CN107119098A - 在发酵过程中添加生长因子生产β‑胡萝卜素及检测方法 - Google Patents

在发酵过程中添加生长因子生产β‑胡萝卜素及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107119098A
CN107119098A CN201710330349.5A CN201710330349A CN107119098A CN 107119098 A CN107119098 A CN 107119098A CN 201710330349 A CN201710330349 A CN 201710330349A CN 107119098 A CN107119098 A CN 107119098A
Authority
CN
China
Prior art keywords
parts
weight
growth factor
fermentation
carotene
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201710330349.5A
Other languages
English (en)
Inventor
乔长晟
张卫
刘珊珊
郝心怡
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Peiyang Biotrans Biotech Co Ltd
Original Assignee
Tianjin Peiyang Biotrans Biotech Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Peiyang Biotrans Biotech Co Ltd filed Critical Tianjin Peiyang Biotrans Biotech Co Ltd
Priority to CN201710330349.5A priority Critical patent/CN107119098A/zh
Publication of CN107119098A publication Critical patent/CN107119098A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P23/00—Preparation of compounds containing a cyclohexene ring having an unsaturated side chain containing at least ten carbon atoms bound by conjugated double bonds, e.g. carotenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明属于微生物发酵领域，尤其涉及一种在发酵过程中添加生长因子生产β‑胡萝卜素的方法，包括：（1）种子培养，（2）发酵培养：发酵培养26‑46h后，在三角瓶中加入生长因子0.5‑7mg后继续在摇床上震荡培养；β‑胡萝卜素含量的检测方法包括（A）标准曲线的绘制步骤和（B）β‑胡萝卜素含量的测定步骤；本发明采用生长因子替代了抗生素，解决了β‑胡萝卜素的生产过程中的抗生素残留问题，并且β‑胡萝卜素产量显著提高。

Description

在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素及检测方法
技术领域
本发明属于微生物发酵领域，尤其涉及一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法及β-胡萝卜素含量的检测方法。
背景技术
β-胡萝卜素是类胡萝卜素之一，其分子式为C40H55。β-胡萝卜素是食用橘黄色脂溶性化合物，其本身的颜色因浓度的差异，可涵盖由红色至黄色的所有色系，也是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素，在食品行业中得到了广泛的应用。β-胡萝卜素既是合成维生素A的前体物质，又是一种抗氧化剂，具有解毒作用，是维护人体健康不可缺少的营养物质，在抗癌、预防心血管疾病、白内障及抗氧化上具有显著的功能，进而防止老化和衰老引起的多种退化性疾病，因此，在医学界也受到了空前的关注。另外，β-胡萝卜素在饲料、化妆品等方面也具有重要用途。
