CN107586757A - 一种猪间充质干细胞培养液及其制备方法 - Google Patents
一种猪间充质干细胞培养液及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107586757A CN107586757A CN201711059115.8A CN201711059115A CN107586757A CN 107586757 A CN107586757 A CN 107586757A CN 201711059115 A CN201711059115 A CN 201711059115A CN 107586757 A CN107586757 A CN 107586757A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- factors
- stem cell
- nutrient solution
- umbilical cord
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
本发明涉及一种猪间充质干细胞培养液及其制备方法，该培养液包含的组分及其含量为：不含动物源成分的基础培养基；胎牛血清：2‑20％；PDGF‑BB因子：5‑10ng/mL。本发明的细胞培养液与常规的普通间充质干细胞培养液比较，培养的猪脐带胎盘间充质干细胞更具有典型的细胞形态，及具有强的传代能力而不易衰老。本发明的猪脐带胎盘间充质干细胞培养液，培养出的细胞应用于生产将得到数量更多生物学特性更加稳定的猪脐带胎盘间充质干细胞产品。
Description
技术领域
本发明涉及猪脐带和/或胎盘细胞培养技术领域，尤其涉及一种猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液。
背景技术
在干细胞治疗应用于人类之前，各种动物，如小鼠，牛，兔和猪来源间充质干细胞(MSCs)对不同疾病的治疗效果已被广泛研究。其中，猪与人有许多相似之处，如器官的大小、生理和功能。因此，猪一直被认为是对体内研究和临床前评估有价值的模型动物。
猪MSCs已从多器官组织成功分离，如骨髓，皮肤，脐带血，脐带，子宫内膜，羊水和外周血。猪骨髓MSC在向间质细胞和功能性细胞的体外分化和转分化方面显示很大潜能，如能够分化为心肌细胞、神经细胞、肝细胞。另外，猪MSC具备免疫调节作用和低免疫原性，应用猪MSC进行异种移植治疗方面的研究是安全和可行的。猪脐带胎盘MSCs具有间充质干细胞的所有特性，如贴壁培养，多向分化(成脂、成骨细胞、软骨细胞、神经元)，表达CD29、CD44、CD90、CD105，同时不表达造血细胞表面标志物如CD45、CD34、CD11b、HLA-DR。
目前同种异体来源的猪骨髓MSCs被用于治疗急性心肌梗死、慢性缺血性心肌病、急性肝衰竭、皮肤修复再生和骨软骨缺损等猪疾病模型。猪脐带胎盘MSCs已用于治疗神经性疾病，例如大鼠的大脑损伤以及小鼠的帕金森氏病。
就像从成人和胎儿组织中分离MSCs一样，应用特定的培养基和操作流程，同样可以从不同组织中分离和扩增猪MSCs。目前，绝大多数的MSCs分化和功能实验是基于骨髓来源的MSCs。从活体猪骨髓中分离MSCs相对困难，多数情况下不得不将实验对象处死后进行骨髓MSCs的分离。然而，猪胎盘和脐带来源MSCs能够以剖腹产的形式从母猪体内获得，同时母猪和新生幼猪都能存活，对母体和幼崽没有任何损伤。
猪MSCs的扩增可以应用不同的培养基，如DMEM，TCM199/DMEM(1:1)，α-MEM，高糖DMEM等。目前研究者应用添加2－20％胎牛血清(FBS)的培养基进行MSCs的体外扩增和传代。体外培养MSCs形成的克隆数与FBS的浓度呈现明显相关性，当不添加FBS时无克隆形成，可能是由于含高浓度血清的培养基中存在一些目前未知的生长因子。目前，尚没有经过验证能够有效培养猪胎盘脐带MSCs的培养基配方。我们发明了一种猪胎盘和/或脐带间充质干细胞培养基配方，为促进猪脐带和/或胎盘干细胞的进行更好的扩增培养，以保证细胞的质量和数量，以备更好的用于猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的生物学特性和临床前试验研究。
发明内容
