CN107022487B - 一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂的制备方法及其应用，该组合物的组分及其重量份数比为：果糖1‑10份；10％聚乙烯基吡咯烷酮1‑10份；叠氮化钠0.01‑0.1份；98％硫酸0.01‑0.05份；灭菌水50‑98份。本发明配方组成科学合理，工艺简单，使用方便，成本极低，对粪便中的球虫卵囊保护效果较好，其利用果糖等成份作为鸡球虫疫苗生产中鸡粪便的保护剂可以有效保持鸡粪便中球虫卵囊的活性，延长粪便保存时间，利于规模化生产，提高生产效率，该保护剂保存的粪便常温下保存4天后，其中的卵囊活性与新鲜粪便中的卵囊活性相比没有变化。

Description

一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂的制备方法及其应用
技术领域
本发明属于兽用生物制品领域，尤其是一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂的制备方法及其应用。
背景技术
随着人们生活水平的不断提高，食品安全问题越来越受到人们的重视。而鸡肉和鸡蛋作为动物性蛋白质的主要来源屡次被舆论推至风口浪尖，究其原因还是药物残留问题。鸡的球虫病是每一个养鸡从业者都绕不开的一种常见病，该病的防治目前主要依靠饲料中添加盐霉素等化学药物进行预防，发病时使用磺胺药等抗生素进行治疗，这些化学药物不仅在生产使用中容易对环境造成污染，更会在鸡肉中造成药物残留。欧美等发达国家早已对这些药物的使用进行了限制，我国也在逐步出台相关的法律法规进行限制。未来鸡球虫病的防治将越来越依赖于球虫疫苗。在球虫疫苗生产中需要收集5-10天的鸡粪便来提取卵囊，新鲜粪便在存放过程中会出现卵囊活力逐渐下降的现象，而当天收取新鲜粪便当天提取卵囊又会造成很大的人力、物力、时间浪费。如何寻求一种合适的方法既能延长粪便的保存期又能保持粪便中球虫卵囊的活性成为球虫疫苗生产中需要迫切解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂的组合物，其配方组成科学合理，工艺简单，使用方便，成本极低，对粪便中的球虫卵囊保护效果较好，其利用果糖等成份作为鸡球虫疫苗生产中鸡粪便的保护剂可以有效保持鸡粪便中球虫卵囊的活性，延长粪便保存时间，利于规模化生产，提高生产效率，该保护剂保存的粪便常温下保存4天后，其中的卵囊活性与新鲜粪便中的卵囊活性相比没有变化。
本发明的另一个目的在于提供一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂的制备方法及其应用。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂的制备方法及其应用，其保护剂的组分及其重量份数比为：
Figure BDA0000918899110000011
Figure BDA0000918899110000021
而且，该保护剂组分及其最优重量份数比分别为：
Figure BDA0000918899110000022
一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂的制备方法及其应用，其制备方法的步骤为：
(1)按照重量配比量取灭菌水，先将灭菌水重量的50％注入配液罐内，然后按照重量配比称取果糖缓慢加入配液罐中，边加边搅拌，直至果糖全部溶解，得溶液A；
(2)按照重量配比称取聚乙烯基吡咯烷酮，缓慢加入步骤(1)所得溶液A中，边加边搅拌，直至混匀，得溶液B；
(3)按照重量配比称取叠氮化钠，用灭菌水全重的10％溶解，并把所得溶液缓慢加入步骤(2)所得溶液B中，边加边搅拌，直至混匀，得溶液C；
(4)按照重量配比称取98％硫酸，用灭菌水全重的10％稀释并冷却至常温，把所得溶液缓慢加入步骤(3)所得溶液C中，边加边搅拌，直至混匀，得溶液D；
(5)把剩余的灭菌水加入步骤(3)所得溶液中，搅拌均匀，所得溶液灌装至灭菌容器内封存备用，即可得到一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂。
本发明的优点及有益效果是：
1.本发明配方组成科学合理，工艺简单，使用方便，成本极低，对粪便中的球虫卵囊保护效果较好
2.本发明保护剂利用果糖等成份作为鸡球虫疫苗生产中鸡粪便的保护剂可以有效保持鸡粪便中球虫卵囊的活性，延长粪便保存时间，利于规模化生产，提高生产效率。用该保护剂保存的粪便常温下保存4天后，其中的卵囊活性与新鲜粪便中的卵囊活性相比没有变化。
3.本发明通过果糖维持卵囊的活性，避免因自身代谢造成活力下降。
4.本发明通过聚乙烯基吡咯烷酮、叠氮化钠、硫酸三者合适浓度的配比来防止粪便的腐败变质，为球虫卵囊提供一个合适的生存环境。
具体实施方式
本发明通过以下实施例进一步详述。需要说明的是：下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
本发明组分中的果糖、10％聚乙烯基吡咯烷酮、叠氮化钠、98％硫酸均可以在市场上购买得到。
实施例1
一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂，其保护剂的组分及其重量分别为：
果糖1kg、10％聚乙烯基吡咯烷酮1kg、叠氮化钠0.01kg、98％硫酸0.01kg；灭菌水50kg。
一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂的制备方法及其应用，该制备方法的步骤为：
(1)按照重量配比量取灭菌水，先将灭菌水重量的50％注入配液罐内，然后按照重量配比称取果糖缓慢加入配液罐中，边加边搅拌，直至果糖全部溶解，得溶液A；
(2)按照重量配比称取聚乙烯基吡咯烷酮，缓慢加入步骤(1)所得溶液A中，边加边搅拌，直至混匀，得溶液B；
(3)按照重量配比称取叠氮化钠，用灭菌水全重的10％溶解，并把所得溶液缓慢加入步骤(2)所得溶液B中，边加边搅拌，直至混匀，得溶液C；
(4)按照重量配比称取98％硫酸，用灭菌水全重的10％稀释并冷却至常温，把所得溶液缓慢加入步骤(3)所得溶液C中，边加边搅拌，直至混匀，得溶液D；
(5)把剩余的灭菌水加入步骤(3)所得溶液中，搅拌均匀，所得溶液灌装至灭菌容器内封存备用，即可得到一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂。
实施例2
一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂，其保护剂的组分及其重量分别为：
果糖10kg、10％聚乙烯基吡咯烷酮10kg、叠氮化钠0.1kg、98％硫酸0.05kg；灭菌水98kg。
其制备方法的步骤同实施例1。
实施例3
一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂，其保护剂的组分及其重量分别为：
果糖6kg、10％聚乙烯基吡咯烷酮6kg、叠氮化钠0.04kg、98％硫酸0.03kg；灭菌水90kg。
其制备方法的步骤同实施例1。
临床应用
本发明所涉及的鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂是通过以下方法应用于实际生产的：每天定时收集一次粪便并称重，粪便和保护剂按重量比1:1的比例充分混合后封存于灭菌容器内。连续收集5天粪便，前4天按以上方法处理，把第5天的新鲜粪便与前4天的粪便和保护剂混合混合均匀，集中进行卵囊提取。
试验一
卵囊孢子化率对比试验：用柔嫩艾美尔球虫疫苗株接种50只30日龄AA肉鸡，1万个孢子化卵囊/只。收集接种后第7天的粪便30kg，把30kg粪便混匀后平分为3份。
第一组10kg粪便，当天提取卵囊，当天孢子化，孢子化完成后标记为1号卵囊；
第二组10kg粪便，用本发明的保护剂保存4天后提取卵囊并孢子化，孢子化完成后标记为2号卵囊；
第三组10kg粪便，常温下保存4天后提取卵囊并孢子化，孢子化完成后标记为3号卵囊。
注：三组粪便所提取的卵囊均在相同条件下进行孢子化。
试验结果：孢子化率分别为第一组91份，第二组90份，第三组82份，可见本发明处理过的鸡粪便孢子化程度与新鲜粪便相差不大，其孢子化率高于常温保存的鸡粪便。
试验二
卵囊产出量对比试验：30日龄AA肉鸡30只，随机分为3组，10只/组，三组分别接种试验一中所得1-3号孢子化卵囊。
第一组：接种1号卵囊，1万个孢子化卵囊/只；
第二组：接种2号卵囊，1万个孢子化卵囊/只；
第三组：接种3号卵囊，1万个孢子化卵囊/只。
分别收取三组7-10天的粪便，并提取卵囊，各组卵囊产量如下:
第一组：1250万卵囊/只，第二组：1235万卵囊/只，第三组：838万卵囊/只，可见本发明处理过的鸡粪便孢子化程度与新鲜粪便相差不大，其卵囊产量明显高于常温粪便保存组。
试验三
卵囊免疫原性对比试验：3日龄无球虫感染AA肉鸡90只，随机分为3组，30只/组，三组分别接种试验一中所得1-3号孢子化卵囊。
第一组：接种1号卵囊，3日龄接种5000个孢子化卵囊/只，10日龄接种10000个孢子化卵囊/只；
第二组：接种2号卵囊，3日龄接种5000个孢子化卵囊/只，10日龄接种10000个孢子化卵囊/只；
第三组：接种3号卵囊，3日龄接种5000个孢子化卵囊/只，10日龄接种10000个孢子化卵囊/只。
试验结果：17日龄用柔嫩艾美尔球虫强度株对所有鸡只进行攻毒，8万卵囊/只，攻毒后第4天剖检所有鸡只进行病变记分，计分标准如下表。
表柔嫩艾美耳球虫记分标准
Figure BDA0000918899110000051
试验结果：第一组平均分值1.8分/只；第二组平均分值1.8分/只；第三组平均分值2.3分/只，可见本发明对鸡粪便中球虫卵囊活性有较好的保护效果。

