CN107151658A - 一种快速mda‑mb‑231乳腺癌细胞的复苏方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种快速MDA‑MB‑231乳腺癌细胞的复苏方法，将冻存的MDA‑MB‑231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者‑80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA‑MB‑231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA‑MB‑231乳腺癌细胞液完全融化，将MDA‑MB‑231乳腺癌细胞液均匀加入到盛有7‑9ml新鲜的MDA‑MB‑231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿3‑5下，于37℃，5%CO2培养箱中培养。本发明所述的MDA‑MB‑231乳腺癌细胞的复苏方法快速、高效，复苏后的MDA‑MB‑231乳腺癌细胞存活率高，细胞生长速度快，细胞状态好。

Description

一种快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法
技术领域
本发明属于生物技术应用领域，具体地，涉及一种快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法。
背景技术
乳腺癌是女性最常见的癌症，主要包括导管癌和小叶癌。2016年美国CA（A CancerJournal for Clinicians）公布的最新统计数据显示，美国2016年预计将有420840例女性患乳腺癌，占女性新发恶性肿瘤的38%，居女性恶性肿瘤发病率第一位，并且死亡人数将达52930例。更为严重的是全球的乳腺癌发病率正在逐年增长。
细胞培养是生物与健康相关研究领域的一项重要技术。随着生命科学的迅速发展，目前细胞培养已成为细胞生物学、分子生物学、遗传学和免疫学等学科研究的重要基础。为了深入探讨细胞的生长活动规律、有关疾病的病理和药物的药理（毒理）机制，开发具有不同针对性的细胞培养方法具有重要意义。
其中，MDA-MB-231乳腺癌细胞作为人源性高转移乳腺癌细胞，常用于乳腺癌的体内外研究。细胞复苏是培养细胞的一种，是生命及再生医学领域中广泛应用的关键技术，在研究中往往需要对冻存的细胞进行复苏，从而进行乳腺癌转移的相关研究。
本发明所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法快速、高效，复苏后的MDA-MB-231乳腺癌细胞存活率高，细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，可以有利于乳腺癌转移的相关研究。
发明内容
发明目的：本发明提供了一种快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法。
技术方案：本发明提供了一种快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化，将MDA-MB-231乳腺癌细胞液均匀加入到盛有7-9ml新鲜的MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿3-5下，于37℃，5%CO2培养箱中培养；所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5-15份、羟甲基淀粉2-5份、海藻糖3-12份、维生素E0.5-3份、25%山梨醇1-5份、丙二醇0.8-1.6份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.5-2份和基础培养基80-90份。本发明所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法快速、高效，复苏后的MDA-MB-231乳腺癌细胞存活率高，细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，可以有利于乳腺癌转移的相关研究。其中，MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液对细胞损伤小，25%山梨醇为渗透性保护液，而(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷则抑制细胞活动和基因表达，维生素E的抗氧化性好，在保证休眠细胞的营养的同时还可以显著减少对细胞的损伤，提高冻存细胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的状态。
进一步的，上述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基，组分合理，可以进一步为复苏的细胞的提供营养物质。
进一步的，上述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 80-90份、碳酸氢钠 10-20份、丙酮酸钠8-18份、脂肪酸白蛋白4-16份、氯化钾 30-50份、无水硫酸镁 5-12份、氯化钠60-80份、无水磷酸二氢钠 8-16份、叶酸 0.2-0.6份、肌醇0.5-1.5份、烟酰胺0.2-0.8份、无水氯化钙20-40份、硝酸铁0.1-0.5份、丁二酸 5-10份、丁二酸钠9-18份、D-泛酸钙 0.2-0.8份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.2-0.8份、酒石酸胆碱0.5-1份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.1-0.5份、盐酸吡哆辛 0.1-0.6份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.2-1份、乙酸酯1-3份、生物素0.5-0.8份、硫辛酸0.2-0.8份、酚红钠0.8-1.5份和去离子水100份。
进一步的，上述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，所述基础培养基还包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 5-10份、L-盐酸胱氨酸 3-8份、L-丝氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-盐酸组氨酸 4-6份、L-异亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-盐酸赖氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-苏氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-缬氨酸8-12份。
进一步的，上述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，所述基础培养基还包括2-5份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3-8份、白介素6 2-5份、白介素10 1-4份、白介素12 3-6份、TNF-β2-10份、GM-CSF1-5份。基础培养基组分合理，营养丰富，可以提高MDA-MB-231乳腺癌细胞复苏后生长的营养物质，MDA-MB-231细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，镜下观察透亮、分裂相更多、形态及分散度佳，可以有利于乳腺癌转移的相关研究。
