CN107014761A - 一种六堡茶提取物中茶多糖的检测方法 - Google Patents

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    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
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    • G01N21/314—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths
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    • G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples

Abstract

本发明公开了一种六堡茶提取物中茶多糖的检测方法，属于食品分析领域，旨在提供一种快速且准确检测六堡茶提取物中茶多糖含量的检测方法，该方法包括以下步骤：包括以下步骤：步骤1：配制葡萄糖标准溶液作为对照；步骤2：将六堡茶提取物样品配制成检测液；步骤3：用紫外分光光度法测定标准对照品溶液和检测液的吸光度，绘制标准曲线；步骤4：计算六堡茶提取物样品中茶多糖含量。本发明适用于任何一种市场上可以购买的六堡茶及其制品。

Description

一种六堡茶提取物中茶多糖的检测方法
技术领域
本发明属于食品分析领域，尤其是一种六堡茶提取物中茶多糖的检测方法。
背景技术
六堡茶属于黑茶类，主产于广西梧州六堡镇，该品种茶叶具有红、浓、陈、醇的特点，具有消暑祛湿、明目清心、帮助消化的功效，因为六堡茶所含脂肪分解酵素高于其他茶类，因此具有健胃养神、减肥健身的功效，是一种广受欢迎的茶类。
现代研究表明茶叶降脂、减肥、降糖等保健功能是多种成分综合作用的结果，其中起主要作用的有两大类物质，一类是多酚类化合物(简称茶多酚)，另一类是脂多糖类化合物(简称茶多糖)。
研究表明，茶多糖抑制高脂饮食小鼠血脂升高的作用大于茶多酚；茶多糖还有显著的降低血糖保健功能。倪德江等研究表明不同茶类多糖对实验型糖尿病小鼠均有极显著的降低血糖作用。在低、中剂量下，乌龙茶、红茶、黑茶、白茶中茶多糖降低血糖的作用明显优于绿茶茶多糖。日本学者清水岑夫也揭示了茶叶中降血糖的有效成分是水溶性的组分复合多糖，即茶多糖。
由于六堡茶中茶多糖具有良好的保健功效，因此准确测定茶多糖含量对选择原料和评价提取、纯化工艺非常重要，但却一直困扰着茶多糖的测定。
目前，国内外快速测定多糖含量主要是用蒽酮-硫酸法或苯酚-硫酸法。由于六堡茶中含有大量茶红素、茶褐素、茶黄素等色素物质，对茶多糖检测中的显色反应会造成很大干扰，造成检测结果偏高，无法准确得到茶多糖含量。因此，为准确测定六堡茶提取物中茶多糖的含量，尽量减少其他物质的干扰。
发明内容
本发明旨在提供一种快速检测六堡茶提取物中茶多糖含量的检测方法，该方法可准确测定茶多糖的含量。
为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种六堡茶提取物中茶多糖的检测方法，包括以下步骤：
步骤1：配制葡萄糖标准溶液作为对照；
步骤2：将六堡茶提取物样品配制成检测液；
步骤3：用紫外分光光度法测定标准对照品溶液和检测液的吸光度，绘制标准曲线；
步骤4：计算六堡茶提取物样品中茶多糖含量。
需要说明的是，步骤1中的配制葡萄糖标准溶液的具体步骤为：取D-无水葡萄糖对照品，加水溶解并稀释制成每1ml中含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。
需要说明的是，所述的步骤2中的将六堡茶提取物样品配制成检测液，包括以下步骤：
步骤S1：取六堡茶3g，置250ml烧瓶中，分别加入30ml沸水浸提3次，每次10min，合并滤液；
步骤S2：加乙醇调整至乙醇含量80％，过滤，用浓度为80％乙醇洗涤滤渣3次，30ml/次，挥干溶剂，滤纸连同滤渣一起置烧瓶中，加50ml水，加热回流0.5h，趁热过滤，用65-100℃热水洗涤，合并滤液，定容至100ml；
步骤S3：精密吸取5ml提取溶液，加入盐酸溶液，混合液中盐酸的浓度为0.5mol/L，在40℃下水解30min，冷却后调pH至中性；
步骤S4：将酸水解后的多糖提取液置规格为15cm×2cm的聚酰胺层析柱中，用70-90℃热水洗脱，收集滤液，定容至100ml，作为供试品溶液。
需要说明的是，步骤3中所述的紫外分光光度法测定为：将葡萄糖标准溶液和检测液分别加入5％的苯酚溶液1.0ml，振摇混匀，加5.0ml硫酸，用微型漩涡混合仪迅速振摇混匀，室温下放置30分钟，以第1管为空白，照中国药典2005年版一部附录VB紫外-可见分光光度法，在487nm波长处测定吸光度。
需要说明的是，步骤3所述的标准曲线的绘制，包括以下步骤：
步骤SS1：分别精密吸取对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml分别置10ml具塞试管中，分别加二纯水至1.0ml，各精密加入5％的苯酚溶液1.0ml，振摇混匀；
步骤SS2：加5.0ml硫酸，用微型漩涡混合仪迅速振摇混匀，室温下放置30分钟；
