CN107151657A - 一种方便快速的mcf‑7乳腺癌细胞的复苏方法 - Google Patents

一种方便快速的mcf‑7乳腺癌细胞的复苏方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107151657A
CN107151657A CN201710525369.8A CN201710525369A CN107151657A CN 107151657 A CN107151657 A CN 107151657A CN 201710525369 A CN201710525369 A CN 201710525369A CN 107151657 A CN107151657 A CN 107151657A
Authority
CN
China
Prior art keywords
parts
breast cancer
mcf
cancer cells
resuscitation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710525369.8A
Other languages
English (en)
Inventor
马荣华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SUZHOU BEIKAI BIOCHEMICAL EQUIPMENT Co Ltd
Original Assignee
SUZHOU BEIKAI BIOCHEMICAL EQUIPMENT Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SUZHOU BEIKAI BIOCHEMICAL EQUIPMENT Co Ltd filed Critical SUZHOU BEIKAI BIOCHEMICAL EQUIPMENT Co Ltd
Priority to CN201710525369.8A priority Critical patent/CN107151657A/zh
Publication of CN107151657A publication Critical patent/CN107151657A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
    • C12N2500/14—Calcium; Ca chelators; Calcitonin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
    • C12N2500/16—Magnesium; Mg chelators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/20—Transition metals
    • C12N2500/24—Iron; Fe chelators; Transferrin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/32—Amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/34—Sugars
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/35—Polyols, e.g. glycerin, inositol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/36—Lipids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/38—Vitamins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/105—Insulin-like growth factors [IGF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/22—Colony stimulating factors (G-CSF, GM-CSF)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2306—Interleukin-6 (IL-6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/231—Interleukin-10 (IL-10)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2312—Interleukin-12 (IL-12)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/25—Tumour necrosing factors [TNF]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了一种方便快速的MCF‑7乳腺癌细胞的复苏方法，将冻存的MCF‑7乳腺癌细胞冻存管从液氮或者‑80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MCF‑7乳腺癌细胞专用冻存液的MCF‑7乳腺癌细胞液完全融化，将MCF‑7乳腺癌细胞液均匀加入到盛有7‑9ml新鲜的MCF‑7乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿3‑5下，于37℃，5%CO2培养箱中培养，快捷、方便，复苏后的MCF‑7乳腺癌细胞存活率高，细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，可以方便应用于乳腺癌的原位生长、血管生成以及与其他乳腺癌高转移性细胞进行对比研究等的相关研究。

Description

一种方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法
技术领域
本发明属于生物技术应用领域，具体地，涉及一种方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法。
背景技术
乳腺癌是女性最常见的癌症，主要包括导管癌和小叶癌。2016年美国CA（A CancerJournal for Clinicians）公布的最新统计数据显示，美国2016年预计将有420840例女性患乳腺癌，占女性新发恶性肿瘤的38%，居女性恶性肿瘤发病率第一位，并且死亡人数将达52930例。更为严重的是全球的乳腺癌发病率正在逐年增长。
细胞培养是生物与健康相关研究领域的一项重要技术。随着生命科学的迅速发展，目前细胞培养已成为细胞生物学、分子生物学、遗传学和免疫学等学科研究的重要基础。为了深入探讨细胞的生长活动规律、有关疾病的病理和药物的药理（毒理）机制，开发具有不同针对性的细胞培养方法具有重要意义。
