CN107094797A - 一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺 - Google Patents
一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107094797A CN107094797A CN201710158346.8A CN201710158346A CN107094797A CN 107094797 A CN107094797 A CN 107094797A CN 201710158346 A CN201710158346 A CN 201710158346A CN 107094797 A CN107094797 A CN 107094797A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- addition
- solution
- cultured
- fermented
- volume ratio
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 title claims abstract description 9
- 238000013329 compounding Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims abstract description 44
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 26
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 claims abstract description 25
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 23
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 23
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 9
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 28
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 23
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 12
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 10
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 10
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 10
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 7
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000306 component Substances 0.000 claims description 5
- 229910052564 epsomite Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000012533 medium component Substances 0.000 claims description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 5
- IQXJCCZJOIKIAD-UHFFFAOYSA-N 1-(2-methoxyethoxy)hexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOCCOC IQXJCCZJOIKIAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229950009789 cetomacrogol 1000 Drugs 0.000 claims description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 4
- 238000012549 training Methods 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NJCUSQKMYNTYOW-MWUYRYRWSA-N enramicina Chemical compound O.N1C(=O)NC(=O)C(C=2C=C(Cl)C(O)=C(Cl)C=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC2N=C(N)NC2)NC(=O)C(CCCNC(N)=O)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)N(CCCCN)C(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)/C=C/C=C/CCCCC(C)CC)C(C)OC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(C)NC(=O)C1CC1CNC(N)=N1 NJCUSQKMYNTYOW-MWUYRYRWSA-N 0.000 claims description 3
- 229950003984 enramycin Drugs 0.000 claims description 3
- 108700041171 enramycin Proteins 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 claims 1
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 claims 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 claims 1
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 claims 1
- SEGLCEQVOFDUPX-UHFFFAOYSA-N di-(2-ethylhexyl)phosphoric acid Chemical compound CCCCC(CC)COP(O)(=O)OCC(CC)CCCC SEGLCEQVOFDUPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Inorganic materials [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 13
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 241000726221 Gemma Species 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 5
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 2
