CN106999570A - 含至少一种流感病毒的中和性结合分子的佐剂组合物及含该佐剂组合物的疫苗组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种含有至少一种流感病毒中和性结合分子的佐剂组合物及含有其的疫苗组合物。证实了本发明的含有至少一种流感病毒中和性结合分子的所述组合物增强了疫苗效果，从而可以在施用疫苗时用作增强免疫应答的佐剂，并其对于预防由病毒引起的疾病是非常有用的。

Description

含至少一种流感病毒的中和性结合分子的佐剂组合物及含该 佐剂组合物的疫苗组合物
技术领域
本发明涉及一种佐剂组合物，该佐剂组合物包括用于中和流感病毒的至少一种结合分子，且涉及一种含该佐剂组合物的疫苗组合物；更具体地，本发明涉及一种佐剂组合物，该佐剂组合物包括对流感病毒具有中和活性的至少一种人单克隆抗体，该佐剂组合物起到增强由疫苗诱导的免疫应答从而增加疫苗功效的佐剂作用，且涉及一种含该佐剂组合物的疫苗组合物。
背景技术
流感是一种流感病毒感染呼吸道所引起的疾病，其常见于冬季、传染性高、易在所有年龄段传播，还已知尤其困扰老年人(Treanor J,2004,N Engl.J Med.350(3):218-20)。流感病毒分为甲型(A)、乙型(B)和丙型(C)流感病毒，甲型流感病毒按照作为主要表面蛋白的HA(血凝素)和NA(神经氨酸酶)，进一步分为许多亚型，其中流感病毒是属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)的包膜病毒，它的基因组由八条负义单链RNA(核糖核酸)片段组成。迄今已知存在17种类型的HA和10种类型的NA(Cheung TK and Poon LL 2007,Ann N YAcad.Sci.1102:1-25；Tong S,et al.2012,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.109:4269-4274)。流感病毒持续产生变种病毒，这些变种病毒由于其特征可以根据其类型而感染鸟、猪和人，并且由于包含RNA片段的基因组而产生多种基因组合和突变(Treanor J,2004.N Engl.JMed.350(3):218-20)。因为这种持续性突变，所以难以获得永久免疫力，目前最有效的预防方法是通过接种抗每年预期流行的流感病毒的疫苗，而每年形成适合于特定类型的免疫力。
目前每年接种的流感病毒疫苗是三价或四价疫苗，其由甲型流感病毒的H1和H3亚型的HA，及乙型流感病毒的一种或两种类型的HA构成。
抗各种感染性疾病的疫苗，包括流感病毒疫苗，可以添加用于增加免疫原性的物质，这种物质被称作佐剂。经批准用于人类的佐剂的例子可包括由氢氧化铝和磷酸铝组成的铝佐剂(Alum)，水包油乳剂MF59、AS03以及由TLR4激动剂MPL和氢氧化铝组成AS04(Rappuoli R,2011.Nature Reviews Immunology 11,11(12):865-72)。
除此之外，还有许多关于通过一起施用抗体和抗原来增强免疫应答的报道，且进行了许多将抗体用作佐剂的尝试。
由本申请人提交的抗甲型流感病毒的抗体显示出抗各种流感亚型的中和活性，尤其是韩国专利申请第10-2011-0020061号中公开的抗体主要表现出抗系统发育组1(H1、H2、H5、H9等)的中和活性，以及韩国专利申请第10-2012-0107512号中公开的抗体主要表现出抗系统发育组2(H3、H7等)的中和活性。因此，如在韩国专利申请第10-2014-0036601号中所公开的，已开发了一种鸡尾酒制剂，其经配置以便混合并共同施用两种或更多种抗体，从而显示出抗可能流行的组1和组2病毒的预防和治疗作用。
发明内容
技术问题
本发明人已经确定，可以通过将疫苗与本发明人已开发的用于中和流感病毒的抗体一起施用来增加疫苗的效果，并已发现了已开发的抗体作为佐剂的新用途，从而实现本发明。
因此，本发明旨在提供一种佐剂组合物，所述佐剂组合物包括用于中和流感病毒的至少一种结合分子。
此外，本发明旨在提供一种包括所述佐剂组合物和靶抗原的疫苗组合物。
此外，本发明旨在提供一种制备疫苗组合物的方法，所述疫苗组合物包括所述佐剂组合物和靶抗原。
此外，本发明旨在提供一种通过向宿主施用所述佐剂组合物，来增加对靶抗原的免疫应答的方法。
此外，本发明旨在提供一种通过向宿主施用所述疫苗组合物，对宿主进行免疫的方法。
此外，本发明旨在提供一种通过向宿主施用所述疫苗组合物，从经免疫的宿主制备免疫产物的方法。
技术方案
因此，本发明提供了一种佐剂组合物，所述佐剂组合物包括用于中和流感病毒的至少一种结合分子。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子可以与甲型流感病毒的血凝素(HA)蛋白的颈部区域中的表位结合。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子的表位可以是选自由以下表位所组成的组中的至少一种：i)包括选自由HA1多肽的第18、25、27、32、33、38、40、54、55、278、291、292、310、311、312和318位的氨基酸所组成的组中任何一个氨基酸残基的表位；和，ii)包括选自由HA2多肽的第18、19、20、21、38、39、41、42、45、46、48、49、52、53、56、57、58、60和99位的氨基酸所组成的组中的任何一个氨基酸残基的表位。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子的表位可以包括HA1多肽的第18、38、40、291、292和318位的氨基酸残基。此外，所述结合分子的表位可以包括HA2多肽的第18、19、20、21、41、42、45、48、49、52和53位的氨基酸残基。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子的表位可以包括HA1多肽的第18、38、40、291、292和318位的氨基酸残基，且可以包括HA2多肽的第18、19、20、21、41、42、45、48、49、52和53位的氨基酸残基。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子的表位可以包括HA1多肽的第278和318位的氨基酸残基。另外，所述结合分子的表位可以包括HA2多肽的第38、39、41、42、45、48、49、52和53位的氨基酸残基。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子的表位可以包括在HA第一单体的HA1多肽和/或HA2多肽的上述位置处的氨基酸残基，并且可以进一步包括与第一单体相邻的第二单体的HA1多肽的第25、32和33位的氨基酸残基。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子的表位可以包括HA1多肽的第278和318位的氨基酸残基，以及HA2多肽的第38、39、41、42、45、48、49、52和53位的氨基酸残基。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子的表位可以包括在HA第一单体的HA1多肽和HA2多肽的上述位置处的氨基酸残基，并且可以进一步包括与第一单体相邻的第二单体的HA1多肽的第25、32和33位的氨基酸残基。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子的表位可以包括HA1多肽的第278和318位的氨基酸残基，以及HA2多肽的第38、39、41、42、45、48、49、52、53、58和99位的氨基酸残基。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子的表位可以包括在HA第一单体的HA1多肽和HA2多肽的上述位置处的氨基酸残基，并且可以进一步包括与第一单体相邻的第二单体的HA1多肽的第25、27、32和33位的氨基酸残基。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子的表位可以包括HA1多肽的第54、55、278、291和318位的氨基酸残基，以及HA2多肽的第19、20、21、38、39、41、42、45、46、48、49、52、53、56、57和60位的氨基酸残基。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子的表位可以包括在HA第一单体的HA1多肽和HA2多肽的上述位置处的氨基酸残基，并且可以进一步包括与HA第一单体相邻的HA第二单体的HA1多肽的第25、32、33、310、311和312位的氨基酸残基。