其中，MCF-7乳腺癌细胞作为人源性高转移乳腺癌细胞，常用于乳腺癌的体内外研究。细胞培养基是培养细胞的营养物质，是生命及再生医学领域中广泛应用的关键技术。尤其随着细胞治疗个性化技术的兴起，体外扩增特殊功效的细胞成了临床前研究以及临床治疗的重点研发项目。
本发明的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法快捷、方便，复苏后的MCF-7细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，可以方便应用于乳腺癌的原位生长、血管生成以及与其他乳腺癌高转移性细胞进行对比研究等的相关研究。
发明内容
发明目的：本发明提供了一种方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法。
技术方案：本发明提供了一种方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MCF-7乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液的MCF-7乳腺癌细胞液完全融化，将MCF-7乳腺癌细胞液均匀加入到盛有7-9ml新鲜的MCF-7乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿3-5下，于37℃，5%CO2培养箱中培养；所述MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5-15份、羟甲基淀粉2-5份、山梨糖3-12份、维生素C1-4份、50%高渗葡萄糖0.8-3份、丙二醇1-1.5份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.3-3份和基础培养基80-90份。本发明所述的快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法快捷、方便，复苏后的MCF-7乳腺癌细胞存活率高，细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，可以方便应用于乳腺癌的原位生长、血管生成以及与其他乳腺癌高转移性细胞进行对比研究等的相关研究。其中，50%高渗葡萄糖为渗透性保护液，而(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷则抑制细胞活动和基因表达，维生素C的抗氧化性好，在保证休眠细胞的营养的同时还可以显著减少对细胞的损伤，提高冻存细胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的状态。
进一步的，上述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，所述MCF-7乳腺癌细胞专用培养基包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。MCF-7乳腺癌细胞专用培养基，组分合理，可以进一步为复苏的细胞的提供营养物质。
进一步的，上述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 80-90份、碳酸氢钠 10-20份、丙酮酸钠8-18份、转铁蛋白2-10份、氯化钾 30-50份、无水硫酸镁 5-12份、氯化钠60-80份、氯化锂3-10份、无水磷酸二氢钠 8-16份、叶酸 0.2-0.6份、肌醇0.5-1.5份、烟酰胺0.2-0.8份、无水氯化钙20-40份、硝酸铁0.1-0.5份、丁二酸 5-10份、丁二酸钠9-18份、D-泛酸钙 0.2-0.8份、酒石酸胆碱0.5-1份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.1-0.5份、盐酸吡哆辛 0.1-0.6份、4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.2-0.8份、亚麻油0.5-2份、聚脂肪酸酯0.5-1.8份、酚红钠0.8-1.5份和去离子水100份。
进一步的，上述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，所述基础培养基还包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 5-10份、L-盐酸胱氨酸 3-8份、L-丝氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-盐酸组氨酸 4-6份、L-异亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-盐酸赖氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-苏氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-缬氨酸8-12份。
进一步的，上述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，所述基础培养基还包括2-5份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3-8份、白介素6 2-5份、白介素10 1-4份、白介素12 3-6份、TNF-β2-10份、GM-CSF1-5份。基础培养基组分合理，营养丰富，可以提高MCF-7乳腺癌细胞复苏后生长的营养物质，MCF-7细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，镜下观察透亮、分裂相更多、形态及分散度佳，可以有利于乳腺癌转移的相关研究。
进一步的，上述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，以重量组分计，所述基础培养基还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。可以有效防止复苏的细胞被污染。
进一步的，上述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。青霉素和链霉素活性好，效果佳。
有益效果：本发明所述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，快捷、方便，复苏后的MCF-7乳腺癌细胞存活率高，细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，可以方便应用于乳腺癌的原位生长、血管生成以及与其他乳腺癌高转移性细胞进行对比研究等的相关研究。
具体实施方式
下面将通过几个具体实施例，进一步阐明本发明，这些实施例只是为了说明问题，并不是一种限制。
实施例1