本发明提供了一种猪脐带和/或胎盘间充质干细胞培养液及其制备方法，为促进猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的进行更好的扩增培养，以保证细胞的生物学特性的稳定和足够的细胞数量，以备更好的用于猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的生物学特性鉴定和临床前试验研究。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液，该培养液包含的组分及其含量为：
不含动物源成分的基础培养基；
胎牛血清：2-20％；
PDGF-BB因子：5-10ng/mL。
优选地，该培养液中还含有bFGF因子，含量为5-10ng/mL。
更优选地，该培养液中还含有hEGF因子，含量为5-10ng/mL。
优选地，所述不含动物源成分的基础培养基选自DMEM/F12培养基、M199培养基、1640培养基中的一种。
优选地，所述的胎牛血清为进口胎牛血清，胎牛血清加入培养基之前要进行0.22的滤膜进行过滤。
更优选地，该培养液包含的组分及其含量为：
不含动物源成分的基础培养基；
胎牛血清：2-20％；
PDGF-BB因子：5ng/mL；bFGF因子：5ng/mL；hEGF因子：5ng/mL。
本发明还提供了上述猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液的制备方法，该方法包括如下步骤：
(1)完全培养基制备：将基础培养基和胎牛血清混合后，进行膜过滤除菌，分装冷冻保存，标记为完全培养基，-20℃保存；
(2)PDGF-BB因子用完全培养基溶解，调整浓度到1ng/μL，并进行分装，-80℃冻存保存；
(3)猪脐带和/或胎盘间充质干细胞培养时，步骤(2)保存的PDGF-BB因子要在冰上融化，然后加入到步骤(1)的完全培养基中，PDGF-BB因子的终浓度为5-10ng/mL；即制得该培养液。
优选地，步骤(3)中还包括向完全培养基中添加bFGF因子，bFGF因子的终浓度为5-10ng/mL，bFGF因子在添加前，用完全培养基溶解，调整浓度到1ng/μL，并进行分装，-80℃冻存保存。
优选地，步骤(3)中还包括向完全培养基中添加hEGF因子，hEGF因子的终浓度为5-10ng/mL，hEGF因子在添加前，用完全培养基溶解，调整浓度到1ng/μL，并进行分装，-80℃冻存保存。
优选地，步骤(3)中向完全培养基中添加PDGF-BB因子、bFGF因子、hEGF因子，终浓度均为5ng/mL。
优选地，所述步骤(1)中基础培养基和胎牛血清的体积比为9:1。
本发明还提供了一种间充质干细胞的培养方法，该方法包括如下步骤：将猪脐带和/或胎盘间充质干细胞接种于上述的猪脐带和/或胎盘间充质干细胞培养液中进行培养。
优选的，所述培养条件为37℃和CO2的体积浓度为5％；
优选的，所述细胞的接种密度为2*104-1.5*105个/mL。
本发明所具有的有益效果为：
本发明的猪脐带和/或胎盘间充质细胞培养液与常规的间充质干细胞培养液相比，能使猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的增殖能力更强，传代周期更短，培养的细胞更具有间充质干细胞的形态，具有更好的传代能力，细胞的表型更加单一、细胞纯度高、且细胞的活性更强，新培养体系培养的猪脐带和/或胎盘间充质干细胞从形态、增生、细胞表型和生物学特点和功能更加符合间充质干细胞的特点。因此，本发明涉及的猪脐带和/或胎盘间充质干细胞培养液应用于生产和实践，将生产出更高的质量和效益的猪脐带和/或胎盘间充质干细胞，为猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的生物学特性研究、临床前试验研究提供足够的间充质干细胞制剂，更好的发挥猪作为多种疾病模型动物的优点。
附图说明：
图1为不同因子的培养液对细胞的培养情况。
图2为不同浓度的bFGF、hEGF和PDGF-BB因子对细胞的培养情况。
图3为因子组合、对照组对不同株猪间充质干细胞的培养情况。
具体实施方式
下面结合附图与具体实施方案对本发明进一步说明，其具体实施方案应该理解为仅为举例说明，不是限定性的，不能以下述举例说明来限定本发明的保护范围。