鉴于β-胡萝卜素功用的多样性，对β-胡萝卜素的需求量也越来越大。目前，β-胡萝卜素的制备方法主要有植物提取法、化学合成法、微生物发酵法。植物提取法是指从胡萝卜等富含β-胡萝卜素的植物中提取β-胡萝卜素，植物原料中的β-胡萝卜素含量低，对原料的需求量大并且容易受到季节性的影响。化学合成法是以化学原料通过化学手段合成β-胡萝卜素的方法，尽管化学合成的β-胡萝卜素的纯度比较高，但是合成技术比较复杂。微生物发酵法是指以三孢布拉氏霉、 杜氏海藻、酵母等微生物发酵生产β-胡萝卜素，由于微生物生长繁殖速度快、含量高、不受季节影响并且具有制备工艺简单等优点，是一种较理想的β-胡萝卜素制备方法，其中，以三孢布拉氏霉发酵生产β-胡萝卜素最具工业应用前景。
公告号为CN 105368908A的中国专利提供了一种提高β-胡萝卜素产量的方法，包括种子培养和发酵培养，在发酵培养开始后的24-48h，加入抗生素溶液，每次1毫升，加两次，一共2毫升。这种方法是通过在发酵过程中添加抗生素，刺激MVA激酶活性，从而可以增加β-胡萝卜素前体物质异戊二烯焦磷酸(IPP)的合成，提高单位菌体合成β-胡萝卜素的产量。但是这种方法在发酵培养过程中添加了抗生素，抗生素在后期处理过程中很难完全处理干净，会有少量的抗生素残留在β-胡萝卜素中，人体或动物长期食用后容易产生耐药性问题，目前，行业内对这一问题并没有很好的解决方案。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，而提供一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法及β-胡萝卜素的含量检测方法，解决了β-胡萝卜素生产过程中的抗生素残留问题。
本发明所采用的技术方案为：
一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法，包括依次进行以下步骤：
(1)种子培养
将三孢布拉氏霉正菌活化后转接到三角瓶中进行种子培养，三孢布拉氏霉 负菌活化后转接到另一三角瓶中进行种子培养，三孢布拉氏霉正菌、负菌转接入的三角瓶中种子培养基的装液量为70-160mL，培养温度为23-32℃，摇床转速150-300rpm，培养时间为45-55h，分别得到三孢布拉氏霉正菌种子液与负菌种子液；
所述种子培养基按照重量份数计，包括2.5-4.0重量份玉米淀粉、1-3重量份黄豆饼粉、0.1-0.2重量份KH2PO4、0.003-0.007MgSO4、0.5-1.5重量份玉米浆、0.2-0.8重量份豆油、90-96重量份水；
(2)发酵培养
①将步骤(1)所得的三孢布拉氏霉正菌种子液与负菌种子液以发酵培养基2-18％的体积按正菌：负菌为1：1-1：7的比例接入到三角瓶中进行发酵培养，三角瓶中发酵培养基的装液量为70-160mL，培养温度为23-32℃，摇床转速150-300rpm；
发酵培养基按照重量份数计，包括2.5-3.5重量份玉米淀粉、1.5-2.5重量份黄豆饼粉、0.15-0.35重量份KH2PO4、0.005-0.015重量份MgSO4、2-4重量份豆油、1-3重量份玉米浆、0.001-0.01重量份维生素B1、0.1-0.5重量份柠檬酸三钠、0.05-0.15重量份曲拉通、0.01-0.1重量份BHT(2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚)、85-92重量份水，pH为7.0-8.0；
②发酵培养26-46h后，在三角瓶中加入生长因子0.5-7mg，继续在摇床上震荡培养72-120h，培养温度为23-32℃，摇床转速150-300rpm。
优选的，所述步骤①中，三孢布拉氏霉正菌种子液与负菌种子液以发酵培 养基10％的体积按正菌：负菌为1:4的比例接入到三角瓶中进行发酵培养。
优选的，所述步骤②中加入的生长因子为VB1、谷氨酸、尿嘧啶中的一种或几种；添加这三种生长因子能够干扰三孢布拉氏霉菌代谢途径，促进了β-胡萝卜素的合成。
优选的，所述步骤②中生长因子以水溶液的形式加入；与发酵培养基相适应，便于生长因子快速均匀分散在发酵培养基内，避免局部浓度过高。
优选的，所述步骤②中生长因子水溶液的体积为3-7mL。
优选的，所述步骤②中生长因子水溶液的浓度为0.1-1.5mg/L。
优选的，所述步骤②中，在发酵培养36h后加入生长因子,加入生长因子后继续在摇床上震荡培养96h。
优选的，所述步骤(1)中种子培养基的装液量与所述步骤(2)中发酵培养基的装液量均为100mL。
优选的，所述种子培养基按照重量份数计，包括3.5重量份玉米淀粉、2.3重量份黄豆饼粉、0.15重量份KH2PO4、0.0049重量份MgSO4、1重量份玉米浆、0.5重量份豆油、92.5451重量份水；通过此种种子培养基能够获得稳定高效的菌体种子；
