CN107050142A - 一种改善睡眠的中药组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种改善睡眠的中药组合物，它是由酸枣仁和茯苓组成的，酸枣仁和茯苓的重量比例关系是1:3‑3:1。本发明中由酸枣仁和茯苓组成的中药组合物选用两种常见的食药同源材料，通过混合制备成具有改善睡眠的中药组合物，能够很好的改善睡眠人群的睡眠质量，提升亚健康人群的生活品质。

Description

一种改善睡眠的中药组合物
技术领域
本发明涉及一种改善睡眠质量的组合物，特别涉及一种含有酸枣仁和茯苓的改善睡眠的药物组合物，属于中药领域或中药领域。
背景技术
酸枣仁为鼠李科落叶灌木或小乔木植物酸枣Ziziphus jujubaMill.var.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chou的干燥成熟种子。其功效为养心益肝，安神，敛汗。其主要成分酸枣仁皂苷A、B等皂苷类和斯皮诺素等黄酮类成分。
茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Shcw.)Wolf的干燥菌核，其功效为利水渗湿，健脾，宁心安神。其主要成分为茯苓多糖及茯苓酸等成分。
从其功效上看，两者均能安神。北京中医药大学苏冠宇对三部《名医类案》不寐病进行用药统计[1]，发现酸枣仁共出现了105次，茯苓共出现63次。北京中医药大学孙洪生[2]对其列入统计的古代文献中不寐方共396方，用药306味，其用药频次酸枣仁为134次(33.84％)、茯苓为112次(28.28％)，并且酸枣仁与茯苓共用的方剂有70首(17.67％)。
另外在《秘传奇方》[3]一书中记载有无名方只炒酸枣、茯苓两味药。中医失眠又称为不寐、不得眠、不得卧，是由于情志失常，饮食不节，劳逸失调，病后体虚等引起心神失养或心神不安，导致不能正常获得睡眠。换言之就是，失眠具有的表现一是入睡困难，入睡时间超过30分钟；二是睡眠质量下降，睡眠维持障碍，整夜觉醒次数≥2次、早醒、睡眠质量下降；三是总睡眠时间减少，通常少于6小时。
以当今医学的发展，已有许许多多的药物可以治疗失眠，但往往结果不是十分理想。如果能在平常膳食中摄入对改善睡眠有帮助的食物，对于该疾病的控制与预防应有重要意义。因此找到行之有效的能改善睡眠的食疗方也是十分重要的事。但是，应用药物的时候常常会引起一般人群的抗拒心理，容易给人一种病情严重的主观感受。因此，在现有的药食同源的中药材成分中挑选出适宜的中药成分进行配合应用，优化组分的比例关系，构成具有改善睡眠的保健型食品具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中改善睡眠的治疗方案多采用药物进行治疗，容易引起失眠人群抗拒心理的不足，提供一种具有改善睡眠的中药组合物，采用药食同源的成分配合构成中药，在不引起人们抗拒心理的情况下实现对于失眠人群睡眠质量的改善作用。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
一种改善睡眠的中药组合物，它是由酸枣仁和茯苓组成的。
本发明的改善睡眠的中药组合物是以食药同源的酸枣仁和茯苓作为基础原料的，安全可靠，可以作为日常中药服用，提高失眠人群的睡眠质量。
进一步，所述中药组合物中，酸枣仁和茯苓的重量比例关系是1:3-3:1。本发明的实验研究过程中发现当酸枣仁和茯苓按照适宜的比例混合的时候可以达到优于单一成分应用的效果，根据研究的比例范围适宜设置在1:3-3:1之间。
进一步，所述酸枣仁是生枣仁和炒枣仁中的一种或两种混合物。应用生枣仁和炒枣仁的混合物作为酸枣仁原料应用，是选用了酸枣仁的两种不同炮制方法制成的，可以发挥出更好的酸枣仁功效，虽然没有明确生枣仁和炒枣仁共同应用在本发明的中药组合物中具有什么样的功效，但是有显著的证据表明同时应用两种可以更好的和茯苓协同配合，提高组合物促进睡眠的功效。所述生枣仁是普通的酸枣仁，没有经过其他的炮制处理，和炒枣仁相对。炒枣仁是酸枣仁经过炒制得到的炮制酸枣仁，也称炒酸枣仁。
更具体的，酸枣仁炮制方法：原药放入竹箩内，沉入清水缸中，使仁浮在水面，壳沉水底，将枣仁捞出、晒干。
更具体的，炒酸枣炮制方法：取洁净的酸枣仁，置锅内用文火炒至外皮鼓起并呈微黄色，取出，放凉。
以上酸枣仁和炒枣仁的炮制方法是本发明研究中应用的炮制方法，可以更好的发挥出酸枣仁和炒枣仁的功效，还可以采用其他的炮制方法
进一步，所述酸枣仁是生枣仁和炒枣仁按照4:6～6:4的重量比例混合而成的。酸枣仁和茯苓混合应用的过程中，如果将生枣仁和炒枣仁按照大约各半的比例混合使用，可以更好的和茯苓发挥出协同增效作用，原本两味中药成分变成了两味以上的中药成分的混合，药物之间的配合关系发生变化，具有更好地改善睡眠功效。