- WFJIVOKAWHGMBH-UHFFFAOYSA-N 4-hexylbenzene-1,3-diol Chemical compound CCCCCCC1=CC=C(O)C=C1O WFJIVOKAWHGMBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000012174 chinese wax Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- A01N43/04—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom
- A01N43/14—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings
- A01N43/16—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings with oxygen as the ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/48—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
- A01N43/50—1,3-Diazoles; Hydrogenated 1,3-diazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
- A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
- A01N47/10—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof
- A01N47/12—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof containing a —O—CO—N< group, or a thio analogue thereof, neither directly attached to a ring nor the nitrogen atom being a member of a heterocyclic ring
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺。将蜡样芽孢杆菌活化培养,然后将活化液等体积接种于发酵培养基中,发酵培养,发酵培养8~11h添加糖和无机盐,发酵培养20~25h添加多元醇、氨基酸和抗菌素溶液,搅拌均匀后进行喷雾干燥,得到蜡样芽孢杆菌活菌‑抗生素复配制剂。本方法工艺简单,生产周期短,操作简便,解决了常规方法生产的蜡样芽孢杆菌生物农药制剂活力低的问题,提高菌体存活率和对农作物的抑菌效率,适合大批量生产,具有很高的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术、农业领域,尤其涉及的是一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺。
背景技术
近两百年来,工业技术革命引发了农业科技革命,化肥、农药、机械和电力进入原有的以可再生的生物质物质能量循环为基础的闭合式体系,产生了工业化的农业——“近代农业”。近代农业的发展极大促进了农村及社会经济的进步。然而,一系列不可修复的问题随之涌现:农村及城镇生态环境严重破坏,植物病虫害抗药性增强,部分生物种群濒临灭绝,食品内化肥农药残留使人类摄入过量引发疾病。科技与生产、人类与自然的关系极不和谐,资源、环境和生态问题已成为中国这样一个农业大国可持续发展的主要瓶颈,也是世界各国面临的一个严峻挑战。当以生物技术和信息技术为主导的新农业革命成为新的科技驱动时,农业科技不再只是化肥农药的事了。传统的“天、地、人合一”的农业理念重被拾起,生物防治作为减少化学药剂的一种有效方式,从“被遗忘的角落”重返“历史的舞台”。现代生物技术手段正成为人类改变非良性农业循环模式的一把利刃,极大缓解了科技与生产、人类与自然的突出矛盾。生物防治作为减少化学农药的一种有效方式越来越受到重视,开发低毒、高效、无残留的生物农药已经是一项紧迫的任务。
蜡样芽孢杆菌能促进植物生长且对多种植物病害有明显的抑制作用,能在植物活体内定植,对寄主植物不产生任何危害并与其建立和谐关系,促进植物生长,减少病害虫害,提高植物抵御不良环境的能力并减少化肥使用量。
蜡样芽孢杆菌在菌剂加工过程中存在着菌体死亡率高的问题,加工的粉剂和液体制剂在储存中存在芽孢存活率低、抑菌率低、货架期短的问题,而且单个蜡样芽孢杆菌制剂抑菌效率低。在发酵工业中,为了延长菌体的寿命,增加生物农药制剂抑菌效率,对菌体采用干燥和抗菌素复配措施。
发明内容
本发明的目的是为了改进现有技术的不足而提供一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺。
本发明的技术方案为:一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺,其具体步骤为:(1)活化培养:将蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CMCC63305的1~2个菌落接入活化培养基中,控制培养液体积装液量为10~20%,活化培养温度为30~40℃,pH为6.5~8.5,转速为160~200 r/min,活化培养10~20h得活化液;(2)发酵培养:将活化液等体积接种于发酵培养基中,控制发酵培养温度为30~40℃,pH为6.5~8.5,转速为160~200r/min,通气速率0.5~2.0vvm,发酵培养8~11h添加糖和无机盐,发酵培养20~25h添加多元醇、氨基酸和抗菌素溶液,搅拌均匀后进行喷雾干燥。
优选步骤(1)中所述的活化培养基成分为:葡萄糖5.0~20.0g/L、蛋白胨5.0~10.0g/L、酵母膏3.0~8.0g/L和NaCl 3.0~8.0g/L。
优选步骤(2)中发酵培养基成分为:葡萄糖5.0~20.0g/L、蛋白胨 5.0~15.0g/L、酵母膏3.0~8.0g/L、NaCl 3.0~8.0g/L、MgSO4·7H2O 0.1~1.5g/L和KH2PO4 1.0~5.0g/L。
优选步骤(2)中添加的糖为葡萄糖、蔗糖或乳糖的一种或多种;糖的添加量与发酵液的体积比为2.5~6.5g/L。
优选步骤(2)中添加的无机盐为氯化钠、磷酸二氢钾或氯化钙的一种或多种;无机盐的添加量与发酵液的体积比为0.01~0.03g/L。
优选步骤(2)中添加的多元醇为聚乙二醇1000、山梨醇或甘油的一种或多种;多元醇的添加量与发酵液的体积比为4.5~7.5g/L。
优选步骤(2)中添加的氨基酸为精氨酸或赖氨酸的一种或两种;氨基酸的添加量与发酵液的体积比为2.5~5.5g/L。
优选步骤(2)中添加的抗菌素溶液为多抗菌素溶液、安来霉素溶液或井冈霉素溶液的一种或多种;抗菌素溶液浓度为 1500~1800mg/L;抗菌素溶液的添加量与发酵液的体积比为 6.5~10.5g/L。
优选步骤(2)中喷雾干燥采用压力式喷嘴雾化,参数为:进风口温度为100~150℃,喷口压力为10~20MPa,容积干燥强度为 3~6kg/(m3·h),出风口温度为50~60℃,流化层高度为200~300mm,运行时间2~3min。
本发明所述的蜡样芽孢杆菌,其分类命名为蜡样芽孢杆菌,菌种的拉丁学名是Bacillus cereus,参据的微生物:NJYH63305,保藏日期是2010年11月15日,保藏中心登记入册编号是CGMCC No.4348.