所述发酵培养基按照重量份数计，包括3.0重量份玉米淀粉、2.0重量份黄豆饼粉、0.25重量份KH2PO4、0.0098重量份MgSO4、3.0重量份豆油、2.0重量份玉米浆、0.005重量份维生素B1、0.3重量份柠檬酸三钠、0.1重量份曲拉通、0.05重量份BHT、89.2852重量份水；通过此种发酵培养基能够获得稳 定高效的菌体。
所述种子培养基和发酵培养基中采用的玉米浆为工业玉米浆；其目的是为了节约生产成本。
所述种子培养基和发酵培养基中采用的水为去离子水；其目的是为了节约生产成本。
一种在发酵过程中添加生长因子生产的β-胡萝卜素含量的检测方法，包括如下步骤：
(A)标准曲线的绘制
a、用分析天平精确称取0.0100gβ-胡萝卜素标品，溶于100mL乙酸乙酯中；
b、精确量取1mL步骤a所得溶液，用乙酸乙酯定容至100mL，得到1mg/Lβ-胡萝卜素标液；
c、再分别取1,2,3,4,5,6,7,8,9mL步骤b所得β-胡萝卜素标液，分别用乙酸乙酯定容至10mL，以乙酸乙酯为空白样，分别于454nm处测其吸光值，得到一条标准曲线；
(B)β-胡萝卜素含量的测定
ⅰ、用滤布过滤步骤②所得发酵液，得到湿菌体；传统的方法是将菌体烘干后进行β-胡萝卜素含量的测定，处理时间长；本步骤采用滤布过滤，直接采用湿菌体进行β-胡萝卜素含量的测定，处理时间短；
ⅱ、精确取湿菌体0.03g，置于洗净的研钵中；
ⅲ、在阴暗避光的条件下，向研钵中加入2mL的乙酸乙酯，在通风橱中， 快速研磨至菌体无色；
ⅳ、将步骤ⅲ所得溶液全部吸取到25mL容量瓶中，乙酸乙酯定容，混匀；
ⅴ、精确吸取步骤ⅳ所得溶液1mL至10mL容量瓶，乙酸乙酯定容，摇匀；
ⅵ、以乙酸乙酯为空白样，用分光光度计在454nm处测其吸光值，并根据步骤c中所得标准曲线回归方程计算其β-胡萝卜素含量。
与传统工艺相比，本发明的有益效果在于：
1、本发明提供的β-胡萝卜素的生产方法，采用生长因子替代了抗生素，生长因子干扰了三孢布拉氏霉菌代谢途径，促进了β-胡萝卜素的合成，解决了抗生素残留难题；
2、利用抗生素溶液生产β-胡萝卜素，其产量为893.23mg/L；采用本发明中方法生产的β-胡萝卜素产量高达1280.58mg/L，β-胡萝卜素产量显著提高；
3、本发明中添加的生长因子-维生素B1、谷氨酸、尿嘧啶也为人体或动物生理代谢过程中的所需物质，即使在提取出的β-胡萝卜素中有痕量或少量残留，食用后可直接进入人体或动物内的生理代谢途径，供人体或动物利用，不仅不会危害人体或动物健康，还能补充人体或动物所需，反而更加有益于人体或动物健康；
4、本发明中选择生长因子中的维生素B1、谷氨酸、尿嘧啶，这三种生长因子对β-胡萝卜素产量的提高效果最为显著；
5、本发明提供了简便有效经济的发酵工艺，在不影响总蛋白质及碳水化合物合成的情况下，增加了单位菌体合成β-胡萝卜素的能力且代谢过程控制简单， 操作方便，易于实现工业化应用；
6、与传统β-胡萝卜素含量的检测方法相比，本发明中的β-胡萝卜素含量的检测方法，节省了检测时间，提高了检测效率。
附图说明
图1为本发明中标准曲线y＝0.1946x，R2＝0.9983的示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明：
一、实施例1-10
(1)种子培养
将三孢布拉氏霉正菌活化后转接到装有70-160mL种子培养基的三角瓶A中，三角瓶A的标注容量为250mL；将三孢布拉氏霉负菌活化后转接到装有70-160mL种子培养基的三角瓶B中，三角瓶B的标注容量为250mL；然后将三角瓶A、三角瓶B分别放置到摇床上于23-32℃震荡培养45-55h，摇床转速为150-300rpm；培养结束后，三角瓶A中得到三孢布拉氏霉正菌种子液，三角瓶B中得到三孢布拉氏霉负菌种子液；实施例1-10中种子培养阶段具体的培养条件见表1；
表1实施例1-10中三孢布拉氏霉正菌、负菌种子培养阶段培养条件明细表
种子培养基按照重量份数计，包括2.5-4.0重量份玉米淀粉、1-3重量份黄豆饼粉、0.1-0.2重量份KH2PO4、0.003-0.007MgSO4、0.5-1.5重量份工业玉米浆、0.2-0.8重量份豆油、90-96重量份去离子水，种子培养基的按照常规方法配置；其中，MgSO4采用MgSO4·7H2O，豆油采用金龙鱼大豆油；实施例1-10三角瓶A中种子培养基的配方明细见表2，实施例1-10三角瓶B中种子培养基的配方明细见表3；
表2实施例1-10三角瓶A中种子培养基的配方明细表
表3实施例1-10三角瓶B中种子培养基的配方明细表
(2)发酵培养
