CN107074963B

CN107074963B - 抑制血管内皮脂肪酶的酶活性的人源化单克隆抗体

Info

Publication number: CN107074963B
Application number: CN201580059706.8A
Authority: CN
Inventors: 内藤正一; 相野弘明; 中村悦男; 今井直; 山根昌治
Original assignee: Shionogi and Co Ltd
Current assignee: Shionogi and Co Ltd
Priority date: 2014-09-11
Filing date: 2015-09-10
Publication date: 2021-07-16
Anticipated expiration: 2035-09-10
Also published as: EP3192813A1; IL250981A0; JP6827255B2; EP3192813A4; EA036324B1; SG10201900605SA; US20200071424A1; EA201790590A1; CL2017000595A1; KR102520286B1; TWI688575B; TW202026313A; KR20170052655A; JP6635599B2; MX2017002968A; BR112017004429A2; JPWO2016039402A1; CA2960994A1; MY181835A; US20170260290A1

Abstract

提供了对动脉硬化、代谢综合征的治疗有效的选择性抑制血管内皮脂肪酶活性的人源化单克隆抗体或其抗体片段，和含有所述人源化单克隆抗体或其抗体片段作为有效成分的药物组合物。

Description

抑制血管内皮脂肪酶的酶活性的人源化单克隆抗体

技术领域

本发明涉及抑制血管内皮脂肪酶(Endothelial Lipase，以下有时也简称为EL))的活性的人源化单克隆抗体或其抗体片段。具体地，本发明涉及选择性地抑制EL的酶活性的人源化单克隆抗体或其抗体片段或含有所述人源化单克隆抗体或其抗体片段的药物组合物。

背景技术

EL是属于甘油三酯脂肪酶(以下为TG)家族的磷脂酶(非专利文献1)。人EL由500个残基(NCBI Accession No. NP_006024.1、SEQ ID NO:1)的氨基酸组成。作为人以外的哺乳动物的EL，例如已知兔EL(NCBI Accession No. NP_001182567.1)、食蟹猴EL(NCBIAccession No. EHH61805.1)、狒狒EL(NCBI Accession No. XP_003914420.1)、小鼠EL(NCBI Accession No. NP_034850.3)等。TG家族中包含脂蛋白脂肪酶(以下为LPL)、肝脂肪酶(以下为HL)。

关于EL，根据其基因敲除小鼠、转基因小鼠的分析而明确由于其强磷脂酶活性而参与HDL胆固醇(以下为HDL-c)的代谢，其作为规定血中HDL-c量的因子受到关注(非专利文献2)。先前已知冠状动脉疾病(以下为CAD)与血中HDL-c量为负相关关系。HDL-c通过抗氧化作用、抗炎症作用、胆固醇逆转运作用等而表现抗动脉硬化作用，低HDL-c血症被认为是CAD的危险因子之一。因此，EL抑制剂通过HDL-c升高而成为CAD治疗药，据报告，实际上敲除了EL的病态小鼠中，HDL-c升高且动脉硬化病变部位减少(非专利文献3)。

这些见解显示EL的选择性抑制剂作为脂质代谢异常症、动脉硬化症中的治疗药的有用性。

选择性地抑制EL作为脂质代谢异常症、动脉硬化症中的治疗药有用，因此，抑制EL的酶活性的针对EL的抗体的制备成为重要的途径之一。迄今据报告，通过制备从兔得到的抑制EL的酶活性的多克隆抗体，并对小鼠施用该抗体，血中HDL-c浓度升高(非专利文献4)。

但是，对于识别EL的多个部位的多克隆抗体，对EL的抑制的选择性不高。另外，EL涉及的脂质代谢异常症、动脉硬化症之类的慢性疾病的治疗药必须长期施用，因此无法使用对人抗原性高的兔多克隆抗体作为药品。而且，即使要改善抗原性，对于多克隆抗体也是困难的。

根据这些情况，要求制备选择性地抑制EL的酶活性的单克隆抗体。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1 : Nature Genetics、1999年、第21卷、424页

非专利文献2 : TCM、第14卷、第5号、2004年、p.202-206

非专利文献3 : The Journal of Biological Chemistry Vol.279，No.43，22，45085-45092，2004

非专利文献4 : J Clin Invest、2003年、第111卷第3号、357页。

发明内容

发明要解决的课题

本发明要解决的课题是提供选择性地抑制EL的酶活性的人源化单克隆抗体或其抗体片段或含有所述人源化单克隆抗体或其抗体片段的药物组合物。

解决课题的手段

本发明人等进行努力研究，结果发现选择性地抑制EL的酶活性的人源化单克隆抗体，从而完成本发明。

也即，本发明涉及：

(1)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的1位至157位，且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性；

(2)前述(1)中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的50位至100位；

(3)前述(1)或(2)中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的50位的精氨酸、52位的天冬酰胺、54位的精氨酸、58位的天冬氨酸、60位的谷氨酸、61位的组氨酸、63位的甘氨酸、65位的酪氨酸或100位的天冬酰胺；

(4)前述(1)或(2)中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的50位的精氨酸、60位的谷氨酸、61位的组氨酸、65位的酪氨酸或100位的天冬酰胺；

(5)前述(1)或(2)中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的65位的酪氨酸；

(6)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的202位至305位，且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性；

(7)前述(6)中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的220位至273位；

(8)前述(6)或(7)中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的220位的组氨酸、221位的苏氨酸、222位的酪氨酸、223位的苏氨酸、224位的精氨酸、226位的苯丙氨酸、227位的甘氨酸、231位的甘氨酸、232位的异亮氨酸、233位的谷氨酰胺、234位的甲硫氨酸、240位的天冬氨酸、242位的酪氨酸、243位的脯氨酸、244位的天冬酰胺、246位的甘氨酸、249位的谷氨酰胺、250位的脯氨酸、251位的甘氨酸、254位的亮氨酸、258位的亮氨酸、263位的酪氨酸、269位的缬氨酸或273位的谷氨酸；

(9)前述(6)或(7)中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的220位的组氨酸、221位的苏氨酸、240位的天冬氨酸、242位的酪氨酸、243位的脯氨酸、244位的天冬酰胺、246位的甘氨酸、249位的谷氨酰胺、250位的脯氨酸或251位的甘氨酸；

(10)前述(6)或(7)中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的220位的组氨酸、221位的苏氨酸、240位的天冬氨酸、242位的酪氨酸、243位的脯氨酸、244位的天冬酰胺、246位的甘氨酸、249位的谷氨酰胺、250位的脯氨酸和251位；

(11)前述(1)至(10)任一项中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其以10nM以下的IC50抑制血管内皮脂肪酶；

(12)前述(11)中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其以5nM以下的IC50抑制血管内皮脂肪酶；

(13)前述(11)中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，，其以2nM以下的IC50抑制血管内皮脂肪酶；

(14)人源化单克隆抗体或其抗体片段，选自：

1)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

包含具有SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7的氨基酸序列的3个CDR的轻链可变区，

2)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的轻链可变区：在具有SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:6和SEQ ID NO:7的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

3)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

4)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

5)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

6)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

7)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

8)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

9)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9的氨基酸序列的3个CDR的轻链可变区，

10)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的轻链可变区：在具有SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:6和SEQ ID NO:9的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

11)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

12)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

13)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:10的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

14)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

15)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:10的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

16)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

17)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

18)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

19)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

20)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

21)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:10的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

22)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

23)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:11、SEQID NO:12和SEQ ID NO:10的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

24)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

25)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

26)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

27)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

28)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

29)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

包含具有SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18的氨基酸序列的3个CDR的轻链可变区，

30)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的轻链可变区：在具有SEQ ID NO:16、SEQID NO:17和SEQ ID NO:18的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

31)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:13、SEQID NO:14和SEQ ID NO:15的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

32)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

33)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:20的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

34)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

35)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:19、SEQID NO:14和SEQ ID NO:20的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

36)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

37)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21的氨基酸序列的3个CDR的轻链可变区，

38)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的轻链可变区：在具有SEQ ID NO:16、SEQID NO:17和SEQ ID NO:21的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

39)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

40)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

41)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

42)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

43)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:22、SEQID NO:23和SEQ ID NO:24的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

44)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

45)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

46)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

47)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

48)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

49)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:106和SEQ ID NO:24的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

50)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

51)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:25、SEQID NO:106和SEQ ID NO:24的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

52)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

53)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

54)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

55)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

56)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

57)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

包含具有SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31的氨基酸序列的3个CDR的轻链可变区，

58)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的轻链可变区：在具有SEQ ID NO:29、SEQID NO:30和SEQ ID NO:31的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

59)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:26、SEQID NO:27和SEQ ID NO:28的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

60)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

61)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

包含具有SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:37的氨基酸序列的3个CDR的轻链可变区，

62)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的轻链可变区：在具有SEQ ID NO:35、SEQID NO:36和SEQ ID NO:37的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

63)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:32、SEQID NO:33和SEQ ID NO:34的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

64)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

65)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

包含具有SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43的氨基酸序列的3个CDR的轻链可变区，

66)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的轻链可变区：在具有SEQ ID NO:41、SEQID NO:42和SEQ ID NO:43的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

67)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:38、SEQID NO:39和SEQ ID NO:40的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

68)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

69)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

包含具有SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49的氨基酸序列的3个CDR的轻链可变区，

70)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的轻链可变区：在具有SEQ ID NO:47、SEQID NO:48和SEQ ID NO:49的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

71)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:44、SEQID NO:45和SEQ ID NO:46的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

72)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

73)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:50的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

74)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

75)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:44、SEQID NO:45和SEQ ID NO:50的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

76)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

77)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:51的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

78)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

79)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:44、SEQID NO:45和SEQ ID NO:51的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

80)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

81)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:53的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

82)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

83)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:52、SEQID NO:45和SEQ ID NO:53的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

84)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

85)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含具有SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56的氨基酸序列的3个CDR的重链可变区，以及

包含具有SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59的氨基酸序列的3个CDR的轻链可变区，

86)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的轻链可变区：在具有SEQ ID NO:57、SEQID NO:58和SEQ ID NO:59的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

87)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含由下列氨基酸序列组成的3个CDR的重链可变区：在具有SEQ ID NO:54、SEQID NO:55和SEQ ID NO:56的氨基酸序列的3个CDR中，1个以上的CDR中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸序列，以及

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

88)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性。

(15)人源化单克隆抗体或其抗体片段，选自：

1)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区，

2)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:61的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

3)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:60的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

4)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

5)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区，

6)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

7)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:62的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

8)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

9)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区，

10)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

11)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:63的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

12)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

13)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的轻链可变区，

14)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:64的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

15)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

16)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

17)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区，

18)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

19)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:65的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

20)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

21)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的轻链可变区，

22)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

23)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

24)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

25)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区，

26)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

27)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:66的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

