740B1 (ko) * 2011-10-26 2013-11-20 공주대학교 산학협력단 작약에서 유래된 ｓｓｒ 프라이머 및 이의 용도
KR101357497B1 (ko) * 2011-10-26 2014-02-03 공주대학교 산학협력단 맥문아재비 속에서 유래된 ｅｓｔ-ｓｓｒ 프라이머 및 이의 용도
CN115011715A (zh) * 2022-04-20 2022-09-06 黑龙江八一农垦大学 一种基于ssr分子标记构建小豆的指纹图谱

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