CN107058336A - 一种ZxABCG11基因及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种ZxABCG11基因，其核酸序列如SEQ ID NO:1所示，基因来源于旱生植物霸王，其抗逆性为抗旱性及抗高温性。ZxABCG11基因的用途，是将ZxABCG11基因导入目的植物中，得到抗逆性提高的转基因植物，抗逆性为抗旱性。通过向目的植物中导入ZxABCG11基因后，目的植物的抗旱性得到显著提升。

Description

一种ZxABCG11基因及其用途
技术领域
本发明涉及一种ZxABCG11基因及其用途。
背景技术
我国是世界上旱灾最严重的国家之一，干旱和半干旱地区占国土面积的50.8％，并且主要分布在西北地区，干旱已成为限制农牧业生产的主要因素之一。在干旱面积日益扩大、程度日趋加重的情况下，如何实现农牧业高产已经成为亟待解决的迫切问题。从抗旱性极强的荒漠植物中发掘其优异抗逆基因资源进而改良栽培作物的抗逆性，是解决该问题的有效途径之一。西北地区的荒漠植物在对极端环境的长期适应和进化中逐渐形成了复杂而独特的抗旱机制、蕴含着丰富的抗旱基因资源，其在农作物及优良牧草抗旱性的遗传改良方面具有重要的应用价值。
旱生植物霸王是我国西北荒漠地区植被组成的优势种，具有极强的抗旱性。目前对霸王抗旱机制的研究主要集中于离子转运及渗透调节方面，其适应干旱环境的有效策略之一是大量吸收并积累Na+，在质膜、液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白的作用下将根系吸收的Na+上运至植株地上部并储存于液泡中作为有益的渗透调节剂来抵御干旱胁迫。而表皮角质层是植物适应干旱环境，防止水分散失的重要屏障，但目前的研究主要以耐旱能力较弱的中生植物为对象。赵翠仙和黄子琛的研究表明，旱生植物表皮角质层发育要比中生植物强烈、且多浆旱生植物角质层比少浆旱生植物更为加厚，多浆旱生植物霸王十分发达的叶表皮角质层是其适应沙漠干旱环境的重要特征。然而，有关旱生植物霸王角质层脂质分泌机制及其分子基础的研究至今尚未见报道。该机制的阐明将有助于解析角质层在荒漠植物适应干旱环境中的作用机制，将克服栽培作物抗性育种中抗逆基因匮乏的问题，在农作物和优良牧草抗旱性的遗传改良方面有广阔的应用前景。
发明内容
本发明的目的就是提供一种ZxABCG11基因及其用途，其可提高植物的抗旱性。
一种ZxABCG11基因，其核酸序列如SEQ ID NO:1所示，基因来源于旱生植物霸王。
一种ZxABCG11基因的用途，是将ZxABCG11基因导入目的植物中，得到抗逆性提高的转基因植物，其抗逆性为抗旱性及抗高温性。
具体的方案为：ZxABCG11基因通过重组表达载体导入所述目的植物中。
通过向目的植物中导入ZxABCG11基因后，目的植物的抗旱性得到显著提升。
附图说明
图1为霸王幼嫩叶总RNA质量检测电泳图；
图2为ZxABCG11 3’端片段电泳检测图；
图3为ZxABCG11 3’端片段菌体电泳检测图；
图4为ZxABCG11 3’端cDNA序列及软件预测分析的氨基酸序列；
图5为ZxABCG11 5’端目的片段电泳检测图；
图6为ZxABCG11 5’端片段菌体电泳检测图；
图7为ZxABCG11 5’端测序所得核苷酸序列及软件分析的氨基酸序列；
图8为ZxABCG11全长核酸序列分段校正电泳检测图(注：M:DNA分子量标准；1.2.3.4:片段1.2.3和4)；
图9为ZxABCG11全长cDNA核酸序列及软件推测翻译的氨基酸序(注：图中方框分别标注起始密码子及终止密码子)；
图10为不同叶位霸王ZxABCG11相对表达量分析；
图11为盐处理与渗透胁迫下霸王ZxABCG11相对表达量分析；
图12为高温处理与高温+渗透胁迫下霸王ZxABCG11相对表达量分析；
其中：图10、11、12中，数值为平均值±SD(n＝3)，柱上不同字母表示在P＜0.05水平上差异显著(Duncan检验)；Zxactin为内参基因，实验重复3次)。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行具体说明。应当理解，以下文字仅仅用以描述本发明的一种或几种具体的实施方式，并不对本发明具体请求的保护范围进行严格限定。
