CN107164329A - 一种mda‑mb‑231乳腺癌细胞的复苏方法 - Google Patents
一种mda‑mb‑231乳腺癌细胞的复苏方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107164329A CN107164329A CN201710527024.6A CN201710527024A CN107164329A CN 107164329 A CN107164329 A CN 107164329A CN 201710527024 A CN201710527024 A CN 201710527024A CN 107164329 A CN107164329 A CN 107164329A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- mda
- breast cancer
- cancer cells
- resuscitation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
- C12N2500/14—Calcium; Ca chelators; Calcitonin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
- C12N2500/16—Magnesium; Mg chelators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/20—Transition metals
- C12N2500/24—Iron; Fe chelators; Transferrin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/34—Sugars
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/35—Polyols, e.g. glycerin, inositol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/38—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/46—Amines, e.g. putrescine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/105—Insulin-like growth factors [IGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/22—Colony stimulating factors (G-CSF, GM-CSF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2306—Interleukin-6 (IL-6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/231—Interleukin-10 (IL-10)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2312—Interleukin-12 (IL-12)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/25—Tumour necrosing factors [TNF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本发明提供了一种MDA‑MB‑231乳腺癌细胞的复苏方法,将冻存的MDA‑MB‑231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者‑80℃冰箱中取出,在取出后1min内于37℃摇晃至含有冻存液的MDA‑MB‑231乳腺癌细胞液完全融化,将MDA‑MB‑231乳腺癌细胞液加入到盛有2‑3ml新鲜培养基的离心管中,用移液枪上下吹打20‑30次,于1000‑1500g/min的转速下离心3‑10min;移去上清液,加入1‑2ml的新鲜培养基,用移液枪上下吹打40‑50次,然后均匀的加入到盛有7‑9ml的细胞培养皿中,于37℃,5%CO2培养箱中培养。
Description
技术领域
本发明属于生物技术应用领域,具体地,涉及一种MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法。
背景技术
乳腺癌是女性最常见的癌症,主要包括导管癌和小叶癌。2016年美国CA(A CancerJournal for Clinicians)公布的最新统计数据显示,美国2016年预计将有420840例女性患乳腺癌,占女性新发恶性肿瘤的38%,居女性恶性肿瘤发病率第一位,并且死亡人数将达52930例。更为严重的是全球的乳腺癌发病率正在逐年增长。
细胞培养是生物与健康相关研究领域的一项重要技术。随着生命科学的迅速发展,目前细胞培养已成为细胞生物学、分子生物学、遗传学和免疫学等学科研究的重要基础。为了深入探讨细胞的生长活动规律、有关疾病的病理和药物的药理(毒理)机制,开发具有不同针对性的细胞培养方法具有重要意义。
其中,MDA-MB-231乳腺癌细胞作为人源性高转移乳腺癌细胞,常用于乳腺癌的体内外研究。细胞复苏是培养细胞的一种,是生命及再生医学领域中广泛应用的关键技术,在研究中往往需要对冻存的细胞进行复苏,从而进行乳腺癌转移的相关研究。
本发明所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法稳定性高,能够去除冻存剂对复苏后细胞生长的影响,复苏后的MDA-MB-231乳腺癌细胞存活率高,细胞生长速度快,细胞状态好,边界清晰,可以有利于乳腺癌转移的相关研究。
发明内容
发明目的:本发明提供了一种MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法。