蜡样芽孢杆菌具有下述性质:
(1)形态与培养特征:
在固体平板上37℃培养,15~30h形成脱落的芽孢,到30~40h芽孢大部分脱落。菌体呈链状杆菌,菌体大小1.0um×3.0um,椭圆形芽孢,芽孢位于杆菌中心或稍微偏向一端,大小1.0um×1.8um。在肉汤培养基上生长浑浊并产生菌膜;在营养琼脂上37℃培养24h,形成圆形凸起菌落,菌落边缘整齐,呈乳白色、不透明,菌落表面呈毛玻璃状,迎光呈白蜡样。
(2)生理生化特性:
主要生理生化特征见表1:
表1菌株的生理生化特征
注:+:阳性或生长;-:阴性或不生长
有益效果:
本发明得到蜡样芽孢杆菌活菌-抗生素复配制剂,显著提高菌体存活率和对农作物的抑菌效率。本方法工艺简单,生产周期短,操作简便,解决了常规方法生产的蜡样芽孢杆菌生物农药制剂活力低的问题,更加适用于工业化生产的需求。
保藏信息
上述的蜡样芽孢杆菌,其分类命名为蜡样芽孢杆菌,菌种的拉丁学名是Bacilluscereus,参据的微生物:NJYH63305,该菌株是由本实验室选育并保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物所),其简称为 CGMCC,保藏日期是2010年11月15日,保藏中心登记入册编号是 CGMCC No.4348。
具体实施方式
以下结合实例来进一步解释本发明,但实施案例并不对本发明做任何形式的限定。
实施例1:
(1)活化培养:将蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CMCC63305的1个菌落接入活化培养基中,控制培养液体积装液量为10%,活化培养温度为30℃,pH为6.5,转速为160r/min,活化培养10h。活化培养基成分为(g/L):葡萄糖5.0、蛋白胨5.0、酵母膏3.0、NaCl 3.0。
(2)发酵培养:将活化液等体积接种于发酵培养基中,改变发酵条件,使得发酵培养温度为30℃,pH为6.5,转速为160r/min,通气速率0.5vvm,发酵培养8h添加糖和无机盐,发酵培养20h添加多元醇、氨基酸、抗菌素溶液,搅拌均匀后进行喷雾干燥。发酵培养基成分为(g/L):葡萄糖5.0、蛋白胨5.0、酵母膏3.0、NaCl 3.0、MgSO4·7H2O 0.1、KH2PO4 1.0。糖为葡萄糖,添加量与发酵液的体积比为2.5g/L。无机盐为氯化钠和磷酸二氢钾,体积比为1:1,总添加量与发酵液的体积比为0.01g/L。多元醇为聚乙二醇1000和山梨醇,体积比为1: 1,总添加量与发酵液的体积比为4.5g/L。氨基酸为精氨酸,添加量与发酵液的体积比为2.5g/L;抗菌素溶液为多抗菌素溶液,浓度为 1500mg/L,添加量与发酵液的体积比为6.5g/L;喷雾干燥的参数为:进风口温度为100℃,喷口压力为10MPa,容积干燥强度为3kg/(m3·h),出风口温度为50℃,流化层高度约200mm,运行时间2min。
(3)结果:所得制剂经稀释平板计数后计算,菌体存活率达65%,与蜡样芽孢杆菌经常规液体发酵后直接进行喷雾干燥相比,存活率提高15%。在农业生产中,以200g/(hm2)的剂量进行叶面喷雾,对农作物的抑菌作用达65%,与单纯使用蜡样芽孢杆菌制剂抑菌效率提高 15%。
实施例2:
(1)活化培养:将蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CMCC63305的2个菌落接入活化培养基中,控制培养液体积装液量为15%,活化培养温度为35℃,pH为7.0,转速为180r/min,活化培养15h。活化培养基成分为(g/L):葡萄糖10.0、蛋白胨6.0、酵母膏5.0、NaCl5.0。
(2)发酵培养:将活化液等体积接种于发酵培养基中,改变发酵条件,使得发酵培养温度为35℃,pH为7.0,转速为180r/min,通气速率1.5vvm,发酵培养9h添加糖和无机盐,发酵培养22h添加多元醇、氨基酸、抗菌素溶液,搅拌均匀后进行喷雾干燥。发酵培养基成分为(g/L):葡萄糖15.0、蛋白胨10.0、酵母膏5.0、NaCl 5.0、MgSO4·7H2O 0.8、KH2PO4 2.5;糖为蔗糖和乳糖,体积比为1:1,总添加量与发酵液的体积比为4.5g/L。无机盐为磷酸二氢钾和氯化钙,体积比为1:1,总添加量与发酵液的体积比为0.02g/L。多元醇为聚乙二醇1000和甘油,体积比为1:1,总添加量与发酵液的体积比为6.0g/L。氨基酸为赖氨酸,添加量与发酵液的体积比为4.5g/L。抗菌素溶液为等浓度的多抗菌素和井冈霉素混合溶液,体积比为1:1,总浓度为1650mg/L,混合溶液添加量与发酵液的体积比为8.5g/L。喷雾干燥的参数为:进风口温度为130℃,喷口压力为15MPa,容积干燥强度为4.5kg/(m3·h),出风口温度为55℃,流化层高度约250mm,运行时间2.5min。
(3)结果:所得制剂经稀释平板计数后计算,菌体存活率达85%,与蜡样芽孢杆菌经常规液体发酵后直接进行喷雾干燥相比,存活率提高35%。在农业生产中,以200g/(hm2)的剂量进行叶面喷雾,对农作物的抑菌作用达80%,与单纯使用蜡样芽孢杆菌制剂抑菌效率提高 30%。
