CN107115383A - 具有防治皮肤干燥综合征功效的皮肤养护/治疗组合物 - Google Patents
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Abstract
具有防治皮肤干燥综合征功效的皮肤养护/治疗组合物,以桂花寡糖为活性成分,重量组成为:桂花寡糖0.5%~20%,包括皮肤外用制剂可接受的辅料成分在内的辅助成分。实验表明,以本发明的该皮肤养护/治疗组合物制成的药物和/或化妆品制剂,可显著增加皮肤水分并有助于减少因皮肤水分过低导致的皮肤干燥、皮肤瘙痒、皲裂等皮肤干燥综合征。
Description
技术领域
本发明涉及一种可具有防治皮肤干燥综合征功效的皮肤养护/治疗组合物,可以作为对皮肤水分过少或易患干皮症的皮肤具有养护/治疗作用的外用药物或化妆品。
背景技术
皮肤干燥综合征是指皮肤因水分或脂质缺乏而产生的紧绷、脱屑、瘙痒等一系列症状,是一个全球性的疾病。
多个国家横断面调查显示,目前老年人皮肤干燥发生率在29.5%~85.5%之间。例如,德国开展的一项大样本多中心调查显示,医院和养老机构中老年人的皮肤干燥发生率分别为48.8%和52.6%,其中42.9%的皮肤干燥出现在小腿和足部,32.0%的皮肤干燥发生在手部和上肢,下肢皮肤干燥的发生率相对较高。法国进行的一项由全科医生开展的多中心横断面调查显示,轻中度皮肤干燥的总体发生率达55.6%,在男性和女性中的发生率分别为37.4%和62.6%,性别差异明显。澳大利亚调查显示,养老机构中老年人皮肤干燥发生率为29.5%。印度调查了数个三级诊疗中心,老年人皮肤干燥发生率高达85.5%。我国目前的相关调查较少或范围局限,仅检索到中国台湾地区南部针对养老机构398例老年人皮肤病现状的调查,皮肤干燥发生率为58.3%,小腿部位皮肤干燥发生率最高,与德国研究一致(戴付敏等,国外老年人皮肤干燥评估与干预的研究进展,中华护理杂志,2017,(01):53-58)。
皮肤干燥不仅可引起皮肤瘙痒、鱼鳞症等皮肤病,还显著降低老年人的生活舒适度,增加感染概率,减缓创面愈合速度,严重降低老年人的生活质量。
皮肤干燥综合征的发病原因,主要可与睡眠不足、年龄的增长、环境的影响以及不正常的饮食习惯等因素有关。睡眠不足使得血液循环变差,肌肤就会失去活力和滋润,导致皮肤干燥和粗糙;随着年龄的增长,皮脂分泌就会慢慢减少,从而导致皮肤保存水分的能力降低;环境的变化,尤其是在秋冬季,由于空气干燥,汗液和皮脂的分泌都会减少,而皮肤表面的水分也会大量的蒸发和流失,从而加速皮肤干燥的现象发生。不正常的饮食习惯也会使得皮肤无法得到充分的营养支撑,逐渐失去水分和弹性,变得干燥、脆弱(谭萍等,皮肤干燥综合征的护理,黑龙江医药科学,2012,(04):82)。
皮肤干燥虽不会直接威胁生命,但可间接降低人的生活舒适度和健康水平,增加身体、心理和经济负担。皮肤干燥若不及时发现、及早干预,将会出现脱皮、裂纹或演变为皮肤瘙痒症。若抓挠破损,则增加感染风险,且影响夜间睡眠,严重降低了人的生活质量。有研究表明,皮肤干燥是皮肤瘙痒的最主要原因,69%的皮肤瘙痒症老年患者的皮肤为中、重度干燥。干燥皮肤的自我修复能力减弱,皮肤创面(如压疮、划伤等)的愈合速度减慢,皮肤完整性长时间受损,导致感染风险增加。
人的皮肤需要保持一定量的水分,通常含水量保持在15~25%为正常,低于10%则属于皮肤干燥综合征。作为人体的第一道防线,人的皮肤可具有良好的防御能力,抵御外来物质通过皮肤进入体内,对人体造成可能的损害。而人体皮肤并不能从外界直接吸收水分。
皮肤干燥与水分从真皮层到角质层转运的能力、皮肤表面水分流失速度、角质层水分结合能力3个方面密切相关。对于皮肤干燥的外用防治方法,目前主要有以甘油、透明质酸为代表的补水产品和以羊毛脂、凡士林等为代表的油脂型产品为主。甘油是使用历史很长的补水剂,由于甘油本身的吸水性很强,使用时,甘油的浓度不能过高,否则反而会导致皮肤干燥。透明质酸是一种高分子量的多糖,吸水能力非常强,对皮肤有很强的滋润感。但是,透明质酸的分子量过大,并不能透过皮肤,故不能真正起到为皮肤补水的作用。透明质酸涂敷在皮肤表面,会形成一层膜,膜的外侧,水分会自然蒸发,而透明质酸本身也需要保持一定量的水分,自然蒸发掉的水分则会从内侧(皮肤)吸收补充。因此,长期使用透明质酸产品,不仅不能起到补水作用,反而可能导致皮肤更干燥。含羊毛脂或凡士林的产品,虽可以起到补充皮脂不足和皮肤滋润,并进而起到减少水分蒸发的作用。但这类产品并不能具有补水的作用。