28)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

29)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的轻链可变区，

30)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

31)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

32)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

33)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的轻链可变区，

34)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:67的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

35)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

36)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

37)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的轻链可变区，

38)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:68的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

39)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

40)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

41)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区，

42)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:69的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

43)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

44)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

45)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

46)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:71的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

47)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:70的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

48)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

49)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

50)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

51)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:72的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

52)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

53)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链可变区，

54)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:73的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

55)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

56)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

57)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

58)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

59)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:74的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

60)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

61)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链可变区，

62)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

63)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

64)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

65)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

66)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

67)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:75的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

68)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

69)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链可变区，

70)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

71)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

72)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

73)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的轻链可变区，

74)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:76的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

75)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

76)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

77)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区，

78)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:78的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

79)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:77的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

80)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

81)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区，

82)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:79的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

83)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

84)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

85)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链可变区，

86)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:80的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

87)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

88)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

89)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区，

90)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

91)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:81的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

92)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

93)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区，

94)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

95)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

96)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

97)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区，

98)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:83的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

99)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:82的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

100)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

101)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的轻链可变区，

102)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:84的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

103)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

104)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

105)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区，

106)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:85的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

107)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

108)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

109)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区，

110)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

111)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:86的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

112)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

113)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的轻链可变区，

114)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:88的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

115)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:87的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

116)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

117)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区，

118)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:89的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

119)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

120)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

121)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的轻链可变区，

122)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:90的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

123)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

124)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

125)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的轻链可变区，

126)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:92的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

127)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:91的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

128)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

129)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的轻链可变区，

130)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

131)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:93的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

132)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

133)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的轻链可变区，

134)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:94的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

135)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

136)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

137)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的轻链可变区，

138)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

139)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

140)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

141)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的轻链可变区，

142)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:96的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

143)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:95的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

144)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

145)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的轻链可变区，

146)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

147)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:97的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

148)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

149)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的轻链可变区，

150)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

151)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:98的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

152)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

153)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的轻链可变区，

154)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的重链可变区，和

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

155)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:99的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

156)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

157)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链可变区，

158)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:101的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

159)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有在SEQ ID NO:100的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

160)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

161)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的轻链可变区，

162)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:102的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

163)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

164)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

165)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的轻链可变区，

166)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:103的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

167)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

168)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

169)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区，

170)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:104的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

171)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

172)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

173)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的轻链可变区，

174)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的重链可变区，和

具有在SEQ ID NO:105的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或添加而成的氨基酸的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

175)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的轻链可变区，

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性，

176)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

且抑制血管内皮脂肪酶的酶活性。

(16)人源化单克隆抗体或其抗体片段，选自：

1)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的轻链可变区，

2)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的轻链可变区，

3)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的轻链可变区，

4)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区，

5)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的轻链可变区，

6)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的轻链可变区，

7)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的轻链可变区，

8)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区，

9)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的轻链可变区，

10)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的轻链可变区，

11)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区，

12)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的轻链可变区，

13)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的轻链可变区，

14)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区，

15)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链可变区，

16)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区，

17)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区，

18)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链可变区，

19)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的轻链可变区，

20)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区，

21)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区，

22)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链可变区，

23)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的轻链可变区，

24)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区，

25)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区，

26)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链可变区，

27)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的轻链可变区，

28)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区，

29)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区，

30)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链可变区，

31)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

32)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链可变区，

33)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的轻链可变区，

34)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

35)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链可变区，

36)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的轻链可变区，

37)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链可变区，

38)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的轻链可变区，

39)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的轻链可变区。

(17)用于治疗或预防与血管内皮脂肪酶有关的疾病的药物组合物，其包含前述(1)至(16)任一项中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，

(18)(17)记载的药物组合物，其中与血管内皮脂肪酶有关的疾病是脂质代谢异常症，

(19)前述(1)～(16)任一项中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其用于治疗或预防与血管内皮脂肪酶有关的疾病，

(20)(19)记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其中与血管内皮脂肪酶有关的疾病是脂质代谢异常症，

(21)与血管内皮脂肪酶有关的疾病的预防或治疗方法，其特征在于施用前述(1)～(16)任一项中记载的人源化单克隆抗体或其抗体片段，

(21)(21)记载的方法，其中与血管内皮脂肪酶有关的疾病是脂质代谢异常症。

发明的效果

本发明的人源化单克隆抗体具有选择性地抑制EL的酶活性的活性，因此，包含本发明的人源化单克隆抗体的药物组合物作为药物、尤其是用于治疗和/或预防脂质代谢异常症、高脂血症、动脉硬化、动脉粥样硬化、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、糖尿病、肥胖和/或X综合征的药物是非常有用的。

附图说明

[图1A] 图1A显示55A1抗体对食蟹猴EL、狒狒EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图1B] 图1B显示7D4抗体对食蟹猴EL、狒狒EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图1C] 图1C显示14A1抗体对食蟹猴EL、狒狒EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图1D] 图1D显示2D5抗体对食蟹猴EL、狒狒EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图1E] 图1E显示53A11抗体对食蟹猴EL、狒狒EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图1F] 图1F显示13B3抗体对食蟹猴、狒狒、兔、人(1-157)小鼠嵌合体EL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图1G] 图1G显示23H8抗体对食蟹猴、狒狒、兔和人(1-157)小鼠嵌合体EL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图1H] 图1H显示16B3抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、人(1-157)小鼠嵌合体EL和人(1-305)小鼠嵌合体EL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图1I] 图1I显示16E7抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、人(1-157)小鼠嵌合体EL和人(1-305)小鼠嵌合体EL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图1J] 图1J显示14E1抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、人(1-157)小鼠嵌合体EL和人(1-305)小鼠嵌合体EL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图1K] 图1K显示19E7抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、人(1-157)小鼠嵌合体EL和人(1-305)小鼠嵌合体EL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2A] 图2A显示55A1抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2B] 图2B显示7D4抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2C] 图2C显示14A1抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2D] 图2D显示2D5抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2E] 图2E显示53A11抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2F] 图2F显示13B3抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2G] 图2G显示23H8抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2H] 图2H显示16B3抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2I] 图2I显示16E7抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2J] 图2J显示14E1抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2K] 图2K显示19E7抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图2L] 图2L显示16F6抗体对人HL和人LPL的酶活性抑制能力的测定结果。

[图3A] 图3A显示55A1抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图3B] 图3B显示7D4抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图3C] 图3C显示14A1抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图3D] 图3D显示2D5抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图3E] 图3E显示53A11抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图3F] 图3F显示13B3抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图3G] 图3G显示23H8抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图3H] 图3H显示16B3抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL、人(1-157)小鼠嵌合体EL、人(1-305)小鼠嵌合体EL和人(202-500)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图3I] 图3I显示16E7抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL、人(1-157)小鼠嵌合体EL、人(1-305)小鼠嵌合体EL和人(202-500)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图3J] 图3J显示14E1抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL、人(1-157)小鼠嵌合体EL、人(1-305)小鼠嵌合体EL和人(202-500)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图3K] 图3K显示19E7抗体对食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL、人(1-157)小鼠嵌合体EL、人(1-305)小鼠嵌合体EL和人(202-500)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图3L] 图3L显示16F6抗体对狒狒EL、人(1-305)小鼠嵌合体EL和人(187-500)小鼠嵌合体EL的结合性的测定结果。

[图4A] 图4A显示55A1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图4B] 图4B显示7D4抗体的可变区的氨基酸序列。

[图4C] 图4C显示14A1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图4D] 图4D显示2D5抗体的可变区的氨基酸序列。

[图4E] 图4E显示53A11抗体的可变区的氨基酸序列。

[图4F] 图4F显示13B3抗体的可变区的氨基酸序列。

[图4G] 图4G显示23H8抗体的可变区的氨基酸序列。

[图4H] 图4H显示16B3抗体的可变区的氨基酸序列。

[图4I] 图4I显示16E7抗体的可变区的氨基酸序列。

[图4J] 图4J显示14E1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图4K] 图4K显示19E7抗体的可变区的氨基酸序列。

[图4L] 图4L显示16F6抗体的可变区的氨基酸序列。

[图5A] 图5A显示55A1抗体、7D4抗体、14A1抗体和2D5抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图5B] 图5B显示55A1抗体、7D4抗体、14A1抗体和2D5抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图5C] 图5C显示53A11抗体、13B3抗体和23H8抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图5D] 图5D显示53A11抗体、13B3抗体和23H8抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图6A] 图6A显示16B3抗体和16E7抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图6B] 图6B显示16B3抗体和16E7抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图6C] 图6C显示14E1抗体和19E1抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图6D] 图6D显示14E1抗体和19E1抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图7A] 图7A显示55A1抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图7B] 图7B显示7D4抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图7C] 图7C显示14A1抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图7D] 图7D显示2D5抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图7E] 图7E显示53A11抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图7F] 图7F显示13B3抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图7G] 图7G显示23H8抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图7H] 图7H显示16B3抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图7I] 图7I显示16E7抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图7J] 图7J显示14E1抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图7K] 图7K显示19E7抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图7L] 图7L显示16F6抗体对导入了突变的狒狒EL的结合性。

[图8A] 图8A显示h16B3-S1～S7抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图8B] 图8B显示h16B3-S1～S7抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图8C] 图8C显示h16B3-F1～F3抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图8D] 图8C显示h16B3-F1～F3抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图9A] 图9A显示h55A1-S1～S7抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图9B] 图9B显示h55A1-S1～S7抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图9C] 图9C显示h55A1-F1～F6抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图9D] 图9D显示h55A1-F1～F6抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图10A] 图10A显示h53A11-S1～S4抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图10B] 图10B显示h53A11-S1～S4抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图11A] 图11A显示h23H8-S1～S3抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图11B] 图11B显示h23H8-S1～S3抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图12A] 图12A显示h13B3-S1～S4抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图12B] 图12B显示h13B3-S1～S4抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图13A] 图13A显示h12B10-S1～S4抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图13B] 图13B显示h12B10-S1～S4抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图14A] 图14A显示h16F6-S1～S5抗体的重链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图14B] 图14B显示h16F6-S1～S5抗体的轻链的可变区的氨基酸序列的比对。

[图15A] 图15A显示h16B3-S1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图15B] 图15B显示h16B3-S2抗体的可变区的氨基酸序列。

[图15C] 图15C显示h16B3-S3抗体的可变区的氨基酸序列。

[图15D] 图15D显示h16B3-S4抗体的可变区的氨基酸序列。

[图15E] 图15E显示h16B3-S5抗体的可变区的氨基酸序列。

[图15F] 图15F显示h16B3-S6抗体的可变区的氨基酸序列。

[图15G] 图15G显示h16B3-S7抗体的可变区的氨基酸序列。

[图15H] 图15H显示h16B3-S8抗体的可变区的氨基酸序列。

[图15I] 图15I显示h16B3-F1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图15J] 图15J显示h16B3-F2抗体的可变区的氨基酸序列。