上述表位的氨基酸位置的编号基于H3HA的编号系统。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子可以包括选自由以下结合分子所组成的组中的至少一种：i)结合分子，该结合分子包括根据Kabat法测定的轻链可变结构域和重链可变结构域，其中，该轻链可变结构域包括SEQ ID NO：1的CDR1区、SEQ ID NO：2的CDR2区和SEQ ID NO：3的CDR3区，该重链可变结构域包括SEQ ID NO：4的CDR1区、SEQ ID NO：5的CDR2区和SEQ ID NO：6的CDR3区；和，ii)结合分子，该结合分子包括根据Kabat法测定的轻链可变结构域和重链可变结构域，其中，该轻链可变结构域包括SEQ ID NO：7的CDR1区、SEQID NO：8的CDR2区和SEQ ID NO：9的CDR3区，该重链可变结构域包括SEQ ID NO：10的CDR1区、SEQ ID NO：11的CDR2区和SEQ ID NO：12的CDR3区。
在本发明中，按照由Kabat等人设计的系统，使用典型方法测定可变结构域的CDR(参见[Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest(5th),National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991)])。使用Kabat法进行本发明中使用的CDR编号，但本发明还涵括包括通过其他方法，包括IMGT法、Chothia法和AbM法等，所测定的CDR的结合分子。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子可以包括选自由以下结合分子所组成的组中的至少一种：i)结合分子，该结合分子包括轻链和重链，其中，该轻链包括SEQ IDNO：13的多肽序列，该重链包括SEQ ID NO：14的多肽序列；和ii)结合分子，该结合分子包括轻链和重链，其中，该轻链包括SEQ ID NO：15的多肽序列，该重链包括SEQ ID NO：16的多肽序列。
在本发明的一个实施方式中，所述结合分子包括与细胞表面的FC受体结合的结合分子。
此外，本发明提供一种包括所述佐剂组合物和靶抗原的疫苗组合物。所述靶抗原可以是病毒抗原，但不限于此。优选地，所述病毒抗原是流感病毒抗原。所述流感病毒抗原包括甲型流感病毒抗原或乙型流感病毒抗原。所述流感病毒抗原可以是血凝素(HA)或神经氨酸酶(NA)，但不限于此。
另外，在本发明的另一实施方式中，所述疫苗组合物可以以1:0.02至1:200，优选1:0.2至1:20的重量比包括所述抗原和所述佐剂组合物，但不限于此。可以降低或提高所述抗原和所述佐剂组合物的重量比，来调节免疫原性活性。
另外，在本发明的另一实施方式中，本发明提供了除上述佐剂组合物外，还加入额外的佐剂组合物的疫苗组合物。所述额外的佐剂组合物可以包括但不限于：铝佐剂、可代谢的油(如角鲨烯)、母育酚(如α-生育酚)、甾醇(如胆固醇)、皂苷(如QS21)、Toll样受体配体(如poly(I:C))、具有CpG基序的寡核苷酸和/或LPS衍生物(如3D-MPL)。
此外，本发明提供了一种制备疫苗组合物的方法，所述疫苗组合物包括上述佐剂组合物和靶抗原。所述疫苗组合物可以是流感病毒疫苗组合物，但不限于此。
此外，本发明提供了一种通过向宿主施用上述佐剂组合物，来增加对靶抗原的免疫应答的方法。所述疫苗组合物可以是流感病毒疫苗组合物，但不限于此。
另外，在本发明的另一个实施方式中，所述免疫应答可以由在其表面上具有Fc受体的细胞来诱导，但本发明不限于此。
此外，本发明提供了一种预防由病毒引起的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的含上述佐剂组合物的疫苗组合物。例如，所述由病毒引起的疾病可以是由流感病毒引起的疾病。
此外，本发明提供了一种通过向宿主施用疫苗组合物，对宿主进行免疫的方法。
此外，本发明提供了一种制备免疫产物的方法，所述方法包括：a)通过向宿主施用上述疫苗组合物来免疫宿主，以及b)从经免疫的宿主获得免疫产物。
另外，在本发明的另一实施方式中，所述免疫产物可以是T细胞、B细胞或抗体。所述免疫产物可以是在其细胞表面上具有Fc受体的其他类型的细胞，如B细胞，例如嗜中性粒细胞、巨噬细胞、天然杀伤细胞或树突状细胞。
下文中，本发明中所使用的术语定义如下。
如本文所使用的，术语“流感病毒”是指属于正粘病毒(Orthomyxoviridae)科，并具有由8个负义单链RNA(核糖核酸)片段组成的基因组的包膜病毒。流感病毒分为甲型(A)、乙型(B)和丙型(C)，并根据作为主要表面蛋白的HA(血凝素)和NA(神经氨酸酶)进一步分为多种亚型。迄今已报告了17种类型的HA和10种类型的NA。
如本文所使用的，“H1亚型”包括H1N1、H1N2、H1N3、H1N4、H1N5、H1N6、H1N7、H1N8、H1N9和H1N10。
如本文所使用的，“H2亚型”包括H2N1、H2N2、H2N3、H2N4、H2N5、H2N6、H2N7、H2N8、H2N9和H2N10。
如本文所使用的，“H5亚型”包括H5N1、H5N2、H5N3、H5N4、H5N5、H5N6、H5N7、H5N8、H5N9和H5N10。
如本文所使用的，“H9亚型”包括H9N1、H9N2、H9N3、H9N4、H9N5、H9N6、H9N7、H9N8、H9N9和H9N10。
如本文所使用的，“H3亚型”包括H3N1、H3N2、H3N3、H3N4、H3N5、H3N6、H3N7、H3N8、H3N9和H3N10。
如本文所使用的，“H7亚型”包括H7N1、H7N2、H7N3、H7N4、H7N5、H7N6、H7N7、H7N8、H7N9和H7N10。
如本文所述，术语“血凝素”(以下称为“HA”)是指流感病毒的包膜糖蛋白。HA介导流感病毒吸附并渗透至宿主细胞中。迄今已报告了17种HA亚型。
如本文所述，术语“神经氨酸酶”(以下称为“NA”)是指流感病毒的包膜糖蛋白。NA在流感病毒在增殖后传播时起重要的作用。迄今已报告了10种NA亚型。
如本文所述的，流感疫苗被认为是预防季节性流感或流行性流感的最有效方法，主要包括活疫苗和灭活疫苗。作为活疫苗，开发并使用活的减毒疫苗。灭活疫苗可以包括：使用完整病毒的全病毒疫苗，其中从鸡胚培养或通过细胞培养物培养的病毒经纯化，并用福尔马林等灭活；裂解疫苗，其中病毒的包膜被乙醚等破坏；和，亚单位疫苗，其中HA和NA组分被纯化。包括甲型流感病毒H1亚型和H3亚型及乙型流感病毒一种类型的疫苗是三价疫苗，包括甲型流感病毒H1亚型和H3亚型及乙型流感病毒两种类型的疫苗是四价疫苗。
如本文所述的，“流感疫苗”包括所有三价、四价、季节性和流行性的活疫苗和灭活疫苗。
如本文所述的，术语“结合分子”是指：完整的免疫球蛋白，包括单克隆抗体，如嵌合单克隆抗体、人源化单克隆抗体或人单克隆抗体；融合蛋白，包括免疫球蛋白的Fc或免疫球蛋白的与抗原结合的部分，例如包括与完整免疫球蛋白竞争以结合甲型流感病毒的单体HA或三聚体HA的免疫球蛋白片段的可变结构域，与底物结合的酶、受体或蛋白质。无论结构如何，抗原结合片段与完整免疫球蛋白所识别的同一抗原结合。抗原结合片段可以包括肽或多肽，其包括由所述结合分子的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基，至少30个连续氨基酸残基、至少35个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基或至少250个连续氨基酸残基所组成的氨基酸序列。
如本文所述的，术语“抗原结合片段”尤其包括Fab、F(ab')、F(ab')2、Fv、dAb、Fd、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、二价单链抗体、单链噬菌体抗体、双抗体、三抗体、四抗体、多肽等，其中该多肽包括免疫球蛋白的足以赋予该多肽抗原特异性结合的至少一个片段。上述片段可以通过合成或通过对完整的免疫球蛋白进行酶促或化学切割来产生，或者可以通过重组DNA技术进行遗传工程处理。这些生产方法是本领域所熟知的。
如本文所使用的，术语“佐剂”是指加入疫苗或药物活性成分中以增加和/或影响免疫应答的物质或组合物。佐剂的实例包括免疫原性载剂或辅助材料，和/或其它药物活性材料或组合物。通常，术语“佐剂”应广义地解释，且是指可以并入佐剂中的，或可增强与佐剂一起施用的抗原的免疫原性的广泛范围的物质或策略。此外，佐剂可以包括但不限于免疫增强剂、抗原递送系统或其组合。
如本文所使用的，术语“免疫产物”是指由通过施用佐剂组合物和/或抗原而被免疫的宿主产生的保护性免疫介质或细胞，其实例可包括但不限于活化的T细胞、B细胞或抗体。
如本文所使用的，术语“药学上可接受的赋形剂”是指与活性分子，如药物、试剂或结合分子组合以制备可接受或方便剂型的任何惰性物质。药学上可接受的赋形剂是如下的赋形剂，该赋形剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒或至少毒性较小，并且与含药物、试剂或结合分子的制剂的其它成分相容。
如本文所使用的，术语“有效量”是指在与抗甲型流感病毒的疫苗一起施用时，有效增加该疫苗效力的本发明结合分子的量。