实施例3:
(1)活化培养:将蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CMCC63305的2个菌落接入活化培养基中,控制培养液体积装液量为20%,活化培养温度为40℃,pH为8.5,转速为200r/min,活化培养20h。活化培养基成分为(g/L):葡萄糖20.0、蛋白胨10.0、酵母膏8.0、NaCl8.0。
(2)发酵培养:将活化液等体积接种于发酵培养基中,改变发酵条件,使得发酵培养温度为40℃,pH为8.5,转速为200r/min,通气速率2.0vvm,发酵培养11h添加糖和无机盐,发酵培养25h添加多元醇、氨基酸、抗菌素溶液,搅拌均匀后进行喷雾干燥。发酵培养基成分为(g/L):葡萄糖20.0、蛋白胨15.0、酵母膏8.0、NaCl 8.0、 MgSO4·7H2O 1.5、KH2PO4 5.0;糖为乳糖,添加量与发酵液的体积比为6.5g/L。无机盐为氯化钠和氯化钙,体积比为1:1,总添加量与发酵液的体积比为0.03g/L。多元醇为山梨醇和甘油,体积比为1:1,总添加量与发酵液的体积比为7.5g/L;氨基酸为赖氨酸,添加量与发酵液的体积比为5.5g/L;抗菌素溶液为等浓度的多抗菌素溶液和安来霉素溶液的混合溶液,体积比为1:1,混合溶液浓度为1800mg/L,混合溶液的添加量与发酵液的体积比为10.5g/L;喷雾干燥的参数为:进风口温度为150℃,喷口压力为20MPa,容积干燥强度为6kg/(m3·h),出风口温度为60℃,流化层高度约300mm,运行时间3min。
(3)结果:所得制剂经稀释平板计数后计算,菌体存活率达70%,与蜡样芽孢杆菌经常规液体发酵后直接进行喷雾干燥相比,存活率提高20%。在农业生产中,以200g/(hm2)的剂量进行叶面喷雾,对农作物的抑菌作用达70%,与单纯使用蜡样芽孢杆菌制剂抑菌效率提高 20%。
Claims (9)
1.一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺,其具体步骤为:
(1)活化培养:将蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CMCC63305的1~2个菌落接入活化培养基中,控制培养液体积装液量为10~20%,活化培养温度为30~40℃,pH为6.5~8.5,转速为160~200r/min,活化培养10~20h得活化液;
(2)发酵培养:将活化液等体积接种于发酵培养基中,控制发酵培养温度为30~40℃,pH为6.5~8.5,转速为160~200r/min,通气速率0.5~2.0vvm,发酵培养8~11h添加糖和无机盐,发酵培养20~25h添加多元醇、氨基酸和抗菌素溶液,搅拌均匀后进行喷雾干燥。
2.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于:步骤(1)中所述的活化培养基成分为:葡萄糖5.0~20.0g/L、蛋白胨5.0~10.0g/L、酵母膏3.0~8.0g/L和NaCl 3.0~8.0g/L。
3.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于:步骤(2)中发酵培养基成分为:葡萄糖5.0~20.0g/L、蛋白胨5.0~15.0g/L、酵母膏3.0~8.0g/L、NaCl 3.0~8.0g/L、MgSO4·7H2O0.1~1.5g/L和KH2PO4 1.0~5.0g/L。
4.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于:步骤(2)中添加的糖为葡萄糖、蔗糖或乳糖的一种或多种;糖的添加量与发酵液的体积比为2.5~6.5g/L。
5.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于:步骤(2)中添加的无机盐为氯化钠、磷酸二氢钾或氯化钙的一种或多种;无机盐的添加量与发酵液的体积比为0.01~0.03g/L。
6.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于:步骤(2)中添加的多元醇为聚乙二醇1000、山梨醇或甘油的一种或多种;多元醇的添加量与发酵液的体积比为4.5~7.5g/L。
7.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于:步骤(2)中添加的氨基酸为精氨酸或赖氨酸的一种或两种;氨基酸的添加量与发酵液的体积比为2.5~5.5g/L。
8.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于:步骤(2)中添加的抗菌素溶液为多抗菌素溶液、安来霉素溶液或井冈霉素溶液的一种或多种;抗菌素溶液浓度为1500~1800mg/L;抗菌素溶液的添加量与发酵液的体积比为6.5~10.5g/L。