一种方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MCF-7乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液的MCF-7乳腺癌细胞液完全融化，将MCF-7乳腺癌细胞液均匀加入到盛有7ml新鲜的MCF-7乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿3下，于37℃，5%CO2培养箱中培养。
其中，所述MCF-7乳腺癌细胞专用培养基包括70%的基础培养基以及30%的胎牛血清。此外，所述MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5份、羟甲基淀粉2份、山梨糖3份、维生素C1份、50%高渗葡萄糖0.8份、丙二醇1份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.3份和基础培养基80份。
其中，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 80份、碳酸氢钠10份、丙酮酸钠8份、转铁蛋白2份、氯化钾 30份、无水硫酸镁 5份、氯化钠60份、氯化锂3份、无水磷酸二氢钠 8份、叶酸 0.2份、肌醇0.5份、烟酰胺0.2份、无水氯化钙20份、硝酸铁0.1份、丁二酸 5份、丁二酸钠9份、D-泛酸钙 0.2份、酒石酸胆碱0.5份、核黄素0.1份、盐酸硫胺0.1份、盐酸吡哆辛 0.1份、4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.2份、亚麻油0.5份、聚脂肪酸酯0.5份、酚红钠0.8份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括3份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 5份、L-盐酸胱氨酸 3份、L-丝氨酸3份、甘氨酸1份、L-盐酸组氨酸 4份、L-异亮氨酸8份、L-亮氨酸7份、L-盐酸赖氨酸10份、L-甲硫氨酸1份、L-苯丙氨酸2份、L-苏氨酸5份、L-色氨酸1份、L-酪氨酸5份和L-缬氨酸8份。
再，所述基础培养基还包括2份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3份、白介素6 2份、白介素10 1份、白介素12 3份、TNF-β2份、GM-CSF1份。
此外，以重量组分计，所述基础培养基还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。
实施例2
一种方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MCF-7乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液的MCF-7乳腺癌细胞液完全融化，将MCF-7乳腺癌细胞液均匀加入到盛有9ml新鲜的MCF-7乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿5下，于37℃，5%CO2培养箱中培养。
其中，所述MCF-7乳腺癌细胞专用培养基包括90%的基础培养基以及10%的胎牛血清。此外，所述MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分二甲基亚砜15份、羟甲基淀粉5份、山梨糖12份、维生素C4份、50%高渗葡萄糖3份、丙二醇1.5份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷3份和基础培养基90份。
其中，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 90份、碳酸氢钠20份、丙酮酸钠18份、转铁蛋白10份、氯化钾 50份、无水硫酸镁 12份、氯化钠80份、氯化锂10份、无水磷酸二氢钠 16份、叶酸 0.6份、肌醇1.5份、烟酰胺0.8份、无水氯化钙40份、硝酸铁0.5份、丁二酸 10份、丁二酸钠18份、D-泛酸钙 0.8份、酒石酸胆碱1份、核黄素0.3份、盐酸硫胺0.5份、盐酸吡哆辛 0.6份、4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.8份、亚麻油2份、聚脂肪酸酯1.8份、酚红钠1.5份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括8份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 10份、L-盐酸胱氨酸 8份、L-丝氨酸6份、甘氨酸5份、L-盐酸组氨酸 6份、L-异亮氨酸20份、L-亮氨酸18份、L-盐酸赖氨酸20份、L-甲硫氨酸6份、L-苯丙氨酸8份、L-苏氨酸15份、L-色氨酸3份、L-酪氨酸9份和L-缬氨酸12份。
再，所述基础培养基还包括5份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子8份、白介素6 5份、白介素10 4份、白介素12 6份、TNF-β10份、GM-CSF 5份。
此外，以重量组分计，所述基础培养基还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。
实施例3
一种方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MCF-7乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液的MCF-7乳腺癌细胞液完全融化，将MCF-7乳腺癌细胞液均匀加入到盛有8ml新鲜的MCF-7乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿4下，于37℃，5%CO2培养箱中培养。
其中，所述MCF-7乳腺癌细胞专用培养基包括80%的基础培养基以及20%的胎牛血清。此外，所述MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜12份、羟甲基淀粉3份、山梨糖8份、维生素C2份、50%高渗葡萄糖2份、丙二醇1.2份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.3-3份和基础培养基85份。
其中，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 86份、碳酸氢钠 18份、丙酮酸钠12份、转铁蛋白6份、氯化钾40份、无水硫酸镁8份、氯化钠75份、氯化锂6份、无水磷酸二氢钠12份、叶酸 0.4份、肌醇1份、烟酰胺0.5份、无水氯化钙30份、硝酸铁0.3份、丁二酸7份、丁二酸钠14份、D-泛酸钙 0.5份、酒石酸胆碱0.7份、核黄素0.2份、盐酸硫胺0.3份、盐酸吡哆辛 0.4份、4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.5份、亚麻油1.2份、聚脂肪酸酯1.2份、酚红钠1.2份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括5份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 8份、L-盐酸胱氨酸 6份、L-丝氨酸5份、甘氨酸4份、L-盐酸组氨酸5份、L-异亮氨酸12份、L-亮氨酸10份、L-盐酸赖氨酸16份、L-甲硫氨酸3份、L-苯丙氨酸6份、L-苏氨酸9份、L-色氨酸2份、L-酪氨酸6份和L-缬氨酸10份。