技术方案:本发明提供了一种MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,包括以下步骤:将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出,在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化,将MDA-MB-231乳腺癌细胞液加入到盛有2-3ml新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的离心管中,用移液枪上下吹打20-30次,于1000-1500g/min的转速下离心3-10min;移去上清液,加入1-2ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基,用移液枪上下吹打40-50次,然后均匀的加入到盛有7-9ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中,于37℃,5%CO2培养箱中培养;所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计,包括以下组分:二甲基亚砜5-15份、羟甲基淀粉2-5份、海藻糖3-12份、维生素E0.5-3份、25%山梨醇1-5份、丙二醇0.8-1.6份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.5-2份和基础培养基80-90份。本发明所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法稳定性高,能够去除冻存剂对复苏后细胞生长的影响,复苏后的MDA-MB-231乳腺癌细胞存活率高,细胞生长速度快,细胞状态好,边界清晰,可以有利于乳腺癌转移的相关研究。同时,MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液对细胞损伤上,25%山梨醇为渗透性保护液,而(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷则抑制细胞活动和基因表达,维生素E的抗氧化性好,在保证休眠细胞的营养的同时还可以显著减少对细胞的损伤,提高冻存细胞的存活率,并且在增殖方面也保持很好的状态。
进一步的,上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基,组分合理,可以进一步为复苏的细胞的提供营养物质。
进一步的,上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,所述基础培养基以重量组分计,包括以下组分:葡萄糖 82-88份、碳酸氢钠 12-25份、丙酮酸钠10-16份、脂肪酸白蛋白6-12份、氯化钾35-45份、无水硫酸镁 6-10份、氯化钠70-78份、无水磷酸二氢钠10-14份、叶酸 0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、烟酰胺0.3-0.6份、无水氯化钙25-35份、硝酸铁0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸钠12-16份、D-泛酸钙 0.3-0.6份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.4-0.6份、酒石酸胆碱0.6-0.8份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.2-0.4份、盐酸吡哆辛 0.3-0.5份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.4-0.8份、乙酸酯1.5-2份、生物素0.6-0.8份、硫辛酸0.4-0.7份、酚红钠1-1.3份和去离子水100份。
进一步的,上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,所述基础培养基还包括3-8份氨基酸,所述氨基酸以重量组分计,由以下组分组成:L-盐酸精氨酸 5-10份、L-盐酸胱氨酸 3-8份、L-丝氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-盐酸组氨酸 4-6份、L-异亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-盐酸赖氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-苏氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-缬氨酸8-12份。
进一步的,上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,所述基础培养基还包括2-5份辅助因子,所述辅助因子以重量组分计,由以下组分组成:胰岛素生长因子3-8份、白介素6 2-5份、白介素10 1-4份、白介素12 3-6份、TNF-β2-10份、GM-CSF1-5份。基础培养基组分合理,营养丰富,可以提高MDA-MB-231乳腺癌细胞复苏后生长的营养物质,MDA-MB-231细胞生长速度快,细胞状态好,边界清晰,镜下观察透亮、分裂相更多、形态及分散度佳,可以有利于乳腺癌转移的相关研究。
进一步的,上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,所述基础培养基以重量组分计,还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。可以有效防止复苏的细胞被污染。
进一步的,上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,所述青霉素选自10000U/ml,所述链霉素选自10000μg/ml。青霉素和链霉素活性好,效果佳。
有益效果:本发明所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法稳定性高,能够去除冻存剂对复苏后细胞生长的影响,复苏后的MDA-MB-231乳腺癌细胞存活率高,细胞生长速度快,细胞状态好,边界清晰,可以有利于乳腺癌转移的相关研究。
具体实施方式
下面将通过几个具体实施例,进一步阐明本发明,这些实施例只是为了说明问题,并不是一种限制。
实施例1