进一步，所述中药组合物是由混合酸枣仁和茯苓按照1:2～3:1的比例混合制成的。所述混合酸枣仁是由酸枣仁和炒枣仁按照4:6～6:4的比例混合而成的，也称混合枣仁、生炒各半。当所述中药组合物中由混合酸枣仁(生炒各半的酸枣仁)和茯苓按照上述比例配制而成的时候，中药组合物中的药效成分的比例更加适宜，中药组合物的治疗功效更加的突出显著，能够更好的改善睡眠状况。
本发明还提供了一种具体的制备实施方案，采用以下的制备方案可以更好的预处理中药组合物，使之品质更加优秀。当然也可以采用其他的处理方法，完成对于组合物的预处理，制备加工制备得到适宜形态的产品。
进一步，所述改善睡眠的中药组合物采用以下方法加工处理，按比例称取原料混合，加入5-20倍重量的水，浸泡10-60分钟，然后煎煮1-4次，优选煎煮2-4次。合并滤液，过滤，浓缩至1-4g/mL，即为中药组合物的汤剂。
上述提供的加工方法处理酸枣仁和茯苓组合物的效率较高，能够显著的改善，经过试验验证所得的汤剂能够充分发挥中药组合物的功效。煎煮得到的汤剂具有性质温和，容易为失眠人群服用(作为睡前补水饮料饮用)，可以很好很方便的促进失眠人群的睡眠质量提升。
进一步，加入7-15倍重量的水进行浸泡、煎煮提取。
进一步，浓缩的时候采用减压浓缩，浓缩至1-3g/mL。经过浓缩得到浓度适宜的汤剂，中药组合物中的有效成分的浓度适宜，功效优良。
进一步，本发明的中药组合物可以加工成保健品、茶、饮料、中药新药、创新药物等，通过不同的形式充分的发挥出该组合物的功效。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
1.本发明中由酸枣仁和茯苓组成的中药组合物选用两种常见的食药同源材料，通过混合制备成具有改善睡眠的中药组合物，能够很好的改善睡眠人群的睡眠质量，提升亚健康人群的生活品质。
2.本发明的中药组合物中，酸枣仁和茯苓混合以后的组合物，由于两种药物相互作用，药效成分的释放效率更高，能够发挥出优于单一药物应用的效果，具有一定的协同增效作用。
3.本发明的中药组合物配合的原料重量比例关系，基于创新性研究中的意外发现，实现的改善睡眠质量的功效并不能够直接的从药物的固有效果推导得出，取得的效果属于难以预料的效果，对于中药组合物的开发具有重要的指导意义。
4.本发明的中药组合物应用的水煎煮提取制备，可以简单方便的制备得到不含有机物残留的汤剂，即方便应用，又能够保持保健品的天然属性。
附图说明：
图1是酸枣仁皂苷AHPLC标准曲线图。
图2是A为酸枣仁皂苷A对照品峰。
图3是B为生枣茯苓3:1酸枣仁皂苷A。
图4是斯皮诺素HPLC标准曲线图。
图5是C为斯皮诺素对照品峰。
图6是D为样品中斯皮诺素峰。
图7是酸枣仁皂苷A紫外波长扫描图。
图8是样品中皂苷波长扫面图。
图9是酸枣仁皂苷A紫外标准曲线图。
图10是斯皮诺素紫外波长扫描图。
图11是样品扫描图。
图12是斯皮诺素紫外标准曲线。
图13是葡萄糖紫外波长扫描图。
图14是样品紫外波长扫描图。
图15是葡萄糖紫外标准曲线。
具体实施方式
下面结合试验例及具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。本发明中为特别说明的比例一般为重量比例关系。
实施例1
改善睡眠的中药组合物，它是由生酸枣仁和茯苓按照1:1的重量比例混合而成。
实施例2
改善睡眠的中药组合物，它是由炒酸枣仁和茯苓按照1:2的重量比例混合而成。
实施例3
改善睡眠的中药组合物，它是由酸枣仁和茯苓按照1:3的重量比例混合，加入10倍的水，浸泡30分钟，然后煎煮3次，合并滤液，过滤，浓缩至2g/mL，即为中药组合物的汤剂，可以作为保健品、饮料等。
实施例4
改善睡眠的中药组合物，它是由酸枣仁和茯苓按照3:1的重量比例混合，加入15倍的水，浸泡20分钟，然后煎煮2次，合并滤液，过滤，浓缩至1.8g/mL，即为中药组合物的汤剂。
实施例5
改善睡眠的中药组合物，它是由酸枣仁和茯苓按照2:1的重量比例混合，加入5倍的水，浸泡60分钟，然后煎煮4次，合并滤液，过滤，浓缩至1.5g/mL，即为中药组合物的汤剂。
实施例6
改善睡眠的中药组合物，它是由酸枣仁和茯苓按照3:2的重量比例混合，加入20倍的水，浸泡10分钟，然后煎煮1次，过滤，浓缩至4g/mL，即为中药组合物的汤剂。
实施例7
改善睡眠的中药组合物，它是由酸枣仁和茯苓按照2:1的重量比例混合，加入5倍的水，浸泡40分钟，然后煎煮4次，过滤，浓缩至干，加入药学可以接受的辅料，制片，得到相应的片剂。
实施例8
改善睡眠的中药组合物，它是由混合酸枣仁(生枣仁和炒枣仁1:1)和茯苓按照3:1的重量比例混合，加入10倍的水，浸泡30分钟，然后煎煮3次，过滤，浓缩至1.8g/mL，即为中药组合物的汤剂。
实施例9
改善睡眠的中药组合物，它是由酸枣仁和茯苓按照3:2的重量比例混合，加入15倍的水，浸泡60分钟，然后煎煮2次，过滤，浓缩至干，混合适宜的辅料，制备成胶囊，即为改善睡眠的中成药胶囊制剂。
实施例10
