CN107014853A - 一种丹参酮ⅱa磺酸钠注射液的含量检测方法 - Google Patents

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姜苗苗
张梦晗
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N24/00—Investigating or analyzing materials by the use of nuclear magnetic resonance, electron paramagnetic resonance or other spin effects
    • G01N24/08—Investigating or analyzing materials by the use of nuclear magnetic resonance, electron paramagnetic resonance or other spin effects by using nuclear magnetic resonance

Abstract

本发明提供了一种丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法，基于定量核磁共振技术对丹参酮ⅡA磺酸钠注射液中丹参酮ⅡA磺酸钠和辅料葡萄糖同时进行含量测定。该方法具有简便易行、稳定性好、精密度高、重现性好、专属性强等特点，在全面检测丹参酮ⅡA磺酸钠注射液质量方面具有广阔的应用前景。

Description

一种丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法
技术领域
本发明涉及一种药物含量检测方法，尤其是一种丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法。
背景技术
丹参酮ⅡA磺酸钠注射液是中国于20世纪60年代自主研发的中药注射制剂,由丹参酮ⅡA磺酸钠和辅料葡萄糖溶于注射用水中形成，临床上用于冠心病、心绞痛、心肌梗死的辅助治疗。丹参酮ⅡA磺酸钠是丹参酮ⅡA经过磺化而成的,其水溶性好,临床起效快,能增加冠脉流量，能改善缺血区心肌的侧枝循环及局部供血,改善缺氧心肌的代谢紊乱,提高心肌耐氧能力,抑制血小板聚集及抗血栓形成,缩小缺血心肌梗死面积,在一定剂量下还能增强心肌收缩力。丹参酮ⅡA磺酸钠注射液原质量标准为地方标准,现国家食品药品监督管理局将其上升为国家标准,标准中含量测定方法为分光光度法，尽管该方法具有许多优点，但仍然在以下缺陷：1、专属性较差：；2、忽略了对辅料葡萄糖的分析和测定。
定量质子核磁共振(quantitative proton nuclear magnetic resonance,q1H-NMR)技术是一种日趋成熟的定量分析方法，现已在药物、化学、食品、农业以及军事领域有广泛的应用，可检测标准物质的纯度，也可测定混合物中各种成分的含量，且定量核磁共振技术q1H-NMR于2010年收载在我国药典附录中。q1H-NMR用于药物分析的最大优势在于可同时提供化合物结构确证的定性信息和含量测定的定量信息。与HPLC方法相比，该方法具有对样品无破坏、操作简便、所得结果重现性好、准确度高等优点。q1H-NMR常用定量方法为绝对定量法，即以含量已知的内标物与待测物制成混合溶液同时测定图谱，通过二者峰面积的比值确定待测物的含量。在对混合物中的成分进行定量分析时，其关键在于定量峰的选择，选择各个成分中完全独立、无干扰的特征信号峰才可用于该化合物的含量测定。
本发明同时对丹参酮ⅡA磺酸钠注射液中的有效成分丹参酮ⅡA磺酸钠和辅料葡萄糖进行定性定量分析，对注射剂质量控制方面具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法，基于核磁共振法(1H-NMR)对丹参酮ⅡA磺酸钠注射液中的丹参酮ⅡA磺酸钠和葡萄糖同时进行含量测定，具体步骤为：
(1)内标溶液的配制
称取内标物TSP(3-三甲基硅基丙酸钠-d4)溶解于容量瓶中，用D2O(重水)溶解并定容至刻度线；
(2)供试品溶液的制备
精密移取丹参酮ⅡA磺酸钠注射液样品并加入上述内标溶液溶解，其中，每0.4ml丹参酮ⅡA磺酸钠注射液样品加入0.1ml内标溶液，得供试品溶液，将所述供试品溶液转移至5mm核磁管中，直接用于1H-NMR测试；
(3)1H-NMR指纹图谱的测定
