CN107173229A - 丹参组织培养中无根苗生根培养工艺 - Google Patents

丹参组织培养中无根苗生根培养工艺 Download PDF

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巢晓峰
盛益龙
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Abstract

本发明公开了丹参组织培养中无根苗生根培养工艺,包括以下步骤:1)培养基的配制;2)丹参苗的选择:3)丹参苗的处理;4)丹参茎段的接种;5)丹参苗的生根培养;该工艺主要对丹参无根苗培养过程中的培养基成分进行优化和改进,只添加一种激素IBA(浓度为0.2mg/L),就可以达到最佳的生根效果,通过优化后的工艺,不仅减少的实验步骤,又节省了实验成本。

Description

丹参组织培养中无根苗生根培养工艺
技术领域
本发明涉及一种丹参组织培养中无根苗生根培养工艺。
背景技术
丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)是是唇形科鼠尾草属多年生草本植物,又名红根、紫丹参、大红袍等。是我国传统常用药和多种中成药的主要原料。以干燥的根或根茎入药,具有活血调经,消炎止痛,养血安神等功效。其主要有效成分为二貼醌类和芬酸类。作为传统中药,丹参在我国栽培历史悠久,近年来丹参的需求量剧增,而传统的繁殖方式即种子繁殖和分根繁殖都具有一定的缺陷,导致现如今丹参产量减少,品种退化,且容易受气候环境的影响。而近年来兴起的植物组织培养技术,不仅可以保持母本植株的优良性状,且不受气候环境的影响就可达到高繁殖倍数。
植物组织培养是根据细胞的全能性理论,利用植物体离体的器官(如根、茎、叶等)、组织(如形成层、表皮、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生质层,在无菌和适宜的人工条件下,诱导出愈伤组织、不定芽、不定根,最后形成完整植株。
近年来,植物组织培养技术已成为丹参繁殖的重要手段。在整个丹参植物组织培养过程中中,丹参苗生根的状况直接决定着组培苗出瓶的存活率。因此对丹参无根苗生根工艺的优化具有重要意义。
发明内容
针对上述存在的问题,本发明旨在提供丹参组织培养中无根苗生根培养工艺,该工艺主要对丹参无根苗培养过程中的培养基成分进行优化和改进,只添加一种激素IBA(浓度为0.2mg/L),就可以达到最佳的生根效果,通过优化后的工艺,不仅减少的实验步骤,又节省了实验成本。
为了实现上述目的,本发明所采用的技术方案如下:
丹参组织培养中无根苗生根培养工艺,包括以下步骤:
1)培养基的配制
a、激素母液的配制:称取IBA 0.1g,用5mL 1M NaOH引溶,再用纯水定容至100mL,即为浓度为1.0mg/mL的IBA母液;
b、激素抽滤灭菌:将滤膜放进抽滤头,高压灭菌,带进超净台,将IBA母液抽滤灭菌,备用;
c、配制培养基基本成分:1/2MS+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂,pH5.8;高压灭菌;带入超净台备用;
d、添加激素:在超净台上用无菌的移液抢吸取IBA加入到基本培养基里,使其浓度为0.2mg/L,混匀;
e、分装:将添加好激素的培养基分装到无菌的组培瓶中,每瓶30~40mL,培养基成分为:1/2MS+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂,pH5.8;
2)丹参苗的选择;
3)丹参苗的处理:先无菌处理再进行修剪,修剪前剪切装置进行无菌处理;
4)丹参茎段的接种;
5)丹参苗的生根培养:接种后的茎段放置于组培室的组培架上进行生根的诱导,培养条件:培养温度27±0.5℃,光照时间12h,光强3000Lx,T5植物培养灯管。
作为优选,所述步骤(2)“丹参苗的选择”是选择粗壮无污染的丹参组培无根苗为材料,带入超净台备用,并用75%酒精棉球擦拭瓶口处。
作为优选,所述步骤(3)“丹参苗的处理”是用无菌的镊子将生长良好的丹参苗镊起,置于无菌的接种盘上,用无菌的剪切装置减去多余叶片,将茎段剪成具有一个生长点的小段。
作为优选,所述步骤(4)“丹参茎段的接种”是用无菌的镊子将剪好的茎段镊起,置于步骤(1)“分装”的固体培养基上。
本发明的有益效果是:在现代丹参植物组织培养过程中,诱导丹参无根苗生根通常以MS为基本培养基,添加6-BA、NAA、IBA、IAA几种激素混合使用。一般来说适量浓度的NAA、IBA、IBA都会诱导植物生根,而6-BA作为植物生长调节剂,不仅可以促进细胞分化,还会抑制或促进根系的生长,一般都以NAA、IBA、IAA其中一种激素搭配使用6-BA诱导植物生根。而本发明以1/2MS为基本培养基,只单独使用IBA一种激素就可以诱导丹参无根苗生根,且生根启动周期短,根系发达,数量多,整株丹参苗生长旺盛。
具体实施方式
为了使本领域的普通技术人员能更好的理解本发明的技术方案,下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的描述。
实施例:丹参组织培养中无根苗生根培养工艺,包括以下步骤:
1)培养基的配制
a、激素母液的配制:称取IBA 0.1g,用5mL 1M NaOH引溶,再用纯水定容至100mL,即为浓度为1.0mg/mL的IBA母液;