改善睡眠的中药组合物，取生枣仁和炒枣仁按照4:6的比例混合得到混合枣仁，取混合均匀的混合酸枣仁和茯苓按照2:1的重量比例混合，40-60℃热风烘干40分钟，破碎，得到粒径小于2mm的碎块，包装成袋泡茶。该袋泡茶直接用开水冲泡即可服用，作为改善睡眠的袋泡茶饮品。
实施例11
改善睡眠的中药组合物，取生枣仁和炒枣仁按照5:5的比例混合得到混合枣仁，破碎得到直径小于1.5mm的小块。取茯苓切薄片(厚度小于0.4mm)，烘干至脆，破碎成小块。然后将取混合酸枣仁破碎料和茯苓破碎小块，按照重量比例3:1混合，分包成小包样，为袋泡茶饮料。
实施例12
改善睡眠的中药组合物，取生枣仁和炒枣仁按照6:4的比例混合得到混合枣仁，取混合均匀的混合酸枣仁和茯苓按照3:1的重量比例混合，40-60℃热风烘干40分钟，磨粉，加入适量小米粉和环糊精，分包成小包，得到冲泡小米糊(食品)。
以上实施例只是部分实施本发明的中药组合物的具体例子，并不限制本发明的实施方式，可以将酸枣仁和茯苓按照1:3-3:1中的任意比例进行混合成组合物，作为改善睡眠的中药应用。也不应理解只能采用水溶液进行提取处理组合物，还可以采用其他已知的提取方法进行加工处理，当然采用水溶液提取的话更加天然、健康、环保，有利于提高保健品的天然属性。
试验例一
不同配比酸枣仁茯苓的化学成分的含量测定
1不同配比酸枣仁茯苓的酸枣仁皂苷A含量测定
1.1实验材料
仪器：日本岛津高效液相色谱仪LC-20AT(日本岛津)；DAD检测器；ELSD 2000ES蒸发光检测器；XWK-III型空气发生器(天津津分分析仪器制造有限公司)；Diamonsil C18反相色谱柱(250×4.6mm，5μm)；优普UPT系列超纯水器(成都优普电子产品有限公司)；BP211D型电子天平(德国Sartorius公司)；BP121S型电子天平(德国Sartorius公司)；SHB-III型循环水式真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；BUG25-12型超声波清洗器(必能信超生(上海)有限公司)。
对照品：酸枣仁皂苷A对照品(成都煜泉绿健科技有限公司，批号：S-045-150922)、斯皮诺素对照品(成都煜泉绿健科技有限公司，批号：S-043-150626)。
试剂：分析甲醇(成都市科龙化工试剂厂)、石油醚(60-90℃)(成都市科龙化工试剂厂)、分析乙醇(成都市科龙化工试剂厂)、色谱乙腈(美国天地)、超纯水。
对照品溶液的制备：同酸枣仁评价酸枣仁皂苷A含量测定项下。
供试品溶液的制备：生枣仁：茯苓为1:0、1:1、1:2、1:3、3:1、2:1、0:1；炒枣仁：茯苓为1:0、1:1、1:2、1:3、3:1、2:1；生炒各半：茯苓为1:0、1:1、1:2、1:3、3:1、2:1，共计19组药材，以10倍量水浸泡30min，煎煮三次，合并滤液，抽滤，浓缩至溶剂干，用甲醇定容至50ml容量瓶中。冷藏备用。用时过微孔滤膜得供试品溶液。
1.2方法学考察
1.2.1酸枣仁皂苷A标准曲线的绘制
精密吸取酸枣仁皂苷A对照品溶液2μL、4μL、6μL、10μL、20μL入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标(Y)，以质量为横坐标(Y)，绘制标准曲线，其回归方程为y＝2E+08x-53406，R2＝0.9991，其线性范围为0.246-2.46μg。见图1。
1.2.2精密度试验
连续5次精密吸取酸枣仁皂苷A对照品溶液10μL入液相色谱仪，计算其RSD为1.53％。
1.2.3稳定性试验
将配好的酸枣仁皂苷A对照品溶液分别于0、2、4、6、8h，精密吸取10μL入液相色谱仪，计算其RSD为1.92％；
1.2.4重复性试验
按3.1.1项下供试品制备方法制备，平行5份，进行含量测定，计算酸枣仁皂苷A的RSD为3.64％；。
1.2.5加样回收实验
精密称取已知含量的6份样品(生枣仁：茯苓＝1:3)，分别加入酸枣仁皂苷A对照品适量，按样品制备和含量测定项下方法操作，酸枣仁皂苷A的平均加样回收率为106.56％，RSD为3.74％。
1.3含量测定
测试酸枣仁，测定评价其中酸枣仁皂苷A含量，图谱见图2-3。其中，图2是A为酸枣仁皂苷A对照品峰，图3是B为生枣茯苓3:1酸枣仁皂苷A。
1.4实验结果
从表中可看出生枣仁:茯苓＝3:1在生枣仁与茯苓配比组中酸枣仁皂苷A的含量最高；炒枣仁:茯苓＝1:1在炒枣仁与茯苓配比组中酸枣仁皂苷A的含量最高；生炒各半:茯苓＝3:1在生炒各半与茯苓配比组中酸枣仁皂苷A的含量最高。见表1。
表1各配比中酸枣仁皂苷A、斯皮诺素生药含量(％)
2不同配比酸枣仁茯苓的斯皮诺素含量测定
2.1实验材料
同酸枣仁有效成分含量测定项下。
对照品溶液的制备：同酸枣仁有效成分含量测定项下斯皮诺素对照品溶液的制备
供试品溶液的制备：见3.1.2项下供试品溶液制备。
2.2方法学考察
2.2.1斯皮诺素标准曲线的绘制