[图15K] 图15K显示h16B3-F3抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16A] 图16A显示h55A1-S1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16B] 图16B显示h55A1-S2抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16C] 图16C显示h55A1-S3抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16D] 图16D显示h55A1-S4抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16E] 图16E显示h55A1-S5抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16F] 图16F显示h55A1-S6抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16G] 图16G显示h55A1-S7抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16H] 图16H显示h55A1-F1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16I] 图16I显示h55A1-F2抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16J] 图16J显示h55A1-F3抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16K] 图16K显示h55A1-F4抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16L] 图16L显示h55A1-F5抗体的可变区的氨基酸序列。

[图16M] 图16M显示h55A1-F6抗体的可变区的氨基酸序列。

[图17A] 图17A显示h53A11-S1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图17B] 图17B显示h53A11-S2抗体的可变区的氨基酸序列。

[图17C] 图17C显示h53A11-S3抗体的可变区的氨基酸序列。

[图17D] 图17D显示h53A11-S4抗体的可变区的氨基酸序列。

[图18A] 图18A显示h23H8-S1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图18B] 图18B显示h23H8-S2抗体的可变区的氨基酸序列。

[图18C] 图18C显示h23H8-S3抗体的可变区的氨基酸序列。

[图19A] 图19A显示h13B3-S1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图19B] 图19B显示h13B3-S2抗体的可变区的氨基酸序列。

[图19C] 图19C显示h13B3-S3抗体的可变区的氨基酸序列。

[图19D] 图19D显示h13B3-S4抗体的可变区的氨基酸序列。

[图20A] 图20A显示h12B10-S1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图20B] 图20B显示h12B10-S2抗体的可变区的氨基酸序列。

[图20C] 图20C显示h12B10-S3抗体的可变区的氨基酸序列。

[图20D] 图20D显示h12B10-S4抗体的可变区的氨基酸序列。

[图21A] 图21A显示h16F6-S1抗体的可变区的氨基酸序列。

[图21B] 图21B显示h16F6-S2抗体的可变区的氨基酸序列。

[图21C] 图21C显示h16F6-S3抗体的可变区的氨基酸序列。

[图21D] 图21D显示h16F6-S4抗体的可变区的氨基酸序列。

[图21E] 图21E显示h16F6-S5抗体的可变区的氨基酸序列。

具体实施方式

本发明提供以选择性地抑制血管内皮脂肪酶的酶活性为特征的人源化单克隆抗体。本发明的抗体具有选择性地抑制血管内皮脂肪酶的酶活性的活性，因此作为动脉硬化、代谢综合征的预防・治疗药是有用的。

作为用于制备本发明的单克隆抗体而使用的抗原，重要的是具有包含SEQ ID NO:1的1位至157位或202位至305位的氨基酸序列的连续氨基酸残基。其长度没有特别限定，作为具有免疫原性的长度的6个残基以上是期望的。作为这种抗原的具体例，可以使用天然地、或人工地高表达的细胞株、其膜级分、或其纯化物、与其它蛋白质或肽(例如，FLAG标签、HIS标签、GST标签、C2标签等标签蛋白质，GFP、EGFP等荧光蛋白质等)的融合蛋白质、或化学地合成的肽等的任一种(以下，也有时将它们简称为本发明的抗原)。另外，这些免疫原的制备方法都是本领域技术人员公知的。

本发明的单克隆抗体可通过已知的一般制备方法制备。具体地，通过将本发明的抗原按照需要与弗氏佐剂一起向哺乳动物、优选地小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠或兔的皮下内、肌肉内、静脉内、爪垫内或腹腔内注射1次至数次而实施免疫敏化。通常地，自初次免疫起每约1～21日进行1～4次免疫，可由自最终免疫起约1～10日后免疫敏化的哺乳动物取得抗体产生细胞。实施免疫的次数及时间间隔可以根据使用的免疫原的性质等而适当变更。

分泌单克隆抗体的杂交瘤的制备可按照Köhler及Milstein等的方法(Nature、1975、vol.256、p495～497)及基于该方法的方法进行。也即，可通过将从如前述免疫敏化的哺乳动物取得的脾脏、淋巴结、骨髓或扁桃体等、优选地脾脏中包含的抗体产生细胞与来自优选地小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、兔或人等的哺乳动物、更优选地小鼠、大鼠或人的没有自身抗体产生能力的骨髓瘤细胞进行细胞融合而制备杂交瘤。

作为细胞融合中应用的骨髓瘤细胞，一般可使用从小鼠得到的株化细胞，例如P3-U1、NS-1、SP-2、653、X63、AP-1等。

产生单克隆抗体的杂交瘤克隆的筛选如下进行：将杂交瘤于例如微量滴定板中培养，通过RIA、ELISA、FACS等测定方法测定见到了增殖的孔的培养上清对前述小鼠免疫敏化中应用的本发明的抗原的反应性，选择产生对该抗原或半抗原显示特异性结合的单克隆抗体的克隆。然后，通常使用使抗原固相化，用放射性物质、荧光物质、酶等标记的二次抗体检测与其结合的培养上清中的抗体的方法。另外，在应用抗原的表达细胞的情况下，向该细胞添加杂交瘤培养上清，随后与用荧光标记的二次抗体反应后，用流式细胞仪等荧光检测装置测定该细胞的荧光强度，由此可以检测该细胞膜上可结合本发明的抗原的单克隆抗体。

单克隆抗体从选择的杂交瘤的制备可如下进行，将杂交瘤在体外培养，或在小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠或兔等、优选地小鼠或大鼠、更优选地小鼠的腹水中等培养，从得到的培养上清、或哺乳动物的腹水分离。在体外培养的情况下，可按照培养的细胞种类的特性、试验研究的目的及培养方法等各种条件，使用用于增殖、维持及保存杂交瘤、在培养上清中产生单克隆抗体的已知营养培养基或由已知的基础培养基诱导制备的所有营养培养基而实施。

作为基础培养基，可列举例如，Ham’F12培养基、MCDB153培养基或低钙MEM培养基等低钙培养基及MCDB104培养基、MEM培养基、D-MEM培养基、RPMI1640培养基、ASF104培养基或RD培养基等高钙培养基等，该基础培养基可按照目的包含例如血清、激素、细胞因子和/或各种无机或有机物质等。

单克隆抗体的分离、纯化可通过将上述培养上清或腹水供给饱和硫酸铵、离子交换层析(DEAE或DE52等)、抗免疫球蛋白柱或蛋白质A柱等亲和柱层析而进行。

另外，作为本发明的单克隆抗体，可应用从抗体产生细胞、例如杂交瘤克隆抗体基因，整合到适当的载体中，将载体导入宿主，用基因重组技术产生的重组型抗体(例如、Carl等人、THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES、1990年发行)。

具体地，从产生目标抗体的杂交瘤、产生抗体的免疫细胞，例如使敏化淋巴细胞通过癌基因等永生化而成的细胞，分离编码抗体的可变区(V区)的mRNA。对于mRNA的分离，通过公知的方法、例如胍超速离心法(Chirgwin、J.M.等人、Biochemistry(1979) 18、5294-5299)等制备总RNA，使用mRNA Purification Kit(Pharmacia制)等而制备mRNA。

使用逆转录酶从得到的mRNA合成抗体V区的cDNA。cDNA的合成可使用AMV ReverseTranscriptase First-strand cDNA Synthesis Kit等进行。另外，进行cDNA的合成和扩增时，可使用5’-Ampli FINDER RACEKit (Clontech制)和应用PCR的5’-RACE法(Frohman，M.A.等人、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1988年、第85卷、 8998页等)。从得到的PCR产物纯化目标DNA片段，使其与载体DNA连接。进一步，由其制备重组载体，导入大肠杆菌等中，选择菌落而制备期望的重组载体。通过公知的方法例如脱氧法确认目标DNA的核苷酸序列。

如果获得编码目标抗体的V区的DNA，则将其与编码期望的抗体恒定区(C区)的DNA连接，将其整合到表达载体。或者，也可将编码抗体的V区的DNA整合到包含抗体C区的DNA的表达载体。在制备本发明中使用的抗体时，以在表达控制区例如增强子/启动子的控制下表达的方式将抗体基因整合到表达载体。随后，可通过该表达载体转化宿主细胞，使抗体表达。

关于抗体基因的表达，可将抗体的重链(H链)或轻链(L链)分别整合到表达载体同时转化宿主，或也可将编码H链和L链的DNA整合到单一表达载体转化宿主(参考WO94/11523)。

上述以外的本发明的单克隆抗体的制备方法也可以使用所谓的噬菌体展示技术(Nature Biotechnology 23，1105(2005))。具体地，例如使以人、动物(例如、兔、小鼠、大鼠、仓鼠等)的B淋巴细胞为材料通过公知方法制备的抗体基因文库，或从人、动物的种系(Germ Line)序列筛选，和改变而完全合成的抗体基因文库呈递在噬菌体、大肠杆菌、酵母、动物细胞等的细胞表面、核糖体上等。此时，作为呈递在细胞表面的抗体的形态，可列举IgG分子、IgM分子、Fab片段、单链Fv(scFv)片段等。

如此得到的单克隆抗体片段基因可通过利用公知方法与IgG抗体基因的对应区重组而得到抗体基因。然后，可将如此得到的基因整合到适当的载体，将其导入宿主，应用基因重组技术产生抗体(例如，Carl等人、THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES、1990年发行)。

本发明的单克隆抗体的特征是抑制血管内皮脂肪酶的酶活性。以下记载了EL的酶活性抑制能力的测定程序的一个例子。

将克隆了编码EL的DNA的pcDNA3.1(Invitrogen公司制)转染到FreeStyleHEK293F细胞，在37℃、8% CO2下培养2天。将培养液离心，回收细胞，在包含20U/mL的肝素的PBS中悬浮，在37℃温育45分钟，其后，通过离心去除细胞获得上清，将该上清作为EL酶溶液，用于抑制活性测定。向由20mM tris盐酸缓冲液(pH7.5)、0.5％牛血清白蛋白、4mM氯化钙、150mM氯化钠、2mg/mL人HDL(Athens Research＆Technology公司制)构成的反应溶液中添加单克隆抗体后，添加EL酶溶液。在37℃反应2小时后，用NEFA C-Test Wako(和光纯药工业公司制)测定通过EL酶由HDL生成的游离脂肪酸(NEFA)，将该NEFA量作为酶活性指标。将未添加抗体时的酶活性设为对照值，算出抗体的各浓度下相对于对照值的比活性，可由该抑制曲线求出抗体的50％抑制浓度(IC50值)。