将核磁管置于核磁共振仪中，采用水峰抑制脉冲序列测定丹参酮ⅡA磺酸钠注射液样品溶液的1H-NMR图谱，其中测试参数及条件为：抑水峰序列zgcppr，观测频率400.13MHz，测定温度300K，谱宽8223.7Hz，90°脉冲宽度15μs，采样数据点65536，扫描次数16次，延迟时间7s，接受增益128；
(4)样品1H-NMR图谱分析
依据1H-NMR图谱及文献数据，鉴定丹参酮ⅡA磺酸钠和葡萄糖，采用MestReNova软件对得到的1H-NMR图谱依次进行相位调整、基线校正、定标，并对其质子峰信号进行归属；
(5)1H-NMR成分的含量测定
在上述实验条件下采集图谱，以3-(三甲基甲硅烷基)丙酸-d4钠盐(TSP)为内标化合物，对丹参酮ⅡA磺酸钠和葡萄糖以及内标物TSP的定量峰分别进行积分，按照1H-NMR内标法根据积分结果依照以下公式计算丹参酮ⅡA磺酸钠和葡萄糖的浓度：
其中PX和PTSP分别为化合物和TSP的浓度，AX和ATSP分别是化合物定量峰和TSP甲基峰的积分面积，NX和NTSP分别代表化合物定量峰和TSP甲基峰的质子个数，MX和MTSP分别是化合物和TSP的分子量。
优选的，上述丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法，所述步骤(1)中称取内标物TSP 5.02mg溶解于10ml容量瓶中，所述内标溶液中含有2.90mmol·L-1TSP。
优选的，上述丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法，所述步骤(4)中丹参酮ⅡA磺酸钠和葡萄糖的信号进行归属如下表1
表1丹参酮ⅡA磺酸钠注射液中2种化学成分的1H-NMR信号归属
上述丹参酮ⅡA磺酸钠的结构式为(Ⅰ)所示结构式，葡萄糖的结构式为(Ⅱ)所示结构式，
本发明的有益效果是：
上述丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法，由于供试品为水溶性成分，故选择重水为溶剂；将制剂样品溶解于含内标物的重水中，不加其它任何处理，在特定测试参数及测定条件下，直接用于1H-NMR测试，操作简单，无须经过柱分离，真实反应了注射液的常规状态。
本发明所述方法可以有效解决丹参酮ⅡA磺酸钠注射液中丹参酮ⅡA磺酸钠和辅料葡萄糖成分的定量分析问题，上述方法具有简便易行、稳定性好、精密度高、重现性好、专属性强等特点，在全面检测丹参酮ⅡA磺酸钠注射液质量方面具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为丹参酮ⅡA磺酸钠注射液1H NMR谱
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。
实施例1
丹参酮ⅡA磺酸钠注射液1H-NMR图谱的建立
1.1仪器与试药
Bruker AvanceⅢ400型超导核磁共振波谱仪(德国BRUKER公司)；METTLER TOLEDOXP6十万分之一天平(瑞士METTLER公司)；5mm标准核磁样品管(美国NORELL公司)；D2O(氘代度＞99.8％美国Sigma-Aldrich公司)；3-(三甲基甲硅烷)丙酸-d4钠盐(TSP，氘代度＞98％，美国Sigma-Aldrich公司)；丹参酮ⅡA磺酸钠(中国食品药品检定研究院，批号：111605-201202)；葡萄糖(美国Sigma-Aldrich公司)；3批丹参酮ⅡA磺酸钠注射液(上海第一生化药业有限公司，诺新康，批号：1507217，1506323，140642)
1.2丹参酮ⅡA磺酸钠注射液供试品溶液的制备
精密移取0.4ml丹参酮ⅡA磺酸钠注射液样品，加入0.1ml D2O(含内标TSP2.90mmol·L-1)，转移至5mm核磁管中，直接用于1H-NMR测试；
1.3 1H-NMR图谱的测定
将核磁管置于核磁共振仪中，采用水峰抑制脉冲序列测定丹参酮ⅡA磺酸钠注射液样品溶液的1H-NMR图谱，其中测试参数及条件为：抑水峰序列zgcppr，观测频率400.13MHz，测定温度300K，谱宽8223.7Hz，90°脉冲宽度15μs，采样数据点65536，扫描次数16次，延迟时间7s，接受增益128。
1.4样品1H-NMR图谱分析
