CN107173229A - 丹参组织培养中无根苗生根培养工艺 - Google Patents

丹参组织培养中无根苗生根培养工艺 Download PDF

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巢晓峰
盛益龙
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Abstract

本发明公开了丹参组织培养中无根苗生根培养工艺，包括以下步骤：1)培养基的配制；2)丹参苗的选择：3)丹参苗的处理；4)丹参茎段的接种；5)丹参苗的生根培养；该工艺主要对丹参无根苗培养过程中的培养基成分进行优化和改进，只添加一种激素IBA(浓度为0.2mg/L)，就可以达到最佳的生根效果，通过优化后的工艺，不仅减少的实验步骤，又节省了实验成本。

Description

丹参组织培养中无根苗生根培养工艺
技术领域
本发明涉及一种丹参组织培养中无根苗生根培养工艺。
背景技术
丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)是是唇形科鼠尾草属多年生草本植物，又名红根、紫丹参、大红袍等。是我国传统常用药和多种中成药的主要原料。以干燥的根或根茎入药，具有活血调经，消炎止痛，养血安神等功效。其主要有效成分为二貼醌类和芬酸类。作为传统中药，丹参在我国栽培历史悠久，近年来丹参的需求量剧增，而传统的繁殖方式即种子繁殖和分根繁殖都具有一定的缺陷，导致现如今丹参产量减少，品种退化，且容易受气候环境的影响。而近年来兴起的植物组织培养技术，不仅可以保持母本植株的优良性状，且不受气候环境的影响就可达到高繁殖倍数。
植物组织培养是根据细胞的全能性理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶等)、组织(如形成层、表皮、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生质层，在无菌和适宜的人工条件下，诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整植株。
近年来，植物组织培养技术已成为丹参繁殖的重要手段。在整个丹参植物组织培养过程中中，丹参苗生根的状况直接决定着组培苗出瓶的存活率。因此对丹参无根苗生根工艺的优化具有重要意义。
发明内容
针对上述存在的问题，本发明旨在提供丹参组织培养中无根苗生根培养工艺，该工艺主要对丹参无根苗培养过程中的培养基成分进行优化和改进，只添加一种激素IBA(浓度为0.2mg/L)，就可以达到最佳的生根效果，通过优化后的工艺，不仅减少的实验步骤，又节省了实验成本。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
丹参组织培养中无根苗生根培养工艺，包括以下步骤：
1)培养基的配制
a、激素母液的配制：称取IBA 0.1g，用5mL 1M NaOH引溶，再用纯水定容至100mL，即为浓度为1.0mg/mL的IBA母液；
b、激素抽滤灭菌：将滤膜放进抽滤头，高压灭菌，带进超净台，将IBA母液抽滤灭菌，备用；
c、配制培养基基本成分：1/2MS+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8；高压灭菌；带入超净台备用；
d、添加激素：在超净台上用无菌的移液抢吸取IBA加入到基本培养基里，使其浓度为0.2mg/L，混匀；
e、分装：将添加好激素的培养基分装到无菌的组培瓶中，每瓶30～40mL，培养基成分为：1/2MS+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8；
2)丹参苗的选择；
3)丹参苗的处理：先无菌处理再进行修剪，修剪前剪切装置进行无菌处理；
4)丹参茎段的接种；
5)丹参苗的生根培养：接种后的茎段放置于组培室的组培架上进行生根的诱导，培养条件：培养温度27±0.5℃，光照时间12h，光强3000Lx，T5植物培养灯管。
作为优选，所述步骤(2)“丹参苗的选择”是选择粗壮无污染的丹参组培无根苗为材料，带入超净台备用，并用75％酒精棉球擦拭瓶口处。
作为优选，所述步骤(3)“丹参苗的处理”是用无菌的镊子将生长良好的丹参苗镊起，置于无菌的接种盘上，用无菌的剪切装置减去多余叶片，将茎段剪成具有一个生长点的小段。
作为优选，所述步骤(4)“丹参茎段的接种”是用无菌的镊子将剪好的茎段镊起，置于步骤(1)“分装”的固体培养基上。
本发明的有益效果是：在现代丹参植物组织培养过程中，诱导丹参无根苗生根通常以MS为基本培养基，添加6-BA、NAA、IBA、IAA几种激素混合使用。一般来说适量浓度的NAA、IBA、IBA都会诱导植物生根，而6-BA作为植物生长调节剂，不仅可以促进细胞分化，还会抑制或促进根系的生长，一般都以NAA、IBA、IAA其中一种激素搭配使用6-BA诱导植物生根。而本发明以1/2MS为基本培养基，只单独使用IBA一种激素就可以诱导丹参无根苗生根，且生根启动周期短，根系发达，数量多，整株丹参苗生长旺盛。
具体实施方式
为了使本领域的普通技术人员能更好的理解本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的描述。
实施例：丹参组织培养中无根苗生根培养工艺，包括以下步骤：