在本发明中，通过小鼠实验证实了，已提交的抗体(韩国专利申请第10-2011-0020061号、第10-2012-0107512号和第10-2014-0036601号)在与流感疫苗一起接种时增加了免疫应答的效果，从而发现了其作为佐剂的新用途。在此，本申请人提交的韩国专利申请第10-2011-0020061号、第10-2012-0107512号和第10-2014-0036601号以引用的方式并入到本申请中。
有益效果
根据本发明，包括用于中和流感病毒的至少一种结合分子的组合物可以增强疫苗的效果，从而可以在施用疫苗时用作增强免疫应答的佐剂，并且对于预防由病毒引起的疾病非常有效。
附图说明
图1示出了在每只小鼠以两周的间隔肌内注射两次H1N1疫苗组合物的条件下，在第一次肌内注射后13天、17天和27天取样的血清中，抗H1N1流感病毒的特异性抗体效价的ELISA结果(表1)。
图2示出了在每只小鼠以两周的间隔肌内注射两次H1N1疫苗组合物的条件下，在第一次肌肉注射后28天取样的血清中，抗H1N1HA蛋白和H1N1流感病毒的特异性抗体效价的ELISA结果(表3)。
图3示出了在用10MLD50的H1N1流感病毒接种经免疫的小鼠后，经免疫的小鼠的存活率和体重变化。
图4示出了在每只小鼠以两周的间隔肌内注射两次H1N1疫苗组合物的条件下，在第一次肌内注射后13天、20天和27天取样的血清中，抗H1N1流感病毒的特异性抗体效价的ELISA结果(表5)。
图5示出了在用10MLD50的H1N1流感病毒接种经免疫的小鼠后，经免疫的小鼠的存活率和体重变化。
图6示出了在每只小鼠以两周的间隔肌内注射两次H1N1疫苗组合物的条件下，在第一次肌内注射后13天、20天和27天取样的血清中，抗H1N1流感病毒的特异性抗体效价的ELISA结果(表7)。
图7示出了在用10MLD50的H1N1流感病毒接种经免疫的小鼠后，经免疫的小鼠的存活率和体重变化。
图8示出了在每只小鼠以两周的间隔肌内注射两次H3N2疫苗组合物的条件下，在第一次肌内注射后13天和27天取样的血清中，抗H3N2流感病毒的特异性抗体效价的ELISA结果(表9)。
图9示出了在用10MLD50的H3N2流感病毒接种经免疫的小鼠后，经免疫的小鼠的存活率和体重变化。
图10示出了在每只小鼠以两周的间隔肌内注射两次H1N1疫苗组合物的条件下，在第一次肌内注射后13天、20天和27天取样的血清中，抗H1N1流感病毒的特异性抗体效价的ELISA结果(表11)。
图11示出了在每只小鼠以两周的间隔肌内注射两次H1N1疫苗组合物的情况下，在第二次肌内注射后1天、3天和7天的脾脏中，免疫细胞中的B细胞群体比例的测量结果(表14)。
图12示出了在每只小鼠以两周的间隔肌内注射两次H1N1疫苗组合物的条件下，在第二次肌内注射后1天、3天和7天的腹股沟淋巴结中，免疫细胞的B细胞群体比例的测量结果(表14)。
图13示出了在每只小鼠以两周的间隔肌内注射两次H1N1疫苗组合物的条件下，在第二次肌内注射后四周，接种H1N1病毒后1天和3天的脾脏和淋巴结中，B细胞群体比例的测量结果(表15)。
图14示出了在每只小鼠以两周的间隔肌内注射两次H1N1疫苗组合物的条件下，在第一次肌内注射后13天、20天和27天取样的血清中，抗H1N1流感病毒的特异性抗体效价的ELISA结果(表16)。
具体实施方式
在下文中，将参照以下实施例来更详细地解释本发明。然而，提供以下实施例和试验例仅用于说明本发明，但不应解释为对本发明的限制。本发明中引用的文献通过引用的方式并入到本发明的说明书中。
实施例
实施例1：对流感病毒中和抗体的疫苗佐剂效果的评价
1-1.ELISA
为了评价治疗性CT120和CT149抗体作为流感病毒疫苗佐剂的效果，如下表1所示进行了动物试验。如下表1所示，将0.2μg H1N1裂解疫苗单独施用，或与通常用作佐剂的铝佐剂(1mg)或与作为佐剂的CT120抗体(0.5μg、1μg、5μg、10μg)或CT149抗体(0.5μg、1μg、5μg、10μg)组合施用，之后测量每只小鼠中抗流感病毒的抗体效价。
[表1]
组 抗原 佐剂 途径 小鼠#
组1 PBS - i.m. 4
组2 PBS CT 120 10μg i.m. 4
组3 PBS CT 149 10μg i.m. 4
组4 H1N1裂解疫苗0.2μg - i.m. 4
组5 H1N1裂解疫苗0.2μg CT 120 10μg i.m. 4
组6 H1N1裂解疫苗0.2μg CT 120 5μg i.m. 4
组7 H1N1裂解疫苗0.2μg CT120 1μg i.m. 4
组8 H1N1裂解疫苗0.2μg CT120 0.5μg i.m. 4
组9 H1N1裂解疫苗0.2μg CT149 10μg i.m. 4
组10 H1N1裂解疫苗0.2μg CT149 5μg i.m. 4
组11 H1N1裂解疫苗0.2μg CT149 1μg i.m. 4
组12 H1N1裂解疫苗0.2μg CT149 0.5μg i.m. 4
组13 H1N1裂解疫苗0.2μg 铝佐剂 i.m. 4
如表1所示，将H1N1疫苗组合物以两周的间隔肌内注射小鼠两次，随后观察每个试验组诱导的免疫应答。在第一次肌内注射后13天、17天和27天，从每个试验组取样血清，并且通过ELISA测量其抗体效价。
如图1的结果所示，相较于仅施用疫苗的组，疫苗与CT120、CT149或铝佐剂联合施用的组中产生更大量的抗体，该抗体能检测到对应于作为整体施用的疫苗的病毒。在比较疫苗和佐剂施用后27天的抗体的量时，在施用5μg CT120或10μg CT149的组中和在施用铝佐剂的组中所产生的抗体的量相似，而在施用1μg或0.5μg CT149的组中所产生的抗体的量大于施用铝佐剂的组。
1-2.血凝抑制试验(HI试验，血凝素抑制试验)
如下表2所示，为了验证治疗性抗体CT120和CT149作为流感病毒疫苗佐剂是否有效，通过血凝抑制试验(HI试验，血凝素抑制试验)评价疫苗的效力。在施用疫苗和佐剂后13天、17天和27天，从每只小鼠获得血清，并测量能够抑制流感病毒和鸡红细胞血凝反应的抗体效价。
[表2]
如图1的结果，在比较疫苗和佐剂施用后27天的抗体的量时，施用5μg CT120和10μg CT149的组(组6和组9)显示出与施用铝佐剂的组(组13)相似的HI效价，而施用1μg和0.5μg CT149的组(组11和组12)显示出高于施用铝佐剂的组的HI效价。
当CT120或CT149与流感病毒疫苗的注射剂一起施用时，表现出相似或优于铝佐剂的免疫原性增强效果。因此，证明了CT120和CT149作为流感病毒疫苗佐剂是有效的。
实施例2：确定抗原浓度以验证使用H1N1疫苗作为抗原时CT120和CT149的佐剂效 果
2-1.抗体生产结果
如下表3所示，在验证治疗性抗体的佐剂效果之前，进行动物试验以确定合适的抗原浓度。H1N1疫苗(基于细胞的)以0.01μg至1μg的量单独施用或与铝佐剂组合施用，随后通过ELISA测量抗体效价，并通过HI测量中和抗体效价。“标准品”表示市售的三价疫苗，用于试验结果的对比。
[表3]
组 抗原 佐剂 途径 小鼠#
组1 PBS - i.m. 5
组2 H1N1疫苗1μg - i.m. 5
组3 H1N1疫苗1μg 铝佐剂 i.m. 5
组4 标准品3μg - i.m. 5
组5 H1N1疫苗0.5μg - i.m. 5
组6 H1N1疫苗0.5μg 铝佐剂 i.m. 5
组7 H1N1疫苗0.2μg - i.m. 5
组8 H1N1疫苗0.2μg 铝佐剂 i.m. 5
组9 H1N1疫苗0.1μg - i.m. 5
组10 H1N1疫苗0.1μg 铝佐剂 i.m. 5
组11 标准品0.3μg - i.m. 5
组12 H1N1疫苗0.05μg - i.m. 5
组13 H1N1疫苗0.05μg 铝佐剂 i.m. 5
组14 H1N1疫苗0.01μg - i.m. 5
组15 H1N1疫苗0.01μg 铝佐剂 i.m. 5
组16 标准品0.03μg - i.m. 5
如表3所示，将H1N1疫苗组合物以两周的间隔肌内注射小鼠两次，随后观察每个试验组诱导的免疫应答。在第一次肌内注射后28天，从每个试验组取样血清，通过ELISA测量血清中抗HA蛋白和病毒的抗体效价，并通过HI试验测量中和抗体的效价。
如图2的结果所示，抗体效价的增加大致与所添加的抗原量成比例，当随之添加铝佐剂时，抗体效价更高。此外，抗HA蛋白的抗体效价与抗H1N1病毒的抗体效价差异不大。
[表4]
从表4的结果可以明显看出，与仅施用抗原的试验组相比，施用抗原和铝佐剂的试验组的HI效价增加。此外，在抗原浓度为0.1μg的试验组(组9和组10)和抗原浓度为0.05μg的试验组(组12和组13)中，与仅添加抗原时相比，额外添加了铝佐剂时HI效价分别增加8倍和4倍，从而明确证实了在含有或不含有佐剂的疫苗效力之间存在差异。
2-2.保护性免疫力的结果
为了评价第二次免疫后4周抗流感病毒的保护性免疫力，将10MLD50的CA/04/09H1N1病毒接种到经免疫的小鼠鼻腔中使其感染，随后持续15天测量每只小鼠的存活率和体重的变化。