发明内容
鉴于此,本发明提供了一种具有防治皮肤干燥综合征功效的皮肤养护/治疗组合物,可作为皮肤局部外用药物和/或化妆品等制剂形式使用,至少能显著增加局部皮肤的水分,并对因皮肤水分过少引致干燥综合征有辅助的治疗作用。
本发明具有防治皮肤干燥综合征功效的皮肤养护/治疗组合物中的基本活性成分,是桂花寡糖。
桂花是木樨科木犀属下众多树木的习称,代表物种木犀(Osmanthus fragrans(Thunb.) Lour.),又名桂花、岩桂、九里香等,常绿乔木或灌木,花冠合瓣四裂,形小。由于桂花显著的甜美芳香的气味和味道,其作为食品加工领域中的添加成分已有广泛的应用和悠久的历史。经过长期的人工栽培和自然杂交,目前已形成了多种栽培品种,如四季桂、金桂、丹桂和银桂等。我国现已登录的桂花栽培品种达150余个(刘玉莲:桂花品种资源及其分类研究,江苏林业科技,2000,(S1):26-31;臧德奎等:中国桂花的研究历史、现状与桂花品种国际登录,植物资源与环境学报,2003,(04):49-53;臧德奎等:桂花品种研究(英文),南京林业大学学报(自然科学版),2004(S1):7-13)。
寡糖一般是指2~9个单糖分子通过糖苷键连接而成的糖类物质,是动植物体内的重要代谢产物。现有研究表明,寡糖不仅是动植物体内的能量单位,也是生物体内承载生物信息传导的载体,同时还与蛋白结合构成糖蛋白,或与脂质结合构成糖脂质,是蛋白或脂质生理活性的重要组成部分。寡糖一般可具有多种生理活性,能促进体内菌群平衡,激活人体自我防卫系统,具有抗菌、抗过敏、抗病毒、抗肿瘤等作用。
桂花的花卉中含有一定量的寡糖成分。现有研究显示,尽管目前的桂花品种繁多,但在构成其特征性寡糖的组成上,实际并无本质差异。
桂花寡糖的制备方法,仅见由周奋进,黄静等报道的“均匀设计法优化桂花寡糖的提取工艺”(华西药学杂志,2017(01):63-66)。其原料包括了自然干燥的桂花干花、经超临界二氧化碳萃取桂花净油后的花渣、桂花鲜花、冷冻桂花或盐渍桂花经水蒸气蒸馏后干燥的花渣等。
本发明所述具有补水保湿功效的皮肤养护/治疗组合物的重量组成为:
桂花寡糖 0.5%~20%,
包括皮肤外用制剂可接受的辅料成分在内的辅助成分 余量。
作为本发明上述组合物中活性成分的桂花寡糖,一般情况下多为呈淡黄色至黄色的固体(颜色的深浅主要与制备方法及条件、过程有关,例如提取的温度高,则颜色较深;温度低,则颜色可较浅)。
在上述组成的基础上,本发明上述组合物中所述的活性成分除直接使用纯品形式的桂花寡糖外,也允许替换为不仅含有同样量桂花寡糖成分、同时还含有其他不会对活性成分的功效造成影响的非活性成分的桂花寡糖提取物。其中,所述桂花寡糖提取物中桂花寡糖活性成分的重量比例应不低于50%,更好的是以桂花寡糖提取物中桂花寡糖活性成分的重量比例不低于60%;最好其重量比例为不低于80%。
与目前各类药物/化妆品类似,为适应或满足不同使用对象的特点、个体实际情况、使用条件或环境等多方面的使用需求,上述皮肤养护/治疗组合物组成中所述的皮肤外用制剂可以接受的辅料成分,可以包括在外用药物和/或化妆品制剂中可以接受的各类辅料添加成分。例如,除作为最为普遍使用的水外,还可以分别选择如软化剂或润滑剂,增稠剂,表面活性剂或乳化剂,稳定剂或保存剂或防腐剂,皮肤渗透促进剂,角质蛋白溶解剂,防晒剂等常用辅料中的一种或几种成分的组合。其中,
软化剂或润滑剂,可包括常用的动物油、植物油或矿物油等油类物质,凡士林,石蜡,纯地蜡,天然地蜡,微晶蜡,全氢角鲨烯,二甲基聚硅氧烷,甲基苯基聚硅氧烷,硅氧烷-乙二醇共聚物,三酸甘油酯,乙酰化单酸甘油酯,乙氧化甘油酯,脂肪酸的烷基酯,脂肪酸和醇类,羊毛脂和羊毛脂衍生物,多元醇酯,甾醇,蜂蜡衍生物,多元醇和聚醚类,以及脂肪酸的酰胺等。可有助于软化皮肤角质层,滋润皮肤,减少皮肤水分蒸发。
增稠剂,可以包括如黄原胶、黄原胶盐水耐受剂、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、水溶乙烯基聚合物(carbopol)和阿拉伯树胶,以及铝硅酸镁盐或铝硅酸镁等,可有助于提高制剂使用时的延展性,方便涂抹。
保存剂(防腐剂)或稳定剂,可包括如烷醇,特别是乙醇、苯甲醇和苯氧乙醇,以及羟苯甲酸酯、山梨酸、山梨酸酯、山梨酸钾、咪唑烷基脲衍生物、碘丙炔醇丁基胺甲酸酯和异噻唑啉酮等。能抑制制剂中微生物的繁殖,保障制剂在限定保质期限内的品质。