b、激素抽滤灭菌:将滤膜放进抽滤头,高压灭菌,带进超净台,将IBA母液抽滤灭菌,备用;
c、配制培养基基本成分:1/2MS+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂,pH5.8;高压灭菌;带入超净台备用;
d、添加激素:在超净台上用无菌的移液抢吸取IBA加入到基本培养基里,使其浓度为0.2mg/L,混匀;
e、分装:将添加好激素的培养基分装到无菌的组培瓶中,每瓶30~40mL,培养基成分为:1/2MS+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂,pH5.8;
2)丹参苗的选择:选择粗壮无污染的丹参组培无根苗为材料,带入超净台备用,并用75%酒精棉球擦拭瓶口处;
3)丹参苗的处理:先无菌处理再进行修剪,修剪前剪切装置进行无菌处理,具体是用无菌的镊子将生长良好的丹参苗镊起,置于无菌的接种盘上,用无菌的剪切装置减去多余叶片,将茎段剪成具有一个生长点的小段;所述剪切装置包括无菌操作台、底座以及无菌剪刀组,无菌剪刀组由若干个无菌剪刀组成,每个无菌剪刀与背板为可拆卸式连接,无菌剪刀组后端通过背板一体连接,所述背板通过铰接轴与底座铰接连接,无菌操作台上沿长度方向设有剪切槽,剪切槽在剪切前也采用无菌处理,剪切槽上设置若干个剪切孔,一个剪切孔对应一个无菌剪刀,具体的无菌剪刀设有2个,剪切孔设有2个,当进行茎段剪切时,向下移动无菌剪刀组,通过无菌剪刀与剪切孔的相互配合能够剪切截面整体,剪切好的茎段,保证培养过程中每个茎段比较整齐的长势;
4)丹参茎段的接种:用无菌的镊子将剪好的茎段镊起,置于1/2MS固体培养基上,培养基成分为1/2MS+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂,pH5.8,高压灭菌;
5)丹参苗的生根培养:接种后的茎段放置于组培室的组培架上进行生根的诱导,记录丹参生根的启动时间,并在30天后开始统计丹参苗生根的数量,生长情况;培养条件:培养温度27±0.5℃,光照时间12h,光强3000Lx,T5植物培养灯管。
目前诱导丹参生根以MS为基本培养基,混合使用两种或两种以上的激素,本发明以1/2MS为基本培养基,只添加一种激素IBA(浓度为0.2mg/L),就可以达到最佳的生根效果。通过优化后的工艺,不仅减少的实验步骤,又节省了实验成本。
IBA作为一种广谱型的植物生长调节剂,其主要用途是促进多种植物插枝生根及某些移栽作物的早生根、多生根。在整个丹参无根苗生根的工艺过程中,本发明的材料是丹参的无根苗,由于植物体本身就可以合成一些激素,因此在后期诱导生根的过程,只需给它营养,并加入诱导其早生根、多生根的激素—IBA,就可以在短时间内获得根系发达的丹参组培苗。且在具体实验中,结果表明,NAA、IAA的生根效果都不如IBA,NAA虽然也有促进植物生根的效果,但是在较高浓度下有抑制茎、枝生长的副作用,IAA在使用时进入植物体内易被过氧化酶、吲哚乙酸氧化酶分解,会从而降低其作用效果,且两种诱导生根的启动时间都比IBA长。而有无6-BA对生根影响不大,因为植物体自身合成的6-BA已经够丹参生根这一阶段所用,若再人工加入6-BA则会起到反作用。
在具体实验过程中,本发明以航天丹参未生根的无菌苗作为材料,MS为基本培养基首先加以单一的NAA,比较不同浓度的生根效果。实验发现当NAA浓度低于1.5mg/L时,无根丹参都会不同程度的长出根,当浓度高度1.5mg/L生根效果开始变差,当浓度达到2.0mg/L,无根苗基本不生根,只是在基部膨大,并出现少量愈伤,浓度在1.0mg/L时生根效果最好。
表1:不同浓度NAA对丹参丹参无根苗生根的影响
在对比IBA的生根效果时同样以MS为基本培养基,添加不同浓度的IBA,低浓度的生根效果好于高浓度,且生根启动时间短,根长势好。
表2:不同浓度IBA对丹参丹参无根苗生根的影响
在单独使用IAA时,同样低浓度的生根效果好于高浓度,但是生根启动时间长,且单棵丹参苗的根数目不多。
表3:不同浓度IAA对丹参丹参无根苗生根的影响
通过对比,对于丹参来说,IBA的生根效果要明显优于NAA和IBA。在最优的生根激素以及相应的浓度(IBA0.2mg/L)基础上附加6-BA,观察丹参无根苗的生根及生长情况。上述结果表明低浓度的6-BA在一定程度可促进根的生长,而高浓度的6-BA抑制根的生长,但是通过比较表2与表4发现:IBA浓度为0.2mg/L时,添加6-BA与未添加6-BA并没有太大差别。
表4:不同浓度激素组合对丹参无根苗生根的影响
通过一系列的实验证明,以MS为基本培养基,只要添加单一激素IBA,且浓度在0.2mg/L时,就可以达到约99%的生根率。此外对比了MS为基本培养基与1/2MS为基本培养基丹参无根苗生根的差异,结果表明,在以1/2MS为基本培养基,丹参无根苗的生根率达到100%。从节约成本方面考虑,选择以1/2MS为基本培养基,添加0.2mg/LIBA为单身无根苗生根的最佳培养基。
表5:MS培养基与1/2MS培养基对丹参无根苗生根的影响
表6:丹参无根苗生根工艺优化后培养结果
表6:丹参无根苗生根工艺优化后培养结果
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (4)