取剖腹产猪脐带、胎盘检测合格后，用pH值为7.2-7.4的磷酸缓冲液冲洗去除残留血液，并浸泡胎盘、脐带组织15分钟；后剪成1-2cm3的小块，再次用磷酸缓冲液清洗，去除残留血液，胎盘、脐带粉碎后加入1-1.5倍的磷酸缓冲稀释液(pH7.2-7.4)，取一份组织混合物加入同体积的一胶原酶和胰酶混合物，胶原酶和胰酶体积比为1:1，胶原酶浓度为0.2％～0.5％，胰酶浓度为0.1％～0.5％，溶液体积为组织体积的1/2，将容器置于恒温磁力搅拌器上消化30-40分钟，转速为90-120转/分钟，温度37℃；所得的消化混合物通过不锈钢过滤网后，再将滤液通过100-200目筛，滤过液为细胞混悬液，将滤过液再次通过1000目筛，滤过液重新加入容器中进行再次消化，用完全培养基(DMEM/F12培养基：胎牛血清＝9:1)冲洗1000目筛得到细胞悬液；收集细胞悬液，进行培养，当细胞爬出后，弃掉旧的培养基及组织块，用PBS清洗培养瓶后换成完全培养基，所得到的细胞标记为原代，即为所得的猪脐带或胎盘间充质干细胞。
实施例1.不同因子对细胞的培养情况对照
取一株猪脐带间充质干细胞复苏后，采用不同培养基进行培养，各种因子加入的浓度均为5ng/mL，由于猪细胞的培养较为困难和复杂，在不含有血清但是还有细胞因子的培养基中细胞几乎不生长，因此血清的加入还是必要的。
对照组：
(1)进口胎牛血清+基础培养基；
(2)进口胎牛血清+基础培养基+b-FGF；
(3)进口胎牛血清+基础培养基+h-EGF；
实验组：
(4)进口胎牛血清+基础培养基+PDGF-BB；
(5)进口胎牛血清+基础培养基+b-FGF+PDGF-BB；
(6)进口胎牛血清+基础培养基+bFGF+hEGF；
(7)进口胎牛血清+基础培养基+hEGF+PDGF-BB
(8)进口胎牛血清+基础培养基+hEGF+PDGF-BB+bFGF(三因子)，
对照组和实验组的基础培养基(DMEM/F12培养基)和胎牛血清的体积比为9:1；各因子的浓度均为5ng/mL。
在相同种植密度(2.5*105个/5mL)相同培养条件(37℃，CO2的体积浓度为5％)下种植T25cm2培养瓶。培养三天后，观察细胞形态，并分别消化计数，检测各组细胞的生长情况，并对各对照组、实验组培养基培养的细胞进行了细胞倍增时间实验，结果见图1。
如图1所示，同一株细胞经过不同的培养基培养后呈现不同的生长情况，培养三天后分别消化计数。并通过对比显示，在相同条件培养下对照组细胞生长较少，且细胞形态发生了一定的变化，加入细胞因子后细胞的所得有核细胞的数量会增加，且培养的细胞更具有间充质干细胞的形态，双因子组和三因子进行比较，相同条件下培养后收获的细胞数量相差不大且细胞形态都没有改变，但进行了细胞的倍增实验结果显示，通过以下公式计算细胞生长的倍增时间，结果显示加入三因子后，细胞倍增时间更短，所得细胞的数量会更多(表1)。
公式为DT＝t*[lg2/(lgNt-lgNo)])
其中：DT为倍增时间；t为培养时间；No为首次种植的细胞数；Nt为t时间后的细胞数
表1：不同细胞因子组合的猪脐带间充质干细胞倍增时间的影响。
实施例2.因子的浓度的选择
取一株猪脐带间充质干细胞复苏后，采用含有不同浓度PDGF+bFGF+hEGF三因子的培养基进行培养，每组中三种因子的浓度相同，实验分四组(1)对照组：进口胎牛血清+基础培养基(DMEM/F12培养基)；(2)进口胎牛血清+基础培养基(DMEM/F12培养基)+2.5ng/mL三因子，(3)进口胎牛血清+基础培养基(DMEM/F12培养基)+5ng/mL三因子(4)进口胎牛血清+基础培养基(DMEM/F12培养基)+10ng/mL三因子；四组中基础培养基(DMEM/F12培养基)和胎牛血清的体积比为9:1；在相同种植密度(2.5*105个/5mL)相同培养条件(37℃，CO2的体积浓度为5％)下种植T25cm2培养瓶，培养三天后，观察细胞生长形态，并分别消化计数细胞，检测各组细胞的生长情况，结果见图2。
如图2所示，在细胞培养基中添加不同浓度的生长因子后，对细胞有不同程度的促增殖作用，培养三天后分别消化计数，通过以下公式计算细胞生长的倍增时间。结合细胞形态、计数结果与细胞生长倍增时间三项结果显示，细胞增殖能力会随着加入因子浓度的增加而增加，但比较加入的5ng组与10ng组，两组的差异较小，即当因子浓度超过5ng/mL后，细胞的生长增殖速度和细胞的生长形态均无明显的差异和影响(表2)。
公式为DT＝t*[lg2/(lgNt-lgNo)])
其中：DT为倍增时间；t为培养时间；No为首次种植的细胞数；Nt为t时间后的细胞数
表2不同细胞因子浓度对猪脐带间充质干细胞倍增时间的影响。
| 组别 | 对照组 | 2.5ng | 5ng | 10ng |
| 细胞数*105 | 3.35 | 5.95 | 9.5 | 10.1 |
| 倍增时间(天) | 11.7 | 6 | 3.1 | 2.9 |