1)培养基的配制
a、激素母液的配制：称取IBA 0.1g，用5mL 1M NaOH引溶，再用纯水定容至100mL，即为浓度为1.0mg/mL的IBA母液；
b、激素抽滤灭菌：将滤膜放进抽滤头，高压灭菌，带进超净台，将IBA母液抽滤灭菌，备用；
c、配制培养基基本成分：1/2MS+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8；高压灭菌；带入超净台备用；
d、添加激素：在超净台上用无菌的移液抢吸取IBA加入到基本培养基里，使其浓度为0.2mg/L，混匀；
e、分装：将添加好激素的培养基分装到无菌的组培瓶中，每瓶30～40mL，培养基成分为：1/2MS+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8；
2)丹参苗的选择：选择粗壮无污染的丹参组培无根苗为材料，带入超净台备用，并用75％酒精棉球擦拭瓶口处；
3)丹参苗的处理：先无菌处理再进行修剪，修剪前剪切装置进行无菌处理，具体是用无菌的镊子将生长良好的丹参苗镊起，置于无菌的接种盘上，用无菌的剪切装置减去多余叶片，将茎段剪成具有一个生长点的小段；所述剪切装置包括无菌操作台、底座以及无菌剪刀组，无菌剪刀组由若干个无菌剪刀组成，每个无菌剪刀与背板为可拆卸式连接，无菌剪刀组后端通过背板一体连接，所述背板通过铰接轴与底座铰接连接，无菌操作台上沿长度方向设有剪切槽，剪切槽在剪切前也采用无菌处理，剪切槽上设置若干个剪切孔，一个剪切孔对应一个无菌剪刀，具体的无菌剪刀设有2个，剪切孔设有2个，当进行茎段剪切时，向下移动无菌剪刀组，通过无菌剪刀与剪切孔的相互配合能够剪切截面整体，剪切好的茎段，保证培养过程中每个茎段比较整齐的长势；
4)丹参茎段的接种：用无菌的镊子将剪好的茎段镊起，置于1/2MS固体培养基上，培养基成分为1/2MS+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8，高压灭菌；
5)丹参苗的生根培养：接种后的茎段放置于组培室的组培架上进行生根的诱导，记录丹参生根的启动时间，并在30天后开始统计丹参苗生根的数量，生长情况；培养条件：培养温度27±0.5℃，光照时间12h，光强3000Lx，T5植物培养灯管。
目前诱导丹参生根以MS为基本培养基，混合使用两种或两种以上的激素，本发明以1/2MS为基本培养基，只添加一种激素IBA(浓度为0.2mg/L)，就可以达到最佳的生根效果。通过优化后的工艺，不仅减少的实验步骤，又节省了实验成本。
IBA作为一种广谱型的植物生长调节剂，其主要用途是促进多种植物插枝生根及某些移栽作物的早生根、多生根。在整个丹参无根苗生根的工艺过程中，本发明的材料是丹参的无根苗，由于植物体本身就可以合成一些激素，因此在后期诱导生根的过程，只需给它营养，并加入诱导其早生根、多生根的激素—IBA，就可以在短时间内获得根系发达的丹参组培苗。且在具体实验中，结果表明，NAA、IAA的生根效果都不如IBA，NAA虽然也有促进植物生根的效果，但是在较高浓度下有抑制茎、枝生长的副作用，IAA在使用时进入植物体内易被过氧化酶、吲哚乙酸氧化酶分解，会从而降低其作用效果，且两种诱导生根的启动时间都比IBA长。而有无6-BA对生根影响不大，因为植物体自身合成的6-BA已经够丹参生根这一阶段所用，若再人工加入6-BA则会起到反作用。
在具体实验过程中，本发明以航天丹参未生根的无菌苗作为材料，MS为基本培养基首先加以单一的NAA，比较不同浓度的生根效果。实验发现当NAA浓度低于1.5mg/L时，无根丹参都会不同程度的长出根，当浓度高度1.5mg/L生根效果开始变差，当浓度达到2.0mg/L，无根苗基本不生根，只是在基部膨大，并出现少量愈伤，浓度在1.0mg/L时生根效果最好。
表1：不同浓度NAA对丹参丹参无根苗生根的影响
在对比IBA的生根效果时同样以MS为基本培养基，添加不同浓度的IBA，低浓度的生根效果好于高浓度，且生根启动时间短，根长势好。
表2：不同浓度IBA对丹参丹参无根苗生根的影响
在单独使用IAA时，同样低浓度的生根效果好于高浓度，但是生根启动时间长，且单棵丹参苗的根数目不多。
表3：不同浓度IAA对丹参丹参无根苗生根的影响
通过对比，对于丹参来说，IBA的生根效果要明显优于NAA和IBA。在最优的生根激素以及相应的浓度(IBA0.2mg/L)基础上附加6-BA，观察丹参无根苗的生根及生长情况。上述结果表明低浓度的6-BA在一定程度可促进根的生长，而高浓度的6-BA抑制根的生长，但是通过比较表2与表4发现：IBA浓度为0.2mg/L时，添加6-BA与未添加6-BA并没有太大差别。
表4：不同浓度激素组合对丹参无根苗生根的影响
通过一系列的实验证明，以MS为基本培养基，只要添加单一激素IBA，且浓度在0.2mg/L时，就可以达到约99％的生根率。此外对比了MS为基本培养基与1/2MS为基本培养基丹参无根苗生根的差异，结果表明，在以1/2MS为基本培养基，丹参无根苗的生根率达到100％。从节约成本方面考虑，选择以1/2MS为基本培养基，添加0.2mg/LIBA为单身无根苗生根的最佳培养基。
表5：MS培养基与1/2MS培养基对丹参无根苗生根的影响
表6：丹参无根苗生根工艺优化后培养结果
表6：丹参无根苗生根工艺优化后培养结果
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (4)