精密吸取斯皮诺素对照品溶液2μL、4μL、6μL、10μL、20μL入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标(Y)，以质量为横坐标(Y)，绘制标准曲线，其回归方程为y＝2.3E+6x-10940，R2＝0.9990，其线性范围为0～4.1μg。见图4。
2.2.2精密度试验
连续5次精密吸取斯皮诺素对照品溶液10μL入液相色谱仪，计算其RSD为1.60％。
2.2.3稳定性试验
将配好的斯皮诺素对照品溶液分别于0、2、4、6、8h，精密吸取10μL入液相色谱仪，计算其RSD为2.81％。
2.2.4重复性试验
按3.1.1项下供试品制备方法制备，平行6份，进行含量测定，计算斯皮诺素的RSD为1.41％。
2.2.5加样回收实验
精密称取已知含量的6份样品(生枣仁：茯苓＝1:3)，分别加入酸枣仁皂苷A对照品适量，按样品制备和含量测定项下方法操作，斯皮诺素的平均加样回收率为88.14％，RSD为4.89％。
2.3含量测定
斯皮诺素含量测定，图谱见5-6。其中，图5是C为斯皮诺素对照品峰，图6是D为样品中斯皮诺素峰。
2.4实验结果
从结果中可看出生枣仁:茯苓＝3:1在生枣仁与茯苓配比组中斯皮诺素的含量最高；炒枣仁:茯苓＝1:1在炒枣仁与茯苓配比组中斯皮诺素的含量最高；生炒各半:茯苓＝3:1在生炒各半与茯苓配比组中斯皮诺素的含量最高，见表1。
3不同配比酸枣仁茯苓的总皂苷含量测定
3.1实验材料
仪器：A560型双光束紫外分光光度计(翱艺仪器(上海)有限公司)，10mm石英比色皿(翱艺仪器(上海)有限公司)，HH-2数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)。
试剂：分析甲醇(成都市科龙化工试剂厂)，香草醛(上海化学试剂总厂)，冰乙酸(成都市科龙化工试剂厂)，高氯酸(天津政成化学试品有限公司)。
对照品溶液的制备：精密称取酸枣仁皂苷A对照品5.03mg，用甲醇溶解定容至10ml，配制成0.503mg/ml的对照品溶液备用。
供试品溶液的制备：见3.1.3项下供试品溶液制备。
3.2最大吸收波长的确定
精密吸取对照品溶液、供试品溶液、甲醇随行空白各0.2ml于10ml具塞试管中，挥尽溶剂，于每支试管中分别加入5％香草醛冰乙酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴锅中加热15min，立即置冰水浴中冷却，精密加入冰乙酸5.0ml，摇匀。A650双光束紫外可见分光光度计上于200-700nm波长范围内扫描。见图7-8，图7是酸枣仁皂苷A紫外波长扫描图，图8是样品中皂苷波长扫面图。
3.3标准曲线的绘制
分别精密取对照品溶液200、250、300、350、400、450μL于10ml具塞试管中，挥尽溶剂，于每支试管中分别加入5％香草醛冰乙酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴锅中加热15min，立即置冰水浴中冷却，精密加入冰乙酸5.0ml，摇匀。以随行试剂为空白，照分光光度法，在474nm波长处测定吸光度，以质量为横坐标，吸收度为纵坐标，结果表明总皂苷在100.6-226.35μg的质量范围内具有良好的线性关系。其回归方程为y＝2.28x-0.0142，R2＝0.9991。见图9，酸枣仁皂苷A紫外标准曲线图。
3.4方法学考察
3.4.1精密度实验
取对照品溶液0.2ml于10ml具塞试管中，挥尽溶剂，于每支试管中分别加入5％香草醛冰乙酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴锅中加热15min，立即置冰水浴中冷却，精密加入冰乙酸5.0ml，摇匀。在474nm波长处测定吸光度，连续测量5次，根据吸光度计算浓度为，RSD为0.10％。
3.4.2稳定性实验
取对照品溶液0.2ml于10ml具塞试管中，挥尽溶剂，于每支试管中分别加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴锅中加热15min，立即置冰水浴中冷却，精密加入冰乙酸5.0ml，摇匀。分别在0、2、4、6、8h于474nm波长处测定吸光度，计算其浓度，得RSD为0.34％。
3.4.3重现性实验
分别称取生枣仁：茯苓＝1:3同一批次原药5份，按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，于474nm处测定吸光度，计算其含量，得总皂苷的RSD为1.83％。
3.4.4加样回收实验
精密称取已知含量的6份样品(生枣仁：茯苓＝1:3)各约0.20ml，分别加入酸枣仁皂苷A对照品溶液适量，按样品制备和含量测定项下方法操作，于474nm测定吸光度，其计算含量，其RSD为1.64％。
3.5含量测定