下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。
一、植物材料的培养与处理
将培养5周龄的霸王幼苗进行如下处理，进行表达模式分析：
a.干旱胁迫:用-0.5MPa山梨醇的营养液处理0.5，1，3，6，12，24，48h；
b.盐处理:用含有50mmol/L的NaCl的营养液处理0.5，1，3，6，12，24，48h；
c.高温处理:将幼苗移入35℃光照培养箱0.5，1，3，6，12h；
d.高温+干旱处理:将幼苗移入35℃光照培养箱，并同时浇灌-0.5MPa山梨醇营养液，处理0.5，1，3，6，12h。
取样时将叶剪下，蒸馏水冲洗净后用滤纸将叶片表面水分吸干，于液氮中迅速冷冻叶片防止降解，放置于超低温冰箱中保存，用于后续RNA提取。
二、试剂及仪器
试剂盒：植物柱式总RNA提取试剂盒(上海生工)，3’及5’端序列克隆RACE试剂盒(Clone-tech)，PCR扩增试剂盒(大连宝生物)，琼脂糖凝胶柱式回收试剂盒(北京康润)，PrimeScriptTM RT reagent Kit(Perfect Real Time)(大连宝生物)， Premix ExTaqTM II(Tli RNaseH Plus)试剂盒(大连宝生物)。
试剂：氯仿-异戊醇24:1(甘肃莱澳)，无水乙醇(甘肃莱澳)，T-simple载体(大连宝生物)，大肠杆菌活性感受态细胞DH5α(北京天根)，IPTG和X-gal(北京全式金)，其他试剂均购自化工院，纯度为分析纯。
仪器：冷冻离心机5810R(德国Eppendorf)，超微量分光光度计(美国Thermo)，PCR仪5331(德国Eppedorf)，凝胶成像仪HP(美国Alpha)，水平电泳槽Sub-Cell GT(美国Bio-Rad)，恒温摇床THZ-300(上海恒一)，实时荧光定量仪(Agilent Stratagene Mx3005P)，恒温金属浴(北京天根)。
三、总RNA提取
总RNA提取注意事项及具体过程参考试剂盒说明书，具体步骤为：
1)将装有霸王叶片样品的离心管于液氮中速冻，使用预冷的研磨杵迅速研磨，期间间隔放入液氮中速冻，研磨至粉末状；
2)迅速在离心管中加入850μL Trizol试剂，在涡旋仪上按压，剧烈震荡30s混匀，室温23℃下平放静置5-7min，加入200μL Chloroform-isoamylol(24:1)，震荡仪剧烈速转20s，室温放置3min后，于离心机中4℃12000rpm离心10min；
3)缓慢取出离心管，小心吸取上清液400μL于预先加入200μL无水乙醇的新的离心管中，混匀后用移液枪转入吸附柱中，室温放置2min；
4)将吸附柱对称放入离心机，4℃转速为14000rpm低温离心3min，倒去底部收集管中液体，在吸附柱中向管壁加入500μL漂洗液，室温静止2min，4℃10000rpm低温离心30s，倒掉底部收集管废液，再重复漂洗一次；
5)将吸附柱放入离心机中，10000rpm低温离心2min，除去滤膜上残留的酒精；
6)将吸附柱放置于新的离心管上，并置于冰上开盖子晾2min，彻底除去残留乙醇；
7)在滤膜中央加入30μL RNAase-free dd H2O，冰上放置5min，进而4℃低温，转速为12000rpm离心2min，将所得RNA于超低温冰箱中保存。
RNA纯度及浓度检测：用移液枪吸取2μL RNA于核酸检测仪，所测得吸光值OD260/OD280的比值为2.0左右证明所提取核酸质量较高，小于2.0表明蛋白质和DNA含量较高，OD260/OD230数据比值为2.0-2.2之间较好，若多糖多酚或胍盐残留则该值偏低。记录RNA浓度值，用于下一步实验。
四、ZxABCG11全长cDNA克隆
(1)3’及5’RACE实验
具体方法及注意事项参照Clone-tech SMARTer TAKARA核酸末端快速扩增试剂盒说明书进行：
准备4个离心管，每个离心管均为10μL体系，依次加入下列组分：