①将步骤(1)所得的三孢布拉氏霉正菌种子液与负菌种子液以发酵培养基2-18％的体积按三孢布拉氏霉正菌种子液体积：负菌种子液体积＝1：1-1：7的比例接入到三角瓶C中，三角瓶C中发酵培养基的装液量为70-160mL，三角瓶C的标注容量为250mL；然后将三角瓶C放置到摇床上于23-32℃震荡培养，摇床转速150-300rpm,实施例1-10中此步骤具体的培养条件见表4；
表4实施例1-10中步骤①的培养条件明细表
发酵培养基按照重量份数计，包括2.5-3.5重量份玉米淀粉、1.5-2.5重量份黄豆饼粉、0.15-0.35重量份KH2PO4、0.005-0.015重量份MgSO4、2-4重量份豆油、1-3重量份工业玉米浆、0.001-0.01重量份维生素B1、0.1-0.5重量份柠檬酸三钠、0.05-0.15重量份曲拉通、0.01-0.1重量份BHT、85-92重量份去离子水，pH为7.0-8.0，发酵培养基的按照常规方法配置；实施例1-10三角瓶C中发酵培养基的配方明细见表5；
表5实施例1-10三角瓶C中发酵培养基的配方明细表
②三角瓶C在摇床上震荡培养26-46h后，在三角瓶C中加入浓度为0.1-1.5mg/L的生长因子水溶液3-7mL，生长因子的总量为0.5-7mg,继续在摇床上于23-32℃震荡培养72-120h，摇床转速150-300rpm，得到发酵液；实施例1-10中此步骤具体的培养条件见表6。
表6实施例1-10中步骤②的培养条件明细表
二、β-胡萝卜素含量进行检测
以在发酵培养阶段添加抗生素溶液的发酵培养液为对照组，对照组发酵培养的具体操作步骤参见公开号为CN105368908A的专利申请文件；
对实施例1-10及对照组中发酵培养完毕的菌液的β-胡萝卜素的含量的进行检测，检测步骤如下：
(A)标准曲线的绘制
a、用分析天平精确称取0.0100gβ-胡萝卜素标品，溶于100mL乙酸乙酯中；
b、精确量取1mL步骤a所得溶液，用乙酸乙酯定容至100mL，得到1mg/Lβ-胡萝卜素标液；
c、再分别取1,2,3,4,5,6,7,8,9mL步骤b所得β-胡萝卜素标液，分别用乙酸乙酯定容至10mL，以乙酸乙酯为空白样，分别于454nm处测其吸光值，得到一条标准曲线；
(B)β-胡萝卜素含量的测定
ⅰ、用滤布过滤步骤②所得发酵液，得到湿菌体；
ⅱ、精确取湿菌体0.03g，置于洗净的研钵中；
ⅲ、在阴暗避光的条件下，向研钵中加入2mL的乙酸乙酯，在通风橱中，快速研磨至菌体无色；
ⅳ、将步骤ⅲ所得溶液全部吸取到25mL容量瓶中，乙酸乙酯定容，混匀；
ⅴ、精确吸取步骤ⅳ所得溶液1mL至10mL容量瓶，乙酸乙酯定容，摇匀；
ⅵ、以乙酸乙酯为空白样，用分光光度计在454nm处测其吸光值，并根据步骤c中所得标准曲线回归方程计算其β-胡萝卜素含量；具体检测结果见表7。
表7实施例1-10发酵培养完毕的菌液中β-胡萝卜素的含量明细表
注：①标准曲线公式中，y代表吸光值，x代表β-胡萝卜素的含量，R代表方差。
②抗生素溶液对照组的β-胡萝卜素产量的数值采用的是在发酵培养阶段添加抗生素溶液时,β-胡萝卜素产量的最高值。
根据表7中数据可知，在发酵培养阶段添加抗生素溶液时,β-胡萝卜素产量为893.23mg/L；而在发酵培养阶段添加生长因子时，β-胡萝卜素产量达到了925.56-1280.58mg/L，其产量明显提高，其中以添加VB1时效果最为显著，β-胡萝卜素产量高达1280.58mg/L，其产量提高了43.4％。
以上对本发明的10个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。

Claims (10)

1. 一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法，其特征在于，包括依次进行以下步骤：
（1）种子培养
将三孢布拉氏霉正菌活化后转接到三角瓶中进行种子培养，三孢布拉氏霉负菌活化后转接到另一三角瓶中进行种子培养，三孢布拉氏霉正菌、负菌转接入的三角瓶中种子培养基的装液量为70-160mL，培养温度为23-32℃，摇床转速150-300rpm，培养时间为45-55h，分别得到三孢布拉氏霉正菌种子液与负菌种子液；
所述种子培养基按照重量份数计，包括2.5-4.0重量份玉米淀粉、1-3重量份黄豆饼粉、0.1-0.2重量份KH2PO4、0.003-0.007 MgSO4、0.5-1.5重量份玉米浆、0.2-0.8重量份豆油、90-96重量份水；
（2）发酵培养
①将步骤（1）所得的三孢布拉氏霉正菌种子液与负菌种子液以发酵培养基2-18%的体积按正菌：负菌为1：1-1：7的比例接入到三角瓶中进行发酵培养，三角瓶中发酵培养基的装液量为70-160mL，培养温度为23-32℃，摇床转速150-300rpm；