进一步的，上述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。可以有效防止复苏的细胞被污染。
进一步的，上述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。青霉素和链霉素活性好，效果佳。
有益效果：本发明所述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，方法合理，应用方便，快速、高效，复苏后的MDA-MB-231乳腺癌细胞存活率高，细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，可以有利于乳腺癌转移的相关研究。
具体实施方式
下面将通过几个具体实施例，进一步阐明本发明，这些实施例只是为了说明问题，并不是一种限制。
实施例1
一种快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化，将MDA-MB-231乳腺癌细胞液均匀加入到盛有7ml新鲜的MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿3下，于37℃，5%CO2培养箱中培养。
其中，所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括70%的基础培养基以及30%的胎牛血清。此外，所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5份、羟甲基淀粉2份、海藻糖3份、维生素E0.5份、25%山梨醇1份、丙二醇0.8份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.5份和基础培养基80份。
其中，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 80份、碳酸氢钠 10份、丙酮酸钠8份、脂肪酸白蛋白4份、氯化钾 30份、无水硫酸镁 5份、氯化钠60份、无水磷酸二氢钠 8份、叶酸 0.2份、肌醇0.5份、烟酰胺0.2份、无水氯化钙20份、硝酸铁0.1份、丁二酸5份、丁二酸钠9份、D-泛酸钙 0.2份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.2份、酒石酸胆碱0.5份、核黄素0.1份、盐酸硫胺0.1份、盐酸吡哆辛 0.1份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.2份、乙酸酯1份、生物素0.5份、硫辛酸0.2份、酚红钠0.8份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括3份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 5份、L-盐酸胱氨酸 3份、L-丝氨酸3份、甘氨酸1份、L-盐酸组氨酸 4份、L-异亮氨酸8份、L-亮氨酸7份、L-盐酸赖氨酸10份、L-甲硫氨酸1份、L-苯丙氨酸2份、L-苏氨酸5份、L-色氨酸1份、L-酪氨酸5份和L-缬氨酸8份。
再，所述基础培养基还包括2份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3份、白介素6 2份、白介素10 1份、白介素12 3份、TNF-β2份、GM-CSF1份。
此外，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。
实施例2
一种快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化，将MDA-MB-231乳腺癌细胞液均匀加入到盛有9ml新鲜的MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿5下，于37℃，5%CO2培养箱中培养。
其中，所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括90%的基础培养基以及10%的胎牛血清。此外，所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜15份、羟甲基淀粉5份、海藻糖12份、维生素E3份、25%山梨醇5份、丙二醇1.6份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷2份和基础培养基90份。
其中，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 90份、碳酸氢钠 20份、丙酮酸钠18份、脂肪酸白蛋白16份、氯化钾 50份、无水硫酸镁 12份、氯化钠80份、无水磷酸二氢钠 16份、叶酸 0.6份、肌醇1.5份、烟酰胺0.8份、无水氯化钙40份、硝酸铁0.5份、丁二酸 10份、丁二酸钠18份、D-泛酸钙 0.8份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.8份、酒石酸胆碱1份、核黄素0.3份、盐酸硫胺0.5份、盐酸吡哆辛 0.6份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽1份、乙酸酯3份、生物素0.8份、硫辛酸0.8份、酚红钠1.5份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括8份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 10份、L-盐酸胱氨酸 8份、L-丝氨酸6份、甘氨酸5份、L-盐酸组氨酸 6份、L-异亮氨酸20份、L-亮氨酸18份、L-盐酸赖氨酸20份、L-甲硫氨酸6份、L-苯丙氨酸8份、L-苏氨酸15份、L-色氨酸3份、L-酪氨酸9份和L-缬氨酸12份。
再，所述基础培养基还包括5份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子8份、白介素6 5份、白介素10 4份、白介素12 6份、TNF-β10份、GM-CSF 5份。
此外，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。
实施例3
一种快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化，将MDA-MB-231乳腺癌细胞液均匀加入到盛有8ml新鲜的MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿4下，于37℃，5%CO2培养箱中培养。
其中，所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括80%的基础培养基以及20%的胎牛血清。此外，所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜12份、羟甲基淀粉4份、海藻糖8份、维生素E2份、25%山梨醇3份、丙二醇1份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.8份和基础培养基88份。
其中，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 86份、碳酸氢钠 18份、丙酮酸钠12份、脂肪酸白蛋白9份、氯化钾40份、无水硫酸镁8份、氯化钠75份、无水磷酸二氢钠12份、叶酸 0.4份、肌醇1份、烟酰胺0.5份、无水氯化钙30份、硝酸铁0.3份、丁二酸7份、丁二酸钠14份、D-泛酸钙 0.5份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.5份、酒石酸胆碱0.7份、核黄素0.2份、盐酸硫胺0.3份、盐酸吡哆辛 0.4份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.6份、乙酸酯1.8份、生物素0.7份、硫辛酸0.6份、酚红钠1.2份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括4份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 8份、L-盐酸胱氨酸 6份、L-丝氨酸5份、甘氨酸3份、L-盐酸组氨酸 5份、L-异亮氨酸12份、L-亮氨酸10份、L-盐酸赖氨酸15份、L-甲硫氨酸3份、L-苯丙氨酸4份、L-苏氨酸9份、L-色氨酸2份、L-酪氨酸6份和L-缬氨酸9份。