一种MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,包括以下步骤:将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出,在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化,将MDA-MB-231乳腺癌细胞液加入到盛有2ml新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的离心管中,用移液枪上下吹打20次,于1000g/min的转速下离心10min;移去上清液,加入1ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基,用移液枪上下吹打40次,然后均匀的加入到盛有7ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中,于37℃,5%CO2培养箱中培养。
其中,所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括70%的基础培养基以及30%的胎牛血清。此外,所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计,包括以下组分:二甲基亚砜5份、羟甲基淀粉2份、海藻糖3份、维生素E0.5份、25%山梨醇1份、丙二醇0.8份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.5份和基础培养基80份。
其中,所述基础培养基以重量组分计,包括以下组分:葡萄糖 82份、碳酸氢钠 12份、丙酮酸钠10份、脂肪酸白蛋白6份、氯化钾35份、无水硫酸镁 6份、氯化钠70份、无水磷酸二氢钠10份、叶酸 0.3份、肌醇0.8份、烟酰胺0.3份、无水氯化钙25份、硝酸铁0.2份、丁二酸6份、丁二酸钠12份、D-泛酸钙 0.3份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.4份、酒石酸胆碱0.6份、核黄素0.1份、盐酸硫胺0.2份、盐酸吡哆辛 0.3份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.4份、乙酸酯1.5份、生物素0.6份、硫辛酸0.4份、酚红钠1份和去离子水100份。
另,所述基础培养基还包括3份氨基酸,所述氨基酸以重量组分计,由以下组分组成:L-盐酸精氨酸 5份、L-盐酸胱氨酸 3份、L-丝氨酸3份、甘氨酸1份、L-盐酸组氨酸 4份、L-异亮氨酸8份、L-亮氨酸7份、L-盐酸赖氨酸10份、L-甲硫氨酸1份、L-苯丙氨酸2份、L-苏氨酸5份、L-色氨酸1份、L-酪氨酸5份和L-缬氨酸8份。
再,所述基础培养基还包括2份辅助因子,所述辅助因子以重量组分计,由以下组分组成:胰岛素生长因子3份、白介素6 2份、白介素10 1份、白介素12 3份、TNF-β2份、GM-CSF1份。
此外,所述基础培养基以重量组分计,还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且,所述青霉素选自10000U/ml,所述链霉素选自10000μg/ml。
实施例2
一种MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,包括以下步骤:将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出,在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化,将MDA-MB-231乳腺癌细胞液加入到盛有3ml新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的离心管中,用移液枪上下吹打30次,于1500g/min的转速下离心3min;移去上清液,加入2ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基,用移液枪上下吹打50次,然后均匀的加入到盛有9ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中,于37℃,5%CO2培养箱中培养。
其中,所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括90%的基础培养基以及10%的胎牛血清。此外,所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计,包括以下组分:二甲基亚砜15份、羟甲基淀粉5份、海藻糖12份、维生素E3份、25%山梨醇5份、丙二醇1.6份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷2份和基础培养基90份。
其中,所述基础培养基以重量组分计,包括以下组分:葡萄糖 88份、碳酸氢钠 25份、丙酮酸钠16份、脂肪酸白蛋白12份、氯化钾45份、无水硫酸镁 10份、氯化钠78份、无水磷酸二氢钠14份、叶酸 0.5份、肌醇1.2份、烟酰胺0.6份、无水氯化钙35份、硝酸铁0.4份、丁二酸8份、丁二酸钠16份、D-泛酸钙 0.6份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.6份、酒石酸胆碱0.8份、核黄素0.3份、盐酸硫胺0.4份、盐酸吡哆辛 0.5份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.8份、乙酸酯2份、生物素0.8份、硫辛酸0.7份、酚红钠1.3份和去离子水100份。
另,所述基础培养基还包括8份氨基酸,所述氨基酸以重量组分计,由以下组分组成:L-盐酸精氨酸 10份、L-盐酸胱氨酸 8份、L-丝氨酸6份、甘氨酸5份、L-盐酸组氨酸 6份、L-异亮氨酸20份、L-亮氨酸18份、L-盐酸赖氨酸20份、L-甲硫氨酸6份、L-苯丙氨酸8份、L-苏氨酸15份、L-色氨酸3份、L-酪氨酸9份和L-缬氨酸12份。
再,所述基础培养基还包括5份辅助因子,所述辅助因子以重量组分计,由以下组分组成:胰岛素生长因子8份、白介素6 5份、白介素10 4份、白介素12 6份、TNF-β10份、GM-CSF5份。
此外,所述基础培养基以重量组分计,还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且,所述青霉素选自10000U/ml,所述链霉素选自10000μg/ml。