1.丹参组织培养中无根苗生根培养工艺,其特征在于,包括以下步骤:
1)培养基的配制
a、激素母液的配制:称取IBA 0.1g,用5mL 1M NaOH引溶,再用纯水定容至100mL,即为浓度为1.0mg/mL的IBA母液;
b、激素抽滤灭菌:将滤膜放进抽滤头,高压灭菌,带进超净台,将IBA母液抽滤灭菌,备用;
c、配制培养基基本成分:1/2MS+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂,pH5.8;高压灭菌;带入超净台备用;
d、添加激素:在超净台上用无菌的移液抢吸取IBA加入到基本培养基里,使其浓度为0.2mg/L,混匀;
e、分装:将添加好激素的培养基分装到无菌的组培瓶中,每瓶30~40mL,培养基成分为:1/2MS+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂,pH5.8;
2)丹参苗的选择;
3)丹参苗的处理:先无菌处理再进行修剪,修剪前剪切装置进行无菌处理;
4)丹参茎段的接种;
5)丹参苗的生根培养:接种后的茎段放置于组培室的组培架上进行生根的诱导,培养条件:培养温度27±0.5℃,光照时间12h,光强3000Lx,T5植物培养灯管。
2.根据权利要求1所述的丹参组织培养中无根苗生根培养工艺,其特征在于:所述步骤(2)“丹参苗的选择”是选择粗壮无污染的丹参组培无根苗为材料,带入超净台备用,并用75%酒精棉球擦拭瓶口处。
3.根据权利要求1所述的丹参组织培养中无根苗生根培养工艺,其特征在于:所述步骤(3)“丹参苗的处理”是用无菌的镊子将生长良好的丹参苗镊起,置于无菌的接种盘上,用无菌的剪切装置减去多余叶片,将茎段剪成具有一个生长点的小段。
4.根据权利要求1所述的丹参组织培养中无根苗生根培养工艺,其特征在于:所述步骤(4)“丹参茎段的接种”是用无菌的镊子将剪好的茎段镊起,置于步骤(1)“分装”的固体培养基上。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110100729A (zh) * 2019-04-22 2019-08-09 陕西理工大学 一种丹参控根育苗方法
CN112167064A (zh) * 2020-11-11 2021-01-05 山东农业大学 一种丹参组培快繁的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孟倩: "丹参组织培养及原生质体分离的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》 *
李胜等: "《植物组织培养》", 31 July 2015, 中国林业出版社 *
梁从莲: "丹参组培条件优化研究", 《山东科学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110100729A (zh) * 2019-04-22 2019-08-09 陕西理工大学 一种丹参控根育苗方法
CN112167064A (zh) * 2020-11-11 2021-01-05 山东农业大学 一种丹参组培快繁的方法

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