9.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于:步骤(2)中喷雾干燥采用压力式喷嘴雾化,参数为:进风口温度为100~150℃,喷口压力为10~20MPa,容积干燥强度为3~6kg/(m3·h),出风口温度为50~60℃,流化层高度为200~300mm,运行时间2~3min。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710158346.8A CN107094797A (zh) | 2017-03-17 | 2017-03-17 | 一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710158346.8A CN107094797A (zh) | 2017-03-17 | 2017-03-17 | 一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107094797A true CN107094797A (zh) | 2017-08-29 |
Family
ID=59675504
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710158346.8A Pending CN107094797A (zh) | 2017-03-17 | 2017-03-17 | 一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107094797A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109452284A (zh) * | 2018-11-19 | 2019-03-12 | 南京工业大学 | 一种氨基寡糖素和芽孢杆菌复配制剂的制备工艺 |
CN109868252A (zh) * | 2019-04-23 | 2019-06-11 | 南京林业大学 | 一种植物内生细菌蜡样芽孢杆菌njsz-13微生态制剂及其制备方法和应用 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1174659A (zh) * | 1997-08-01 | 1998-03-04 | 上海农乐生物制品厂 | 增效井岗霉素组合物 |
CN101253857A (zh) * | 2008-02-03 | 2008-09-03 | 溧阳中南化工有限公司 | 井·腊质芽孢杆菌水剂 |
CN101463333A (zh) * | 2009-01-09 | 2009-06-24 | 南京工业大学 | 高活性蜡样芽孢杆菌Bacillus cereusCMCC63305菌株的培养及保护方法 |
CN101473853A (zh) * | 2009-01-21 | 2009-07-08 | 南京工业大学 | 蜡样芽孢杆菌Bacillus cereusCMCC63305在农业领域的应用 |
CN102093974A (zh) * | 2010-12-08 | 2011-06-15 | 南京工业大学 | 一种蜡样芽孢杆菌及其多阶段发酵方法 |
CN102168051A (zh) * | 2011-01-25 | 2011-08-31 | 浙江工业大学 | 一株对井岗霉素水剂具有较高抗性的蜡状芽孢杆菌及应用 |
CN104186549A (zh) * | 2014-08-20 | 2014-12-10 | 青岛农业大学 | 一种杀菌剂复配组合物制剂 |
CN104419652A (zh) * | 2013-08-20 | 2015-03-18 | 镇江拜因诺生物科技有限公司 | 一种芽孢杆菌喷雾干燥保护剂 |
CN105432668A (zh) * | 2015-12-19 | 2016-03-30 | 佛山市艳晖生物科技有限公司 | 一种蜡质芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法 |
-
2017
- 2017-03-17 CN CN201710158346.8A patent/CN107094797A/zh active Pending
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1174659A (zh) * | 1997-08-01 | 1998-03-04 | 上海农乐生物制品厂 | 增效井岗霉素组合物 |
CN101253857A (zh) * | 2008-02-03 | 2008-09-03 | 溧阳中南化工有限公司 | 井·腊质芽孢杆菌水剂 |
CN101463333A (zh) * | 2009-01-09 | 2009-06-24 | 南京工业大学 | 高活性蜡样芽孢杆菌Bacillus cereusCMCC63305菌株的培养及保护方法 |
CN101473853A (zh) * | 2009-01-21 | 2009-07-08 | 南京工业大学 | 蜡样芽孢杆菌Bacillus cereusCMCC63305在农业领域的应用 |