实施例3
一种MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,包括以下步骤:将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出,在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化,将MDA-MB-231乳腺癌细胞液加入到盛有2ml新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的离心管中,用移液枪上下吹打20次,于1200g/min的转速下离心5min;移去上清液,加入1ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基,用移液枪上下吹打45次,然后均匀的加入到盛有8ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中,于37℃,5%CO2培养箱中培养。
其中,所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括80%的基础培养基以及20%的胎牛血清。此外,所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计,包括以下组分:二甲基亚砜12份、羟甲基淀粉3份、海藻糖8份、维生素E2份、25%山梨醇3份、丙二醇1份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷1份和基础培养基85份。
其中,所述基础培养基以重量组分计,包括以下组分:葡萄糖 86份、碳酸氢钠 18份、丙酮酸钠12份、脂肪酸白蛋白9份、氯化钾40份、无水硫酸镁8份、氯化钠75份、无水磷酸二氢钠12份、叶酸 0.4份、肌醇1份、烟酰胺0.5份、无水氯化钙30份、硝酸铁0.3份、丁二酸7份、丁二酸钠14份、D-泛酸钙 0.5份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.5份、酒石酸胆碱0.7份、核黄素0.2份、盐酸硫胺0.3份、盐酸吡哆辛 0.4份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.6份、乙酸酯1.8份、生物素0.7份、硫辛酸0.6份、酚红钠1.2份和去离子水100份。
另,所述基础培养基还包括4份氨基酸,所述氨基酸以重量组分计,由以下组分组成:L-盐酸精氨酸 8份、L-盐酸胱氨酸 6份、L-丝氨酸5份、甘氨酸3份、L-盐酸组氨酸 5份、L-异亮氨酸12份、L-亮氨酸10份、L-盐酸赖氨酸15份、L-甲硫氨酸3份、L-苯丙氨酸4份、L-苏氨酸9份、L-色氨酸2份、L-酪氨酸6份和L-缬氨酸9份。
再,所述基础培养基还包括3份辅助因子,所述辅助因子以重量组分计,由以下组分组成:胰岛素生长因子5份、白介素6 3份、白介素10 2份、白介素12 5份、TNF-β8份、GM-CSF2份。
此外,所述基础培养基以重量组分计,还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且,所述青霉素选自10000U/ml,所述链霉素选自10000μg/ml。
实施例4
一种MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,包括以下步骤:将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出,在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化,将MDA-MB-231乳腺癌细胞液加入到盛有3ml新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的离心管中,用移液枪上下吹打20次,于1200g/min的转速下离心8min;移去上清液,加入1ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基,用移液枪上下吹打50次,然后均匀的加入到盛有9ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中,于37℃,5%CO2培养箱中培养。
其中,所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括70%的基础培养基以及30%的胎牛血清。此外,所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计,包括以下组分:二甲基亚砜5份、羟甲基淀粉5份、海藻糖9份、维生素E3份、25%山梨醇1份、丙二醇1份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷1.5份和基础培养基85份。
其中,所述基础培养基以重量组分计,包括以下组分:葡萄糖 82份、碳酸氢钠 25份、丙酮酸钠10份、脂肪酸白蛋白8份、氯化钾38份、无水硫酸镁 8份、氯化钠70份、无水磷酸二氢钠10份、叶酸 0.5份、肌醇1.2份、烟酰胺0.5份、无水氯化钙30份、硝酸铁0.4份、丁二酸6份、丁二酸钠12份、D-泛酸钙 0.6份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.5份、酒石酸胆碱0.7份、核黄素0.2份、盐酸硫胺0.4份、盐酸吡哆辛 0.3份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.8份、乙酸酯1.8份、生物素0.6份、硫辛酸0.7份、酚红钠1份和去离子水100份。
另,所述基础培养基还包括6份氨基酸,所述氨基酸以重量组分计,由以下组分组成:L-盐酸精氨酸 5份、L-盐酸胱氨酸 8份、L-丝氨酸6份、甘氨酸1份、L-盐酸组氨酸 4份、L-异亮氨酸12份、L-亮氨酸12份、L-盐酸赖氨酸20份、L-甲硫氨酸1份、L-苯丙氨酸2份、L-苏氨酸5份、L-色氨酸2份、L-酪氨酸6份和L-缬氨酸10份。
再,所述基础培养基还包括2份辅助因子,所述辅助因子以重量组分计,由以下组分组成:胰岛素生长因子3份、白介素6 5份、白介素10 4份、白介素12 3份、TNF-β5份、GM-CSF3份。