按供试品溶液的制备项下制备供试品溶液。按上述方法测定19组供试品溶液的吸光度，计算供试品溶液总皂苷的含量。
3.6结果
从结果中可看出生枣仁：茯苓＝3：1在生枣仁与茯苓配比组中总皂苷的含量最高；炒枣仁：茯苓＝1：1在炒枣仁与茯苓配比组中总皂苷的含量最高；生炒各半：茯苓＝2：1在生炒各半与茯苓配比组中总皂苷的含量最高，详见表1。
4总黄酮的含量测定
4.1实验材料
仪器：同3.3.1项下仪器。
试剂：分析甲醇(成都市科龙化工试剂厂)，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠
对照品：斯皮诺素对照品(成都煜泉绿健科技有限公司)
对照品溶液的制备：取干燥至恒重的斯皮诺素对照品约5mg，精密称定，置10ml量瓶中，甲醇定容，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：见1.3项下供试品溶液制备。
4.2最大吸收波长的确定
精密吸取对照品溶液、蒸馏水1ml，加甲醇4ml，加5％亚硝酸钠溶液0.5ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.5ml，摇匀，放置6分钟，加4％氢氧化钠溶液4ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，立即照紫外-可见分光光度法，在300～700nm扫描。
4.3方法学考察
4.3.1线性关系考察
分别精密量取斯皮诺素对照品溶液1ml、1.5ml、2ml、2.5ml、3ml，置10ml量瓶中，各加甲醇3ml，加5％亚硝酸钠溶液0.5ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.5ml，摇匀，放置6分钟，加4％氢氧化钠试液4ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外-可见分光光度法，在390nm的波长处测定吸光度，以斯皮诺素的含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并求得回归方程为y＝0.4665x-0.0066，R2＝0.9993，其线性范围为0.563～1.696mg。见图12，斯皮诺素紫外标准曲线。
4.3.2精密度试验
精密吸取对照品溶液1ml，分别按“4.3.1”项下方法操作，1d内测定6次，计算其RSD值为0.10％。
4.3.3稳定性试验
精密吸取供试品溶液分别按“4.3.1”项下方法分别在5、10、15、25、35、45min，进行测定，计算RSD值为0.26％。
4.3.4重复性试验
取同一批供试品6份，分别按“3.4.3.1”项下方法操作，测定供试品含量，计算RSD值为2.60％。
4.3.5回收率试验
精密吸取已知含量的同一批供试品，共6份，准确加入mg对照品，按“4.3.1”项下方法操作，测定吸光度，求其含量，计算平均值为106.05％，RSD值为2.90％。
4.4总黄酮含量测定
精密吸取对照品溶液、供试品溶液1ml，加甲醇4ml，加5％亚硝酸钠溶液0.5ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.5ml，摇匀，放置6分钟，加4％氢氧化钠溶液4ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外-可见分光光度法，在390nm吸收波长处测定吸光度。
部分图谱如图10-图11所示，图10是斯皮诺素紫外波长扫描图，图11是样品扫描图。
4.5结果
从结果中可看出生枣仁：茯苓＝2：1在生枣仁与茯苓配比组中总黄酮的含量最高；炒枣仁：茯苓＝1：1在炒枣仁与茯苓配比组中总黄酮的含量最高；生炒各半:茯苓＝1:2在生炒各半与茯苓配比组中总黄酮的含量最高，详见表1。
5茯苓总糖的含量测定
5.1实验材料
仪器：A560型双光束紫外分光光度计(翱艺仪器(上海)有限公司)，10mm石英比色皿(翱艺仪器(上海)有限公司)。
试剂：苯酚(成都科龙化工试剂厂)，硫酸(成都科龙化工试剂厂)
对照品：葡萄糖对照品(成都煜泉绿健科技有限公司)
对照品溶液的制备：精密称定减压干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成浓度为1mg/ml的储备液。精密吸取对照品储备液1ml定容至25ml棕色容量瓶，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：各配比见3.1.3项下供试品配比及煎煮，过滤，浓缩，定容至50ml容量瓶中。取1ml供试品溶液定容至25ml容量瓶中，摇匀，即得。
5.2测定波长的选择
精密吸取对照品溶液和两种供试品溶液各1ml，分别置10ml试管中，分别精密加入5％苯酚溶液1ml，充分混合后，缓慢精密加入浓硫酸6ml，迅速摇匀，室温放置40分钟，在紫外分光光度仪上，于300～700nm之间进行扫描。对照品最大吸收波长为487nm，供试品最大吸收波长为486nm，故以487nm为测定波长。
