CN106999540A - 组合疗法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包括蛋白酶体抑制剂和含有暴露的Arg‑Gly‑Asp(RGD)部分的环肽的组合。具体地，本发明涉及包括选自由硼酸酯、环氧酮、肽醛和β‑内酯蛋白酶抑制剂组成的组的蛋白酶体抑制剂；和含有暴露的Arg‑Gly‑Asp(RGD)部分的环肽的组合。更具体地，本发明涉及包含选自由硼替佐米、德兰佐米、艾沙佐米、卡非佐米、奥普佐米、MG132和麻日佐米组成的组的蛋白酶体抑制剂；和含有暴露的Arg‑Gly‑Asp(RGD)部分的环肽的组合。

Description

组合疗法
技术领域
本发明涉及包括蛋白酶体抑制剂和含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分的环肽的组合。具体地，本发明涉及包括选自由硼酸酯、环氧酮、肽醛和β-内酯蛋白酶抑制剂组成的组的蛋白酶体抑制剂；和含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分的环肽的组合。更具体地，本发明涉及包含选自由硼替佐米(bortezomib)、德兰佐米(delanzomib)、艾沙佐米(ixazomib)、卡非佐米(carfilzomib)、奥普佐米(oprozomib)、MG132和麻日佐米(marizomib)组成的组的蛋白酶体抑制剂；和含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分的环肽的组合。
本发明涉及用作例如在如癌症等过度增殖性疾病的治疗中的药剂的组合。
本发明还涉及包括所述组合的药物组合物以及包括所述组合的各组分的试剂盒。
背景技术
硼替佐米(BTZ)是静脉注射(IV)或皮下(SC)使用的抗肿瘤剂。硼替佐米的结构为：
硼替佐米是哺乳动物细胞中26S蛋白酶体的糜蛋白酶样活性的可逆抑制剂。26S蛋白酶体是一种大的蛋白质复合物，可以使泛素化的蛋白质降解。泛素-蛋白酶体通路在调节特定蛋白质的细胞内浓度方面发挥重要作用，从而维持细胞内的稳态。26S蛋白酶体的抑制可以防止这种靶向的蛋白水解，这可以影响细胞内的多个信号级联。这种正常稳态机制的破坏可以导致细胞死亡。实验证实硼替佐米对体外各种癌细胞类型具有细胞毒性。硼替佐米在包括多发性骨髓瘤在内的非临床肿瘤模型中导致体内肿瘤生长的延迟。
来自利用硼替佐米的体外、离体和动物模型的数据表明其增加成骨细胞分化和活性并抑制破骨细胞功能。已经在受到晚期溶骨性疾病的影响并用硼替佐米治疗的多发性骨髓瘤患者中观察到这些作用。
德兰佐米(DLZ)，([(1R)-1-[[(2S,3R)-3-羟基-2-[[(6-苯基吡啶-2-基)羰基]氨基]-1-氧丁基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸)，是静脉注射(IV)、口服或皮下(SC)使用的抗肿瘤剂。德兰佐米的结构为：
德兰佐米也是哺乳动物细胞中26S蛋白酶体的糜蛋白酶样活性的可逆抑制剂。实验已经证明德兰佐米在体外对多发性骨髓瘤细胞系具有细胞毒性(Piva等人，Blood 2008；111:2765–75，Dorsey等人，J.Med Chem 2008；51:1068-72)。德兰佐米在包括多发性骨髓瘤在内的非临床肿瘤模型中导致体内肿瘤生长减少(Sanchez等，Br.J.Haematol 2010；148:569-81)。
艾沙佐米(IXZ)是静脉注射(IV)、口服或皮下(SC)使用的抗肿瘤剂。艾沙佐米用柠檬酸配制用于临床用途：柠檬酸盐与血浆或水溶液一接触即刻水解(Kupperman等人，Cancer Res.2010；70:1970-80)。最终制剂称为柠檬酸艾沙佐米，开始被命名为‘MLN9708’，其含有活性药物组分‘MLN2238’(艾沙佐米)和柠檬酸部分。
艾沙佐米(MLN2238)([(1R)-1-[[2-[(2,5-二氯苯甲酰基)氨基]乙酰基]氨基]-3-甲基-丁基]硼酸)的结构如下示出：
柠檬酸艾沙佐米(MLN9708)(2,2'-{2-[(1R)-1-{[N-(2,5-二氯苯甲酰基)甘氨酰]氨基}-3-甲基丁基]-5-氧-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(dioxaborolane)-4,4-二基}二乙酸)的结构如下示出：
艾沙佐米也是哺乳动物细胞中26S蛋白酶体的糜蛋白酶样活性的可逆抑制剂。