EL酶的抑制活性的抑制率显示50％的抗体的有效浓度(IC50)常常被用作表示EL抑制活性的指标之一。

本发明中，以10nM以下的IC抑制血管内皮脂肪酶的单克隆抗体或其抗体片段意指用前述[0163]的方法测定的IC50是10nM以下的单克隆抗体或其片段。测定中使用的EL只要是来自哺乳动物的EL则种类没有特别限制，在使用任一种EL的情况下如果是10nM以下，则符合以10nM以下的IC抑制血管内皮脂肪酶的单克隆抗体或其抗体片段。

另外，本发明的单克隆抗体的特征是选择性地抑制EL酶。以下，显示选择性地抑制EL酶，换言之，不抑制LPL和HL的酶活性的确认程序的一个例子。

将克隆了编码HL的DNA的pcDNA3.1(Invitrogen公司制)转染到FreeStyleHEK293F细胞，在37℃、8% CO2下培养2天。将培养液离心，回收细胞，在包含20U/mL的肝素的PBS中悬浮，在37℃温育45分钟，其后，通过离心去除细胞获得上清，将该上清作为HL酶溶液。通过同样的操作制备LPL酶溶液。向由20mM tris盐酸缓冲液(pH7.5)、0.5％牛血清白蛋白、4mM氯化钙、150mM氯化钠、0.5mg/mL人VLDL(INTRACEL公司制)构成的反应溶液中添加单克隆抗体后，添加HL或LPL酶溶液。在37℃反应2小时后，用NEFA C-Test Wako(和光纯药工业公司制)测定通过HL或LPL酶由VLDL生成的游离脂肪酸(NEFA)，将该NEFA量作为酶活性指标。将未添加单克隆抗体时的酶活性设为对照值，算出相对于对照值的比活性。

对EL酶具有选择性抑制活性意味着，在加入了相当于对EL为IC50的量的单克隆抗体时，不抑制3%以上的LPL和HL的酶活性的情况。本发明的单克隆抗体的特征在于，不抑制LPL和HL的酶活性，选择性地抑制EL酶，因此，优选表位部位为EL与LPL、HL没有同源性的区域。

本发明的人源化单克隆抗体是具有上述特征的单克隆抗体的人源化形式。人源化单克隆抗体是将人以外的哺乳动物、例如小鼠抗体的互补决定区(CDR；complementaritydetermining region)移植到人抗体的构架区(FR；framework region)而成。因此，人源化单克隆抗体的FR来自人。适当的FR可参考Kabat E.A.等人的文献选择。作为该情况的FR，选择CDR形成良好的抗原结合部位的FR。也可按照需要以再构建的人源化抗体的CDR形成适当的抗原结合部位的方式置换抗体的可变区的FR的氨基酸(Sato、K.等人, Cancer Res.1993年、第53卷、851页)。置换的FR的氨基酸的比例是全部FR区的0～15％、优选地0～5％。

也已知人源化单克隆抗体的一般制备方法(例如，参考WO95/14041号公报、WO96/02576号公报)。具体地，首先，通过PCR法，从以具有在末端部重叠的部分的方式制备的数个寡核苷酸，合成编码以将小鼠抗体的CDR与人抗体的FR连接的方式设计的可变区的DNA序列(参考WO98/13388号公报)。将得到的DNA与编码人抗体的恒定区的DNA连接，随后整合到表达载体。或者，也可将编码抗体的可变区的DNA整合到包含抗体的恒定区的DNA的表达载体。在制备本发明中使用的抗体时，以在表达控制区、例如增强子/启动子的控制下表达的方式将抗体基因整合到表达载体。随后，可通过该表达载体转化宿主细胞，使抗体表达。作为宿主细胞，可列举例如，COS细胞、CHO细胞等的脊椎动物细胞、原核细胞、酵母等。

关于抗体基因的表达，可将抗体的重链(H链)或轻链(L链)分别整合到表达载体同时转化宿主，或者也可将编码H链和L链的DNA整合到单一表达载体转化宿主(参考WO94/11523)。

通过上述得到的期望的转化体可根据本领域技术人员公知的方法培养，通过该培养，在转化体细胞内或细胞外产生EL的人源化单克隆抗体。作为该培养中应用的培养基，可根据采用的宿主细胞适当选择常用的各种培养基，例如在上述COS细胞的情况下，可使用在RPMI-1640培养基、达尔伯克改良伊格尔极限必需培养基(DMEM)等培养基中按照需要添加胎牛血清(FBS)等血清成分的培养基。关于该转化体培养时的培养温度，只要是不使细胞内的蛋白质合成能力显著降低的温度则可为任意温度，适当地在32～42℃、最适当地在37℃培养是优选的。另外，按照需要，可在包含1～10％(v/v)的二氧化碳的空气中培养。

包含通过上述在转化体的细胞内或细胞外生产的本发明的EL的人源化单克隆抗体的级分可通过利用该蛋白质的物理性质、化学性质等的各种公知的分离操作方法来分离纯化。作为所述方法，具体地，例如可采用通常的利用蛋白质沉淀剂的处理、超滤、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、亲和层析、高效液相层析(HPLC)等的各种层析、透析法，和它们的组合等。

通过上述方法，可容易地以高收率、高纯度制备期望的EL的人源化单克隆抗体。将通过上述方式、将为了使小鼠单克隆抗体(16B3、55A1、53A11、23H8、13B3、12B10和16F6)人源化而确定的CDR序列全体和FR序列的一部分的氨基酸残基移植到人抗体而最佳化的抗体的可变区的氨基酸序列示于图15～图21。

这些人源化抗体与通过杂交瘤产生的小鼠抗体(16B3、55A1、53A11、23H8、13B3、12B10和16F6)相比，具有同等强的EL的酶抑制活性能力。在抗体的人源化中，通常难以在维持来源抗体的活性的情况下进行人源化，但在本发明中，成功取得具有与来源小鼠抗体同等的活性的人源化抗体。人源化抗体在人体内抗原性降低，因此，在以治疗目的等向人施用的情况下是有用的。

本发明的人源化单克隆抗体使用人抗体的恒定区。作为优选的人抗体的恒定区，作为重链可列举Cγ，例如可使用Cγ1，Cγ2，Cγ3，Cγ4，作为轻链可使用Cκ、Cλ。另外，为了改善抗体或其产生的稳定性，也可修饰人抗体的C区。人源化时应用的人抗体可为IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等任意同种型的人抗体，但在本发明中优选应用IgG，进一步优选IgG1或IgG4。

本发明的人源化单克隆抗体也可为与聚乙二醇(PEG)、放射性物质、毒素等各种分子结合的偶联抗体。这种偶联抗体可通过对得到的抗体实施化学修饰而得到。另外，抗体的修饰方法已在本领域中确立。本发明中的人源化单克隆抗体也包含这些偶联抗体。

另外，本发明的人源化单克隆抗体也可在其N末端或C末端融合其它蛋白质(Clinical Cancer Research, 2004, 10, 1274-1281)。融合的蛋白质可由本领域技术人员适当选择。

本发明中的“单克隆抗体的抗体片段”是前述本发明的单克隆抗体的一部分，且意味着与该单克隆抗体同样地对血管内皮脂肪酶具有特异性结合性的片段、或与该单克隆抗体同样地对血管内皮脂肪酶具有特异性结合性且具有抑制血管内皮脂肪酶的酶活性的作用的片段。

具体地，可列举前述对人EL具有特异性结合性的Fab (抗原结合片段)、F(ab')₂、Fab'、单链抗体(单链Fv; 以下记载为scFv)、二硫化物稳定抗体(二硫化物稳定Fv; 以下记载为dsFv)、二聚体V区片段 (以下记载为双抗体(Diabody))、包含CDR的肽等(ExpertOpinion on Therapeutic Patents、第6卷、第5号、第441～456页、1996年)。

Fab是用木瓜蛋白酶分解在IgG的铰链区交联2条H链的2个二硫键(S-S键)的上部肽部分得到的、由H链的N末端侧约一半与L链全体构成的、分子量约5万的具有抗原结合活性的抗体片段。本发明中使用的Fab可对上述本发明的单克隆抗体进行木瓜蛋白酶处理而得到。或者，也可通过将编码上述本发明的单克隆抗体的Fab的DNA插入细胞用表达载体，将该载体导入细胞而使其表达来制备Fab。

F(ab')₂是用胃蛋白酶分解IgG的铰链区的2个S-S键的下部得到的、由2个Fab’区在铰链部分结合构成的、分子量约10万的具有抗原结合活性的抗体片段。本发明中使用的F(ab')₂可对上述本发明的单克隆抗体进行胃蛋白酶处理而得到。或者，也可通过将编码该单克隆抗体的F(ab')₂的DNA插入细胞用表达载体，将该载体导入大肠杆菌、酵母或动物细胞而使其表达来制备F(ab')₂。

Fab'是将上述F(ab')₂的铰链间的S-S键切断而成的分子量约5万的具有抗原结合活性的抗体片段。本发明中使用的Fab'可对上述本发明的单克隆抗体的F(ab')₂进行还原剂二硫苏糖醇处理而得到。或者，也可通过将编码该单克隆抗体的Fab'的DNA插入细胞用表达载体，将该载体导入大肠杆菌、酵母或动物细胞而使其表达来制备Fab'。

scFv是使用适当的肽接头(以下记载为P)连接单链VH和单链VL而成的、VH-P-VL或VL-P-VH多肽，是具有抗原活性的抗体片段。本发明中使用的scFv中包含的VH和VL只要是上述本发明的单克隆抗体的VH和VL即可。本发明中使用的scFv可通过从产生本发明的单克隆抗体的杂交瘤取得编码VH和VL的cDNA，构建scFv表达载体，导入大肠杆菌、酵母或动物细胞使其表达而制备。

dsFv指将VH和VL中各1个氨基酸残基置换为半胱氨酸残基而成的多肽通过S-S键结合而成。置换为半胱氨酸残基的氨基酸残基可根据Reiter等所示的方法 (ProteinEngineering，7，697 (1994))基于抗体的立体结构预测来选择。本发明中使用的dsFv中包含的VH或VL只要是本发明的单克隆抗体的VH和VL即可。本发明中使用的dsFv可通过从产生本发明的单克隆抗体的杂交瘤取得编码VH和VL的cDNA，插入适当的表达载体中构建dsFv表达载体，将该表达载体导入大肠杆菌、酵母或动物细胞使其表达而制备。

双抗体是抗原结合特异性相同或不同的scFv形成二聚体的抗体片段，具有对相同抗原的2价抗原结合活性、或对不同抗原的2种特异性抗原结合活性的抗体片段。例如，与本发明的单克隆抗体特异性反应的2价双抗体可通过取得编码本发明的单克隆抗体的VH和VL的cDNA，构建编码具有3～10个残基的肽接头的scFv的DNA，将该DNA插入细胞用表达载体，将该表达载体导入大肠杆菌、酵母或动物细胞使双抗体表达而制备。