发酵培养基按照重量份数计，包括2.5-3.5重量份玉米淀粉、1.5-2.5重量份黄豆饼粉、0.15-0.35重量份KH2PO4、0.005-0.015重量份MgSO4、2-4重量份豆油、1-3重量份玉米浆、0.001-0.01重量份维生素B1、0.1-0.5重量份柠檬酸三钠、0.05-0.15重量份曲拉通、0.01-0.1重量份BHT、85-92重量份水，pH为7.0-8.0；
②发酵培养26-46h后，在三角瓶中加入生长因子0.5-7mg，继续在摇床上震荡培养72-120h，培养温度为23-32℃，摇床转速150-300rpm。
2.根据权利要求1所述的一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤①中，三孢布拉氏霉正菌种子液与负菌种子液以发酵培养基10%的体积按正菌：负菌为1:4的比例接入到三角瓶中进行发酵培养。
3.根据权利要求1所述的一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤②中加入的生长因子为VB1、谷氨酸、尿嘧啶中的一种或几种。
4.根据权利要求1或3所述的一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤②中生长因子以水溶液的形式加入。
5.根据权利要求4所述的一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤②中生长因子水溶液的体积为3-7mL。
6.根据权利要求4所述的一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤②中生长因子水溶液的浓度为0.1-1.5mg/L。
7.根据权利要求1所述的一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤②中，在发酵培养36h后加入生长因子,加入生长因子后继续在摇床上震荡培养96h。
8.根据权利要求1所述的一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法，其特征在于：所述种子培养基按照重量份数计，包括3.5重量份玉米淀粉、2.3重量份黄豆饼粉、0.15重量份KH2PO4、0.0049重量份MgSO4、1重量份玉米浆、0.5重量份豆油、92.5451重量份水；所述发酵培养基按照重量份数计，包括3.0重量份玉米淀粉、2.0重量份黄豆饼粉、0.25重量份KH2PO4、0.0098重量份MgSO4、3.0重量份豆油、2.0重量份玉米浆、0.005重量份维生素B1、0.3重量份柠檬酸三钠、0.1重量份曲拉通、0.05重量份BHT、89.2852重量份水。
9.根据权利要求1所述的一种在发酵过程中添加生长因子生产β-胡萝卜素的方法，其特征在于：所述种子培养基和发酵培养基中采用的玉米浆为工业玉米浆；所述种子培养基和发酵培养基中采用的水均为去离子水。
10.一种在发酵过程中添加生长因子生产的β-胡萝卜素含量的检测方法，其特征在于：包括如下步骤
（A）标准曲线的绘制
a、用分析天平精确称取0.0100gβ-胡萝卜素标品，溶于100mL乙酸乙酯中；
b、精确量取1mL步骤a所得溶液，用乙酸乙酯定容至100mL，得到1mg/Lβ-胡萝卜素标液；
c、再分别取1,2,3,4,5,6,7,8,9mL步骤b所得β-胡萝卜素标液，分别用乙酸乙酯定容至10mL，以乙酸乙酯为空白样，分别于454nm处测其吸光值，得到一条标准曲线；
（B）β-胡萝卜素含量的测定
ⅰ、用滤布过滤步骤②所得发酵液，得到湿菌体；
ⅱ、精确取湿菌体0.03g，置于洗净的研钵中；
ⅲ、在阴暗避光的条件下，向研钵中加入2mL的乙酸乙酯，在通风橱中，快速研磨至菌体无色；
ⅳ、将步骤ⅲ所得溶液全部吸取到25mL容量瓶中，乙酸乙酯定容，混匀；
ⅴ、精确吸取步骤ⅳ所得溶液1mL至10mL容量瓶，乙酸乙酯定容，摇匀；
ⅵ、以乙酸乙酯为空白样，用分光光度计在454nm处测其吸光值，并根据步骤c中所得标准曲线回归方程计算其β-胡萝卜素含量。