如图3的结果所示，与仅施用抗原的试验组相比，在施用抗原和铝佐剂的试验组中，所有浓度下抗流感病毒的保护性免疫力效果都较高。此外，对于两种抗原浓度(0.1μg和0.05μg)的试验组，通过HI效价测量，在这两种抗原浓度下存在或不存在佐剂的疫苗效果显著不同，在0.1μg试验组中，仅施用抗原的试验组显示出80％的存活率，而施用抗原和佐剂的试验组的存活率为100％。另一方面，在0.05μg试验组中，仅施用抗原的试验组显示出60％的存活率，而施用抗原和佐剂的试验组的存活率为100％。
2-3.结论
基于抗流感病毒的HI效价结果和保护性免疫效果，对于0.1μg试验组，HI效价结果是不同的，但依赖于是否存在佐剂的保护性免疫效果的差异较小，而0.05μg试验组显示出HI效价结果和保护性免疫效果依赖于是否存在佐剂而显著不同，因此将0.05μg确定为最终抗原浓度。下面，使用该条件进行动物试验以评价佐剂效果。
实施例3：使用H1N1疫苗作为抗原评价CT120和CT149的佐剂效果
3-1.使用H1N1疫苗作为抗原评价CT120的佐剂效果
3-1-1.抗体生产结果
使用基于动物试验结果(实施例2)确定的0.05μg的抗原浓度，进行用于验证治疗性抗体CT120和CT149的佐剂效果的动物试验。此处，在小鼠试验中，预期对应于CT120和CT149抗体的小鼠形式CT120(mIgG2a)和CT149(mIgG2a)的佐剂效果与CT120或CT149同样有效，因此，将CT120和CT149及其小鼠形式用于动物试验。
通过将人IgG1形式的CT120或CT149中Fc区的恒定区替换为小鼠的IgG1或IgG2a区，来制备小鼠形式的抗体。
通过预试验(本文未描述)，选择作为佐剂有效的浓度，来确定CT120和CT120(mIgG2a)的量。
如下表5所示，将H1N1疫苗(基于细胞的)与不同浓度的治疗性抗体混合，在37℃下反应1小时，并以2周的间隔肌内注射两次。第一次肌内注射后13天、20天和27天，在每个试验组中取样血清，并分别通过ELISA和HI试验测量血清中抗H1N1病毒的抗体效价和中和抗体效价。
[表5]
组 抗原 佐剂 途径 小鼠#
组1 PBS - i.m. 10
组2 PBS CT 120 0.5μg i.m. 10
组3 PBS CT 120(mIgG2a)0.5μg i.m. 10
组4 H1N1疫苗0.05μg - i.m. 10
组5 H1N1疫苗0.05μg CT 120 0.05μg i.m. 10
组6 H1N1疫苗0.05μg CT 120 0.1μg i.m. 10
组7 H1N1疫苗0.05μg CT 120 0.5μg i.m. 10
组8 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.05μg i.m. 10
组9 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.1μg i.m. 10
组10 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.5μg i.m. 10
组11 H1N1疫苗0.05μg 铝佐剂 i.m. 10
组12 标准品0.15μg - i.m. 10
如图4的结果所示，与使用CT120作为佐剂的试验组相比，使用小鼠形式的CT120(mIgG2a)作为佐剂的试验组中的抗H1N1病毒的抗体效价更高。此外，在使用CT120(mIgG2a)的试验组的情况下，抗体效价高于使用铝佐剂作为佐剂的试验组，并且第一次免疫后3周取样的血清中(图5中的D20)抗体效价急剧增加。
[表6]
从表6的结果可以明显看出，与使用CT120作为佐剂的试验组相比，使用CT120(mIgG2a)作为佐剂的试验组中，HI效价通常增加，取决于所使用的浓度最多增加4倍。在所有试验组中，使用0.5μg CT120(mIgG2a)的、具有最高的抗体效价的试验组(组10)，显示出最高的HI效价，具体为160。
3-1-2.保护性免疫力结果
为了评价第二次免疫后4周抗流感病毒的保护性免疫力，将10MLD50的CA/04/09H1N1病毒接种到经免疫的小鼠鼻腔中使其感染，随后持续15天测量每只小鼠的存活率和体重的变化。
如图5的结果所示，使用CT120(mIgG2a)作为佐剂时，其存活率高于使用CT120作为佐剂的试验组或仅使用抗原的试验组，且其体重变化最低。具体地，使用0.5μg CT120(mIgG2a)作为佐剂的、具有最高抗体效价和HI效价结果的试验组，显示出100％的存活率，比使用铝佐剂作为佐剂的试验组高30％。
因此，证明了与CT120相比，CT120(mIgG2a)作为佐剂更有效，且以0.5μg的浓度施用时显示出最佳效果。
3-2.使用H1N1疫苗作为抗原评价CT149的佐剂效果
3-2-1.抗体生产结果
如下表7所示，确定CT149在预试验(本文未描述)中显示出佐剂效果的浓度，并进行与实施例3-1-1相同的试验。
[表7]
组 抗原 佐剂 途径 小鼠#
组1 PBS - i.m. 10
组2 PBS CT 149 0.5μg i.m. 10
组3 PBS CT 149(mIgG2a)0.5μg i.m. 10
组4 H1N1疫苗0.05μg - i.m. 10
组5 H1N1疫苗0.05μg CT 149 0.01μg i.m. 10
组6 H1N1疫苗0.05μg CT 149 0.05μg i.m. 10
组7 H1N1疫苗0.05μg CT 149 0.5μg i.m. 10
组8 H1N1疫苗0.05μg CT 149(mIgG2a)0.01μg i.m. 10
组9 H1N1疫苗0.05μg CT 149(mIgG2a)0.05μg i.m. 10
组10 H1N1疫苗0.05μg CT 149(mIgG2a)0.5μg i.m. 10
组11 H1N1疫苗0.05μg 铝佐剂 i.m. 10
组12 标准品0.15μg - i.m. 10
如图6的结果所示，与CT120不同，CT149的佐剂效果通常较弱，并且在使用0.5μgCT149(mIgG2a)的试验组中，表现出与使用铝佐剂的试验组相似的抗体效价。
[表8]
抗原 佐剂 HI效价
G1 PBS - N.D.
G2 PBS CT 149 0.5μg N.D.
G3 PBS CT 149(mIgG2a)0.5μg N.D.
G4 H1N1疫苗0.05μg - 20
G5 H1N1疫苗0.05μg CT 149 0.01μg 20
G6 H1N1疫苗0.05μg CT 149 0.05μg 40
G7 H1N1疫苗0.05μg CT 149 0.5μg 20
G8 H1N1疫苗0.05μg CT 149(mIgG2a)0.01μg 20
G9 H1N1疫苗0.05μg CT 149(mIgG2a)0.05μg 40
G10 H1N1疫苗0.05μg CT 149(mIgG2a)0.5μg 80
G11 H1N1疫苗0.05μg 铝佐剂 80
G12 标准品0.15μg - N.D.
从表8的结果可以明显看出，在使用CT149或CT149(mIgG2a)作为佐剂的试验组中，HI效价没有显著增加，并且如通过ELISA测定的抗体效价的结果所示，使用0.5μg CT149(mIgG2a)的试验组(组10)中的HI效价与使用铝佐剂的试验组(组11)相同。
3-2-2.保护性免疫力结果
为了评价第二次免疫后4周抗流感病毒的保护性免疫力，将10MLD50的CA/04/09H1N1病毒接种到经免疫的小鼠鼻腔中使其感染，随后持续15天测量每只小鼠的存活率和体重的变化。
如图7的结果所示，使用0.5μg CT149(mIgG2a)作为佐剂的试验组显示出80％存活率，比使用铝佐剂的试验组高10％。与使用铝佐剂的试验组相比，体重变化的程度没有明显改善。
3-3.结论
基于上述结果，CT120(mIgG2a)对于H1N1疫苗显示出优异的佐剂效果，特别是以0.5μg浓度使用时效果最佳。当使用0.5μg CT149(mIgG2a)时，显示出佐剂效果，但低于CT120(mIgG2a)的佐剂效果。
实施例4：使用H3N2疫苗作为抗原评价CT120和CT149的佐剂效果
实施例1～3证实了CT120和CT149作为H1N1疫苗佐剂的效果，使用另一种流感病毒株，菲律宾/2/82(H3N2)，生产H3N2疫苗(基于细胞的)，并进行动物试验以评价CT120和CT149作为H3N2疫苗佐剂的效果。
4-1.抗体生产结果
如下表9所示，在验证治疗性抗体的佐剂效果之前，进行动物试验以确定合适的抗原浓度。H3N2疫苗以0.01μg至1μg的量单独施用或与铝佐剂组合施用，随后通过ELISA测量抗体效价并通过HI测量中和抗体效价。此外，为了评价保护性免疫力效果，用适于小鼠的菲律宾/2/82(H3N2)病毒感染每只小鼠，并测量其存活率和体重的变化。
[表9]
组 抗原 佐剂 途径 小鼠#
组1 PBS - i.m. 5
组2 H3N2疫苗1μg - i.m. 5
组3 H3N2疫苗1μg 铝佐剂 i.m. 5