Kupperman及其同事(Kupperman等人，Cancer Res.2010；70:1970-80)描述了与硼替佐米相比，艾沙佐米与蛋白酶体的生理化学、药代动力学、药效学、抗肿瘤活性和相互作用。硼替佐米和艾沙佐米优先与20S蛋白酶体的β5位点结合，也与较高浓度的β2和β1位点结合。尽管艾沙佐米和硼替佐米对蛋白酶体中的活性位点的亲和力大致相同，但发现艾沙佐米保持与蛋白酶体结合较短的时间。艾沙佐米的蛋白酶体解离半衰期约为18分钟，而硼替佐米的解离半衰期为约110分钟，即艾沙佐米比硼替佐米的释放快约6倍。艾沙佐米在体外对各种癌细胞系包括黑素瘤、肺癌和结直肠癌细胞系等具有细胞毒性。艾沙佐米在几种临床前模型中也表现出体内抗肿瘤活性。在CWR22人前列腺癌异种移植物中，硼替佐米和艾沙佐米均以其最大耐受剂量(MTD)显示出有效的抗肿瘤活性。艾沙佐米在一半MTD时证明比硼替佐米更有效。在WSU-DLCL2淋巴瘤异种移植模型中，艾沙佐米显示出显著的抗肿瘤活性，而硼替佐米在其MTD时无效。类似地，在代表弥漫性淋巴瘤的Oci-Ly7-Luc模型中，与硼替佐米相比，用艾沙佐米治疗的动物表现出改善的抗肿瘤作用。还发现艾沙佐米具有口服生物利用度，这意味着口服给药可以是包括艾沙佐米的治疗的方案(Kupperman等人，CancerRes.,2010；70:1970-80)。Lee及其同事将此分析扩展到包括几种另外的淋巴瘤模型，基于异种移植物的淋巴瘤模型(OCI-Ly10和PHTX22L)和基因工程小鼠模型iMyccα/Bcl-XL，均设计成更多地代表人类癌症的临床进展。在各情况下，使用艾沙佐米的MTD水平治疗与使用硼替佐米的MTD-水平治疗至少一样有效。在PHTX22L异种移植物的情况下，仅发现艾沙佐米显示抗肿瘤作用。艾沙佐米在DP54-Luc模型中也有效缓解溶骨性骨病(Lee等，Clin.CancerRes.,2011；17：7313-23)。应注意的是，由于艾沙佐米在动物模型中表现出较高的MTD，所以在Kupperman和Lee等人的研究中，艾沙佐米以比硼替佐米高出十倍以上的浓度递送，因此所观察到的改善可能与递送的较高剂量有关，而不是与艾沙佐米的化学性质有关。然而，与硼替佐米相比，降低的毒性是艾沙佐米的一个重要特征，定义了其潜在的临床适用性(意味着艾佐佐米与硼替佐米相比增加的剂量在临床上是可行的)。
在临床试验中评估时，已经发现柠檬酸艾沙佐米通过口服和静脉途径均耐受性良好，其MTD值通常大于硼替佐米所显示的值。柠檬酸艾沙佐米已被试验用于各种实体瘤和非霍奇金淋巴瘤的静脉内治疗，以及多发性骨髓瘤的口服治疗(参见Allegra等人，LeukemiaResearch 2014；38:1-9)。计划III期临床试验用于评价柠檬酸艾沙佐米与(来那度胺)和地塞米松组合用于治疗骨髓瘤或全身性轻链淀粉样变性，在各情况下口服递送(clintrials.gov标识符NCT01564537，NCT01659658，NCT01850524和NCT0218141)。
卡非佐米(CFZ)具有如下结构：
卡非佐米在I期试验中使用的最高剂量下，对患者血液中蛋白酶体的糜蛋白酶样活性的抑制作用比硼替佐米高88％，其中尚未达到最大耐受剂量(O'Conner等人，2009Clin.Cancer Res.15,7085-7091)。在II期试验中，卡非佐米在严重的预先治疗的患者群体中获得24％的部分反应率(partial response rate)，为多药疗法的五种以前治疗的中值(Kisselev等，化学与生物学19，2012年1月27日，99-115)。与硼替佐米相比，外周神经病变的发生率大大降低(Molineaux,S.M.(2012),Clin.Cancer Res.18,15–20)。
奥普佐米(OPZ)具有如下结构：
奥普佐米是卡非佐米的口服可用类似物(Zhou,H.J.等人(2009).J.Med.Chem.52,3028–3038)。
MG-132具有如下结构：
MG-132是一种快速可逆的、有效抑制剂，其通过与活性位点苏氨酸的羟基形成半缩醛来阻断蛋白酶体(Kisselev等人，Chemistry&Biology 19,27 January 2012,99–115)。
麻日佐米具有如下结构：