CN201710330349.5A 2017-05-11 2017-05-11 在发酵过程中添加生长因子生产β‑胡萝卜素及检测方法 Withdrawn CN107119098A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710330349.5A CN107119098A (zh) 2017-05-11 2017-05-11 在发酵过程中添加生长因子生产β‑胡萝卜素及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710330349.5A CN107119098A (zh) 2017-05-11 2017-05-11 在发酵过程中添加生长因子生产β‑胡萝卜素及检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107119098A true CN107119098A (zh) 2017-09-01

Family

ID=59728218

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710330349.5A Withdrawn CN107119098A (zh) 2017-05-11 2017-05-11 在发酵过程中添加生长因子生产β‑胡萝卜素及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107119098A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107604036A (zh) * 2017-09-22 2018-01-19 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种制备β‑胡萝卜素的方法以及β‑胡萝卜素制品
CN109612957A (zh) * 2019-02-22 2019-04-12 济宁医学院 一种快速检测番茄红素的方法
CN114686378A (zh) * 2020-12-28 2022-07-01 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种三孢布拉氏霉全合成培养基及其应用、三孢布拉氏霉生产类胡萝卜素的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103276018A (zh) * 2013-05-28 2013-09-04 北京化工大学 一种提高三孢布拉氏霉菌发酵生产番茄红素的方法
CN105368909A (zh) * 2015-12-15 2016-03-02 天津北洋百川生物技术有限公司 提高β-胡萝卜素产量的方法
US20170081693A1 (en) * 2014-05-12 2017-03-23 Hochschule Anhalt Process for preparing carotenoids by submerged fermentation with mixed cultures of (+) and (-) strains of the fungus blakeslea trispora

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103276018A (zh) * 2013-05-28 2013-09-04 北京化工大学 一种提高三孢布拉氏霉菌发酵生产番茄红素的方法
US20170081693A1 (en) * 2014-05-12 2017-03-23 Hochschule Anhalt Process for preparing carotenoids by submerged fermentation with mixed cultures of (+) and (-) strains of the fungus blakeslea trispora
CN105368909A (zh) * 2015-12-15 2016-03-02 天津北洋百川生物技术有限公司 提高β-胡萝卜素产量的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHOUDHARI, S. M. ET AL.: "Use of metabolic stimulators and inhibitors for enhanced production of β-carotene and lycopene by Blakeslea trispora NRRL 2895 and 2896", 《BIORESOURCE TECHNOLOGY》 *
卫扬保: "《微生物生理学》", 30 June 1989, 高等教育出版社 *
姜丰等: "三孢布拉霉菌发酵生产番茄红素的最佳条件的筛选", 《黑龙江八一农垦大学学报》 *
林海: "《环境工程微生物学》", 31 October 2008, 冶金工业出版社 *