实施例3.猪脐带胎盘间充质干细胞的传代能力检测
取两株不同的猪脐带间充质干细胞P2代按相同的密度进行复苏，采用以下两种培养液，(1)对照组：进口胎牛血清+基础培养基；(2)因子组：进口胎牛血清+基础培养基+5ng/mL PDGF-BB+bFGF+hEGF，对照组和实验组的基础培养基(DMEM/F12培养基)和胎牛血清的体积比为9:1，在其它因素相同的培养条件下进行培养，分别对细胞进行传代，检测细胞的传代能力，实验结果见图3。
细胞凋亡是细胞在生长过程中的自然死亡和衰老现象。不同株的猪脐带间充质干细胞使用加因子的培养液后，于培养的第6代时细胞生长良好，死亡现象极少出现，而使用对照组培养液培养的猪间充质干细胞，在细胞培养到第3代时，已经出现了明显的衰老现象，且细胞传代后大量漂浮，死亡现象非常明显，结果显示添加PDGF-BB+bFGF+hEGF因子的培养液使猪脐带间充质干细胞具有较强的传代能力和抗衰老的能力。
实施例4.猪脐带胎盘间充质干细胞细胞表型特点
不同于人、啮齿类动物和灵长类动物，猪的间充质干细胞的特别是脐带胎盘组织来源的间充质干细胞并不好培养，这为将猪作为模型动物造成了很大的技术障碍，其中传统培养体系培养的猪间充质干细胞不仅生长缓慢、细胞形态不典型和流式检测的细胞表型不符合国际干细胞协会的标准，因此我们对传统的猪间充质干细胞培养体系进行了优化，在加入5ng/ml的PDGF因子后，细胞表型明显改善，CD44、CD90和CD105的表达均超过了95％(表3)，且造血细胞的细胞表型均为阴性，符合国际干细胞协会的标准，表明新培养体系培养的猪脐带胎盘组织来源的间充质干细胞具有更高的纯度。
表3：PDGF-BB对猪脐带间充质干细胞细胞表型的影响。
表3：猪脐带间充质干细胞以1：3的比例进行传代培养至第3代时，猪脐带间充质干细胞的细胞表型特点：其中PDGF(-)为在含有10％胎牛血清、5ng/ml hEGF和5ng/ml bFGF的DF12培养基中培养的细胞的表型，PDGF(5ng/ml)为在含有10％胎牛血清、5ng/ml hEGF、5ng/ml bFGF和5ng/ml PDGF-BB的DF12培养基中培养的细胞的表型。
Claims (10)
1.一种猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液，其特征在于：该培养液包含的组分及其含量为：
不含动物源成分的基础培养基；
胎牛血清：2-20％；
PDGF-BB因子：5-10ng/mL。
2.根据权利要求1所述一种猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液，其特征在于：该培养液中还含有bFGF因子，含量为5-10ng/mL。
3.根据权利要求1或2所述一种猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液，其特征在于：该培养液中还含有hEGF因子，含量为5-10ng/mL。
4.根据权利要求3所述一种猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液，其特征在于：该培养液包含的组分及其含量为：
不含动物源成分的基础培养基；
胎牛血清：2-20％；
PDGF-BB因子：5ng/mL；bFGF因子：5ng/mL；hEGF因子：5ng/mL。
5.权利要求1所述猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
(1)完全培养基制备：将基础培养基和胎牛血清混合后，进行膜过滤除菌，分装冷冻保存，标记为完全培养基，-20℃保存；
(2)PDGF-BB因子用完全培养基溶解，调整浓度到1ng/μL，并进行分装，-80℃冻存保存；
(3)猪脐带和/或胎盘间充质干细胞培养时，步骤(2)保存的PDGF-BB因子要在冰上融化，然后加入到步骤(1)的完全培养基中，PDGF-BB因子的终浓度为5-10ng/mL；即制得该培养液。
6.根据权利要求5所述猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液的制备方法，其特征在于：步骤(3)中还包括向完全培养基中添加bFGF因子，bFGF因子的终浓度为5-10ng/mL，bFGF因子在添加前，用完全培养基溶解，调整浓度到1ng/μL，并进行分装，-80℃冻存保存。