然后在3’RACE反应管中按顺序用移液枪加入以下各试剂：
在5’RACE反应管中按顺序用移液枪加入以下各试剂：
瞬时离心混匀后，在恒温金属浴仪器中设定62℃保温3min，然
后在42℃水浴锅降温2min。孵育时同时准备下列各组试剂备用：
孵育结束后先在5’cDNA末端扩增反应离心管中加入1μL试剂盒中IIA oligo，混匀后向每管加入5.25μL预先混匀试剂，此时每管均为10μL体系。
最后42℃孵育90min，70℃加热10min终止反应。
(2)基因克隆引物设计
根据已知序列片段，在Primer 5.0软件中输入序列设定所需条件设计特异性引物。引物设计原则为选择GC碱基含量较高，退火温度在60℃左右，引物特异性较高；且在DNAMAN中分析其自身结构，无复杂结构或自由能绝对值小于10。设计巢式引物分别对5’和3’端基因序列，且巢式引物分别与试剂盒自带引物配对进行PCR扩增。引物序列为：
5’外侧引物：P5-w：TATTGCCTCAGCAGTTGTTACCT
5’内侧引物：P5-n：GAAGTTTCATAGAGCCCTTTAGTG
3’外侧引物：P3-w：GAGACCCAGATTGCTTTTCCTTG
3’内侧引物：P3-n：ATTCGTCACCTTTATGTCAATCGG
序列扩增拼接结束后，为校正序列准确性，将序列分为4段，相邻两段之间重合100bp左右，引物序列为：
分段1：P1-1：CATGAGGGACAGTGCAAGTAATGTT
分段1：P1-2：TTGCCTCAGCAGTTGTTACCTT
分段2：P2-1：CAGTGCCTCCGCTTTCTTT
分段2：P2-2：CCAATAGTAGCCGAAGTCC
分段3：P3-1：CTGCTGAGGCAATACGAACC
分段3：P3-2：CGCCAAAATGGTTTCGGTAT
分段4：P4-1：CAATAGCCAGTGTTGTCCCC
分段4：P4-2：GGATTCCATTGCTACATTGTCTG
(3)PCR反应
依次在扩增序列的反应管中加入已下各种试剂，并用枪头吹打混匀：
随后在PCR仪上按照如下程序：94℃预变性2min；94℃变性25sec、53℃退火45sec、72℃延伸40sec(延伸时间按照1kb/1min计算)，25个循环；最后72℃延伸10min，4℃保存。
为保证序列准确性，还需用高保真酶重新扩增，体系为：
PCR反应程序为三步法：98℃预变性10sec、55℃退火15sec、72℃延伸40sec(延伸时间按照1kb/min计算)，30个循环，最后4℃保存。
(4)扩增反应的回收和纯化
在电泳得到目的片段后，在成像仪照相板上参考Maker标示，将所推测的目的亮带快速切下，按照GenStar柱式凝胶纯化回收试剂盒步骤对目的条带进行提取纯化：
称重：将目的片段凝胶切碎，放入新的已称重的大离心管中，天平称重并计数；
溶解凝胶：按照每1mg凝胶加入1μL膜结合液计算，在55℃水浴中溶解，间隔1min混匀，直至胶块完全溶解，溶解时间不超过5min；
DNA结合：待溶胶液冷却至常温后，用移液枪吸入带有吸附柱中，23℃静置1-2min，14000rpm常温22℃离心2min，倒掉离心在底部收集管内的液体，将带有滤膜的过滤柱放回；
漂洗：加入600μL预先加入无水乙醇的膜漂洗液，14000rpm常温离心40sec，弃除底部的废弃液体，并将过滤柱放回，再重复漂洗一次；将吸附柱盖子去除后，于离心机中14000rpm常温离心90sec，彻底除净包含在滤膜的废液；
洗脱DNA：将吸附柱放于新的反应管中，在过滤柱滤膜上加入预热至55℃的灭菌ddH2O，室温静置1min，14000rpm离心1min；
检测：将所回收的目的片段吸取5μL电泳检测，若成功回收到目的片段，则于-20℃保存备用。
(5)回收产物连接
目的片段回收后为便于测序，将其连接至T载体，但高保真酶扩增片段需延伸加A后连接。连接反应方法按照宝生物T载体自带反应说明书进行：
在200μL反应管中按顺序加入以下各组试剂：
枪头吹打混匀后，16℃水浴温浴12小时，确保连接效率。
(6)连接产物转化