组4 H3N2疫苗0.5μg - i.m. 5
组5 H3N2疫苗0.5μg 铝佐剂 i.m. 5
组6 H3N2疫苗0.2μg - i.m. 5
组7 H3N2疫苗0.2μg 铝佐剂 i.m. 5
组8 H3N2疫苗0.1μg - i.m. 5
组9 H3N2疫苗0.1μg 铝佐剂 i.m. 5
组10 H3N2疫苗0.05μg - i.m. 5
组11 H3N2疫苗0.05μg 铝佐剂 i.m. 5
组12 H3N2疫苗0.01μg - i.m. 5
组13 H3N2疫苗0.01μg 铝佐剂 i.m. 5
如表9所示，将H3N2疫苗组合物以两周的间隔肌内注射小鼠两次，随后观察每个试验组诱导的免疫应答。在每次肌内注射后2周，从每个试验组取样血清，通过ELISA测量血清中抗H3N2病毒的抗体效价，并通过HI试验测量中和抗体效价。
如图8的结果所示，抗体效价的增加与添加的抗原量成比例，当与铝佐剂一起使用时，抗体效价更高。
[表10]
从表10的结果可以看出，使用抗原和铝佐剂的试验组中的HI效价高于仅使用抗原的试验组。在使用0.01μg和0.05μg抗原的试验组中(组12和组10)，没有测量出HI效价，但是在额外添加铝佐剂作为佐剂的试验组(组13和组11)中，HI效价分别增加至160和640。
4-2.保护性免疫力结果
为了评价第二次免疫后4周抗流感病毒的保护性免疫力，将10MLD50的A/菲律宾/2/82H3N2病毒接种到经免疫的小鼠鼻腔中使其感染，随后持续15天测量每只小鼠的存活率和体重的变化。
如图9的结果所示，除仅使用低剂量抗原(即0.01μg抗原和0.05μg抗原)的试验组外，其他试验组的免疫应答效果都较高。
4-3.结论
在实施例3的H1N1试验中所使用的抗原浓度(0.05μg)下，H3N2疫苗组合物显示出依赖于是否存在佐剂的可变的HI效价和存活率。因此，以与实施例3相同的方式，使用确定的0.05μg H3N2抗原浓度进行用于评价治疗性抗体CT120和CT149的佐剂效果的动物试验，由此证实了CT120和CT149作为H3N2疫苗佐剂的效果，其中H3N2疫苗用作抗原。
实施例5：流感疫苗佐剂的功能机制
基于实施例1～4的试验结果，结论是治疗性流感抗体起到增强流感疫苗效力的佐剂作用。因此，进行了动物试验，以测试产生佐剂效果的机制。
关于治疗性抗体显示出作为流感疫苗佐剂效果的机制的假说是，抗体的Fc区可能结合存在于免疫细胞中的Fc受体，由此可以更有效地发生对流感疫苗的免疫应答。
为了证明这一假说，选择在实施例3中被证明有明显佐剂效果的、0.1μg和0.5μg的CT120(mIgG2a)抗体浓度，并且如下表11所示，将完整的CT120(mIgG2a)和不含Fc的CT120(mIgG2a)F(ab')2以不同的量与0.05μg H1N1疫苗反应，然后肌内注射到小鼠中，之后观察诱导的免疫应答。
5-1.抗体生产结果
如下表11所示，测试以0.1μg和0.5μg的浓度施用CT120(mIgG2a)的组，在实施例3中显示在该浓度下具有作为H1N1疫苗佐剂的最佳效果。对于施用CT120(mIgG2a)F(ab')2的组，在下组中进行试验：一个组中，施用与CT120(mIgG2a)相同的量；以及，一个组中，CT120(mIgG2a)F(ab')2的量经计算，以与0.5μg和0.1μg CT120(mIgG2a)的疫苗相同的摩尔比来施用。
[表11]
组 抗原 佐剂 途径 小鼠#
组1 PBS - i.m. 10
组2 H1N1疫苗0.05μg - i.m. 10
组3 PBS CT 120(mIgG2a)F(ab')2 0.5μg i.m. 10
组4 PBS CT 120(mIgG2a)0.5μg i.m. 10
组5 H1N1疫苗0.05μg 铝佐剂 i.m. 10
组6 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.5μg i.m. 10
组7 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.1μg i.m. 10
组8 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)F(ab')2 0.5μg i.m. 10
组9 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)F(ab')2 0.3μg i.m. 10
组10 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)F(ab')2 0.1μg i.m. 10
组11 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)F(ab')2 0.06μg i.m. 10
如表11所示，将H1N1疫苗与各种浓度的CT120(mIgG2a)或CT120(mIgG2a)F(ab')2混合，在37℃反应1小时，以2周的间隔肌内注射小鼠两次，之后观察每个试验组诱导的免疫应答。第一次肌内注射后13天、20天和27天，在每个试验组中取样血清，并分别通过ELISA和HI测量血清中抗H1N1病毒的抗体效价和抗H1N1病毒的中和抗体效价。
如图10的结果所示，使用CT120(mIgG2a)F(ab')2时，抗体效价相对较低，抗体效价的不同在各试验组间无显著性差异。
[表12]
组 抗原 佐剂 途径 HI效价
组1 PBS - i.m. N.D.
组2 H1N1疫苗0.05μg - i.m. 20
组3 PBS CT 120(mIgG2a)F(ab')2 0.5μg i.m. N.D.
组4 PBS CT 120(mIgG2a)0.5μg i.m. N.D.
组5 H1N1疫苗0.05μg 铝佐剂 i.m. 160
组6 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.5μg i.m. 160
组7 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.1μg i.m. 80
组8 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)F(ab')2 0.5μg i.m. 40
组9 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)F(ab')2 0.3μg i.m. 20
组10 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)F(ab')2 0.1μg i.m. 20
组11 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)F(ab')2 0.06μg i.m. 40
从表12的结果可以明显看出，使用CT120(mIgG2a)F(ab')2作为佐剂的所有试验组中(组8～组11)的HI效价，与单独施用H1N1疫苗而不含佐剂的试验组(组2)相似。相比之下，使用完整CT120(mIgG2a)作为佐剂的试验组(组6和组7)分别显示出160和80的HI效价，与单独施用H1N1疫苗的试验组(组2)相比增加了8倍和4倍。
5-2.保护性免疫力结果
为了评价第二次免疫后4周抗流感病毒的保护性免疫力，将10MLD50的CA/04/09H1N1病毒接种到经免疫的小鼠鼻腔中使其感染，随后持续15天测量每只小鼠的存活率。
[表13]
从表13的结果可以明显看出，如实施例3一样，使用完整CT120(mIgG2a)作为佐剂的试验组(组6和组7)显示出高存活率，而使用CT120(mIgG2a)F(ab')2作为佐剂的试验组(组8～组11)表现出与仅使用抗原的试验组(组2)相似的存活率。
5-3.结论
基于上述结果，证明了抗体的Fc区在作为流感疫苗佐剂中起重要作用。
实施例6：流感疫苗佐剂的靶免疫细胞的发现
6-1.靶免疫细胞的验证
实施例5中确认了流感抗体的Fc区作为佐剂起重要作用。相应地，进行动物试验，以从表达Fc受体的免疫细胞中，发现具有依赖于与Fc区结合而变化的免疫应答的细胞。用作抗体的量为0.5μg小鼠形式的CT120(mIgG2a)，在实施例3中显示出该量作为H1N1疫苗佐剂具有最佳效果。
[表14]
组 抗原 佐剂 途径 小鼠#
组1 PBS - i.m 3
组2 H1N1疫苗0.05μg - i.m 3
组3 - CT 120(mIgG2a)0.5μg i.m 3
组4 H1N1疫苗0.05μg 铝佐剂 i.m 3
组5 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.5μg i.m 3
组6 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)F(ab')2 0.5μg i.m 3
如表14所示，将H1N1疫苗与佐剂混合，在37℃下反应1小时，并以2周的间隔肌内注射小鼠两次。在1天、3天和7天后，分离每只小鼠的脾和腹股沟淋巴结，从而测量各种免疫细胞的数量和相应的细胞比例。