此外,所述基础培养基以重量组分计,还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且,所述青霉素选自10000U/ml,所述链霉素选自10000μg/ml。
Claims (7)
1.一种MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,其特征在于:包括以下步骤:将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出,在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化,将MDA-MB-231乳腺癌细胞液加入到盛有2-3ml新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的离心管中,用移液枪上下吹打20-30次,于1000-1500g/min的转速下离心3-10min;移去上清液,加入1-2ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基,用移液枪上下吹打40-50次,然后均匀的加入到盛有7-9ml的新鲜MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中,于37℃,5%CO2培养箱中培养;所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计,包括以下组分:二甲基亚砜5-15份、羟甲基淀粉2-5份、海藻糖3-12份、维生素E0.5-3份、25%山梨醇1-5份、丙二醇0.8-1.6份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.5-2份和基础培养基80-90份。
2.根据权利要求1所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,其特征在于:所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。
3.根据权利要求1或2所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,其特征在于:所述基础培养基以重量组分计,包括以下组分:葡萄糖 82-88份、碳酸氢钠 12-25份、丙酮酸钠10-16份、脂肪酸白蛋白6-12份、氯化钾35-45份、无水硫酸镁 6-10份、氯化钠70-78份、无水磷酸二氢钠10-14份、叶酸 0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、烟酰胺0.3-0.6份、无水氯化钙25-35份、硝酸铁0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸钠12-16份、D-泛酸钙 0.3-0.6份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.4-0.6份、酒石酸胆碱0.6-0.8份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.2-0.4份、盐酸吡哆辛 0.3-0.5份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.4-0.8份、乙酸酯1.5-2份、生物素0.6-0.8份、硫辛酸0.4-0.7份、酚红钠1-1.3份和去离子水100份。
4.根据权利要求3所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,其特征在于:所述基础培养基还包括3-8份氨基酸,所述氨基酸以重量组分计,由以下组分组成:L-盐酸精氨酸 5-10份、L-盐酸胱氨酸 3-8份、L-丝氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-盐酸组氨酸 4-6份、L-异亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-盐酸赖氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-苏氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-缬氨酸8-12份。
5.根据权利要求4所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,其特征在于:所述基础培养基还包括2-5份辅助因子,所述辅助因子以重量组分计,由以下组分组成:胰岛素生长因子3-8份、白介素6 2-5份、白介素10 1-4份、白介素12 3-6份、TNF-β2-10份、GM-CSF1-5份。
6.根据权利要求5所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,其特征在于:所述基础培养基以重量组分计,还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。
7.根据权利要求6所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法,其特征在于:所述青霉素选自10000U/ml,所述链霉素选自10000μg/ml。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710527024.6A CN107164329A (zh) | 2017-06-30 | 2017-06-30 | 一种mda‑mb‑231乳腺癌细胞的复苏方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710527024.6A CN107164329A (zh) | 2017-06-30 | 2017-06-30 | 一种mda‑mb‑231乳腺癌细胞的复苏方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107164329A true CN107164329A (zh) | 2017-09-15 |
Family