包含CDR的肽为包含VH或VL的CDR中至少1个区域以上而构成。多个CDR可直接或通过适当的肽接头结合。本发明中使用的包含CDR的肽可通过取得编码本发明的单克隆抗体的VH和VL的cDNA，随后构建编码CDR的DNA，将该DNA插入动物细胞用表达载体，将该载体导入大肠杆菌、酵母或动物细胞使其表达而制备。另外，包含CDR的肽也可通过Fmoc法(芴甲氧羰基法)、tBoc法(叔丁氧羰基法) 等化学合成方法制备。

本发明的单克隆抗体或其一部分只要可在本发明中适当使用则可为其修饰物。作为修饰物，可使用与聚乙二醇(PEG)等各种分子结合的抗体。抗体中进行的修饰可为通过导入化学键的修饰，也可为抗体的氨基酸序列中进行的修饰。本发明的单克隆抗体或其一部分中也可包含这些抗体修饰物。为了得到这样的抗体修饰物，可通过对得到的抗体实施修饰而获得。这些方法已在本领域中确立。

在其它观点中，本发明提供编码本发明的人源化单克隆抗体的重链可变区或轻链可变区的多核苷酸。另外，与该多核苷酸在严格条件下杂交、并且编码与本发明的抗体具有同等活性的抗体的多核苷酸也在本发明的范围内。

本发明的多核苷酸只要编码本发明的抗体则无特别限定，是由多个脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)等核苷酸组成的聚合物。可包含天然以外的碱基。本发明的多核苷酸可为了通过基因工程方法制备抗体而使用。另外，为了筛选与本发明的抗体具有同等功能的抗体，可也将其作为探针应用。也即，将编码本发明的抗体的多核苷酸、或其一部分用作探针，通过杂交、基因扩增技术(例如PCR)等技术，可获得与该多核苷酸在严格条件下杂交、且编码与本发明的抗体具有同等活性的抗体的DNA。这种DNA也包含在本发明的多核苷酸中。

杂交技术(Sambrook,J et al., Molecular Cloning 2nd ed., 9.47-9.58,Cold Spring Harbor Lab. press, 1989)是本领域技术人员公知的技术。作为杂交的条件，可列举例如低严格的条件。低严格的条件是在杂交后的洗涤中，例如42℃、0.1×SSC、0.1％SDS的条件，优选地50℃、0.1×SSC 、0.1％SDS的条件。作为更优选的杂交条件，可列举高严格的条件。高严格的条件是例如65℃、5×SSC和0.1％SDS的条件。在这些条件中，越提高温度越有效地得到具有高同源性的多核苷酸是期望的。但是，作为影响杂交的严格性的要素，考虑温度、盐浓度等多个要素，如果是本领域技术人员，则可适当选择这些要素而实现相同的严格性。

通过这些杂交技术、基因扩增技术得到的多核苷酸所编码的、与本发明的抗体在功能上同等的抗体通常与这些抗体在氨基酸序列上具有高同源性。本发明的抗体也包含与本发明的抗体在功能上同等的、且与该抗体的氨基酸序列具有高同源性的抗体。高同源性是指在氨基酸水平上通常至少50％以上的同一性、优选地75％以上的同一性、进一步优选地85％以上的同一性、进一步优选地95％以上的同一性。在确定多肽的同源性时，只要依据文献(Wilbur, W. J. and Lipman, D. J. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1983) 80,726-730)中记载的算法即可。

本发明的人源化单克隆抗体或其抗体片段的特征是，识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的1位至157位、或识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的202位至305位中的任一。识别SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的1位至157位意味着，抗体识别该区域内存在的氨基酸。

本发明的人源化单克隆抗体或其抗体片段作为药物组合物是有用的。因此，包含本发明的人源化单克隆抗体和其抗体片段的药物组合物可以经口的或非经口地全身或局部施用。作为非经口施用，可选择例如，滴注等静脉内注射、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、鼻腔内施用、吸入等。

另外，本发明的人源化单克隆抗体或其抗体片段对血管内皮脂肪酶具有特异性结合性，因此，也可应用于脂质代谢异常症、高脂血症、动脉硬化、动脉粥样硬化、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、糖尿病、肥胖和/或X综合征的诊断。

本发明的药物组合物的对象患者假定为动脉硬化、代谢综合征。有效施用量从每次每1kg体重0.01mg至100mg的范围中选择。或者，可选择每名患者5～5000mg、优选地10～500mg的施用量。但是，包含本发明的单克隆抗体或其抗体片段的药物组合物不限于这些施用量。另外，施用时期可根据患者的年龄、症状适当选择。本发明的药物组合物也可根据施用途径共同包含药学上容许的载体、添加剂。作为这样的载体和添加剂的例子，可列举水、药学上容许的有机溶剂、胶原蛋白、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、藻酸钠、水溶性葡聚糖、果胶、甲基纤维素、乙基纤维素、酪蛋白、二甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、人血清白蛋白(HSA)、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、作为药物添加剂容许的表面活性剂等。使用的添加剂按照剂型从上述中适当或组合选择，但不限于这些。

(参考例1)

狒狒EL表达腺病毒制备

克隆pShuttle载体(Clontech公司制)中通过PCR法、利用限制酶的手法附加C2标签的狒狒ELcDNA序列。将该亚克隆载体与具有腺病毒骨架基因的载体通过PI-SceI和I-CeuI酶酶切(Adeno-x Accessory Kit, Clontech公司制)。酶切片段的连接反应在16℃进行3小时(ligation high, 东洋纺公司制)，将连接产物转化至大肠杆菌株(one-shotStbl3化学感受态细胞，Invitrogen公司制)。氨苄青霉素选择后，从得到的克隆纯化质粒(QIAprep spin Miniprep Kit, QIAGEN公司制)，然后通过PacI酶(New England Biolabs公司制)处理切出大肠杆菌生长区。通过以上，得到用于腺病毒载体制备的质粒DNA。使用Lipofectamine2000(Invitrogen公司制)将得到的质粒DNA转染到HEK293细胞(得自ATCC)，在含有10％牛血清的DMEM培养基中在37℃、5% CO2下培养。转染后每5日更换培养基，继续培养直至确认到细胞变性效果(CPE)。确认CPE后，回收培养上清和细胞。将回收的细胞用干冰甲醇浴和温水浴反复继续冻融5次左右后，在3000rpm离心15分钟得到上清，将该上清作为细胞提取液回收。将该细胞提取液和培养上清混合，制成病毒载体含有液。将该病毒载体含有液添加到HEK293细胞，通过重复同样的操作，继续病毒载体的扩增。扩增后，将最终得到的细胞提取液用Benzonase(Merck-Novagen公司制)在37℃处理30分钟后离心，将得到的上清用于通过以下的密度梯度离心的病毒载体纯化。将包含1.5、1.35、1.25g/cm³的氯化铯的PBS(磷酸缓冲盐水)在离心管内分层，然后将上述上清分层。将其在35000rpm、16℃离心1小时，通过目视回收得到的病毒载体。将回收的病毒载体针对包含10％甘油的PBS进行透析，制成纯化腺病毒载体。病毒载体一部分用于滴定测定(Adeno-X rapid titer kit,Clontech公司制)和自我增殖能力获得型出现判定，仅将无异常者用于以下的免疫。

(参考例2)

狒狒EL表达腺病毒载体免疫

将相当于2×10⁹i.f.u.的纯化的狒狒EL表达腺病毒载体施用于6周龄雌性小鼠(A/J Jms Slc种，得自日本SLC)的静脉内、皮下或后肢肌肉内。施用后每7日自尾静脉采血，应用如此制备的血清测定抗体效价。另外，除初次施用腺病毒载体之外，作为追加免疫，将相同量的腺病毒载体施用于静脉内、皮下或后肢肌肉内。对见到抗体效价升高的小鼠，自尾静脉实施加强免疫作为最终免疫。

(参考例3)

抗体产生杂交瘤的制备

最终免疫的3日后，对见到对狒狒EL的抗体效价升高的个体进行剖腹，摘除脾脏，回收脾细胞。将脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(p3×63-Ag8.U1，东京肿瘤研究所)用50％聚乙二醇4000融合，用包含次黄嘌呤、氨基喋呤及胸苷的培养基选择。

(参考例4)

产生与狒狒EL结合的抗体的杂交瘤的筛选

在细胞融合10日后进行特异抗体产生细胞的筛选。筛选中应用的ELSIA如下。向384孔微量滴定板(NUNC公司制)的各孔中加入35μl的包含0.35μg的抗小鼠IgG-Fc抗体(Jackson Immuno Research公司制)的tris缓冲液(50mM Tris-HCl、pH7.5)，在4℃固定16小时。用90μl的洗涤液(含有0.01％ Tween20的生理盐水)洗涤这些孔1次后，添加100μlBlockAce(大日本制药公司制)在室温放置2小时，进行封闭(抗小鼠IgG-Fc抗体固相化板)。用90μl的洗涤液洗涤各孔1次后，加入15μl的杂交瘤培养上清放置2小时。用90μl的洗涤液洗涤这些孔3次后，加入15μl的包含狒狒EL肝素提取液的分析缓冲液(包含4％BlockAce、0.05％ Tween20、150mM NaCl的50mM tris缓冲液pH7.4)，在4℃放置16小时。用90μl的洗涤液洗涤这些孔3次后，加入15μl的包含生物素标记抗C2标签抗体(Fab)和HRP标记链霉抗生物素(Thermo scientific公司制)的分析缓冲液，在室温放置1小时。用90μl的洗涤液洗涤这些孔3次后，加入15μl的TMB＋-Substrate-Chromogen(DAKO公司制)在室温显色30分钟后，添加15μl的0.05M的硫酸停止反应，测定450nm的吸光度。

筛选的结果是，得到11个与狒狒EL结合的杂交瘤的克隆(55A1、7D4、14A1、2D5、53A11、13B3、23H8、16B3、16E7、14E1和19E7)。将55A1、7D4、14A1、2D5、53A11、13B3、23H8、16B3、16E7、14E1和19E7的克隆产生的抗体分别命名为55A1、7D4、14A1、2D5、53A11、13B3、23H8、16B3、16E7、14E1和19E7抗体。应用小鼠单克隆抗体分型试剂盒(BD Bioscience)确定抗体的亚型。

关于抗体的亚型，55A1抗体为IgG2a、7D4抗体为IgG1、14A1抗体为IgG1、2D5抗体为IgG2a、53A11抗体为IgG2a、13B3抗体为IgG2a、23H8抗体为IgG2a、16B3抗体为IgG2a、16E7抗体为IgG1、14E1抗体为IgG1、19E7抗体为IgG2a。

(参考例5)

各EL抗体的EL酶活性抑制能力的测定

对于55A1、7D4、14A1、2D5、53A11、13B3、23H8、16B3、16E7、14E1和19E7的各抗体，测定对狒狒EL、食蟹猴EL、人(1-157)小鼠嵌合体EL、人(1-53)小鼠嵌合体EL、人(61-111)小鼠嵌合体EL、兔EL、小鼠EL、人(1-305)小鼠嵌合体EL或人(202-500)小鼠嵌合体EL的EL活性抑制能力。具体的方法示于以下。