7.根据权利要求5或6所述猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液的制备方法，其特征在于：步骤(3)中还包括向完全培养基中添加hEGF因子，hEGF因子的终浓度为5-10ng/mL，hEGF因子在添加前，用完全培养基溶解，调整浓度到1ng/μL，并进行分装，-80℃冻存保存。
8.根据权利要求7所述猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液的制备方法，其特征在于：步骤(3)中向完全培养基中添加PDGF-BB因子、bFGF因子、hEGF因子，终浓度均为5ng/mL。
9.根据权利要求5-8任一项所述猪脐带和/或胎盘间充质干细胞的培养液的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中基础培养基和胎牛血清的体积比为9:1。
10.一种间充质干细胞的培养方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：将猪脐带和/或胎盘间充质干细胞接种于权利要求1-4任一项所述的猪脐带和/或胎盘间充质干细胞培养液中进行培养；更优选地，所述细胞的接种密度为2*104-1.5*105个/mL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711059115.8A CN107586757A (zh) | 2017-11-01 | 2017-11-01 | 一种猪间充质干细胞培养液及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711059115.8A CN107586757A (zh) | 2017-11-01 | 2017-11-01 | 一种猪间充质干细胞培养液及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107586757A true CN107586757A (zh) | 2018-01-16 |
Family
ID=61044017
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711059115.8A Pending CN107586757A (zh) | 2017-11-01 | 2017-11-01 | 一种猪间充质干细胞培养液及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107586757A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111321107A (zh) * | 2019-02-01 | 2020-06-23 | 南方医科大学南方医院 | 人主动脉瓣膜间质细胞的分离及培养方法 |
| CN114457011A (zh) * | 2022-02-24 | 2022-05-10 | 广州陈运贤生命科技有限公司 | 一种干细胞培养基及干细胞分离培养方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101395266A (zh) * | 2005-12-29 | 2009-03-25 | 人类起源公司 | 胎盘干细胞群 |
| CN103060264A (zh) * | 2012-12-20 | 2013-04-24 | 上海市第十人民医院 | 一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法 |
| CN105013013A (zh) * | 2015-07-29 | 2015-11-04 | 陕西博与再生医学有限公司 | 一种皮肤溃疡修复基质的制备方法 |
| CN107022521A (zh) * | 2017-02-13 | 2017-08-08 | 广东唯泰生物科技有限公司 | 壁蜕膜组织冻存、复苏及分离培养间充质干细胞的方法 |
-
2017
- 2017-11-01 CN CN201711059115.8A patent/CN107586757A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101395266A (zh) * | 2005-12-29 | 2009-03-25 | 人类起源公司 | 胎盘干细胞群 |