麻日佐米源自海洋微生物热带盐孢菌(Salinispora tropica)(Chauhan等人，Cancer Cell 8,407–419)。麻日佐米通过将起催化作用的苏氨酸羟基酯化来使蛋白酶体失活。由于抑制剂的氯原子的亲核取代，β-内酯环的打开之后形成四氢呋喃环(Groll等人，J.Am.Chem.Soc.128,5136-5141)。所有β-内酯加成物被水缓慢水解，导致蛋白酶体的再活化(Dick等人，J.Biol.Chem.272,182-188)。麻日佐米是目前正在进行临床试验的所有蛋白酶体抑制剂中最有效的。它产生更强(高达100％)和更持久的糜蛋白酶样位点的抑制，并且还靶向胰蛋白酶样和半胱天冬酶样位点(Potts等人，Curr.Cancer Drug Targets 11,254–284)。
已知含有暴露的RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)氨基酸序列的肽结合整联蛋白，并已经对靶向药物递送进行了大量研究(参见Temming等人，Drug Resistance Updates 8(2005)381-402)。由于它们与在某些癌症特别是肿瘤血管中过度表达的αvβ3整联蛋白结合，所以含RGD的肽也已被直接用作抗癌剂。一个这样的例子是西仑吉肽或EMD121974，一种含有RGD序列的5个氨基酸的环化肽，已在黑色素瘤、胶质母细胞瘤和前列腺癌的临床试验中试验。虽然三个氨基酸RGD基序本身是不可变的，但是通过改变侧翼氨基酸序列的数量和组成可以改变靶向的特异性和亲和力(avidity)。将核心RGD序列维持在含有D-氨基酸的环状结构中表现出增加的稳定性和对α整联蛋白的结合亲和力。
西仑吉肽已被列入美国和欧洲至少38项临床试验(14项I期，5项I/II期，17项II期和2项III期)的研究对象，其中该药物已对患有非小细胞肺癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、脑肿瘤、乳腺肿瘤、头颈部转移性鳞状细胞癌、前列腺癌、白血病、黑素瘤、淋巴瘤和晚期实体瘤、卡波西肉瘤的患者进行了试验。就组合疗法而言，已经测试了西仑吉肽与贝伐单抗、丙卡巴肼、放化疗(标准放射疗法和基于顺铂和长春瑞滨的化学疗法)、替莫唑胺、皮质类固醇、放射疗法、马来酸西地那非、紫杉醇、西妥昔单抗、5-氟尿嘧啶(5-FU)、苹果酸舒尼替尼、异长春花碱(Venorelbine)和吉西他滨的组合。然而，这些组合并没有得到美国或欧洲机构的批准。
我们已经发现，蛋白酶体抑制剂与含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分的环肽的组合相对于各单独组分的总和产生协同治疗效果。
发明内容
本发明的一个方面，提供一种包括：(i)蛋白酶体抑制剂及其药学上可接受的盐；和(ii)环肽的组合，其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分。
本发明的另一方面，提供一种包括：(i)蛋白酶体抑制剂及其药学上可接受的盐；和(ii)环肽的组合，其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分，其用作药剂。
本发明的另一方面，提供一种包括：(i)蛋白酶体抑制剂及其药学上可接受的盐；和(ii)环肽的组合，其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分，其用于治疗肿瘤疾病，例如过度增殖性疾病，如癌症。
本发明的另一方面，提供一种肿瘤疾病例如过度增殖性疾病如癌症的治疗方法，所述方法包括向需要其的受试者施用包括：(i)蛋白酶体抑制剂及其药学上可接受的盐；和(ii)环肽的组合，其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分。
本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包括本发明的组合与药学上可接受的赋形剂。
本发明的另一方面，提供一种试剂盒，其包括作为独立组分的：(i)蛋白酶体抑制剂及其药学上可接受的盐；和(ii)环肽，其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分。
本发明的另一方面，提供一种环肽用于改善蛋白酶体抑制剂及其药学上可接受的盐的治疗活性的用途，其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分。
这些和其他实施方案通过详细的描述公开或根据其中包括的内容是显而易见的。
附图说明
在下文中将参考附图进一步描述本发明的实施例，其中：