向由20mM tris盐酸缓冲液(pH7.5)、0.5％牛血清白蛋白、4mM氯化钙、150mM氯化钠、2mg/mL人HDL(Athens Research＆Technology公司制)构成的反应溶液中添加EL抗体后，添加EL酶溶液(以总量计10μl )。在37℃反应90分钟后，利用NEFA C-Test Wako(和光纯药工业公司制)测定通过EL酶由HDL生成的游离脂肪酸(NEFA)，将其NEFA量作为酶活性指标。将未添加EL抗体时的酶活性作为对照值，算出抗体的各浓度下相对于对照值的比活性并绘图(图1A～图1K)。通过图1A～图1K的抑制曲线，求出各抗体的50％抑制浓度(IC50值)。

(参考例6)

各EL抗体的HL和LPL酶活性抑制能力的测定

将克隆了编码人HL的DNA的pcDNA3.1(Invitrogen公司制)转染至FreeStyleHEK293F细胞，在37℃、8%CO2下培养2日。离心培养液，回收细胞，在包含20U/mL的肝素的PBS中悬浮，在37℃温育45分钟。然后通过离心除去细胞，将得到的上清作为人HL酶溶液。通过同样的操作，制备人LPL酶溶液。向由20mM tris盐酸缓冲液(pH7.5)、0.5％牛血清白蛋白、4mM氯化钙、150mM氯化钠、0.5mg/mL人VLDL(INTRACEL公司制)构成的反应溶液中添加EL抗体后，添加人HL、或人LPL酶溶液(以总量计10μl )。在37℃反应2小时后，利用NEFA C-TestWako(和光纯药工业公司制)测定通过HL或LPL酶由VLDL生成的游离脂肪酸(NEFA)，将其NEFA量作为酶活性指标。将未添加EL抗体时的酶活性作为对照值，算出相对于对照值的比活性。为了比较，将结果与食蟹猴EL的抑制曲线一并记载(图2A～图2K)。

其结果是，可知55A1、7D4、14A1、2D5、53A11、13B3、23H8、16B3、16E7、14E1和19E7抗体全部不抑制HL和LPL的酶活性。

(参考例7)

各EL抗体与EL的结合能力测定

向抗小鼠IgG-Fc抗体固相化板加入15μl的包含EL抗体(从1μg/mL的3倍稀释系列)的分析缓冲液放置2小时。用90μl的洗涤液洗涤这些孔3次后，加入15μl的包含食蟹猴EL、狒狒EL、兔EL、小鼠EL、人(1-157)小鼠嵌合体EL、人(1-305)小鼠嵌合体EL或人(202-500)小鼠嵌合体EL肝素提取液的分析缓冲液，在4℃放置16小时。用90μl的洗涤液洗涤这些孔3次后，加入15μl的包含生物素标记抗C2标签抗体(Fab)和HRP标记链霉抗生物素的分析缓冲液，在室温放置1小时。用90μl的洗涤液洗涤这些孔3次后，加入15μl的TMB＋-Substrate-Chromogen(DAKO公司制)在室温显色30分钟后，添加15μl的0.05M的硫酸停止反应，测定450nm的吸光度。测定结果示于图3A～图3K。

显示55A1、7D4、14A1、2D5、53A11、13B3和23H8抗体与食蟹猴、狒狒、人(1-157)小鼠嵌合体EL结合，但不与小鼠EL结合。另外，显示13B3和23H8抗体与兔EL结合，但55A1、7D4、14A1、2D5和53A11抗体不与兔EL结合(图3A～图3G)。

另一方面，显示16B3、16E7、14E1和19E7抗体与食蟹猴EL、狒狒EL、人(1-305)小鼠嵌合体EL和人(202-500)小鼠嵌合体EL结合，但不与小鼠EL和人(1-157)小鼠嵌合体EL结合。另外，显示16B3、14E1和19E7抗体与兔EL结合，但16E7抗体不与兔EL结合(图3H～图3K)。

(参考例8)

各EL抗体的结合亲和性测定

各EL抗体的结合亲和性用Biacore测定。将抗C2标签抗体通过胺偶联法固定于传感器芯片CM5(GE HealthCare公司制)，添加用HBS-P(GE HealthCare公司制)稀释的狒狒EL肝素提取液、食蟹猴EL、或人(1-305)小鼠嵌合体EL肝素提取液，在传感器芯片上捕获EL。然后，添加用HBS-P稀释的EL抗体，用BIAevaluation软件通过二价拟合(Bivalent fitting)算出结合亲和性。各抗体对狒狒EL的结合亲和性示于表1，对食蟹猴EL的结合亲和性示于表2，对人(1-305)小鼠嵌合体EL的结合亲和性示于表3。

[表1]

。

[表2]

。

[表3]

。

将参考例5～8判明的各EL抗体的特征总结于下述的表4。

[表4]

。

(参考例9)

与人EL和小鼠EL结合的抗体的制备

用与参考例1同样的方法制备表达小鼠EL的腺病毒，用与参考例2同样的方法免疫EL敲除小鼠。用与实施例3和4同样的方法获得与人和小鼠EL结合的抗体(16F6)。利用小鼠单克隆抗体分型试剂盒(BD Bioscience)，确定抗体的亚型，16F6的亚型是IgG1。测定16F6的中和活性和结合亲和性，其结果示于表5和6。

[表5]

。

[表6]

。

(参考例10)

利用了狒狒EL的突变体的对EL抗体的结合有贡献的部位的作图

为了确定对EL抗体的结合重要的EL的氨基酸残基，对狒狒EL的氨基酸残基加入突变，通过ELISA研究EL抗体的结合。具体地，应用Quikchange Site-Directed MutagenesisKit(Agilent Technologies株式会社)对狒狒EL的cDNA加入突变，置换为丙氨酸。但是，在狒狒EL与小鼠EL的氨基酸残基不同的情况下，置换为小鼠EL的氨基酸残基。应用表达导入了突变的狒狒EL的质粒DNA，以与实施例2同样的方法制备肝素提取液，以与实施例8同样的ELISA法研究与抗体的结合。为了评价狒狒EL的氨基酸残基的相对贡献率，算出相对结合活性([A450成为1.0的抗体浓度_突变型EL]/[A450成为1.0的抗体浓度_野生型EL])。导入了突变的狒狒EL对55A1、7D4、14A1、2D5、53A11、13B3和23H8抗体的相对结合活性示于图7A-G。另外，导入了突变的狒狒EL对16B3、16E7、14E1、19E7和16F6抗体的相对结合活性示于图7H-L。

比较图7A-G的结果是，判明对55A1、7D4、14A1、2D5、53A11、13B3和23H8抗体与EL结合重要的氨基酸是SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的50位的精氨酸、60位的谷氨酸、61位的组氨酸、65位的酪氨酸、100位的天冬酰胺。

比较图7H-K的结果是，判明对16B3、16E7、14E1和19E7抗体与EL结合重要的氨基酸是SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的220位的组氨酸、221位的苏氨酸、222位的酪氨酸、223位的苏氨酸、224位的精氨酸、226位的苯丙氨酸、227位的甘氨酸、231位的甘氨酸、232位的异亮氨酸、233位的谷氨酰胺、234位的甲硫氨酸、240位的天冬氨酸、242位的酪氨酸、243位的脯氨酸、244位的天冬酰胺、246位的甘氨酸、249位的谷氨酰胺、250位的脯氨酸、251位的甘氨酸、254位的亮氨酸、258位的亮氨酸、263位的酪氨酸、269位的缬氨酸、273位的谷氨酸。

(参考例11)

各抗体的可变区的氨基酸序列确定

对于EL抗体，应用常规方法确定可变区的序列，示于图4A-4L。

以下，显示实施例对本发明具体说明，但本发明不限于下述实施例。另外，作为抗体制备手法，只要没有特别预先说明，则使用Immunochemistry in Practice(BlackwellScientific Publiations)记载的方法。另外，作为基因操作手法，只要没有特别预先说明，则使用Molecular Cloning：A Laboratory Manual，2^nd Edition(Cold Spring HarborLaboratory)记载的方法。

实施例1

小鼠单克隆抗体的人源化

基于如上述制备的16B3、55A1、53A11、23H8、13B3和16F6的小鼠单克隆抗体以及WO2013/054830记载的12B10的小鼠单克隆抗体的总计7个单克隆抗体，进行人源化抗体的制备。

具体地，将向人抗体构架导入了各小鼠单克隆抗体的CDR残基的人源化可变区插入以含有人κ恒定结构域和人γ1恒定结构域的pcDNA为基础的质粒衍生物中，由此进行人源化。

通过上述方法，基于16B3抗体，制备h16B3-S1、h16B3-S2、h16B3-S3、h16B3-S4、h16B3-S5、h16B3-S6、h16B3-S7、h16B3-S8、h16B3-F1、h16B3-F2和h16B3-F3总计11种人源化抗体。这11种人源化抗体的可变区的比对示于图8A、图8B、图8C和图8D。

通过上述方法，基于55A1抗体，制备h55A1-S1、h55A1-S2、h55A1-S3、h55A1-S4、h55A1-S5、h55A1-S6、h55A1-S7、h55A1-F1、h55A1-F2、h55A1-F3、h55A1-F4、h55A1-F5和h55A1-F6总计13种人源化抗体。这13种人源化抗体的可变区的比对示于图9A、图9B、图9C和图9D。

通过上述方法，基于53A11抗体，制备h53A11-S1、h53A11-S2、h53A11-S3和h53A11-S4总计4种人源化抗体。这4种人源化抗体的可变区的比对示于图10A和图10B。

通过上述方法，基于23H8抗体，制备h23H8-S1、h23H8-S2和h23H8-S3总计3种人源化抗体。这3种人源化抗体的可变区的比对示于图11A和图11B。

通过上述方法，基于13B3抗体，制备h13B3-S1、h13B3-S2、h13B3-S3和h13B3-S4总计4种人源化抗体。这4种人源化抗体的可变区的比对示于图12A和图12B。

通过上述方法，基于12B10抗体，制备h12B10-S1、h12B10-S2、h12B10-S3和h12B10-S4总计4种人源化抗体。这4种人源化抗体的可变区的比对示于图13A和图13B。

通过上述方法，基于16F6抗体，制备h16F6-S1、h16F6-S2、h16F6-S3、h16F6-S4和h16F6-S5总计5种人源化抗体。这5种人源化抗体的可变区的比对示于图14A和图14B。

这44种人源化抗体的可变区的氨基酸序列的概要总结于表7-1和7-2中，这些人源化抗体的可变区的氨基酸序列示于图15～图21。

[表7-1]

。

[表7-2]