ID=59827575
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710527024.6A Pending CN107164329A (zh) | 2017-06-30 | 2017-06-30 | 一种mda‑mb‑231乳腺癌细胞的复苏方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107164329A (zh) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1698690A1 (en) * | 2003-12-26 | 2006-09-06 | Makoto Asashima | Basal medium for es cell culturing |
CN102305747A (zh) * | 2011-05-27 | 2012-01-04 | 苏州大学 | 一种用于检测乳腺癌状态的生物标记物试剂 |
-
2017
- 2017-06-30 CN CN201710527024.6A patent/CN107164329A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1698690A1 (en) * | 2003-12-26 | 2006-09-06 | Makoto Asashima | Basal medium for es cell culturing |
CN102305747A (zh) * | 2011-05-27 | 2012-01-04 | 苏州大学 | 一种用于检测乳腺癌状态的生物标记物试剂 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
PHYSICAL SCIENCES-ONCOLOGY CENTER NETWORK BIORESOURCE CORE FACIL: "Protocal for thawing,propagation and cryopreservation of NCl-PBCF-HTB26(MDA-MB-231)(ATCC HTB-26TM) breast adenocarcinoma", 《AMERCIAN TYPE CULTURE COLLECTION》 * |
余跃: "《干细胞基础与临床》", 29 February 2008, 中国科学技术大学出版社 * |
刘冬: "《食品生物技术》", 30 June 2008, 中国轻工业出版社 * |
无: "DMEM细胞培养基的成分", 《HTTP://WWW.BIOMART.CN/EXPERIMENT/430/488/489/37921.HTM》 * |
陈宁: "《酶工程》", 30 June 2011, 中国轻工业出版社 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104663649B (zh) | 人类卵母细胞冷冻保护剂 | |
Ochoa | [114] Crystalline condensing enzyme from pig heart: Acetyl-S-CoA+ Oxalacetate−−+ H20⇄ Citrate−−−+ HS-CoA+ H+ | |
CN109486904A (zh) | 一种全血rna保存液及其应用 | |
CN107142241A (zh) | 一种提高猪卵母细胞体外成熟质量和发育潜力的培养液及其培养方法 | |
CN108902129A (zh) | 细胞冻存组合物及其应用 | |
CN107164328A (zh) | 一种高稳定性mcf‑7乳腺癌细胞的复苏方法 | |
CN107164329A (zh) | 一种mda‑mb‑231乳腺癌细胞的复苏方法 | |
CN107151657A (zh) | 一种方便快速的mcf‑7乳腺癌细胞的复苏方法 | |
Verma et al. | Sugar partitioning in sprouting lateral bud and shoot development of sugarcane | |
CN105394028A (zh) | 一种低冷冻损伤的脐带血干细胞冻存方法 | |
CN107151658A (zh) | 一种快速mda‑mb‑231乳腺癌细胞的复苏方法 | |
CA1054085A (en) | Urokinase production | |
Diettrich et al. | Long-term storage in liquid nitrogen of an embryogenic cell strain of Digitalis lanata | |
US20060105317A1 (en) | Method and solutions for cryopreserving oocytes, especially fresh human oocytes | |
CN107211995A (zh) | 一种便捷的mda‑mb‑231乳腺癌细胞的冻存方法 | |
CN107094756A (zh) | 一种高存活率mcf‑7乳腺癌细胞冻存液 | |
CN107183011A (zh) | 一种mcf‑7乳腺癌细胞的冻存方法 | |
CN107151650A (zh) | 一种Vero细胞的复苏方法 | |
CN107177554A (zh) | 一种mcf‑7乳腺癌细胞扩大培养的方法 | |
CN107164311A (zh) | 一种便捷、快速Vero细胞的复苏方法 | |
WO2023085369A1 (ja) | 角膜内皮細胞の凍結保存製剤およびその製造法 | |
CN107164327A (zh) | 一种mda‑mb‑231乳腺癌细胞扩大培养的方法 | |
CN114762495B (zh) | 心肌细胞冻存方法 | |
Kilbride et al. | Scaling up Cryopreservation from Cell Suspensions to Tissues: Challenges and Successes | |
CN111304159B (zh) | 辛酰化Ghrelin在体外抑制牛卵母细胞减数分裂中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170915 |