角质蛋白溶解剂或脱落剂,可包括水杨酸、过氧化苯甲酰、曲酸苯醌、甘草衍生物、抗坏血酸及其衍生物(如抗坏血酰基磷酸镁)、甘油酸(glycerhetinic acid)及其衍生物等化妆品中常用的有助于改善或提高皮肤光亮性的成分。
皮肤渗透促进剂可包括如氮酮(月桂氮䓬酮),二甲基亚砜,N-甲基-2-吡咯烷酮,1-丁基-3-十二烷基-2-吡咯烷酮,1-己基-2-吡咯烷酮,1-月桂酰-2-吡咯烷酮,丙二醇, 油酸,吐温-80,吐温-60,司盘-60,卵磷脂,泊洛沙姆和卡波姆,冰片,薄荷脑等成分,有利于促进活性成分穿透皮肤,提高活性效果。
防晒剂可有如二氧化钛,氧化锌,对甲氧基肉桂酸异辛酯,二苯丙酮-1、二苯丙酮-2 和二苯丙酮-4,芦荟提取物,黄芩提取物等,有利于降低紫外线对皮肤的再损伤,保障活性成分的效果。
本发明上述皮肤养护/治疗组合物,可以制成目前已有报道/使用的不同类型/形式的皮肤外用药物和/或化妆品供使用,可包括水剂、喷剂、乳液剂、乳霜剂、乳膏剂、乳条剂、凝胶剂、软膏剂、胶布或贴布、巴布剂、脂质体调配物等形式的皮肤外用药物和/或化妆品制剂。例如,
乳霜膏形式的制剂,可以由所述比例的桂花寡糖形式提取物活性成分,与0.5~50(w)%(以下未特别说明时均为w%)的软化剂,0.1~6%的增稠剂,及余量部分的水共同组成;或者由所述比例的桂花寡糖形式提取物活性成分,与0.5~50%软化剂,0.1~30%的乳化剂,0.1~6%的增稠剂及余量部分的水共同组成。
微乳液形式的制剂,可以由所述比例的桂花寡糖形式提取物活性成分,与0.5~20%的凡士林等外用制剂中常用烃类成分,0.5~20%的霍霍巴油、橄榄油、大米油、玉米胚芽油等外用制剂中常用的一种或多种油类成分及余量部分的水共同组成;或由所述比例的桂花寡糖形式提取物活性成分,与0.5~15%的烃,1~15%的油,0.1~10%的甘油、1,3-丁二醇、丙二醇等外用制剂中常用的一种或多种脂肪醇成分,30%的吐温-80,吐温-60,司盘-60,卵磷脂等非离子表面活性剂,及余量部分的水共同组成。
乳液形式的制剂,可包括如常用的水包油型或油包水型乳液,以及如水/油/水型、油/水/硅氧烷流体型三重乳液等形式的多相乳液(可参照美国专利No.4254105、No.4960764等文献)。
临床实践中发现,不少皮肤干燥的患者,同时还可能会伴随有不同形式/程度的皮肤损伤或其他症状。因此,在上述组成的基础上,还可以根据中国药典规定允许的成分和/或用量的范围,进一步增加皮肤外用制剂中可以接受的包括抗生素类成分,抗/杀菌或真菌性成分,营养性成分(维生素、氨基酸),类视黄醇(retinoids)成分,抗过敏成分,H1和/或H2抗组胺成分,激素类成分,麻醉性成分等中的至少一种,作为辅助成分。其中,
抗生素类成分,可包括如红霉素、四环素、多西霉素、头孢菌素、青霉素、大环内酯类等;肽化合物中的新生霉素、万古霉素、竹桃霉素、巴龙霉素、桂晶白霉素等;带大环内酯分子的安福霉素、喹诺酮衍生物等;以及具有干扰细菌等微生物的细胞壁合成、膜功能、RNA代谢、嘌呤、嘧啶和蛋白质合成、呼吸或磷酸化作用等功能的化合物。
抗/杀真菌类成分,包括如克霉唑、酮康唑、咪康唑、萘替芳、托萘酯、两性霉素B、制霉菌素、5-氟胞嘧啶、灰黄霉素、卤普罗近等。
维生素类成分,包括如维生素B6、维生素B12、维生素D3、1,25-二羟基维生素D3、维生素B1、维生素B2、维生素K、维生素E、生育三烯酚类及其衍生物、烟酸及其酯类、泛酸及其酯类、泛醇、叶酸及其衍生物、胆碱、肉碱以及无正式维生素状态的物质,酶辅因子,以及如视黄醇、视黄酸、棕榈酸视黄基酯、丙酸视黄基酯、乙酸视黄基酯、异视黄酸及合成的类视黄素模拟物等可具有促进修复修复作用的类视黄醇化合物。
激素类成分,包括雌三醇、雌二醇、雌酮或缀合的雌激素组合成组合物;氢化可的松、羟基曲安西龙(hydroxytriamcilone)、α-甲基地塞米松、磷酸地塞米松、二丙酸氯地米松(beclamethasone dipropionate)、戊酸氢化可的松、氢化可的松环戊丙酸酯、泼尼松龙及其混合物(可优选泼尼松龙和氢化可的松)等皮质酮成分。在所述组合物中用量的比例范围一般可为0.025~10%,优选的范围是0.5-1%(重量%)。