CN102093974A (zh) * | 2010-12-08 | 2011-06-15 | 南京工业大学 | 一种蜡样芽孢杆菌及其多阶段发酵方法 |
CN102168051A (zh) * | 2011-01-25 | 2011-08-31 | 浙江工业大学 | 一株对井岗霉素水剂具有较高抗性的蜡状芽孢杆菌及应用 |
CN104419652A (zh) * | 2013-08-20 | 2015-03-18 | 镇江拜因诺生物科技有限公司 | 一种芽孢杆菌喷雾干燥保护剂 |
CN104186549A (zh) * | 2014-08-20 | 2014-12-10 | 青岛农业大学 | 一种杀菌剂复配组合物制剂 |
CN105432668A (zh) * | 2015-12-19 | 2016-03-30 | 佛山市艳晖生物科技有限公司 | 一种蜡质芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
严清平等: "井冈霉素对3种生防芽孢杆菌的生长抑制活性", 《农药科学与管理》 * |
唐容容等: "蜡样芽孢杆菌CGMCC4348菌株防治番茄灰霉病的蜡样芽孢杆菌CGMCC4348菌株防治番茄灰霉病的效果及机理研究", 《湖北农业科学》 * |
张科等: "井冈霉素和蜡质芽孢杆菌混剂防治稻曲病试验", 《种子世界》 * |
管珺等: "蜡样芽孢杆菌CMCC63305的促生·抑菌及杀虫作用研究", 《安徽农业科学》 * |
贺金梅等: "固态微生物菌剂干燥和菌体保存的研究进展", 《食品工业科技》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109452284A (zh) * | 2018-11-19 | 2019-03-12 | 南京工业大学 | 一种氨基寡糖素和芽孢杆菌复配制剂的制备工艺 |
CN109868252A (zh) * | 2019-04-23 | 2019-06-11 | 南京林业大学 | 一种植物内生细菌蜡样芽孢杆菌njsz-13微生态制剂及其制备方法和应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102660461B (zh) | 一种缩短烟叶发酵周期的微生物制剂及其应用 | |
CN104744112A (zh) | 一种复合叶面肥及其制备方法 | |
CN103184174B (zh) | 培养基中含腐植酸钠饲料用枯草芽孢杆菌生物制剂的生产 | |
CN103243044A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
CN102965416A (zh) | 一种蛹虫草半连续液体发酵生产虫草素的方法 | |
CN103614323B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌的培养基及应用 | |
CN104480097A (zh) | 一种绿藻糖基微胶囊生物菌剂及其制备方法和应用 | |
CN102674986A (zh) | 具有保水保肥作用的生物有机肥及其制备方法 | |
CN103497914B (zh) | 枯草芽孢杆菌菌株及利用该菌株生产γ-PGA的方法 | |
CN103333845A (zh) | 一种绿针假单胞菌及其发酵培养方法 | |
CN104788250A (zh) | 一株高效固氮芽孢杆菌及含其微生物肥料的制备方法 | |
CN103289930B (zh) | 一种微生物腐熟菌剂及其制备方法和应用 | |
WO2016150152A1 (zh) | 一种凝结芽胞杆菌菌悬液的制备方法 | |
CN110205271A (zh) | 地衣芽孢杆菌的深层发酵方法及其应用 | |
CN103300209A (zh) | 一种沼泽红假单胞菌活菌制剂及其制备方法 | |
CN102115347A (zh) | 一种混合物肥料及其制备方法 | |
CN104671854A (zh) | 一种复合光合菌肥的制备方法 | |
CN111607526A (zh) | 一种秸秆腐熟剂及其制备方法和应用 | |
CN102943056B (zh) | 一种地衣芽孢杆菌及多阶段发酵的方法 | |
CN107094797A (zh) | 一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺 | |
CN104862249A (zh) | 用于制备高净菌力微生物菌肥的微生态制剂及其制备方法 | |
CN102703357B (zh) | 聚天冬氨酸作为农用芽孢杆菌喷雾干燥保护剂的应用 | |
CN102533604B (zh) | 一种黄色短杆菌及其应用及发酵制备赖氨酸的方法 | |
CN1587372A (zh) | 一种农用复合菌剂及制备方法 | |
CN101861796B (zh) | 一种利用有色稻米发酵废糟培养豹斑毒鹅膏的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170829 |