将已经连有目的条带的载体冰冻法转化大肠杆菌活性感受态细胞，具体步骤按照天根生物DH5α感受态细胞说明书进行：
a、取50μl未冻融的感受态细胞液体于冰盘中自然消融；
b、吸取5μl连接产物，将枪头伸入感受态悬浮液，轻轻吹打出连接产物，置于冰浴30min；
c、将离心管42℃高温热激80sec，然后迅速转入冰中冷冻5min，期间不要晃动反应管；
d、在反应管中加入400μl不含无氨苄的液体SOC培养基，于37℃摇床中黑暗条件下150rpm复苏菌体1h；
e、均匀涂布10μl IPTG和8μl X-Gal在固体LB培养基表面(含有100μg/mL氨苄)，便于蓝白斑筛选；
f、将复苏后的菌液4000rpm离心3min，弃去上部澄清液体，吹打混匀菌液后，吸取30μl均匀涂布于操作e中的平板，倒置37℃暗培养12h；
(7)阳性克隆筛选与测序
将平板取出后置于4℃冰箱中冷却，使其充分显色。用枪头随机挑取单一白斑于含有Amp抗生素的LB液体培养基中，于37温度黑暗摇床中150rpm培养6h。进行菌体PCR检测。在反应管中按顺序加入以下各组试剂：
电泳检测后，挑选有目的条带的克隆送至公司测序。
五、ZxABCG11表达模式分析
(1)反转录cDNA第一链合成
1)除去基因组DNA
在冰上按照以下步骤配置反应混合液于200μL离心管中混匀，RNA每个离心管中终浓度为2000ng。
瞬时离心混匀后，42℃金属浴中静置3min，置于4℃用于下步反应。
2)反转录反应
在1.5mL离心管中按照反应数量混合以下试剂：
瞬时离心混匀后，向(1)中离心管分别加入10μl混匀反应液，快速离心收集液体后，37℃金属浴15min，85℃热激5sec停止反应；4℃保存，用于下步荧光PCR反应。
(2)实时荧光定量PCR反应
依据已克隆得到的霸王ZxActin及ZxABCG11基因序列设计引物，引物由大连宝生物合成，PAGE方式纯化。引物序列如下：
表4-1实时荧光定量PCR引物序列
Table 4-1 Sequence of primers for real-time quantitative PCR
按照反应数在1.5mL离心管中混匀下列组分后，分别加入200μL的PCR八连管中：
PCR反应条件为：95℃预变性30s；95℃变性5s、60℃退火35s，40个循环。每个样品各个基因均重复3次，按照2-△△Ct相对定量法计算待检测基因在不同处理条件下的相对表达量。
(3)数据处理
采用Excel(Microsoft Office 2007)软件对所得数据作图，并使用SPSS19.0软件对数据进行单因素方差分析(ANOVA)，用Duncan进行多重比较的差异显著性分析，最小差异显著性水平为P＜0.05。
六、结果与分析
1、RNA质量检测
将用霸王幼嫩叶提取的植物总RNA经甲醛变性凝胶电泳检测，结果表明28S和18SRNA的条带均很清晰(图1)，前者的亮度、宽度约为后者2倍，并且在28S上面无DNA条带，表明RNA完整性好，且无DNA混杂。经核酸检测仪测定，OD260nm/OD280nm为1.95，OD260nm/OD230nm为2.1，浓度为1357ng/μL，表明RNA质量良好，可用于后续RACE实验。
2、ZxABCG11基因3’端序列扩增
(1)3’端RACE
以霸王50mmol/L NaCl处理三天的霸王幼嫩叶总RNA为模板，进行3’端RACE实验。进而以3’端RACE实验所得cDNA为模板，用试剂盒自带引物与特异引物P3-w(引物序列见4.1.4)进行外侧扩增，将所得PCR产物为模板，用P3-n与试剂盒自带引物进行巢式目的条带扩增。琼脂糖凝胶电泳检测发现在1105bp处有一亮带(图2)，推测是ZxABCG11基因3’端序列。
(2)鉴定阳性克隆
将图2中的推测是所需PCR产物的条带切下，片段回收提取和纯化运用柱式的胶回收试剂盒，回收所得产物电泳检测后，连接至所购pGEM-T载体，进而转化入Ecoli.的活性感受态细胞Trans-5α，在平板上随机选白色独立菌落6个克隆，作为菌体PCR模板。PCR产物进行电泳检测，发现在1105bp处多个检测样均出现亮带(图3)，与巢式PCR检测结果一致，推测为ZxABCG11基因3’端序列。将出现预测目的条带的菌体样品送至公司检测。