氨基酸类成分,包括如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、丝氨酸、硫堇、蛋氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、组氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、色氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、肌酸、脯氨酸、3-或4-羟脯氨酸、5-羟赖氨酸、鸟氨酸及其衍生物、3-氨基丙酸,以及如氨基羧酸中的刀豆氨酸、副刀豆氨酸、高精氨酸、牛磺酸、氨基醛糖酸和氨基糖、氨基糖醛酸、氨基醛糖二酸、脱乙酰透明质酸、玻璃二糖醛酸(hyalobiuronic acid)、软骨胶素、脱硫肝素、神经氨酸或唾液酸、蛋氨酸砜、甘氨酰甘氨酸、软骨素、D,L-鞘氨醇、鞘磷脂、蛇肉肽、胰高血糖素、高肌肽、磷脂酰丝氨酸、可可基两性甘氨酸 (cocoamphoglycine)、磷脂酰乙醇胺、半胱亚磺酸、谷胱甘肽、两性无机氧化物、聚酰氨基胺、基于聚酰氨基胺的树枝状物、羟甲基甘氨酸钠和聚乙烯胺等,可以增强本发明上述组合物对皮肤的一般活性和温和性。
抗过敏剂和H1和/或H2抗组胺类成分,可包括如二苯基醇胺、克立咪唑(clomisole)、安他唑啉、噻苯哌胺、苄苯醇胺柠檬酸盐,以及三环抗过敏剂的酮替芬,二硫庚啶和硫庚啶(thiadene)中的3-噻吩基硫化物,H2受体阻滞剂,特别是布立马胺、甲硫米特和西咪替丁(cimetidien)、色甘酸(cromolic acid)及其盐等。
此外,针对与皮肤干燥同时伴随的不同现象和/或症状,在本发明上述形式的组合物基础上,还可以与本申请人已提供的其他不同形式桂花提取物的相应制剂,如桂花精油提取物、桂花净油提取物、含桂花精油的芳香水的制剂等配合使用,以获得全面综合缓解/治疗的更好效果。
对比实验结果显示,本发明上述形式的皮肤养护/治疗组合物,可以有效增加皮肤水分,对皮肤干燥具有显著的减轻效果,并对皮肤干燥症的治疗产生直接或间接的积极作用。
以下通过实施例的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更,均应包括在本发明的范围内。
具体实施方式
下述各实施例中所使用的桂花寡糖和桂花寡糖提取物样品,如非特别说明,均为采用上述周奋进,黄静等人“均匀设计法优化桂花寡糖的提取工艺”(华西药学杂志,2017,32(1):63-66)报道的方法,以四川成都地区产金桂的冷冻鲜花经超临界二氧化碳萃取后的花渣为原料,制备得到的桂花寡糖提取物(黄色固体,无气味,硫酸-丙酮法测定提取物中桂花寡糖的含量为70%)。将该桂花寡糖提取物经反相色谱分离,脱去大部分色素等杂质后,得到干燥的桂花寡糖(淡黄色固体,无气味,硫酸-丙酮法测定提取物中糖的含量为86%)。
所述的吸湿性(通常用吸湿率%来表示),代表了活性成分对水分的亲和能力及携带水的能力,吸湿性越好,则表示活性成分对水分的亲和能力及携带水的能力越强。吸湿性的测定受环境因素的影响严重,故相关实验分别是在相对湿度(RH)43%和81%的条件下进行测试。
所述的失水性(通常用失水率%来表示),代表了活性成分在充分吸水后,是否容易将所吸水分释放出来的能力。失水性越好,则表示活性成分能更好地将所吸收的水分释放出来,补水能力更强。
实施例1:桂花寡糖与透明质酸钠的吸湿性比较1
1. 试验样品:桂花寡糖(其中寡糖含量为86%)。
2. 对照样品:透明质酸钠(HA,华熙福瑞达生物医药有限公司生产,批号:1305093)。
3. 试验方法:在室温下,取试样样品和对照样品各0.5克,分别放入直径为30mm称量瓶中,精密称定,平行称取样品各3份。将所有样品放入底部放置有饱和碳酸钠溶液(相对湿度为43%)的密闭干燥器内,于放置第0小时、4小时、8小时、12小时、24小时、36小时和48小时,分别称量,记录数据。按下式计算吸湿率:
吸湿率(%)=(Mn-M0)/ M0×100%,
式中:M0为放置第0小时的质量;Mn为放置第n小时的质量。
4. 试验结果:见表1。
5. 试验结论:在相对湿度为43%的条件下,在4小时-12小时内,桂花寡糖和透明质酸钠样品的吸湿率比较,两者无显著性差异(p > 0.05);24小时-48小时,桂花寡糖和透明质酸钠样品的吸湿率均不断上升,但桂花寡糖的吸湿率明显高于透明质酸钠,两者之间有显著性差异(p < 0.05)。
实施例2:桂花寡糖与透明质酸钠的吸湿性比较2
1. 试验样品:同实施例1。
2. 对照样品:同实施例1。
3. 试验方法:称取样品方式同实施例1。将所有样品放入底部放置有饱和硫酸铵溶液(相对湿度为81%)的密闭干燥器内,于放置第0小时、4小时、8小时、12小时、24小时、36小时和48小时,分别称量,记录数据。吸湿率的计算同实施例1。