| CN103060264A (zh) * | 2012-12-20 | 2013-04-24 | 上海市第十人民医院 | 一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法 |
| CN105013013A (zh) * | 2015-07-29 | 2015-11-04 | 陕西博与再生医学有限公司 | 一种皮肤溃疡修复基质的制备方法 |
| CN107022521A (zh) * | 2017-02-13 | 2017-08-08 | 广东唯泰生物科技有限公司 | 壁蜕膜组织冻存、复苏及分离培养间充质干细胞的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李慧等: "猪脐带间充质干细胞的培养与鉴定", 《中国畜枚兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会议论文集》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111321107A (zh) * | 2019-02-01 | 2020-06-23 | 南方医科大学南方医院 | 人主动脉瓣膜间质细胞的分离及培养方法 |
| CN114457011A (zh) * | 2022-02-24 | 2022-05-10 | 广州陈运贤生命科技有限公司 | 一种干细胞培养基及干细胞分离培养方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100908481B1 (ko) | 중간엽 줄기세포 배양 배지 및 이를 이용한 중간엽줄기세포의 배양 방법 | |
| CN102511471B (zh) | 一种间充质干细胞冻存液及其制备方法 | |
| CN106754674B (zh) | 从人胎盘羊膜制备羊膜间充质干细胞的方法及其应用 | |
| CN103070161B (zh) | 一种脂肪间充质干细胞冻存液及冻存方法 | |
| CN106982821A (zh) | 脐带间充质干细胞临床冻存保护液组合物及其用途 | |
| CN104560870B (zh) | 一种制备蜕膜间充质干细胞的方法 | |
| CN103667187B (zh) | 一种人脂肪干细胞的分离培养方法和干细胞库的构建方法 | |
| CN101922048B (zh) | 一种脐带间充质干细胞公共库的建库方法 | |
| CN105861430A (zh) | 一种外泌体、外泌体的制备方法及其在制备治疗脓毒症药物或者制剂中的应用 | |
| CN104770363A (zh) | 一种间充质干细胞的冻存液及冻存方法 | |
| CN101748096A (zh) | 亚全能干细胞、其制备方法及其用途 | |
| CN104560869B (zh) | 一种制备绒毛膜间充质干细胞的方法 | |
| CN101591644A (zh) | 临床治疗用脐带间充质干细胞的制备和储存 | |
| CN109234229A (zh) | 从胎盘血管分离间充质干细胞的方法和所用消化酶组合物 | |
| CN108795855A (zh) | 一种间充质干细胞的无血清培养基 | |
| CN108456657A (zh) | 犬脐带间充质干细胞及其制备方法和冻存方法 | |
| CN105331579A (zh) | 人睾丸间质干细胞的分离、培养方法及其用途 | |
| CN106318906A (zh) | 一种大规模培养人脐带间充质干细胞的方法 | |
| CN109699634A (zh) | 一种间充质干细胞的超低温冻存与复苏方法 | |
| CN105238749A (zh) | 一种复苏骨髓间充质干细胞的方法 | |
| CN108057014A (zh) | 一种美容护肤的干细胞制剂的制备方法 | |
| CN102154200A (zh) | 临床治疗用脐带间充质干细胞的制备和保存 | |
| CN104830763A (zh) | Y-27632在间充质干细胞培养中的应用及间充质干细胞的培养方法 | |
| CN105602895A (zh) | 一种乳牙牙髓间充质干细胞的制备方法 | |
| CN107586757A (zh) | 一种猪间充质干细胞培养液及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180116 |