再，所述基础培养基还包括3份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子4份、白介素6 4份、白介素10 3份、白介素12 5份、TNF-β8份、GM-CSF3份。
此外，以重量组分计，所述基础培养基还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。
实施例4
一种方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，包括以下步骤：将冻存的MCF-7乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液的MCF-7乳腺癌细胞液完全融化，将MCF-7乳腺癌细胞液均匀加入到盛有7ml新鲜的MCF-7乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿5下，于37℃，5%CO2培养箱中培养。
其中，所述MCF-7乳腺癌细胞专用培养基包括90%的基础培养基以及10%的胎牛血清。此外，所述MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5份、羟甲基淀粉2份、山梨糖12份、维生素C4份、50%高渗葡萄糖2份、丙二醇1.2份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷1.5份和基础培养基90份。
其中，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 82份、碳酸氢钠 25份、丙酮酸钠16份、转铁蛋白5份、氯化钾40份、无水硫酸镁 6份、氯化钠78份、氯化锂6份、无水磷酸二氢钠12份、叶酸 0.4份、肌醇1.2份、烟酰胺0.3份、无水氯化钙28份、硝酸铁0.2份、丁二酸8份、丁二酸钠12份、D-泛酸钙 0.6份、酒石酸胆碱0.8份、核黄素0.1份、盐酸硫胺0.4份、盐酸吡哆辛 0.3份、4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.6份、亚麻油1.2份、聚脂肪酸酯0.8份、酚红钠1.3份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括5份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 5份、L-盐酸胱氨酸 8份、L-丝氨酸3份、甘氨酸4份、L-盐酸组氨酸 5份、L-异亮氨酸12份、L-亮氨酸7份、L-盐酸赖氨酸10份、L-甲硫氨酸6份、L-苯丙氨酸8份、L-苏氨酸9份、L-色氨酸2份、L-酪氨酸8份和L-缬氨酸8份。
再，所述基础培养基还包括2份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3份、白介素6 5份、白介素10 3份、白介素12 5份、TNF-β8份、GM-CSF5份。
此外，以重量组分计，所述基础培养基还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。
以上所述仅是发明的几个实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：包括以下步骤：将冻存的MCF-7乳腺癌细胞冻存管从液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min内于37℃摇晃至含有MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液的MCF-7乳腺癌细胞液完全融化，将MCF-7乳腺癌细胞液均匀加入到盛有7-9ml新鲜的MCF-7乳腺癌细胞专用培养基的细胞培养皿中，顺时针摇晃细胞培养皿3-5下，于37℃，5%CO2培养箱中培养；所述MCF-7乳腺癌细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5-15份、羟甲基淀粉2-5份、山梨糖3-12份、维生素C1-4份、50%高渗葡萄糖0.8-3份、丙二醇1-1.5份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.3-3份和基础培养基80-90份。
2.根据权利要求1所述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：所述MCF-7乳腺癌细胞专用培养基包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。
3.根据权利要求1或2所述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 80-90份、碳酸氢钠 10-20份、丙酮酸钠8-18份、转铁蛋白2-10份、氯化钾 30-50份、无水硫酸镁 5-12份、氯化钠60-80份、氯化锂3-10份、无水磷酸二氢钠 8-16份、叶酸 0.2-0.6份、肌醇0.5-1.5份、烟酰胺0.2-0.8份、无水氯化钙20-40份、硝酸铁0.1-0.5份、丁二酸 5-10份、丁二酸钠9-18份、D-泛酸钙 0.2-0.8份、酒石酸胆碱0.5-1份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.1-0.5份、盐酸吡哆辛 0.1-0.6份、4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.2-0.8份、亚麻油0.5-2份、聚脂肪酸酯0.5-1.8份、酚红钠0.8-1.5份和去离子水100份。
4.根据权利要求3所述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：所述基础培养基还包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 5-10份、L-盐酸胱氨酸 3-8份、L-丝氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-盐酸组氨酸 4-6份、L-异亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-盐酸赖氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-苏氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-缬氨酸8-12份。