(3)3’端序列测序结果及cDNA序列分析
将菌体检测阳性克隆送至公司测序，得到一段1105bp的序列片段。在DNAMAN序列分析软件中对其翻译的氨基酸进行分析，发现该段序列共翻译281个氨基酸，TAG为终止密码子；其3’端非翻译区共有262bp，包含poly A 25bp(图4)，表明克隆片段完整性好。将该序列在Gene Bank上BLAST分析，与已鉴定的ABCG11基因的同源性较高，表明克隆所得序列为霸王ABCG11基因序列片段。
3、ZxABCG11基因5’端序列扩增
以霸王50mmol/L NaCl处理三天的霸王幼嫩叶总RNA为模板，进行5’端RACE实验。进而以5’端RACE实验所得cDNA为模板，用试剂盒自带引物与特异引物P5-w(引物序列见4.1.4)进行外侧扩增，将所得PCR产物为模板，用P5-n与试剂盒自带引物进行内侧扩增PCR。运用凝胶电泳检测发现在1024bp处有一亮带(图5)，推测是ZxABCG11基因5’端序列。
鉴定所得的阳性克隆
将图3-5中的预测ZxABCG11基因5’端巢式PCR产物亮带回收至离心管，运用琼脂糖凝胶柱式回收试剂盒纯化目的条带，连接至所购粘末端pMD19-T载体，冰冻法转化至具有活性的大肠杆菌感受态细胞DH5α，在平板上选独立白色6个推测克隆，作为菌体PCR模板。PCR产物进行电泳检测，发现在1024bp处多个检测样均出现亮带(图6)，与巢式PCR检测结果一致，推测为ZxABCG11基因5’端序列。将出现待测目的条带的菌体样品送至公司检测。
(3)5’端序列测序结果及序列分析
将菌体检测样品送至公司测序，得到一段1024bp的序列片段。在DNAMAN序列分析软件中对其翻译的氨基酸进行分析，发现该段序列共翻译324个氨基酸，ATG为终止密码子；其5’端非翻译区共有54bp(图7)，表明克隆片段完整性好。将该序列在Gene Bank上比对BLAST分析，与已经鉴定功能的ABCG11基因的同源性均在70％以上，表明克隆所得序列为霸王ABCG11基因序列片段。
4、ZxABCG11基因全长cDNA序列校正
ZxABCG11基因全长cDNA序列5’与3’端序列得到后，用DNAMAN将其拼接。然后将其ORF框分为四段，为保证测序结果覆盖全部序列，相邻两段序列之间重叠100bp左右。分段扩增模板为RNA反转录所得cDNA第一链，各段引物参照4.1.4中分段引物序列。PCR扩增后分别得到第一段1022bp，第二段538bp，第三段711bp和第四段688bp共四段序列(图8)。测序结果在Gene Bank中序列比对BLAST后，与已经鉴定功能的ABCG11基因序列相似性均很高，确定是霸王ZxABCG11基因片段。将四段序列在DNAMAN中拼接，与原序列比对后发现原3’与5’端片段拼接序列共有2个位点有差异，但均为同义突变，不影响氨基酸序列。
5、ZxABCG11基因全长cDNA序列及氨基酸翻译
将序列校正后的四段序列拼接后得到霸王ABCG11基因全长cDNA序列，共2416bp。在DNAMAN中进行氨基酸翻译，发现该序列包含起始密码子ATG前的5’端非翻译区54bp，开放阅读框(ORF)2100bp以及终止密码子TAG后的3’端非翻译区262bp，其中包含25bp polyA，共翻译700个氨基酸(图9)。运用在线软件Compute PI/MW预测霸王ABCG11脂质转运蛋白的等电点PI为9.05，分子量为77.7kDa。本研究中将该基因命名为ZxABCG11，其序列如SEQ IDNO:1所示。
七、ZxABCG11表达模式分析
(1)霸王ZxABCG11表达量组织特异性分析
将5周龄霸王分别取三层不同叶位进行组织特异性分析。分析发现ZxABCG11相对表达量在最嫩叶中最大，中度幼嫩叶片(第四层叶)表达量居中，而老叶即子叶中表达量最低(图10)。表明霸王角质层脂质转运蛋白编码基因ZxABCG11大量在幼嫩叶中表达，其相对表达量约为子叶中的2倍。
(2)不同处理下霸王ZxABCG11表达模式分析