如图11和图12的结果所示，与其他施用组相比，当加入H1N1疫苗和CT120(mIgG2a)时，在两次肌内注射后1天，脾脏和腹股沟淋巴结中的B细胞的量大约增加了一倍。在第3天和第7天，得到相对类似的细胞比例。
因此，证实了CT120佐剂通过Fc区提高B细胞的免疫应答。在施用CT120F(ab')2的组中，其与施用PBS对照的小鼠没有差异，从而再次证实Fc区的重要性。相应地，可证明CT120佐剂通过与市售佐剂铝佐剂不同的机制来增加H1N1疫苗的免疫原性。
6-2.B细胞的保护性免疫力结果
在实施例6-1中，证实了CT120佐剂增强B细胞的免疫力。基于此，进行动物试验来评价CT120佐剂是否即使在病毒接种的状态下，也能与B细胞的保护性免疫力相关。
[表15]
组 抗原 佐剂 途径 小鼠#
组1 PBS - i.m 3
组2 H1N1疫苗0.05μg - i.m 3
组3 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.5μg i.m 3
组4 H1N1疫苗0.05μg 铝佐剂 i.m 3
如表15所示，将H1N1疫苗组合物以2周的间隔肌内注射小鼠两次。4周后，将10MLD50的CA/04/09H1N1病毒接种到经免疫的小鼠鼻腔中。病毒感染后1天和3天，分离每只小鼠的脾脏和内部淋巴结，并使用流式细胞仪测量所有细胞中的B细胞比例。
如图13的结果所示，当病毒感染后1天对脾脏进行分析时，与PBS对照相比，在使用H1N1疫苗和CT120两者的试验组中，B细胞群体增加了约10％。在使用疫苗和铝佐剂两者的试验组中，B细胞群体与PBS对照相比显著增加，但与使用CT120的试验组相比未显著增加。此外，在其他组中存在未成熟的B细胞，即B-1细胞(CD19+B220-)，但在使用H1N1疫苗和CT120的试验组中仅存在由B-1细胞发育来的B-2细胞(CD19+B220+)。对于淋巴结，与脾脏中相同，B细胞比例未急剧增加，但在三次重复实验中显著增加。
6-3结论
因此，当使用CT120作为佐剂时，迅速形成更多的成熟B细胞。
实施例7：市售佐剂与CT120的效果比较
通过上述实施例，证实了CT120作为流感疫苗佐剂是有效的，并且将该效果与目前有用的流感疫苗佐剂的效果进行比较。目前市售的季节性流感疫苗佐剂是Novartis的MF59、Fluad。在以下比较试验中，使用具有与MF59相同组成的AddaVaxTM(InvivoGen，货号#vac-adx-10)。
7-1抗体生产结果
使用0.5μg和0.1μg小鼠形式的CT120(mIgG2a)进行试验，其在实施例3中显示出作为H1N1疫苗佐剂具有最佳效果。在下表16中，100％Addvax表示在45μg季节性流感疫苗HA中所含佐剂的量。
[表16]
组 抗原 佐剂 途径 小鼠#
组1 PBS - i.m. 10
组2 H1N1疫苗0.05μg - i.m. 10
组3 PBS CT 120(mIgG2a)0.5μg i.m. 10
组4 PBS Addvax 100％ i.m. 10
组5 H1N1疫苗0.05μg 铝佐剂 i.m. 10
组6 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.5μg i.m. 10
组7 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.1μg i.m. 10
组8 H1N1疫苗0.05μg Addvax 100％ i.m. 10
组9 H1N1疫苗0.05μg Addvax 10％ i.m. 10
组10 H1N1疫苗0.05μg Addvax 1％ i.m. 10
如表16所示，将H1N1疫苗与CT120(mIgG2a)或具有与市售佐剂相同组成的Addvax混合，在37℃下反应1小时，以2周的间隔肌内注射小鼠两次，随后观察每个试验组诱导的免疫应答。第一次肌内注射后13天、20天和27天，在每个试验组中取样血清，并分别通过ELISA和HI测量血清中抗H1N1病毒的抗体效价和抗H1N1病毒的中和抗体效价。
如图14的结果所示，仅施用100％Addavax的试验组显示出与施用0.5μg和0.1μgCT120(mIgG2a)的试验组相似的抗体效价。当施用10％和1％的Addavax时，所得抗体效价较低。
[表17]
组 抗原 佐剂 HI效价
组1 PBS - N.D.
组2 H1N1疫苗0.05μg - 20
组3 PBS CT 120(mIgG2a)0.5μg N.D.
组4 PBS Addvax 100％ N.D.
组5 H1N1疫苗0.05μg 铝佐剂 160
组6 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.5μg 160
组7 H1N1疫苗0.05μg CT 120(mIgG2a)0.1μg 80
组8 H1N1疫苗0.05μg Addvax 100％ 160
组9 H1N1疫苗0.05μg Addvax 10％ 20
组10 H1N1疫苗0.05μg Addvax 1％ N.D.
从表17的结果可以看出，施用100％Addvax的试验组(组8)显示出与施用0.5μg和0.1μg CT120(mIgG2a)的试验组(组6和组7)相似的HI效价，而施用1％和10％Addvax的试验组(组10和组9)的HI效价未测量到，或表现出与仅施用H1N1疫苗的试验组(组2)相似的HI效价。
7-2.保护性免疫力结果
为了评价第二次免疫后4周抗流感病毒的保护性免疫力，将10MLD50的CA/04/09H1N1病毒接种到经免疫的小鼠鼻腔中使其感染，之后持续15天测量小鼠的存活率。
[表18]
从表18的结果可以看出，施用100％Addavax的试验组(组8)显示出与施用0.5μg和0.1μg CT120(mIgG2a)的试验组(组6和组7)相似的存活率，而在施用1％和10％Addvax的试验组(组10和组9)中存活率降低。
7-3.结论
因此，在H1N1疫苗添加了0.5μg和0.1μg CT120(mIgG2a)时的佐剂效果，与在45μg市售流感疫苗HA中添加一定量的佐剂(100％Addavax)时的效果相似。在实施例4中，当使用0.5μg CT149(mIgG2a)作为佐剂时，结果与施用0.1μg和0.5μg CT120(mIgG2a)时类似，由此可以预期CT149(mIgG2a)显示出的效果与CT120(mIgG2a)相似。
<110> 赛特瑞恩股份有限公司
<120> 含至少一种流感病毒的中和性结合分子的佐剂组合物及含该佐剂组合物的疫苗组合物
<130> CPD2015043KR
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<170> KopatentIn 2.0
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Gly
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Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
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Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn
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Ile Trp Asn Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
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Arg Leu Leu Ile Ser Gly Ala Ser Thr Gly Ala Thr Gly Val Pro Ser
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Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Arg Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser
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Ser Trp Pro Arg Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
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Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
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165 170 175