5.根据权利要求4所述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：所述基础培养基还包括2-5份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3-8份、白介素6 2-5份、白介素10 1-4份、白介素12 3-6份、TNF-β2-10份、GM-CSF1-5份。
6.根据权利要求5所述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：以重量组分计，所述基础培养基还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。
7.根据权利要求6所述的方便快速的MCF-7乳腺癌细胞的复苏方法，其特征在于：所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。
CN201710525369.8A 2017-06-30 2017-06-30 一种方便快速的mcf‑7乳腺癌细胞的复苏方法 Pending CN107151657A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710525369.8A CN107151657A (zh) 2017-06-30 2017-06-30 一种方便快速的mcf‑7乳腺癌细胞的复苏方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710525369.8A CN107151657A (zh) 2017-06-30 2017-06-30 一种方便快速的mcf‑7乳腺癌细胞的复苏方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107151657A true CN107151657A (zh) 2017-09-12

Family

ID=59796187

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710525369.8A Pending CN107151657A (zh) 2017-06-30 2017-06-30 一种方便快速的mcf‑7乳腺癌细胞的复苏方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107151657A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114525251A (zh) * 2022-02-21 2022-05-24 广东粤微食用菌技术有限公司 一种3d乳腺癌细胞的体外快速培养方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
无: "DMEM细胞培养基的成分", 《HTTP://WWW.BIOMART.CN/EXPERIMENT/430/488/489/37921.HTM》 *
杨泽成: "布洛芬对人乳腺癌细胞系MCF-7的作用及其机制的实验研究", 《吉林大学 博士论文》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114525251A (zh) * 2022-02-21 2022-05-24 广东粤微食用菌技术有限公司 一种3d乳腺癌细胞的体外快速培养方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107027743B (zh) 细胞冻存液及细胞冻存方法
CN104663649B (zh) 人类卵母细胞冷冻保护剂
Määttä et al. Localization of MT1-MMP, TIMP-1, TIMP-2, and TIMP-3 messenger RNA in normal, hyperplastic, and neoplastic endometrium: enhanced expression by endometrial adenocarcinomas is associated with low differentiation
GB2427873A (en) Method for making high purity cardiomyocyte preparations suitable for regenerative medicine
Katsuoka et al. Transplantation of human renal cell carcinoma to the nude mice: as an intermediate of in vivo and in vitro studies
Johnson Aconitase
CN107094752A (zh) 一种肿瘤组织体外保存液及其制备方法
CN107151657A (zh) 一种方便快速的mcf‑7乳腺癌细胞的复苏方法
CN103782907B (zh) 一种小麦玉米杂交诱导单倍体胚的麦穗离体培养液配方及制备方法
CN107142241A (zh) 一种提高猪卵母细胞体外成熟质量和发育潜力的培养液及其培养方法
CN107164328A (zh) 一种高稳定性mcf‑7乳腺癌细胞的复苏方法
CN108450458A (zh) 一种无血清细胞冻存液
CN107151658A (zh) 一种快速mda‑mb‑231乳腺癌细胞的复苏方法
CA1054085A (en) Urokinase production
CN107164329A (zh) 一种mda‑mb‑231乳腺癌细胞的复苏方法
CN107094756A (zh) 一种高存活率mcf‑7乳腺癌细胞冻存液
CN107177554A (zh) 一种mcf‑7乳腺癌细胞扩大培养的方法
Minami et al. Creatine kinase and troponin after myocardial preservation using HTK solution (Custoidol) for clinical heart transplantation
NO168184B (no) Fremgangsmaate for aa oeke utbyttet av plasminogen aktivator
CN107183011A (zh) 一种mcf‑7乳腺癌细胞的冻存方法
CN107151650A (zh) 一种Vero细胞的复苏方法
CN107258768A (zh) 一种mda‑mb‑231乳腺癌细胞专用冻存液
CN107164311A (zh) 一种便捷、快速Vero细胞的复苏方法
CN107254445A (zh) 一种mcf‑7乳腺癌细胞专用培养基
Day Vitamin B6 and growth of excised tomato roots in agar culture

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170912