4. 试验结果:见表2。
5. 试验结论:在相对湿度为81%的条件下,在4小时-12小时内,桂花寡糖和透明质酸钠样品的吸湿率比较,两者无显著性差异(p > 0.05);24小时-48小时,桂花寡糖和透明质酸钠样品的吸湿率均不断上升,但桂花寡糖的吸湿率明显高于透明质酸钠,两者之间有显著性差异(p < 0.05)。
实施例3:桂花寡糖与甘油的失水率比较1
1. 试验样品:同实施例1。
2. 对照样品:甘油(>98%,厦门星鲨制药有限公司,批号:140901)。
3. 试验方法:
在室温下,取试样样品和对照样品各0.5克,分别放入直径为30mm称量瓶中,并加入1.0克蒸馏水水,振动溶解均匀后,精密称定。平行称取样品各3份。将称量后的称量瓶,放入40℃烘箱中,于放置第0小时、4小时、8小时、12小时、24小时和36小时,称量,记录数据。按下式计算失水率。
失水率(%)=(M0-Mn)/ M0×100%,
式中:M0为放置第0小时的质量,Mn为放置后第n小时的质量。
4. 试验结果:见表3。
5. 试验结论:40℃烘箱的条件下,在4小时-12小时内,桂花寡糖和甘油样品的失水率比较,两者无显著性差异(p >0.05);24小时-36小时,桂花寡糖和甘油样品的失水率均不断增加,但桂花寡糖的失水率明显高于甘油,两者之间有显著性差异(p <0.05)。
实施例4:桂花寡糖与甘油的失水率比较2
1. 试验样品:同实施例1。
2. 对照样品:甘油(>98%,厦门星鲨制药有限公司,批号:140901)。
3. 试验方法:
在室温下,取试样样品和对照样品各0.5克,分别放入直径为30mm称量瓶中,并加入1.0克蒸馏水,振动溶解均匀后,精密称定。平行称取样品各3份。将称量后的称量瓶,放入底部放置等量的变色硅胶的密封干燥器中,密封放置第0小时、4小时、8小时、12小时、24小时、36小时和48小时,称量,记录数据。按实施例3的公式计算失水率。
4. 试验结果:见表4。
5. 试验结论:在常温和有干燥剂的环境下,在4小时-12小时内,桂花寡糖失水率比甘油样品略高,但两者之间无显著性差异(p > 0.05);24小时-48小时,桂花寡糖和甘油样品的失水率均不断增加,但桂花寡糖的失水率明显高于甘油,两者之间有显著性差异(p< 0.05)。
实施例5:桂花寡糖的急性毒性试验
1. 试验样品:实施例1的桂花寡糖,真空冷冻干燥法干燥后,取6.25克桂花寡糖干品,溶解于25ml生理盐水中,配制成0.25g/ml的桂花寡糖试验样品液。
2. 试验动物:成年健康昆明小鼠(清洁级)18只,雌(♀)雄(♂)各半,体重20±2克(成都达硕实验动物有限公司,许可证编号:SCXK(川)2015-24)。
3. 试验环境:饲养实验室温度,室温22±2℃,相对湿度(RH)60±10%。雌雄动物分笼饲养,全价颗粒饲料喂养,自由饮水。在该环境中饲养3天,适应环境后,开始试验。试验前一天晚上5点开始禁食16小时,但不限制饮水。
4. 剂量设计:参照《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》及文献方法(石金金等,益母草成分盐酸水苏碱对小鼠的急性毒性研究,时珍国医国药,2015,(4):865-866;陈奇,中药药理研究方法学,人民卫生出版社,1991,p43)进行设计。
5. 急性毒性预试验:取昆明小鼠4只,按5g/kg的最大给药量法及样品配制浓度换算灌胃体积,并对小鼠进行灌胃,给药后24h内密切观察小鼠的行为活动。结果显示,小鼠的行为活动均表现正常,未出现小鼠死亡。故本试验采用小鼠最大给药量法,进行经口灌胃给药的急性毒性试验。
6. 观察指标:参照《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》及文献方法(肖小年等,薏苡仁油微乳对小鼠的急性毒性研究,南昌大学学报(理科版),2015,39(1):92-93),设计观察指标包括小鼠外观、行为、摄食、饮水、毛发、粪便等一般变化及小鼠体重、存活情况、死亡情况等。另外,于给药第0d、1d、4d、7d、10d和14d各称1次体重,记录体重变化情况。
7. 给药方法:试验当天,测量小鼠体重,按5g/kg最大给药量法及样品浓度换算灌胃体积,如小鼠体重25g,则灌胃药量为25g × 5g/kg = 0.125g,灌胃体积 = 灌胃药量/样品浓度 = 0.125g/0.25g/ml = 0.5ml。空白组小鼠给予盐水。给药后24h内严密观察,详细记录各组小鼠的活动状态、毒性症状、重度反应起始时间、严重程度、持续时间、恢复时间以及死亡动物数。