1.丹参组织培养中无根苗生根培养工艺，其特征在于，包括以下步骤：
1)培养基的配制
a、激素母液的配制：称取IBA 0.1g，用5mL 1M NaOH引溶，再用纯水定容至100mL，即为浓度为1.0mg/mL的IBA母液；
b、激素抽滤灭菌：将滤膜放进抽滤头，高压灭菌，带进超净台，将IBA母液抽滤灭菌，备用；
c、配制培养基基本成分：1/2MS+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8；高压灭菌；带入超净台备用；
d、添加激素：在超净台上用无菌的移液抢吸取IBA加入到基本培养基里，使其浓度为0.2mg/L，混匀；
e、分装：将添加好激素的培养基分装到无菌的组培瓶中，每瓶30～40mL，培养基成分为：1/2MS+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8；
2)丹参苗的选择；
3)丹参苗的处理：先无菌处理再进行修剪，修剪前剪切装置进行无菌处理；
4)丹参茎段的接种；
5)丹参苗的生根培养：接种后的茎段放置于组培室的组培架上进行生根的诱导，培养条件：培养温度27±0.5℃，光照时间12h，光强3000Lx，T5植物培养灯管。
2.根据权利要求1所述的丹参组织培养中无根苗生根培养工艺，其特征在于：所述步骤(2)“丹参苗的选择”是选择粗壮无污染的丹参组培无根苗为材料，带入超净台备用，并用75％酒精棉球擦拭瓶口处。
3.根据权利要求1所述的丹参组织培养中无根苗生根培养工艺，其特征在于：所述步骤(3)“丹参苗的处理”是用无菌的镊子将生长良好的丹参苗镊起，置于无菌的接种盘上，用无菌的剪切装置减去多余叶片，将茎段剪成具有一个生长点的小段。
4.根据权利要求1所述的丹参组织培养中无根苗生根培养工艺，其特征在于：所述步骤(4)“丹参茎段的接种”是用无菌的镊子将剪好的茎段镊起，置于步骤(1)“分装”的固体培养基上。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110100729A (zh) * 2019-04-22 2019-08-09 陕西理工大学 一种丹参控根育苗方法
CN112167064A (zh) * 2020-11-11 2021-01-05 山东农业大学 一种丹参组培快繁的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孟倩: "丹参组织培养及原生质体分离的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》 *
李胜等: "《植物组织培养》", 31 July 2015, 中国林业出版社 *
梁从莲: "丹参组培条件优化研究", 《山东科学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110100729A (zh) * 2019-04-22 2019-08-09 陕西理工大学 一种丹参控根育苗方法
CN112167064A (zh) * 2020-11-11 2021-01-05 山东农业大学 一种丹参组培快繁的方法

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