。

实施例2

人源化EL抗体的EL酶抑制活性的测定

使用实施例1制备的质粒，使人源化抗体的蛋白质表达，用ProteinA纯化抗体。通过人源化抗体的EL酶抑制活性利用以下方法实施。

具体地，向由20mM tris盐酸缓冲液(pH7.5)、0.5％牛血清白蛋白、4mM氯化钙、150mM氯化钠、2mg/mL人HDL(Athens Research＆Technology公司制)构成的反应溶液中添加EL抗体后，添加EL酶溶液(以总量计10μl )。在37℃反应90分钟后，利用NEFA C-TestWako(和光纯药工业公司制)测定通过EL酶由HDL生成的游离脂肪酸(NEFA)，将其NEFA量作为酶活性指标。将未添加EL抗体时的酶活性作为对照值，算出抗体各浓度下相对于对照值的比活性，各抗体对人EL、人(1-305)小鼠嵌合体EL、人(331-459)小鼠嵌合体EL、食蟹猴EL或小鼠EL的50％抑制浓度(IC50值)示于表8-11。

对于16B3抗体，h16B3-S1、h16B3-S2、h16B3-S3、h16B3-S4、h16B3-S5、h16B3-S6、h16B3-S7、h16B3-S8、16B3-F1、16B3-F2和16B3-F3的人源化抗体显示与基础的16B3抗体大致同等或增强的中和活性。根据这些结果，认为重链第94位的氨基酸容许K或R，认为重链第31位的氨基酸容许G或A，认为重链第50位的氨基酸容许E或D，认为重链第98位的氨基酸容许R或K，认为重链第100位的氨基酸容许H或R，认为重链第100B位的氨基酸容许Ｙ或F，认为重链第102位的氨基酸容许V或L，认为轻链第93位的氨基酸容许K或R。另外，关于人源化抗体中应用的种系序列，认为轻链可变区容许IGKV4-1＊01、IGKV1-39＊01、IGKV3-15＊01或IGKV3-20＊01。

对于55A1抗体，h55A1-S1、h55A1-S2、h55A1-S3、h55A1-S4、h55A1-S5、h55A1-S6、h55A1-S7、h55A1-F1、h55A1-F2、h55A1-F3、h55A1-F4、h55A1-F5和h55A1-F6的人源化抗体显示与基础的55A1抗体大致同等或增强的中和活性。根据这些结果，认为重链第33位的氨基酸容许G或A，认为重链第34位的氨基酸容许M或L，认为重链第57位的氨基酸容许P或G，认为重链第62位的氨基酸容许D或E，认为重链第97位的氨基酸容许Ｙ或F，认为重链第100B位的氨基酸容许Ｙ或F，认为轻链第90位的氨基酸容许Q或N。另外，关于人源化抗体中应用的种系序列，认为重链可变区容许IGHV7-4-1＊02、IGHV1-18＊01或IGHV1-46＊01，认为轻链可变区容许IGKV7-3＊01、IGKV1-33＊01、IGKV1-39＊01、IGKV3-15＊01或IGKV3-20＊01。

对于53A11抗体，h53A11-S4的人源化抗体中和活性减弱。但是，h53A11-S1、h53A11-S2和h53A11-S3的人源化抗体显示与基础的53A11抗体大致同等或增强的中和活性。根据这些结果，认为重链R94K和轻链P8L的突变组合、或重链的R94K和轻链Y49K的突变组合是人源化抗体的中和活性期望的。

对于23H8抗体，h23H8-S1的人源化抗体中和活性减弱。但是，h23H8-S2和h23H8-S3的人源化抗体显示与基础的23H8抗体大致同等或增强的中和活性。根据这些结果，认为轻链的Y49S、P80R的突变是人源化抗体的中和活性期望的。

对于13B3抗体，h13B3-S1、h13B3-S2、h13B3-S3和h13B3-S4的人源化抗体显示与基础的13B3抗体大致同等或增强的中和活性。

对于12B10抗体，h12B10-S1、h12B10-S2、h12B10-S3和h12B10-S4的人源化抗体显示与基础的12B10抗体大致同等或增强的中和活性。

对于16F6抗体，h16F6-S1、h16F6-S2、h16F6-S3、h16F6-S4和h16F6-S5的人源化抗体显示与基础的16F6抗体大致同等或增强的中和活性。根据这些结果，认为重链R94V的突变、和轻链A43S的突变是人源化抗体的中和活性期望的，认为轻链第20位的氨基酸容许T或S，认为轻链第63位的氨基酸容许S或T，认为轻链第67位的氨基酸容许S或A，认为轻链第73位的氨基酸容许L或F。

[表8]

。

[表9-1]

。

[表9-2]

。

[表10]

。

[表11]

。

实施例3

人源化EL抗体的HL和LPL酶活性抑制能力的测定

将克隆了编码人HL的DNA的pcDNA3.1(Invitrogen公司制)转染FreeStyleHEK293F细胞，在37℃、8%CO2培养2日。离心培养液，回收细胞，在包含20U/mL的肝素的PBS中悬浮，在37℃温育45分钟。其后，通过离心除去细胞得到上清，将其作为人HL酶溶液。通过同样的操作，制备人LPL酶溶液。向由20mM tris盐酸缓冲液(pH7.5)、0.5％牛血清白蛋白、4mM氯化钙、150mM氯化钠、0.5mg/mL人VLDL(INTRACEL公司制)构成的反应溶液中添加EL抗体溶液后，添加人HL或人LPL酶溶液(以总量计10μl)。在37℃反应2小时后，利用NEFA C-TestWako(和光纯药工业公司制)测定通过HL或LPL酶由VLDL生成的游离脂肪酸(NEFA)，将其NEFA量作为酶活性指标。将未添加EL抗体时的酶活性作为对照值，算出相对于对照值的比活性，将各抗体的50％抑制浓度(IC50值)示于表12。

其结果是，可知h16B3-S2、h55A1-S1、h53A11-S1、h23H8-S2和h13B3-S1的人源化抗体不抑制HL和LPL的酶活性。

[表12]

。

实施例4

人源化EL抗体的结合亲和性测定

用Biacore测定各人源化EL抗体的结合亲和性。将抗C2标签抗体在传感器芯片CM5(GE HealthCare公司制)上通过胺偶联法固定，添加用HBS-P(GE HealthCare公司制)稀释的人(1-305)小鼠嵌合体EL、人(331-459)小鼠嵌合体EL、食蟹猴EL或小鼠EL肝素提取液，在传感器芯片上捕获EL。其后，添加用HBS-P稀释的EL抗体，用BIAevaluation软件，通过二价拟合(Bivalent fitting)算出结合亲和性。将各抗体对人(1-305)小鼠嵌合体EL、人(331-459)小鼠嵌合体EL、食蟹猴EL或小鼠EL的结合亲和性示于表13-1、表13-2、表14和表15。

[表13-1]

。

[表13-2]

。

[表14]

。

[表15]

。

产业上的可利用性

本发明的抑制血管内皮脂肪酶的酶活性的人源化抗体对血管内皮脂肪酶具有选择性抑制活性，因此作为用于脂质代谢异常症、高脂血症、动脉硬化、动脉粥样硬化、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、糖尿病、肥胖和/或X综合征的治疗和/或预防的药物是有用的。

序列表

<110> SHIONOGI & CO., LTD.

<120>

<130> 15P00051WO

<160> 106

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 500

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 1

Met Ser Asn Ser Val Pro Leu Leu Cys Phe Trp Ser Leu Cys Tyr Cys

1 5 10 15

Phe Ala Ala Gly Ser Pro Val Pro Phe Gly Pro Glu Gly Arg Leu Glu

20 25 30

Asp Lys Leu His Lys Pro Lys Ala Thr Gln Thr Glu Val Lys Pro Ser

35 40 45

Val Arg Phe Asn Leu Arg Thr Ser Lys Asp Pro Glu His Glu Gly Cys

50 55 60

Tyr Leu Ser Val Gly His Ser Gln Pro Leu Glu Asp Cys Ser Phe Asn

65 70 75 80

Met Thr Ala Lys Thr Phe Phe Ile Ile His Gly Trp Thr Met Ser Gly

85 90 95

Ile Phe Glu Asn Trp Leu His Lys Leu Val Ser Ala Leu His Thr Arg

100 105 110

Glu Lys Asp Ala Asn Val Val Val Val Asp Trp Leu Pro Leu Ala His

115 120 125

Gln Leu Tyr Thr Asp Ala Val Asn Asn Thr Arg Val Val Gly His Ser

130 135 140

Ile Ala Arg Met Leu Asp Trp Leu Gln Glu Lys Asp Asp Phe Ser Leu

145 150 155 160

Gly Asn Val His Leu Ile Gly Tyr Ser Leu Gly Ala His Val Ala Gly

165 170 175

Tyr Ala Gly Asn Phe Val Lys Gly Thr Val Gly Arg Ile Thr Gly Leu

180 185 190

Asp Pro Ala Gly Pro Met Phe Glu Gly Ala Asp Ile His Lys Arg Leu

195 200 205

Ser Pro Asp Asp Ala Asp Phe Val Asp Val Leu His Thr Tyr Thr Arg

210 215 220

Ser Phe Gly Leu Ser Ile Gly Ile Gln Met Pro Val Gly His Ile Asp

225 230 235 240

Ile Tyr Pro Asn Gly Gly Asp Phe Gln Pro Gly Cys Gly Leu Asn Asp

245 250 255

Val Leu Gly Ser Ile Ala Tyr Gly Thr Ile Thr Glu Val Val Lys Cys

260 265 270

Glu His Glu Arg Ala Val His Leu Phe Val Asp Ser Leu Val Asn Gln

275 280 285

Asp Lys Pro Ser Phe Ala Phe Gln Cys Thr Asp Ser Asn Arg Phe Lys

290 295 300

Lys Gly Ile Cys Leu Ser Cys Arg Lys Asn Arg Cys Asn Ser Ile Gly

305 310 315 320

Tyr Asn Ala Lys Lys Met Arg Asn Lys Arg Asn Ser Lys Met Tyr Leu

325 330 335

Lys Thr Arg Ala Gly Met Pro Phe Arg Val Tyr His Tyr Gln Met Lys

340 345 350

Ile His Val Phe Ser Tyr Lys Asn Met Gly Glu Ile Glu Pro Thr Phe

355 360 365

Tyr Val Thr Leu Tyr Gly Thr Asn Ala Asp Ser Gln Thr Leu Pro Leu

370 375 380

Glu Ile Val Glu Arg Ile Glu Gln Asn Ala Thr Asn Thr Phe Leu Val

385 390 395 400

Tyr Thr Glu Glu Asp Leu Gly Asp Leu Leu Lys Ile Gln Leu Thr Trp

405 410 415

Glu Gly Ala Ser Gln Ser Trp Tyr Asn Leu Trp Lys Glu Phe Arg Ser

420 425 430

Tyr Leu Ser Gln Pro Arg Asn Pro Gly Arg Glu Leu Asn Ile Arg Arg

435 440 445

Ile Arg Val Lys Ser Gly Glu Thr Gln Arg Lys Leu Thr Phe Cys Thr

450 455 460

Glu Asp Pro Glu Asn Thr Ser Ile Ser Pro Gly Arg Glu Leu Trp Phe

465 470 475 480

Arg Lys Cys Arg Asp Gly Trp Arg Met Lys Asn Glu Thr Ser Pro Thr

485 490 495

Val Glu Leu Pro

500

<210> 2

<211> 5

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 2

Gly Tyr Thr Met Ser

1 5

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 3

Glu Ile Ser Phe Ala Arg Asp Arg Ala Phe Tyr Pro Asp Thr Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 4