8. 急性毒性试验结果
1)小鼠一般状态观察结果:
各组连续观察14天,动物毛皮光滑,饮食、饮水、大小便正常,眼、鼻无分泌物,黏膜无充血,呼吸、心跳正常。观察期满后,小鼠解剖未见肉眼可见病理变化。心、肝、脾、肺、肾的外观正常。
2)小鼠的死亡情况:见表5。
3)小鼠体重变化测定结果:见表6。
小鼠的体重,给药后与给药前比较,无显著性差异(p > 0.05),雌雄组比较,也无显著性差异。各组小鼠的体质量增加趋势也无显著性差异(p > 0.05)。
9. 试验结论:桂花寡糖在最大给药剂量5g/kg经口灌胃的急性毒性试验结果表明,桂花寡糖无明显的经口急性毒性。
实施例6:桂花寡糖对皮肤刺激性/腐蚀性的试验
材料和方法:
1. 受试动物:健康新西兰大白兔4只,普通级,雌性,体重2.0~2.5kg,由四川省实验动物管委会养殖场提供(生产许可证号:SCXK(川)2.13-14)。由四川省实验动物管委会养殖场在温度23±20C,相对湿度50-80%,12/12小时明暗交替照明。单笼饲养,自主饮水,全价颗粒饲料喂养。试验前适应3天。
2. 试验样品:按实施例5制备的桂花寡糖干品,称取8.25g溶解在25ml生理盐水中,配制成0.33g/ml的试验样品。试样用量:0.5ml/2.5cm*2.5cm/只。
3. 试验方法:试验前约24小时,将实验动物背脊两侧毛减掉,不可损伤表皮,去毛范围左右各约为3×3cm。将试样0.5ml直接涂抹在皮肤上(面积约为2.5×2.5cm),每天涂抹1次,连续涂抹14天。从第2天开始,每次涂抹前剪毛,用温水清除残留受试物。1小时后观察结果,按《化妆品卫生规范》(2007年版)皮肤刺激性/腐蚀性试验表1评分,对照区和试验区同样处理。按照相应公式计算每天每只动物平均积分,以表1判定皮肤刺激强度。
4. 试验结果:见表7。
5. 试验结论:桂花寡糖对家兔的皮肤刺激性试验为无刺激性。
实施例7:桂花寡糖对眼睛的刺激性试验
1. 受试动物:健康新西兰大白兔4只,普通级,雌性,体重2.0~2.5kg,由四川省实验动物管委会养殖场提供(生产许可证号:SCXK(川)2.13-14)。由四川省实验动物管委会养殖场在温度23±20C,相对湿度50-80%,12/12小时明暗交替照明。单笼饲养,自主饮水,全价颗粒饲料喂养。试验前适应3天。试验前对实验动物的眼睛进行检查,检查结果显示所使用的动物均无眼刺激性症状,无眼角膜缺陷和结膜损伤。
2. 试验样品:按实施例5制备的桂花寡糖干品,称取3.3g溶解在10ml生理盐水中,配制成0.33g/ml的试验样品。
3. 试验方法:试验时,轻轻拉开动物眼睛的下眼睑,分别在左侧眼睛滴入桂花寡糖生理盐水溶液0.1ml,并使眼睛上下眼见闭合10s。右侧眼睛中则滴入生理盐水作为对照。
滴入受试样品24小时后,用生理盐水冲洗眼睛,冲洗后1h观察角膜、虹膜i、结膜情况,判断眼刺激反应积分,并判断眼刺激反应强度。1h后,按上述方法继续滴入受试样品,连续给药7天。
4. 判断标准:最后一次给药后,用生理盐水冲洗残留物,分别在1h、24h、48h和72h后,观察眼睛,并进行刺激评分。评分标准按《化妆品卫生规范》(2007年版)眼刺激性试验表进行评分,对照区和试验区同样处理。按照相应公式计算每天每只动物平均积分,以判定眼睛刺激强度。
5. 试验结果:见表8
6. 试验结论:桂花寡糖对家兔的眼睛刺激性试验为无刺激性。
实施例8:补水保湿霜(化妆品制剂)
组成:
组 成 | 克 |
桂花寡糖 | 5.0 |
硬脂酸(天津市鼎盛鑫化工有限公司,生产日期:2016年3月10日) | 8.0 |
羊毛脂(天津市致远化学试剂有限公司,生产日期:2016年4月10日) | 2.0 |
乳化剂(聚山梨醇-80,成都科龙化工试剂厂,批号:151201) | 1.5 |
防腐剂(杰马BP,上海同顶实业有限公司,批号:20160301) | 0.1 |
去离子水 | 加至100 |
制备方法:按常规化妆品制备方法,将上述组成中的硬脂酸、羊毛脂和聚山梨醇-80混合,70-80℃水浴加热熔化成液态(油相)。另将桂花寡糖,防腐剂加入到去离子水中,搅拌溶解均匀后,水浴加热至70-80℃(水相)。在保持70-80℃温度,并在搅拌下,缓慢将水相加入到油相中至乳化形成,待冷却后,混合均匀。即制得所述产品。
实施例9:补水保湿乳剂(化妆品制剂)
组成:
组 成 | 克 |