图1：含半胱氨酸的环状RGD肽对蛋白酶体抑制剂硼替佐米的增强。示出当用10μMBTZ、与10μM RGDfC(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-苯丙氨酸-半胱氨酸)肽组合的10μM BTZ、或无BTZ的10μM RGDfC(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-苯丙氨酸-半胱氨酸)肽处理时，与未处理的HEK293细胞相比的％相对细胞生长值的直方图。结果以在分析中包括的五次实验重复的平均值的±标准误差示出。将对照细胞生长赋予100％的相对细胞生长值，并且相对于该数值计算所有细胞生长值。
图2：含赖氨酸的环状RGD肽对各种蛋白酶体抑制剂的增强。相对于对照的生长(即，负值代表细胞杀伤，正值<100％代表细胞生长抑制)。在HEK 293和Cos7细胞中进行初始单剂量评估(±10μM各蛋白酶体抑制剂，±10μM c(RGDfK)(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-苯丙氨酸-赖氨酸))。(BTZ-硼替佐米；IXZ-艾沙佐米；DLZ-德兰佐米；CFZ-卡非佐米；OPZ-奥普佐米；MG132)。
图3：西仑吉肽对硼替佐米和卡非佐米蛋白酶体抑制剂的增强。相对于对照的生长(即，负值代表细胞杀伤，正值<100％代表细胞生长抑制)。在HEK293中进行初始单剂量评估(±10μM硼替佐米或卡非佐米，±1或10μM西仑吉肽)。(BTZ-硼替佐米；CFZ-卡非佐米)。
图4：西仑吉肽和BTZ对T47D乳腺癌细胞系的影响。相对于对照(未处理)细胞的细胞生长。该图示出了磺酰罗丹明B测定的结果，绘制为OD570nm(测试)/OD570nm(对照)。对照＝仅用稀释剂处理的孔(＝'无添加物')。
图5：BTZ和西仑吉肽组合疗法对体内骨髓瘤异种移植物的影响。在给药：(1)媒介物+媒介物；(2)媒介物+西仑吉肽(45mg/kg)；(3)0.2mg/kg BTZ+媒介物；(4)0.2mg/kg BTZ+西仑吉肽(45mg/kg)；(5)1mg/kg BTZ+媒介物；和(6)1mg/kg BTZ+西仑吉肽(45mg/kg)的第4天，植入有1×107个NCI-H929肿瘤细胞的CB.17SCID小鼠的平均肿瘤大小。
图6：示出硼替佐米和西仑吉肽在各种摩尔比下的协同作用的等效线图(isobologram)。评估与两种药剂的期望剂量相比导致生存力降低50％的两种药剂的组合，如果组合效果是相加的，预测其显示出相同的生存力降低。剂量对(等效点)的位置表示两种药剂是否相加(落在或接近线上)，次加性/拮抗(落在线上方/右侧)或超加性/协同(落在线下方/左侧)。
图7：BTZ(0.2、0.5、0.7或0.9mg/kg每两周一次静脉内注射)和西仑吉肽或媒介物(每日腹膜内注射45mg/kg)的作用。在研究中的主要终点评估肿瘤生长抑制(TGI)(第21天或媒介物处理的对照动物达到平均肿瘤体积为2000mm3的那一天-在该情况下，在第18天达到该终点)。
图8：BTZ(0.2、0.5、0.7或0.9mg/kg每两周一次静脉内注射)和西仑吉肽或媒介物(每日腹膜内注射45mg/kg)的作用。结合图7中的所有组的数据，而不考虑硼替佐米浓度，并且分为两组处理，n＝40只小鼠/组(即加或减西仑吉肽)。使用非参数Kruskal-Wallis检验来评估这些组显示的肿瘤体积之间的差异的统计学显著性(P＝3.465×10-7)。
图9：0.2mg/kg BTZ(每两周一次静脉内注射)±45mg/kg西仑吉肽(每日腹膜内注射)至第31天的Kaplan-Meier图，提供时间对终点(time to endpoint,TTE)的差异。TTE计算为TTE＝[log(终点体积)-b]/m，其中TTE以天表示，终点体积以mm3表示，b为截距，m为通过对数转化的肿瘤生长数据集的线性回归得到的线的斜率。
图10：0.5mg/kg BTZ(每两周一次静脉内注射)±45mg/kg西仑吉肽(每日腹膜内注射)直到第31天的Kaplan-Meier图，提供时间对终点(TTE)的差异。TTE计算为TTE＝[log(终点体积)-b]/m，其中TTE以天表示，终点体积以mm3表示，b为截距，m为通过对数转化的肿瘤生长数据集的线性回归得到的线的斜率。
具体实施方式
以下实施方式同样适用于本发明的任何上述方面。
蛋白酶体抑制剂:
在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为硼酸酯化合物。