顾秋亚: "β-胡萝卜素高产菌株的选育及代谢调控的初步研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）基础科学辑》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107604036A (zh) * 2017-09-22 2018-01-19 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种制备β‑胡萝卜素的方法以及β‑胡萝卜素制品
CN107604036B (zh) * 2017-09-22 2020-10-02 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种制备β-胡萝卜素的方法以及β-胡萝卜素制品
CN109612957A (zh) * 2019-02-22 2019-04-12 济宁医学院 一种快速检测番茄红素的方法
CN114686378A (zh) * 2020-12-28 2022-07-01 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种三孢布拉氏霉全合成培养基及其应用、三孢布拉氏霉生产类胡萝卜素的方法
CN114686378B (zh) * 2020-12-28 2024-04-05 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种三孢布拉氏霉全合成培养基及其应用、三孢布拉氏霉生产类胡萝卜素的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Carvalho et al. Production of Monascus biopigments: an overview
CN104046671B (zh) 一种发酵生产唾液酸的方法
US10188596B2 (en) Omega-7 fatty acid composition, methods of cultivation of tribonema for production of composition and application of composition
JP6113808B2 (ja) 冬虫夏草の培養方法
CN1986822A (zh) 用寇氏隐甲藻发酵生产二十二碳六烯酸油脂的方法
CN107119098A (zh) 在发酵过程中添加生长因子生产β‑胡萝卜素及检测方法
CN105039236B (zh) 一种酵母菌富集铜离子的驯化培养和检测方法
CN102925504B (zh) 微生物发酵合成γ-氨基丁酸的方法及发酵培养基
CN104178430B (zh) 一种虾青素高产菌株及其应用
CN104087631B (zh) 一种深层液态发酵生产樟芝胞外多糖的方法
CN102674929B (zh) 一种桦褐孔菌的深层发酵培养基及其深层发酵方法
CN104893983B (zh) 液态发酵低桔霉素、高色价红曲红色素的制备方法及制品
CN109288014A (zh) 一种白果冠突散囊菌液态发酵的方法及其制备的产品和应用
CN104946699A (zh) 一种偶联原位萃取发酵红曲黄色素的双液相发酵方法
CN106715708A (zh) 通过使用三孢布拉霉菌正负菌株混合培养深层发酵制造类胡萝卜素的方法
Barner et al. Nutritional relationships in a new species of Blastocladiella
CN103374533B (zh) 一种鲁氏活性干酵母及生产方法，其制备的酱制品及方法
CN104893978B (zh) 一株雨生红球藻enn71及其培养方法与应用
CN109355321A (zh) 一种利用核桃壳提取液提高微藻油脂产率的方法
CN106010982A (zh) 一种麦角甾醇猴头菌液体深层培养方法
CN106636252B (zh) 干巴菌胞外多糖及其制备方法和应用
CN108588162A (zh) 一种采用工程菌规模化发酵培养制备人工熊胆粉的工艺
CN101928702A (zh) 制备纤维素酶的方法
CN114456988B (zh) 一种产山奈酚的功能菌群及其制备和应用
CN109673393A (zh) 一种蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的生产方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20170901