桂花寡糖 | 8.0 |
硬脂酸(同实施例8) | 2.0 |
1,3-丁二醇(美国OXEA,上海同顶实业有限公司,批号:20160115) | 1.0 |
木糖醇(山东福田药业有限公司,批号:116032307) | 0.5 |
乳化剂(同实施例8) | 1.5 |
防腐剂(同实施例8) | 0.1 |
去离子水 | 加至100 |
制备方法:按常规化妆品制备方法,将上述组成中的硬脂酸、木糖醇和乳化剂混合,70-80℃水浴加热熔化成液态,在保持70-80℃温度,并在搅拌下,加入20克的去离子水,搅拌至乳化完成,放冷。另将桂花寡糖,1,3-丁二醇和防腐剂加入到剩余的去离子水中,搅拌溶解均匀。将乳化完成的乳化液,加入到溶解了1,3-丁二醇和防腐剂的水中,搅拌均匀,即制得所述产品。
实施例10:补水保湿水(化妆品制剂)
组成:
组 成 | 克 |
桂花寡糖 | 10.0 |
防腐剂(同实施例8) | 0.1 |
去离子水 | 加至100 |
制备方法:将桂花寡糖、防腐剂直接加入到去离子水中,搅拌均匀,高温灭菌后,即得到所述产品。
实施例11:补水保湿凝胶(化妆品制剂)
组成:
组 成 | 克 |
桂花寡糖 | 15.0 |
甘油(厦门星鲨制药有限公司,批号:140901) | 6.0 |
卡波姆940(广州美懿生物科技有限公司,批号:160415) | 0.5 |
杰马BP(上海同顶实业有限公司,批号:20160301) | 0.1 |
三乙醇胺(成都市科隆化学品有限公司,批号:2016122101) | 0.5 |
含桂花精油的芳香水 | 加至100 |
制备方法:取卡波姆,加入甘油和70克芳香水,搅匀,使其充分溶胀,待用。另取桂花寡糖、杰马BP加入30克芳香水,搅拌溶解均匀后,加入到待用的卡波姆液中,搅拌均匀后,高温灭菌。冷却后,补加芳香水至100克,搅拌均匀,用三乙醇胺调节pH值至凝胶形成,即得所述凝胶产品。
实施例12:补水保湿软膏(药物制剂)
组成:
组 成 | 克 |
桂花寡糖提取物 | 18 |
丙二醇(同实施例1) | 6.0 |
十四酸异丙酯(广州美懿生物科技有限公司,批号:151205) | 4.0 |
十六醇(广州美懿生物科技有限公司,批号:151108) | 2.0 |
十八醇(广州美懿生物科技有限公司,批号:151221) | 1.5 |
失水山梨醇单硬脂酸酯(广州美懿生物科技有限公司,批号:151118) | 1.2 |
聚山梨醇80(同实施例1) | 1.0 |
无水亚硫酸钠(成都科龙化工试剂厂,批号:151016) | 0.8 |
防腐剂(同实施例1) | 0.2 |
纯化水 | 加至100 |
制备方法:按常规的皮肤外用药制备方法,将桂花寡糖提取物、聚山梨醇80、无水亚硫酸钠和防腐剂加入到40ml纯化水中,搅拌溶解后,加热至70-80℃,即得水相。另取丙二醇,十四酸异丙酯,十六醇,十八醇,失水山梨醇单硬脂酸酯混合,加热至70-80℃,即得油相,备用。将同温的水相缓慢加入到油相中,边加边搅拌至冷凝,即得所述的外用药膏。
实施例13:补水保湿巴布剂(药物制剂)
组成:
组 成 | 克 |
桂花寡糖提取物 | 20.0 |
甘油(南京化学试剂有限公司,批号:14072610893) | 14.0 |
1,3-丙二醇(上海凌峰化学试剂有限公司,批号:130815) | 3.0 |
聚丙烯酸钠(北京国人逸康科技有限公司,批号:20150227) | 1.8 |
卡波姆940(北京国人逸康科技有限公司,批号:20141205) | 0.3 |
甘羟铝(山西西岳制药有限公司,批号:150901) | 0.16 |
柠檬酸(南京化学试剂厂) | 0.32 |
明胶(国药集团化学试剂有限公司,批号:F20150713) | 1.5 |
高岭土(国药集团化学试剂有限公司,批号:F20150420) | 1.6 |
纯化水 | 加至150 |
制备方法:取处方量卡波姆加适量水静置,使其充分溶胀,作为I相。取处方量明胶加入适量水,自然溶胀,60 oC水浴溶解,加入溶解好的甘羟铝和柠檬酸溶液,混匀,作为II相。取处方量甘油和丙二醇,将聚丙烯酸钠和高岭土分散其中,作为III相。取桂花寡糖提取物,加入甘油5克,水适量,搅拌溶解,作为IV相。将IV相加入到I相中混匀后,加入III相混匀,再加入II相充分搅搅拌均匀后,用三乙醇胺调 pH 6-7,低速搅拌,至黏稠状半固态流体后立即涂布于无纺布上,干燥,加聚乙烯膜覆盖,即得所述的补水保湿巴布剂。