依据1H-NMR图谱及文献数据，鉴定丹参酮ⅡA磺酸钠和葡萄糖，采用MestReNova软件对得到的1H-NMR图谱依次进行相位调整、基线校正、定标，根据质子信号峰的化学位移值和偶合裂分情况，进行归属，结果显示δ2.69处的1位的亚甲基质子信号峰与其它信号峰分离良好，被选为丹参酮ⅡA磺酸钠的定量峰；δ4.65和5.25处1位次甲基质子信号峰及δ3.25和3.55处2位次甲基质子信号峰与其它信号峰分离良好，被选为葡萄糖的定量峰。
1.5方法学考察
精密度：取同一份丹参酮ⅡA磺酸钠注射液供试品溶液，在上述1H-NMR测试条件下连续测定6次，记录定量峰积分面积，计算RSD值。
重复性：取同一批次丹参酮ⅡA磺酸钠注射液供试品溶液6份，测试1H-NMR图谱，记录定量峰积分面积，计算RSD值。
稳定性试验：取同一份丹参酮ⅡA磺酸钠注射液供试品溶液，分别在0,2,4,8,10,12h，测试1H-NMR图谱，记录定量峰积分面积，计算RSD值。
加样回收率：取同一批次丹参酮ⅡA磺酸钠注射液0.2ml,加水稀释至0.4ml，共3份，然后分别精密加入0.35mg丹参酮ⅡA磺酸钠、4.39mg葡萄糖，每份加入0.1ml内标溶液,配制供试品溶液，测定1H-NMR图谱，记录积分面积，计算回收率。实验结果见下表2。
表2定量核磁法方法学考察
通过实验结果(表2)可以确定本发明所述方法的正确性和准确性。
1.6定量核磁法测定不同批号丹参酮ⅡA磺酸钠注射液中丹参酮ⅡA磺酸钠和葡萄糖的含量
精密移取0.4ml丹参酮ⅡA磺酸钠注射液样品，按照“1.2”项下方法制备供试品溶液，按“1.3”项下条件进行测定。记录样品NMR图谱，计算含量。结果见表3。
表3样品含量测定
综上,本发明建立了一种基于定量核磁共振技术的含量检测方法，特别涉及到丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的1H-NMR指纹图谱，在一张图谱上同时完成了对主成分丹参酮ⅡA磺酸钠和辅料葡萄糖的定性、定量检测，同时也弥补了分光光度法对上述成分检测中专属性较差、测定不到辅料葡萄糖的缺陷。
上述参照具体实施方式对该一种丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法，其特征在于：基于定量核磁共振技术对丹参酮ⅡA磺酸钠注射液中丹参酮ⅡA磺酸钠和辅料葡萄糖同时进行含量测定，具体步骤为：
(1)内标溶液的配制
称取内标物TSP溶解于容量瓶中，用D2O溶解并定容至刻度线；
(2)供试品溶液的制备
精密移取丹参酮ⅡA磺酸钠注射液样品并加入上述内标溶液溶解，其中，每0.4ml丹参酮ⅡA磺酸钠注射液样品加入0.1ml内标溶液，得供试品溶液，将所述供试品溶液转移至5mm核磁管中，直接用于1H-NMR测试；
(3)1H-NMR指纹图谱的测定
将核磁管置于核磁共振仪中，采用水峰抑制脉冲序列测定丹参酮ⅡA磺酸钠注射液样品溶液的1H-NMR图谱，其中测试参数及条件为：抑水峰序列zgcppr，观测频率400.13MHz，测定温度300K，谱宽8223.7Hz，90°脉冲宽度15μs，采样数据点65536，扫描次数16次，延迟时间7s，接受增益128；
(4)样品1H-NMR图谱分析
依据1H-NMR图谱及文献数据，鉴定丹参酮ⅡA磺酸钠和葡萄糖，采用MestReNova软件对得到的1H-NMR图谱依次进行相位调整、基线校正、定标，并对其质子峰信号进行归属；
(5)1H-NMR成分的含量测定
在上述实验条件下采集图谱，以3-(三甲基甲硅烷基)丙酸-d4钠盐(TSP)为内标化合物，对丹参酮ⅡA磺酸钠和葡萄糖以及内标物TSP的定量峰分别进行积分，按照1H-NMR内标法根据积分结果依照以下公式计算丹参酮ⅡA磺酸钠和葡萄糖的浓度：
其中PX和PTSP分别为化合物和TSP的浓度，AX和ATSP分别是化合物定量峰和TSP甲基峰的积分面积，NX和NTSP分别代表化合物定量峰和TSP甲基峰的质子个数，MX和MTSP分别是化合物和TSP的分子量。
2.根据权利要求1所述的丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中称取内标物TSP 5.02mg溶解于10ml容量瓶中，所述内标溶液中含有2.90mmol·L-1TSP。
3.根据权利要求1所述的丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的含量检测方法，其特征在于：所述步骤(4)中丹参酮ⅡA磺酸钠和葡萄糖的信号进行归属如下：
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