<211> 13

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 4

Leu Gly Gly Arg Asn His Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 5

<211> 15

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 5

Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu Met Gln

1 5 10 15

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 6

Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser

1 5

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 7

Gln Gln Ser Trp Lys Val Pro Phe Thr

1 5

<210> 8

<211> 13

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 8

Leu Gly Gly Lys Asn His Asp Phe Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 9

Gln Gln Ser Trp Arg Val Pro Phe Thr

1 5

<210> 10

<211> 13

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 10

Leu Gly Gly Lys Asn Arg Asp Phe Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 11

<211> 5

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 11

Ala Tyr Thr Met Ser

1 5

<210> 12

<211> 17

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 12

Asp Ile Ser Phe Ala Arg Asp Arg Ala Phe Tyr Pro Asp Thr Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 13

<211> 5

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 13

Asn Tyr Gly Met Asn

1 5

<210> 14

<211> 17

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 14

Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Gly Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 15

<211> 11

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 15

Arg Gly Tyr Tyr Gly Arg Arg Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 16

<211> 15

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 16

Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Val Asp Ser Tyr Met His

1 5 10 15

<210> 17

<211> 7

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 17

Ala Ala Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 18

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 18

Gln Gln Thr Ile Glu Asp Pro Pro Thr

1 5

<210> 19

<211> 5

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 19

Asn Tyr Gly Leu Asn

1 5

<210> 20

<211> 11

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 20

Arg Gly Tyr Tyr Gly Arg Arg Phe Phe Asp Val

1 5 10

<210> 21

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 21

Gln Asn Thr Ile Glu Asp Pro Pro Thr

1 5

<210> 22

<211> 5

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 22

Asn Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 23

<211> 17

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 23

Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Gly Thr Tyr Ala Gly Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 24

<211> 11

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 24

Arg Gly Phe Tyr Gly Arg Arg Phe Phe Asp Val

1 5 10

<210> 25

<211> 5

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 25

Asn Tyr Ala Leu Asn

1 5

<210> 26

<211> 5

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 26

Asp Tyr Thr Met His

1 5

<210> 27

<211> 17

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 27

Gly Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 28

<211> 10

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 28

Gly Asp Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Asn Tyr

1 5 10

<210> 29

<211> 11

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 29

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Ser Leu His

1 5 10

<210> 30

<211> 7

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 30

Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser

1 5

<210> 31

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 31

Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr Thr

1 5

<210> 32

<211> 5

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 32

Asp Asn Thr Ile His

1 5

<210> 33

<211> 17

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 33

His Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Asn Asn Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 34

<211> 11

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 34

Lys Gly Ile Tyr Tyr Ser Ser Pro Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 35

<211> 11

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 35

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 36

<211> 7

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 36

Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser

1 5

<210> 37

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 37

Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Phe Thr

1 5

<210> 38

<211> 5

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 38

Glu Tyr Thr Met His

1 5

<210> 39

<211> 17

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 39

Ser Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 40

<211> 10

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 40

Tyr Gly Asn Tyr Val Gly Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 41

<211> 10

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 41

Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met Tyr

1 5 10

<210> 42

<211> 7

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 42

Tyr Thr Ser Asn Leu Ala Pro

1 5

<210> 43

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 43

Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr

1 5

<210> 44

<211> 7

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 44

Thr Ser Gly Met Gly Val Gly

1 5

<210> 45

<211> 16

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 45

His Ile Trp Trp Asn Asp Glu Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 46

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 46

Asp His Leu Ala Tyr Tyr Phe Asp Val

1 5

<210> 47

<211> 11

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 47

Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala

1 5 10

<210> 48

<211> 7

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 48

Tyr Pro Phe Thr Leu Gln Pro

1 5

<210> 49

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 49

Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Leu Trp Thr

1 5

<210> 50

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 50

Asp His Leu Ala Phe Tyr Phe Asp Leu

1 5

<210> 51

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 51

Asp His Leu Ala Phe Phe Phe Asp Leu

1 5

<210> 52

<211> 7

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 52

Ser Ser Gly Met Gly Val Gly

1 5

<210> 53

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 53

Asp His Leu Val Phe Phe Phe Asp Leu

1 5

<210> 54

<211> 5

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 54

Thr Tyr Trp Ile Ala

1 5

<210> 55

<211> 17

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 55

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Ala Lys Thr Lys Tyr Asn Lys Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 56

<211> 7

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 56

Tyr Asp Tyr Gly Ala Asp Tyr

1 5

<210> 57

<211> 11

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 57

Lys Ala Ser Gln Asp Val Tyr Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 58

<211> 7

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 58

Ser Ala Ser Tyr Arg Phe Thr

1 5

<210> 59

<211> 9

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 59

Gln Gln His Tyr Ser Ile Pro Arg Thr

1 5

<210> 60

<211> 122

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 60

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Glu Ile Ser Phe Ala Arg Asp Arg Ala Phe Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Leu Gly Gly Arg Asn His Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 61

<211> 111

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 61

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr

20 25 30

Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Trp

85 90 95

Lys Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 62

<211> 122

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 62

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Glu Ile Ser Phe Ala Arg Asp Arg Ala Phe Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Gly Gly Arg Asn His Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 63

<211> 122

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 63

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Glu Ile Ser Phe Ala Arg Asp Arg Ala Phe Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Gly Gly Lys Asn His Asp Phe Trp Tyr Phe Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 64

<211> 111

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 64

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr

20 25 30

Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Trp

85 90 95

Arg Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 65

<211> 122

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 65

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Glu Ile Ser Phe Ala Arg Asp Arg Ala Phe Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Gly Gly Lys Asn Arg Asp Phe Trp Tyr Phe Asp Leu Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 66

<211> 122

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 66

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr

20 25 30

Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asp Ile Ser Phe Ala Arg Asp Arg Ala Phe Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Gly Gly Lys Asn Arg Asp Phe Trp Tyr Phe Asp Leu Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 67

<211> 111

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 67

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr

20 25 30

Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ser

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Trp

85 90 95

Lys Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 68

<211> 111

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 68

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr

20 25 30

Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Trp

85 90 95

Lys Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 69

<211> 111

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 69

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr

20 25 30

Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Trp

85 90 95

Lys Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 70

<211> 120

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 70

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Gly Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Tyr Tyr Gly Arg Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Lys

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 71

<211> 111

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 71

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Val Asp Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ile

85 90 95

Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 72

<211> 120

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 72

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Gly Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Tyr Tyr Gly Arg Arg Phe Phe Asp Val Trp Gly Lys

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 73

<211> 111

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 73

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Val Asp Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Asn Thr Ile

85 90 95

Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 74

<211> 120

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 74

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Gly Thr Tyr Ala Gly Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Phe Tyr Gly Arg Arg Phe Phe Asp Val Trp Gly Lys

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 75

<211> 120

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 75

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Ala Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Gly Thr Tyr Ala Gly Glu Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Phe Tyr Gly Arg Arg Phe Phe Asp Val Trp Gly Lys

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 76

<211> 111

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 76

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Val Asp Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ile

85 90 95

Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 77

<211> 120

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 77

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Gly Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Tyr Tyr Gly Arg Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Lys

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 78

<211> 111

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 78

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Val Asp Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ile

85 90 95

Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 79

<211> 111

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 79

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Val Asp Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ile

85 90 95

Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 80

<211> 111

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 80

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Val Asp Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ile

85 90 95

Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 81

<211> 120

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 81

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Gly Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Phe Thr Leu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Tyr Tyr Gly Arg Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Lys

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 82

<211> 119

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 82

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Asp Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Asn Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 83

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 83

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Leu Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Ser

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 84

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 84

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Leu Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Ser

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 85

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 85

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Ser

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 86

<211> 119

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 86

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Asn Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 87

<211> 120

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 87

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly His Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Asn Asn Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Gly Ile Tyr Tyr Ser Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 88

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 88

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 89

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 89

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Arg

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 90

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 90

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 91

<211> 119

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 91

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Gly Asn Tyr Val Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 92

<211> 106

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 92

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Tyr Thr Ser Asn Leu Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 93

<211> 119

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 93

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Ser Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Gly Asn Tyr Val Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 94

<211> 106

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 94

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Tyr Thr Ser Asn Leu Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 95

<211> 119

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 95

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asn Asp Glu Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp His Leu Ala Tyr Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 96

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 96

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr

20 25 30

Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Met

35 40 45

Ala Tyr Pro Phe Thr Leu Gln Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Leu Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 97

<211> 119

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 97

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asn Asp Glu Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp His Leu Ala Phe Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 98

<211> 119

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 98

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asn Asp Glu Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp His Leu Ala Phe Phe Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 99

<211> 119

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 99

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asn Asp Glu Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp His Leu Val Phe Phe Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 100

<211> 116

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 100

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Ala Lys Thr Lys Tyr Asn Lys Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Val Tyr Asp Tyr Gly Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 101

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 101

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Tyr Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Ile Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 102

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 102

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Tyr Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Ile Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 103

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 103

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Tyr Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Ile Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 104

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 104

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Tyr Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Ile Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 105

<211> 107

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 105

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Tyr Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Ile Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 106

<211> 17

<212> PRT

<213> 嵌合体

<400> 106

Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Gly Thr Tyr Ala Gly Glu Phe Lys

1 5 10 15

Gly

Claims

1.人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

包含分别由SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:106和SEQ ID NO:24的氨基酸序列所示的CDR1、2、3的重链可变区，以及

包含分别由SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18的氨基酸序列所示的CDR1、2、3的轻链可变区。

2.人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区。

3.人源化单克隆抗体或其抗体片段，选自：

27)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的轻链可变区，

28)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区，

29)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变区，

30)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链可变区，

31)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

33)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的轻链可变区，

34)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区，

36)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的轻链可变区，

37)人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有：

具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和

具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链可变区。

4.用于治疗或预防脂质代谢异常症的药物组合物，其包含权利要求1-3任一项所述的人源化单克隆抗体或其抗体片段。

5.权利要求1-3任一项所述的人源化单克隆抗体或其抗体片段，所述人源化单克隆抗体或其抗体片段用于治疗或预防脂质代谢异常症。

6.权利要求1-3任一项所述的人源化单克隆抗体或其抗体片段在制备用于预防或治疗脂质代谢异常症的药物中的用途。