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<212> PRT
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<223> CT120 重链
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Met Asp Trp Thr Trp Arg Phe Leu Phe Val Val Ala Ala Ala Thr Gly
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Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Met
20 25 30
Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Val Phe Phe
35 40 45
Ser Ser His Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Gly Ile Ser Pro Met Phe Gly Thr Thr His Tyr Ala
65 70 75 80
Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Gln Ser Thr Thr
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Ala Gly Ser Tyr Tyr Pro Leu Asn Trp
115 120 125
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
130 135 140
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
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Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
165 170 175
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180 185 190
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
195 200 205
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210 215 220
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Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
245 250 255
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275 280 285
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Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
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Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
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<213> 人工序列
<220>
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<210> 16
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CT149 重链
<400> 16
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Val
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Thr Gly Ile Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ala Thr Thr Ala Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Asp Leu Arg Ser Leu Arg Pro Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Val Gln Gly Arg Val Glu Val Gly Ser Gly Gly Arg
100 105 110
His Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Gly Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455

Claims (11)

1.一种佐剂组合物，所述佐剂组合物包括用于中和流感病毒的至少一种结合分子。
2.根据权利要求1所述的佐剂组合物，其中，所述结合分子与甲型流感病毒的血凝素(HA)蛋白的颈部区域中的表位结合。
3.根据权利要求1所述的佐剂组合物，其中，所述结合分子的表位是选自由以下表位所组成的组中的至少一种：i)包括选自由HA1多肽的第18、25、27、32、33、38、40、54、55、278、291、292、310、311、312和318位的氨基酸所组成的组中的任何一个氨基酸残基的表位；和，ii)包括选自由HA2多肽的第18、19、20、21、38、39、41、42、45、46、48、49、52、53、56、57、58、60和99位的氨基酸所组成的组中的任何一个氨基酸残基的表位。
4.根据权利要求1所述的佐剂组合物，其中，所述至少一种结合分子是选自由以下结合分子所组成的组中的至少一种：
i)结合分子，该结合分子包括根据Kabat法测定的轻链可变结构域和重链可变结构域，其中，该轻链可变结构域包括SEQ ID NO：1的CDR1区、SEQ ID NO：2的CDR2区和SEQ ID NO：3的CDR3区，该重链可变结构域包括SEQ ID NO：4的CDR1区、SEQ ID NO：5的CDR2区和SEQ IDNO：6的CDR3区；和
ii)结合分子，该结合分子包括根据Kabat法测定的轻链可变结构域和重链可变结构域，其中，该轻链可变结构域包括SEQ ID NO：7的CDR1区、SEQ ID NO：8的CDR2区和SEQ IDNO：9的CDR3区，该重链可变结构域包括SEQ ID NO：10的CDR1区、SEQ ID NO：11的CDR2区和SEQ ID NO：12的CDR3区。
5.根据权利要求1所述的佐剂组合物，其中，所述至少一种结合分子是选自由以下结合分子所组成的组中的至少一种：
i)结合分子，该结合分子包括具有SEQ ID NO：13的多肽序列的轻链和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的重链；和
ii)结合分子，该结合分子包括具有SEQ ID NO：15的多肽序列的轻链和具有SEQ IDNO：16的多肽序列的重链。
6.一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括：权利要求1至5中任一项所述的佐剂组合物，和靶抗原。
7.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其中，所述靶抗原是流感病毒抗原。
8.根据权利要求6或7所述疫苗组合物，其中，所述抗原和所述佐剂组合物的重量比为1:0.02至1:200。
9.一种制备疫苗组合物的方法，所述疫苗组合物包括：权利要求1至5中任一项所述的佐剂组合物，和靶抗原。
10.一种增强对靶抗原的免疫应答的方法，所述方法向宿主施用权利要求6至8中任一项所述的疫苗组合物。
11.一种制备免疫产物的方法，所述方法包括：
a)通过向宿主施用权利要求6至8中任一项所述的疫苗组合物，来免疫所述宿主；以及
b)从经免疫的宿主获得免疫产物，
其中，所述免疫产物是抗所述疫苗组合物中所含的靶抗原的T细胞、B细胞或抗体。
CN201580065445.0A 2014-12-05 2015-12-05 含至少一种流感病毒的中和性结合分子的佐剂组合物及含该佐剂组合物的疫苗组合物 Active CN106999570B (zh)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110680912A (zh) * 2019-09-26 2020-01-14 中国农业大学 H3n2和h3n8亚型犬流感二价灭活苗及其制备方法与应用