5.3方法学考察
5.3.1标准曲线及线性范围
分别精密吸取对照品溶液0.02016mg/ml、0.05109mg/ml、0.06048mg/ml、0.08064mg/ml、0.10322mg/ml溶液各1.0ml，于10ml试管中，分别精密加入5％苯酚溶液1.0ml，充分混合后，再分别缓慢精密加入浓硫酸6.0ml，迅速摇匀，室温下放置40分钟，在紫外分光光度仪上，以最大吸收波长测定样品溶液的吸收值，以浓度(C)为横坐标，吸收值(A)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程y＝6.4083x+0.1099，R2＝0.9997，其线性范围为0.02016～0.10322mg。如图15所示，葡萄糖紫外标准曲线。
5.3.2精密度试验
分别精密吸取对照品溶液1.0ml，按“5.3.1”项下方法测定吸收值6次，计算其RSD值为0.13％。
5.3.3稳定性试验
分别精密量不同配比的供试品溶液各1.0ml，精密加入5％苯酚溶液1.0ml，充分混合后，缓慢精密加入浓硫酸6.0ml，迅速摇匀，室温下放置40、60、80、100、120、140分钟，分别于紫外分光光度仪上，在选择的吸收波长下测定样品溶液的吸收值，计算RSD为0.49％。
5.3.4重复性试验
取同一批不同配比的供试品溶液各6份。分别精密吸取供试品溶液各1.0ml，按“5.3.1”项下方法测定吸收值，计算RSD为1.51％。
5.3.5加样回收率试验
称取供试品各6份，按3.1.3项下方法煎煮，分别准确加入一定量的对照品，按“5.3.1’项下方法测定吸收值，计算回收率为95.99％，RSD为2.47％。
5.4供试品多糖的含量测定
分别精密量取葡萄糖对照品溶液、供试品溶液各1.0ml，精密加入5％苯酚溶液1.0ml，充分混合后，缓慢精密加入浓硫酸6.0ml，迅速摇匀，室温下放置40分钟，分别于紫外分光光度仪上，以吸收波长测定样品溶液的吸收值，计算其生药含量。测试图谱如图13-14所示，图13是葡萄糖紫外波长扫描图，图14是样品紫外波长扫描图。
5.5结果
生枣仁:茯苓＝2:1在生枣仁与茯苓配比组中总糖的含量最高；炒枣仁:茯苓＝3:1在炒枣仁与茯苓配比组中总皂苷糖的含量最高；生炒各半:茯苓＝0:1在生炒各半与茯苓配比组中总糖的含量最高。结果见表1。
6讨论与结论
茯苓对于不同量生、炒枣仁中的酸枣仁皂苷A与斯皮诺素的溶出影响的趋势不同。总体而言，对于生枣仁配比组，随茯苓量的增加，酸枣仁皂苷A和斯皮诺素的含量呈先增后减的趋势；对于炒枣仁组，随茯苓量的增加，酸枣仁皂苷A和斯皮诺素的含量先减后增再减的趋势；生炒各半组中的趋势同生枣仁组。生炒各半组与生枣仁组及炒枣仁组在同种配比下比较，其有效成分的含量绝大部分比另两组的低。各组配比为1：0中，生炒各半组酸枣仁皂苷A的含量次于炒枣仁组，斯皮诺素的含量比生、炒两组都低，这与文献[4]报道中有所不同，有可能与提取方式的不同有关。此外，上表可看出茯苓对于酸枣仁中的酸枣仁皂苷A及斯皮诺素的溶出具有辅助作用。
茯苓对于不同量生、炒枣仁中的总皂苷及总糖的溶出影响的趋势不同。总体而言，对于生枣仁配比组，随茯苓量的增加，总皂苷呈先增加后减少的趋势；对于炒枣仁配比组，随茯苓量的增加，总皂苷呈先增加后减少再增加的趋势；对于生炒各半组，随茯苓量的增加，总皂苷呈先增加后减少的趋势。茯苓的在474nm有吸收值，可能与其含有三萜类化合物有关。对于生枣仁配比组和生炒各半组，随茯苓量的增加，总糖呈三增二减的趋势；对于炒枣仁配比组，随茯苓量的增加，总糖呈先增后减再增的趋势。总体而言，酸枣仁与茯苓配比不利于茯苓中多糖的溶出。
茯苓的含量变化对生、炒酸枣仁的酸枣仁皂苷A与斯皮诺素的含量变化影响是不同的。其中生枣仁：茯苓＝3：1在生枣仁与茯苓配比组，炒枣仁：茯苓＝1：1在炒枣仁与茯苓配比组，生炒各半：茯苓＝3：1在生炒各半与茯苓配比组中酸枣仁皂苷A及斯皮诺素的含量最高。生枣仁：茯苓＝3：1在生枣仁与茯苓配比组中总皂苷的含量最高；炒枣仁：茯苓＝1：1在炒枣仁与茯苓配比组中总皂苷的含量最高；生炒各半：茯苓＝2：1在生炒各半与茯苓配比组中总皂苷的含量最高。总黄酮生枣仁：茯苓＝2：1在生枣仁与茯苓配比组中总糖的含量最高；炒枣仁：茯苓＝3：1在炒枣仁与茯苓配比组中总糖的含量最高；生炒各半：茯苓＝0：1在生炒各半与茯苓配比组中总糖的含量最高。
试验例二
酸枣仁茯苓不同配比对改善失眠的药理实验研究
1实验材料
中药饮片：生、炒酸枣仁(购买于河北邢台)，茯苓(购买于湖北随州)，经成都中医药大学生药学龙飞老师鉴定符合《中华人民共和国药典》规定，生、炒酸枣仁经水分，总灰分，含量测定；茯苓经水分，总灰分及浸出物检查均符合《中华人民共和国药典》规定。
仪器：ZZ-6小鼠自主活动测试仪(成都泰盟科技有限公司)