表达模式分析发现(图11)，在50mM NaCl处理下，ZxABCG11在0.5h时表达量显著上调，表达量升高为对照0h的2.3倍，在1-6h表达量基本维持不变后，12h时其表达量下降。在-0.5MPa渗透胁迫处理下，ZxABCG11表达量在0.5h上调为对照的3.7倍，1h时表达量达到最高峰值，与对照相比高于3.3倍，在24h时表达量下调为与对照相近。由图中也可看出-0.5MPa渗透胁迫下ZxABCG11表达量上调倍数大于盐处理，其表达量最大值约为50mM NaCl处理的2倍。
表达模式分析发现(图12)，在35℃高温处理下，ZxABCG11在1h时表达量显著上调，与对照0h的表达量相比，上调2.6倍，在6h表达量达到最大值，约为对照的6倍，12h时表达量下调。在35℃高温与-0.5MPa渗透胁迫处理下，ZxABCG11表达量在1h上调为对照的4.5倍，表达量的最大峰值出现在3h时，约为对照的8倍，在12h时表达量下调为与对照相近。由图中也可看出高温与-0.5MPa渗透胁迫下ZxABCG11表达量上调倍数大于单一高温处理，其表达量峰值约为高温35℃处理的1.3倍。
表明渗透胁迫、高温胁迫以及高温+渗透胁迫下霸王ZxABCG11基因表达量均在短时间内显著上调(图10、11)，表明ZxABCG11在霸王抵抗逆境中发挥重要作用。研究发现在-0.5MPa渗透胁迫下ZxABCG11相对表达量高于50mM NaCl处理，其可能的原因是50mM NaCl促进了霸王生长(Ma等，2012)，其渗透势约为-0.27MPa，低于-0.5MPa渗透胁迫。此外，高温+渗透胁迫下ZxABCG11表达量上调最大，表明双重胁迫条件更能诱导其表达，进一步表明ZxABCG11对于霸王抵抗高温、干旱等逆境具有重要意义。因此本研究克隆的霸王ZxABCG11基因将为探究其在霸王抗逆性中的分子机制奠定基础。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在获知本发明中记载内容后，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对其作出若干同等变换和替代，这些同等变换和替代也应视为属于本发明的保护范围。
序列表
<110> 兰州大学
<120> ZxABCG11及其应用
<160> 1
<210> 1
<211> 2103
<212> DNA
<213> 旱生植物霸王
<400> 1
ATGAGGGACAGTGCAAGTAATGTTATTATGGAGATAGAAGCGAACAAGCCATCTGGCAAT 60
GGGATAGTAGTGGCAGGATTGAGTCCTCTGAGCGAGACATTGTGGAGGGAGAAGACTAAT 120
ACAGACTTTGTAGGAGATGTGTCAGCCAGGCTCACTTGGAAGGATCTGACTGTCATGGTG 180
ACTCTCGGCAATGGGGATACTCAGAATGTTTTGGAAGGTCTTACAGGATATGCTGAGCCT 240
GGTACTATCACTGCTCTTATGGGTCCTTCTGGCTCTGGAAAGTCTACACTGCTCGATGCT 300
CTTTCCAGCCGCCTCGCTTCCAACGCGTTCCTCTCGGGATCCATTCTTCTAAATGGCAGG 360
AAAACTAAACTCTCCTTTGGAGCTGCAGCATATTTGACACAAGATGACAACCTAATTGGG 420
ACTCTGACGGTCAGGGAAACGATTTCATATTCAGCTAGGCTGCGACTTCCCGATAAGATG 480
CCGTGGGCGGAGAAGCGTGCCTTGATCGAGAGTACCATAATAGAGATGGGTCTCCAAGAC 540
TGTGCTGATACAGTTATCGGAAATTGGCATTTGCGAGGGATCAGTGGAGGAGAAAAGAGA 600
AGAGTTAGTATTGCTGTTGAGATCTTGATGAGGCCGAGATTGCTTTTCCTTGATGAGCCA 660