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20180008702A1 (en) 2014-12-05 2018-01-11 Celltrion Inc. Adjuvant composition containing at least one influenza virus neutralizing and binding molecule and vaccine composition containing same
KR102475104B1 (ko) 2021-11-05 2022-12-07 에이피알지 주식회사 용아초 추출물 및 오배자 추출물을 포함하는 백신 아쥬반트 조성물
WO2023230448A1 (en) * 2022-05-23 2023-11-30 Vir Biotechnology, Inc. Combination immunotherapy for influenza

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1390138A (zh) * 1999-11-16 2003-01-08 伊格尼昂癌症治疗研发股份公司 抗体作疫苗的新用途
WO2008147847A9 (en) * 2007-05-22 2009-11-05 Baylor College Of Medicine Immune complex vaccination as a strategy to enhance immunity in the elderly and other immune compromised populations
CN101732716A (zh) * 2008-11-04 2010-06-16 中国科学院动物研究所 用于预防和/或治疗禽流感的抗原抗体复合物
CN102164613A (zh) * 2008-07-25 2011-08-24 生物医学研究所 中和抗甲型流感病毒抗体及其用途
WO2011111966A2 (en) * 2010-03-08 2011-09-15 Celltrion, Inc. Human monoclonal antibodies derived from human b cells and having neutralizing activity against influenza a viruses
CN102233133A (zh) * 2010-04-29 2011-11-09 上海市农业科学院 一种新城疫病毒感染免疫复合物疫苗的制备方法和应用
CN104011077A (zh) * 2011-09-30 2014-08-27 赛特瑞恩股份有限公司 从人b细胞产生的具有甲型流感病毒中和活性的结合分子
WO2014158001A1 (ko) * 2013-03-29 2014-10-02 (주)셀트리온 2 이상의 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 결합 분자를 포함하는 조성물

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100476343B1 (ko) 2003-01-24 2005-03-16 한국생명공학연구원 Ａ형 간염 바이러스 중화 인간 단일클론항체
US8148085B2 (en) * 2006-05-15 2012-04-03 Sea Lane Biotechnologies, Llc Donor specific antibody libraries
WO2009121004A2 (en) 2008-03-28 2009-10-01 Sea Lane Biotechnologies, Llc Neutralizing molecules to viral antigens
US20180008702A1 (en) 2014-12-05 2018-01-11 Celltrion Inc. Adjuvant composition containing at least one influenza virus neutralizing and binding molecule and vaccine composition containing same

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1390138A (zh) * 1999-11-16 2003-01-08 伊格尼昂癌症治疗研发股份公司 抗体作疫苗的新用途
WO2008147847A9 (en) * 2007-05-22 2009-11-05 Baylor College Of Medicine Immune complex vaccination as a strategy to enhance immunity in the elderly and other immune compromised populations
CN102164613A (zh) * 2008-07-25 2011-08-24 生物医学研究所 中和抗甲型流感病毒抗体及其用途
CN101732716A (zh) * 2008-11-04 2010-06-16 中国科学院动物研究所 用于预防和/或治疗禽流感的抗原抗体复合物
WO2011111966A2 (en) * 2010-03-08 2011-09-15 Celltrion, Inc. Human monoclonal antibodies derived from human b cells and having neutralizing activity against influenza a viruses
CN102791734A (zh) * 2010-03-08 2012-11-21 赛特瑞恩股份有限公司 源自人b细胞且具有抗甲型流感病毒的中和活性的人单克隆抗体
CN102233133A (zh) * 2010-04-29 2011-11-09 上海市农业科学院 一种新城疫病毒感染免疫复合物疫苗的制备方法和应用
CN104011077A (zh) * 2011-09-30 2014-08-27 赛特瑞恩股份有限公司 从人b细胞产生的具有甲型流感病毒中和活性的结合分子
WO2014158001A1 (ko) * 2013-03-29 2014-10-02 (주)셀트리온 2 이상의 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 결합 분자를 포함하는 조성물
KR20140119641A (ko) * 2013-03-29 2014-10-10 (주)셀트리온 2 이상의 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 결합 분자를 포함하는 조성물

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DAE SUB SONG ET AL.: ""Evaluation of a competitive ELISA for antibody detection against avian influenza virus"", 《JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE》 *
NEIL GREENSPAN ET AL.: ""Capacity of Influenza virus-monoclonal antibody mixtures to stimulate memory and cytotoxic Tlymphocyte populations"", 《INFECTION AND IMMUNITY》 *
姚忻 等: ""流感裂解疫苗H3N2-抗H3N2免疫原性复合物滴鼻诱导小鼠黏膜免疫应答的研究"", 《微生物与感染》 *
常军亮等: ""甲型H1N1流感病毒佐剂疫苗小鼠免疫效果"", 《微生物免疫学进展》 *
李公美 等: ""抗原-抗体复合物疫苗研究进展"", 《动物医学进展》 *
李影 等: ""兽用抗原-抗体复合物疫苗研究概况"", 《中国兽药杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110680912A (zh) * 2019-09-26 2020-01-14 中国农业大学 H3n2和h3n8亚型犬流感二价灭活苗及其制备方法与应用
CN110680912B (zh) * 2019-09-26 2021-08-17 中国农业大学 H3n2和h3n8亚型犬流感二价灭活苗及其制备方法与应用

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