小鼠：SPFKM品系雄性小鼠(成都达硕实验动物有限公司)
药物：舒乐安定(常州四药制药有限公司)
给药溶液的制备：生枣仁：茯苓为1:0、1:1、1:2、1:3、3:1、2:1、0:1；炒枣仁：茯苓为1:0、1:1、1:2、1:3、3:1、2:1；生炒各半：茯苓为1:0、1:1、1:2、1:3、3:1、2:1，共计19组药材，以10倍量水浸泡30min，煎煮三次，合并滤液，抽滤，浓缩至1.8g/ml。冷藏备用。
2药理实验
2.1小鼠自主活动实验
2.1.1实验方法
将小鼠由体重随机分组，每组10只，共9组。连续灌胃给药6天，每天一次，阳性药灌胃舒乐安定0.05mg/ml，给药组1.8g/ml，小鼠给药容量0.2ml/10g，空白组灌胃等量蒸馏水。
于末次灌胃给药30min后，将小鼠放入多功能小鼠自主活动记录仪中，适应3min后，观察记录小鼠5min内的活动次数。自主活动实验在室温为25℃的安静实验室内，于晚上19:00开始进行。
2.2小鼠悬尾实验
2.2.1实验方法
分组及给药同上。于末次灌胃给药30min后，将小鼠尾部距末端约2cm处，用医用胶布粘贴固定在一水平杆上，使小鼠倒悬。悬挂计时4min，记录悬挂时至小鼠静止时的间隔时间(s)为悬尾至静止潜伏期及4min内累计不动时间(s)为悬尾静止累计时间。
3统计学方法及结果
采用SPSS19.0统计学软件对数据进行T检验。药理实验结果见表2-4。
表2生酸枣仁与茯苓不同配比对小鼠自主活动和悬尾实验结果(n＝10)
注：与空白组相比＊＊：P<0.01＊：P<0.05
表3炒酸枣仁与茯苓不同配比对小鼠自主活动和悬尾实验结果(n＝10)
注：与空白组相比＊＊：P<0.01＊：P<0.05
表4酸枣仁生炒各半与茯苓不同配比对小鼠自主活动和悬尾实验结果(n＝10)
注：与空白组相比＊＊：P<0.01＊：P<0.05
生枣仁茯苓组，阳性药组与空白组相比较各个指标均有显著性差异(P<0.01)。悬尾实验中，与空白组比较悬尾至静止潜伏期1:1、1:2、2:1三组有显著性差异(P<0.01)，1:0、1:3两组有明显差异(P<0.05)。
炒枣仁茯苓组：自主活动中，与空白组比较，站立次数中阳性药组具有显著差异(P<0.01)，炒1:0、1:1、3:1具有明显差异(P<0.05)。悬尾实验中，阳性药组与空白组比较悬尾至静止潜伏期有明显差异(P<0.05)，悬尾静止累计时间有显著性差异(P<0.01)。
生炒酸枣仁各半茯苓组：自主活动中活动次数，与空白组比较阳性药组有明显差异(P<0.01)，1:2、3:1两组有显著性差异(P<0.05)；站立次数中，与空白组比较阳性药组有明显差异(P<0.05)。悬尾实验中，悬尾静止累积时间中与空白组比较阳性药组有显著性差异(P<0.01)。
4讨论与结论
按五代史·后唐刊石药验云：“酸枣仁，睡多生使，不得睡炒熟。”李时珍云：“……熟用疗胆虚不得眠、烦渴虚汗之证。生用疗胆热好眠，皆足厥阴、少阳药也。”[5]但统计《中医方剂大辞典》[6]中所知，治疗失眠中，生炒酸枣仁皆在用。另有报道称生炒酸枣仁合用较两者单用更有效[4]。因此酸枣仁设置生品、炒品及生炒各半三类。实验中并未对小鼠先造成病理损伤后治疗，主要考虑到所选药物均为药食同源之品，药性不强，可能力有不及。从实验结果来看与空白组比较多数对小鼠改善失眠有一定的作用，可为两者之后在产品研发方面提供一定的参考。
试验例三
酸枣仁茯苓不同配比对大鼠改善失眠的药理实验研究
基于上述试验例二的研究，以酸枣仁茯苓不同配比对小鼠进行自主活动和悬尾实验，生枣仁茯苓组、炒枣仁茯苓组、生炒酸枣仁各半茯苓组三组中与空白组各有显效的配比组合，本实验室比较生炒酸枣仁各半茯苓组中生炒酸枣仁各半：茯苓＝1:2、3:1两组的大鼠实验，以期二者择其一。
1实验材料
大鼠：SPFSD品系大鼠雌雄各半(成都达硕实验动物有限公司)
仪器：ZZ-6小鼠自主活动测试仪(成都泰盟科技有限公司)
药物：舒乐安定(常州四药制药有限公司)，柏子养心丸(芜湖张恒春药业有限公司)，戊巴比妥纳，0.9％生理盐水(四川科伦药业股份有限公司)
给药溶液的制备：生枣仁：茯苓为1:0、1:1、1:2、1:3、3:1、2:1、0:1；炒枣仁：茯苓为1:0、1:1、1:2、1:3、3:1、2:1；生炒各半：茯苓为1:0、1:1、1:2、1:3、3:1、2:1，共计19组药材，以10倍量水浸泡30min，煎煮三次，合并滤液，抽滤，浓缩至6g/ml。冷藏备用。酸枣仁汤(酸枣仁、茯苓、川芎、知母)、一种中药组方(远志、酸枣仁、茯苓、丁香)各参照专利号200710195543.3、CN 104013694 A进行制备。
2分组即给药情况
大鼠(180-200g)随机分组，每组八只，雌雄各半。组别为空白组、西药阳性药组、中药阳性药组、生炒酸枣仁各半：茯苓＝1:2、3:1、酸枣仁汤、一种中药组方(同上)，共计八组。空白组灌胃超纯水，西药阳性组灌胃舒乐安定0.1g/ml，中药阳性组灌胃柏子养心丸1g/ml，给药组给药浓度为6g/ml，酸枣仁汤组给药浓度为1g/ml，一种中药组方组给药浓度为1g/ml。给药量为1ml/100g。