ACAAGTGGACTAGACAGTGCCTCCGCTTTCTTTGTGACTCAAACACTCCGTGGCCTGTCT 720
AGAGACGGAAGGACTGTCATAGCCTCAATTCATCAGCCTAGTAGTGAAGTGTTCGAACTG 780
TTTGATCAATTATACTTGCTTTCTAGTGGCAAAACAGTGTATTTTGGGAAGGCTTCAGAA 840
GCATATGAATTTTTCGCAGATGCTGGATTTCCCTGCCCTGCACTGAGGAATCCATCCGAT 900
CATTTCCTTAGGTGTGTCAATGCTGATTTCGACAAAGTTAAGGCAACACTAAAGGGCTCT 960
ATGAAACTTCGGATCGAGGCAAGTGACGATCCTGTGGAGAAGGTAACAACTGCTGAGGCA 1020
ATACGAACCCTCATTGATCACTACAACTCTTCGCAGTACTCTTATGCAGCAAGAGAGAGG 1080
GTTGATTTAATATCCAAAGTTAAAGGGACAGTGCTCGACATTGGAGGAAGTCAAGCGAGC 1140
TTCTTGATGCAGGCTTTCACTTTAACAAAGCGTTCATTTGTTAACATGTCAAGGGACTTC 1200
GGCTACTATTGGTTGAGGCTTGTCATTTACATCGTAGTCACTATCTGCATCGGAACTATA 1260
TATTTTGATATAGGGACAGGCAGCAGCGCAATGCTGGCAAGGGGGGCATGTGCATCATTT 1320
GTTTTCGGCTTTGTCACGTTTATGTCAATTGGTGGATTTCCTTCTTTTGTGGAAGACATG 1380
AAGGTTTTCCAAAGAGAGAGGCTGAATGGCCACTATGGTGTAGCTGCATTTGTCATAAGC 1440
AATACACTCTCCGCGATGCCTTTTCTCATACTGATCACCTTTCTCTCTGGCACCATCTGT 1500
TACTTCATGGTCCGCCTCCATCCGGGTTTCGAACATTACTTGTTCTTCGTGTTGTGCTTA 1560
TATGCTAGTGTCACTGTTGTTGAGAGCTTGATGATGGCAATAGCCAGTGTTGTCCCCAAC 1620
TTCCTGATGGGCATCATAACAGGGGCTGGCATTCAGGGAATATTCATGCTAGTATCAGGA 1680
TACTTCAGGCTTCCGAAGGATATACCGAAACCATTTTGGCGCTACCCTATGTCCTTTATC 1740
AGCTTCCACTTCTGGGCTCTGCAGGGACAATACCAGAATGATCTAAGGGGATTACTATTT 1800
GACAGTCCATCTGGTCCATTCAAAGTTCCTGGTGACTATGTCCTGGAGAACTATTTCCAG 1860
ATTGATTTGAGTCGGTCGAAATGGGTGAACCTCGGTGTTCTCTTCGGCATGATAGCTGCC 1920
TACCGCGTTATCTTCTTTATCATGATCAAGATCAATGAGGATATAACTCCTTGGATAAGG 1980
GGATACATTGCAAGGAAAAGAATGCAACATAAGAATGGAAACCAGACTGGTCCTACTCTT 2040
ACTCAGTCTCCTTCCCTTAGGAACTATGTGTCCAGCCGATCAAATCGAGCAAGCAGAAGG 2100
TAG 2103

Claims (2)

1.一种ZxABCG11基因，其核酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种ZxABCG11基因的用途，是将ZxABCG11基因导入目的植物中，得到抗逆性提高的转基因植物，其抗逆性为抗旱性及抗高温性。
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