步骤SS3：以第1管为空白，参照中国药典2005年版一部附录VB紫外-可见分光光度法，在487nm波长处测定吸光度，以吸光度和质量作标准曲线。
本发明与传统方法相比，具有以下优点：
1.本发明采用酸水解和聚酰胺柱分离两个步骤改进了六堡茶取物样品的制备方法，有效地分离了对测定结果产生干扰的茶色素等物质，实现了准确的多糖含量测定。
2.直接采用苯酚-硫酸法检测由于有茶色素的干扰造成结果偏高；采用本法检测有效去除了茶色素等物质的干扰，结果较准确。
3.本发明适用于任何一种市场上可以购买的六堡茶及其制品；
4.本发明适用于任何一种通过现有技术或新技术对六堡茶进行提取分离得到的六堡茶提取物。
具体实施例
下面结合具体实施方式对本发明的权利要求书做进一步说明，但不构成对本发明的任何限制，任何以本发明的技术方案为基础所作出的有限次修改仍然属于本发明所要保护的内容。
实施例1
1.六堡茶叶供试品溶液制备方法
步骤S1：取六堡茶3g，置250ml烧瓶中，分别加入30ml沸水浸提3次，每次10min，合并滤液；
步骤S2：加乙醇调整至乙醇含量80％，过滤，用浓度为80％乙醇洗涤滤渣3次，30ml/次，挥干溶剂，滤纸连同滤渣一起置烧瓶中，加50ml水，加热回流0.5h，趁热过滤，用65-100℃热水洗涤，合并滤液，定容至100ml；
步骤S3：精密吸取5ml提取溶液，加入盐酸溶液，混合液中盐酸的浓度为0.5mol/L，在40℃下水解30min，冷却后调pH至中性；
步骤S4：将酸水解后的多糖提取液置规格为15cm×2cm的聚酰胺层析柱中，用70-90℃热水洗脱，收集滤液，定容至100ml，作为供试品溶液。
2.对照品溶液的制备
将葡萄糖标准溶液和检测液分别加入5％的苯酚溶液1.0ml，振摇混匀，加5.0ml硫酸，用微型漩涡混合仪迅速振摇混匀，室温下放置30分钟，以第1管为空白，照中国药典2005年版一部附录VB紫外-可见分光光度法，在487nm波长处测定吸光度。
3.标准曲线的绘制
步骤SS1：分别精密吸取对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml分别置10ml具塞试管中，分别加二纯水至1.0ml，各精密加入5％的苯酚溶液1.0ml，振摇混匀；
步骤SS2：加5.0ml硫酸，用微型漩涡混合仪迅速振摇混匀，室温下放置30分钟；
步骤SS3：以第1管为空白，参照中国药典2005年版一部附录VB紫外-可见分光光度法，在487nm波长处测定吸光度，以吸光度和质量作标准曲线(在1小时内测定完毕)，计算。
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种六堡茶提取物中茶多糖的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：配制葡萄糖标准溶液作为对照；
步骤2：将六堡茶提取物样品配制成检测液；
步骤3：用紫外分光光度法测定标准对照品溶液和检测液的吸光度，绘制标准曲线；
步骤4：计算六堡茶提取物样品中茶多糖含量。
2.根据权利要求1的六堡茶提取物中茶多糖的检测方法，其特征在于，步骤1中的配制葡萄糖标准溶液的具体步骤为：取D-无水葡萄糖对照品，加水溶解并稀释制成每1ml中含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。
3.根据权利要求1的六堡茶提取物中茶多糖的检测方法，其特征在于，所述的步骤2中的将六堡茶提取物样品配制成检测液，包括以下步骤：
步骤S1：取六堡茶3g，置250ml烧瓶中，分别加入30ml沸水浸提3次，每次10min，合并滤液；
步骤S2：加乙醇调整至乙醇含量80％，过滤，用浓度为80％乙醇洗涤滤渣3次，30ml/次，挥干溶剂，滤纸连同滤渣一起置烧瓶中，加50ml水，加热回流0.5h，趁热过滤，用65-100℃热水洗涤，合并滤液，定容至100ml；
步骤S3：精密吸取5ml提取溶液，加入盐酸溶液，混合液中盐酸的浓度为0.5mol/L，在40℃下水解30min，冷却后调pH至中性；
步骤S4：将酸水解后的多糖提取液置规格为15cm×2cm的聚酰胺层析柱中，用70-90℃热水洗脱，收集滤液，定容至100ml，作为供试品溶液。
4.根据权利要求1的六堡茶提取物中茶多糖的检测方法，其特征在于，步骤3中所述的紫外分光光度法测定为：将葡萄糖标准溶液和检测液分别加入5％的苯酚溶液1.0ml，振摇混匀，加5.0ml硫酸，用微型漩涡混合仪迅速振摇混匀，室温下放置30分钟，以第1管为空白，在487nm波长处测定吸光度。
5.根据权利要求1的六堡茶提取物中茶多糖的检测方法，其特征在于，步骤3所述的标准曲线的绘制，包括以下步骤：
步骤SS1：分别精密吸取对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml分别置10ml具塞试管中，分别加二纯水至1.0ml，各精密加入5％的苯酚溶液1.0ml，振摇混匀；
步骤SS2：加5.0ml硫酸，用微型漩涡混合仪迅速振摇混匀，室温下放置30分钟；
步骤SS3：以第1管为空白，在487nm波长处测定吸光度，以吸光度和质量作标准曲线。
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