实施例14:对皮肤补水功效试验1
1. 试验样品:按实施例9方式制备成桂花寡糖的含量分别为0.5%,1%,5%,10%,15%,20%的补水保湿乳剂。空白对照物:为同样按实施例9方式制备的不含桂花寡糖的(以等量甘油替换含桂花寡糖)乳剂。
2. 试验对象:年龄为45岁~60岁的试验志愿者24人,其中女性15人,男性9人。
3. 试验方法、分组与观察时间:将24人随机分为2组,实验组20人,对照组4人。将试验样品2-3ml直接喷涂在小腿部位1次,轻轻拍打至吸收后,分别在5分钟、10分钟、30分钟和60分钟进行皮肤水分测试。
试验结果判断标准:用皮肤测试仪对涂抹部位进行皮肤水分测定,比较皮肤含水量。
4. 试验结果:见表9
5. 试验结论:桂花寡糖的含量在0.5%~1.0%时,有一定补充皮肤水分的作用,但作用不明显。含量在5%~20%时,补充皮肤水分的作用明显。
实施例15:对皮肤补水功效试验2
1. 试验样品:按实施例9的方法进行制备,制备过程中用桂花寡糖提取物替换桂花寡糖,按桂花寡糖提取物中桂花寡糖的含量折算后,分别配制成为含桂花寡糖0.5%,1%,5%,10%,15%,20%的补水保湿乳剂。空白对照物:为同样按实施例9方式制备的不含桂花寡糖提取物的(以等量甘油替换含桂花寡糖提取物)乳剂。
2. 试验对象:年龄为45岁~60岁的试验志愿者24人,其中女性15人,男性9人。
3. 试验方法、分组与观察时间:将24人随机分为2组,实验组20人,对照组4人。将试验样品2-3ml直接喷涂在小腿部位1次,轻轻拍打至吸收后,分别在5分钟、10分钟、30分钟和60分钟进行皮肤水分测试。
试验结果判断标准:用皮肤测试仪对涂抹部位进行皮肤水分测定,比较皮肤含水量。
4. 试验结果:见表10
5. 试验结论:桂花寡糖提取物中桂花寡糖的含量在0.5%~1.0%时,有一定补充皮肤水分的作用,但作用不明显。含量在5%~20%时,补充皮肤水分的作用明显。桂花寡糖提取物与桂花寡糖的补水效果基本一致。
实施例16:与现有补水产品的对比试验
1. 试验样品:按实施例9方式制备成桂花寡糖的含量为10%的补水保湿乳剂。
2. 对照样品:百雀羚草本水嫩倍现保湿精华乳液(上海百雀羚日用化学有效公司,生产日期:20161123)
3. 试验对象:年龄为45岁~60岁的试验志愿者12人,其中女性8人,男性4人。
4. 试验方法、分组与观察时间:将12人随机分为2组,实验组6人,对照组6人。将试验样品2-3ml直接喷涂在小腿部位1次,轻轻拍打至吸收后,分别在5分钟、10分钟、30分钟和60分钟进行皮肤水分测试。
试验结果判断标准:用皮肤测试仪对涂抹部位进行皮肤水分测定,比较皮肤含水量。
5. 试验结果:见表11
6. 试验结论:两种产品均有良好的补水效果,但含桂花寡糖的乳液在使用后39分钟以上的补水效果更明显(p<0.05)。
Claims (9)
1.具有防治皮肤干燥综合征功效的皮肤养护/治疗组合物,其特征是以桂花寡糖为活性成分,其重量组成为:
桂花寡糖 0.5%~20%,
包括皮肤外用制剂可接受的辅料成分在内的辅助成分 余量。
2.如权利要求1所述的皮肤养护/治疗组合物,其特征是所述组成中桂花寡糖活性成分的重量含量为5%~20%。
3.如权利要求1所述的皮肤养护/治疗组合物,其特征是所述的活性成分允许替换为其中含有同样量桂花寡糖成分的桂花寡糖提取物。
4.如权利要求3所述的皮肤养护/治疗组合物,其特征是所述桂花寡糖提取物中桂花寡糖成分的重量比例≥50%。
5.如权利要求4所述的皮肤养护/治疗组合物,其特征是所述桂花寡糖提取物中桂花寡糖成分的重量比例≥60%。
6.如权利要求5所述的皮肤养护/治疗组合物,其特征是所述桂花寡糖提取物中桂花寡糖成分的重量比例≥80%。
7.如权利要求1至6之一所述的皮肤养护/治疗组合物,其特征是所述的皮肤外用制剂可接受的辅料成分为润滑剂,增稠剂,表面活性剂或乳化剂,稳定剂或保存剂或防腐剂,皮肤渗透促进剂,角质蛋白溶解剂,防晒剂中的至少一种。
8.如权利要求1至6之一所述的皮肤养护/治疗组合物,其特征是所述的辅助成分包括抗生素类成分,抗/杀菌或真菌性成分,营养性成分,类视黄醇,抗过敏成分,H1和/或H2抗组胺成分,激素类成分中的至少一种。
9.如权利要求1至8之一所述的皮肤养护/治疗组合物,其特征是为包括水剂、乳液、乳霜、乳膏、凝胶、喷剂、脂质体调配物形式的皮肤外用药物和/或化妆品制剂。
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