3实验方法
自主活动实验，于末次灌胃给药30min后，将大鼠放入多功能小鼠自主活动记录仪中，适应3min后，观察记录大鼠5min内的活动次数。自主活动实验在室温为25℃的安静实验室内，于晚上19:00开始进行。
悬尾实验，于末次灌胃给药30min后，将大鼠尾部距末端约5cm处，用医用胶布粘贴固定在一水平杆上，使大鼠倒悬。悬挂计时2min，记录悬挂时至大鼠静止时的间隔时间(s)及2min内累计不动时间(s)。
戊巴比妥纳镇静催眠实验，大鼠给药30min后，以40mg/kg的剂量注射大鼠戊巴比妥纳生理盐水溶液，观察大鼠翻正反射消失的时间(min)以及翻正反射恢复的时间(min)。
4统计学方法及结果
采用SPSS19.0统计学软件对数据进行T检验。药理实验结果见表5。
表5六种组方药对大鼠自主活动、悬尾和戊巴比妥纳镇静催眠实验结果(X±S,n＝8)
注：与空白组比较＊＊：P<0.01，＊：P<0.05。
与空白组比较，舒乐安定组在活动次数、站立次数、悬尾累积时间及睡眠潜伏期具有显著性差异，半1：2组在活动次数、站立次数及睡眠潜伏期中具有明显差异，半3:1组在活动次数中有明显差异。
5讨论与结论
与空白组比较，舒乐安定组在悬尾累积时间与睡眠时间上均有增加，柏子养心丸组、酸枣仁汤组和一种中药组方在悬尾累积时间有增加；而半1：2、3：1两组在悬尾累积时间与睡眠时间上均呈减少的趋势。也许和给药中所含生枣仁的“醒神”作用有关，可对大鼠戊巴比妥纳所致睡眠有调节作用，猜测可能对睡眠存在双向调节作用。根据这六项指标可选择出半1：2这个比例较佳。
引起失眠的原因有很多，应当辨证论治。比如柏子养心丸主治心气虚寒，心悸易惊，失眠多梦，健忘；酸枣仁汤主治虚烦虚劳不得眠，肝血不足。一种中药组方对改善失眠的机理并未明确指出。本实验中的酸枣仁与茯苓的配比中的半1:2、3:1两组均能改善小鼠、大鼠睡眠，根据“五神分型论治”理论，酸枣仁可治以“入寐为艰”为主诉的失眠疾病，涉及到酸枣仁的生品与炒品，有俗语云：“生则醒神，炒则喜寐”之称，那么本品中既有生品又有炒品，两者结合达到夜晚入睡，白天醒神的作用。而茯苓的健脾安神则对该组方在由脾胃方面引起失眠的致病因素起到一定的改善作用。
参考文献：
[1]苏冠宇.三部《名医类案》医籍中不寐医案用药特色探讨[D].北京：北京中医药大学，2010。
[2]孙洪生.不寐病证的文献研究与学术源流探讨[D].北京：北京中医药大学，2006。
[3]清·佚名辑.秘传奇方.北京：中医古籍出版社，1992.112。
[4]王文凯.生、炒酸枣仁相伍抗抑郁作用机制及相伍后化学成分变化研究[D].哈尔滨：黑龙江中医药大学，2014。
[5]明·李时珍著；柳长华,柳璇校注.本草纲目.北京：中国医药科技出版社，2011,116。
[6]彭怀仁主编.中医方剂大辞典(1-10册)[M].北京：人民卫生出版社，1996。

Claims (10)

1.一种改善睡眠的中药组合物，它是由酸枣仁和茯苓组成的。
2.如权利要求1所述改善睡眠的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物中，酸枣仁和茯苓的重量比例关系是1:3-3:1。
3.如权利要求1所述改善睡眠的中药组合物，其特征在于，所述酸枣仁是生枣仁和炒枣仁中的一种或两种混合物。
4.如权利要求3所述改善睡眠的中药组合物，其特征在于，酸枣仁炮制方法：原药放入竹箩内，沉入清水缸中，使仁浮在水面，壳沉水底，将枣仁捞出、晒干。
5.如权利要求3所述改善睡眠的中药组合物，其特征在于，炒酸枣炮制方法：取洁净的酸枣仁，置锅内用文火炒至外皮鼓起并呈微黄色，取出，放凉。
6.如权利要求3所述改善睡眠的中药组合物，其特征在于，所述酸枣仁是生枣仁和炒枣仁按照4:6~6:4的重量比例混合而成的。
7.如权利要求3所述改善睡眠的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物是由混合酸枣仁和茯苓按照1:2~3:1的比例混合制成的；所述混合酸枣仁是由酸枣仁和炒枣仁按照4:6~6:4的比例混合而成的。
8.如权利要求1所述改善睡眠的中药组合物，其特征在于，所述改善睡眠的中药组合物采用以下方法加工处理，按比例称取原料混合，加入5-20倍重量的水，浸泡10-60分钟，然后煎煮1-4次，合并滤液，过滤，浓缩至1-4g/mL，即为中药组合物的汤剂。
9.如权利要求8所述改善睡眠的中药组合物，其特征在于，加入7-15倍重量的水进行浸泡、煎煮提取。
10.如权利要求8所述改善睡眠的中药组合物，其特征在于，浓缩的时候采用减压浓缩，浓缩至1-3g/mL。
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