再，所述基础培养基还包括3份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子5份、白介素6 3份、白介素10 2份、白介素12 5份、TNF-β8份、GM-CSF2份。
此外，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。
实施例4
一种快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化，将MDA-MB-231乳腺癌细胞液均匀加入到盛有7ml新鲜的MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿5下，于37℃，5%CO2培养箱中培养。
其中，所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括80%的基础培养基以及20%的胎牛血清。此外，所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5份、羟甲基淀粉5份、海藻糖9份、维生素E3份、25%山梨醇1份、丙二醇1份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷1.5份和基础培养基85份。
其中，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 82份、碳酸氢钠 25份、丙酮酸钠10份、脂肪酸白蛋白8份、氯化钾38份、无水硫酸镁 8份、氯化钠70份、无水磷酸二氢钠10份、叶酸 0.5份、肌醇1.2份、烟酰胺0.5份、无水氯化钙30份、硝酸铁0.4份、丁二酸6份、丁二酸钠12份、D-泛酸钙 0.6份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.5份、酒石酸胆碱0.7份、核黄素0.2份、盐酸硫胺0.4份、盐酸吡哆辛 0.3份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.8份、乙酸酯1.8份、生物素0.6份、硫辛酸0.7份、酚红钠1份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括6份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 5份、L-盐酸胱氨酸 8份、L-丝氨酸6份、甘氨酸1份、L-盐酸组氨酸 4份、L-异亮氨酸12份、L-亮氨酸12份、L-盐酸赖氨酸20份、L-甲硫氨酸1份、L-苯丙氨酸2份、L-苏氨酸5份、L-色氨酸2份、L-酪氨酸6份和L-缬氨酸10份。
再，所述基础培养基还包括2份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3份、白介素6 5份、白介素10 4份、白介素12 3份、TNF-β5份、GM-CSF3份。
此外，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。
以上所述仅是发明的几个实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：包括以下步骤：将冻存的MDA-MB-231乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液的MDA-MB-231乳腺癌细胞液完全融化，将MDA-MB-231乳腺癌细胞液均匀加入到盛有7-9ml新鲜的MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿3-5下，于37℃，5%CO2培养箱中培养；所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5-15份、羟甲基淀粉2-5份、海藻糖3-12份、维生素E0.5-3份、25%山梨醇1-5份、丙二醇0.8-1.6份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.5-2份和基础培养基80-90份。
2.根据权利要求1所述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。
3.根据权利要求1或2所述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 80-90份、碳酸氢钠 10-20份、丙酮酸钠8-18份、脂肪酸白蛋白4-16份、氯化钾 30-50份、无水硫酸镁 5-12份、氯化钠60-80份、无水磷酸二氢钠 8-16份、叶酸 0.2-0.6份、肌醇0.5-1.5份、烟酰胺0.2-0.8份、无水氯化钙20-40份、硝酸铁0.1-0.5份、丁二酸 5-10份、丁二酸钠9-18份、D-泛酸钙 0.2-0.8份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.2-0.8份、酒石酸胆碱0.5-1份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.1-0.5份、盐酸吡哆辛 0.1-0.6份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.2-1份、乙酸酯1-3份、生物素0.5-0.8份、硫辛酸0.2-0.8份、酚红钠0.8-1.5份和去离子水100份。
4.根据权利要求3所述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：所述基础培养基还包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸5-10份、L-盐酸胱氨酸 3-8份、L-丝氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-盐酸组氨酸 4-6份、L-异亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-盐酸赖氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-苏氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-缬氨酸8-12份。
5.根据权利要求4所述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：所述基础培养基还包括2-5份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3-8份、白介素6 2-5份、白介素10 1-4份、白介素12 3-6份、TNF-β2-10份、GM-CSF1-5份。
6.根据权利要求5所述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。
7.根据权利要求6所述的快速MDA-MB-231乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。
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