Claims (3)

1.一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂，其特征在于：该组合物的组分及其重量份数比为：
Figure FDA0002488522770000011
2.根据权利要求1所述的一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂，其特征在于：该保护溶液组分及其重量份数比分别为：
Figure FDA0002488522770000012
3.一种如权利要求1所述的一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂的制备方法，其特征在于：该制备方法的步骤为：
(1)按照重量配比量取灭菌水，先将灭菌水重量的50％注入配液罐内，然后按照重量配比称取果糖缓慢加入配液罐中，边加边搅拌，直至果糖全部溶解，得溶液A；
(2)按照重量配比称取聚乙烯基吡咯烷酮，缓慢加入步骤(1)所得溶液A中，边加边搅拌，直至混匀，得溶液B；
(3)按照重量配比称取叠氮化钠，用灭菌水全重的10％溶解，并把所得溶液缓慢加入步骤(2)所得溶液B中，边加边搅拌，直至混匀，得溶液C；
(4)按照重量配比称取98％硫酸，用灭菌水全重的10％稀释并冷却至常温，把所得溶液缓慢加入步骤(3)所得溶液C中，边加边搅拌，直至混匀，得溶液D；
(5)把剩余的灭菌水加入步骤(3)所得溶液中，搅拌均匀，所得溶液灌装至灭菌容器内封存备用，即可得到一种鸡粪便中球虫卵囊活性保护剂。
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