在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为环氧酮化合物。
在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为肽醛化合物。
在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为β-内酯蛋白酶抑制剂化合物。
在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为选自由硼替佐米、德兰佐米和艾沙佐米组成的组的硼酸酯化合物。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为硼替佐米。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为德兰佐米。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为艾沙佐米。
在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为环氧酮化合物。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为卡非佐米。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为奥普佐米。
在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为肽醛化合物。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为MG132。
在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为β-内酯蛋白酶抑制剂化合物。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂为麻日佐米。
环肽组分：
在一个实施方案中，环肽具有如下结构:
其中：
Ra、Rb和Rc为氨基酸侧链残基；
Rd各自独立地选自由H、C1烷基、C2烷基和C3烷基组成的组；
m为0、1或2；
n为0、1或2；
条件是n+m的值为0、1或2。
在一个实施方案中，环肽具有如下结构：
其中：
Ra、Rb和Rc为氨基酸侧链残基；
m为0、1或2；
n为0、1或2；
条件是n+m的值为0、1或2。
在一个实施方案中，Ra、Rb和Rc为丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、酪氨酸、硒代半胱氨酸或吡咯赖氨酸的氨基酸侧链残基。
在一个实施方案中，m为0且n为0。在替代的实施方案中，m为1且n为0。在一个实施方案中，m为0且n为1。在替代的实施方案中，m为1且n为1。在替代的实施方案中，m为0且n为2。在替代的实施方案中，m为2且n为0。优选，m为0且n为1。
在一个实施方案中，Ra为赖氨酸的氨基酸侧链残基。
在一个实施方案中，Rb为苯丙氨酸的氨基酸侧链残基。
在一个实施方案中，m为0且n为1；Ra为赖氨酸的氨基酸侧链残基；和Rb为苯丙氨酸的氨基酸侧链残基。
在一个实施方案中，环肽组分的氨基酸残基的氨基酸的各胺氮可以独立地单烷基化。在其中一个或多个氨基酸的胺氮为单烷基化的实施方案中，烷基为甲基或乙基，优选甲基。因此，在一个实施方案中，环肽组分的氨基酸残基的至少之一为N-甲基氨基酸残基。
在一个实施方案中，环肽组分：
具有如下结构：
其中Rd各自独立地选自由H、C1烷基、C2烷基和C3烷基组成的组。
在一个实施方案中，环肽组分：
具有如下结构：
在一个实施方案中，环肽组分为西仑吉肽，即具有如下结构：
蛋白酶体抑制剂和环肽组分的组合
在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂与环肽组分之比在1:20000至20000:1w/w的范围内。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂与环肽组分之比在1:20000至1000:1w/w的范围内。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂与环肽组分之比在1:20000至10:1w/w的范围内。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂与环肽组分之比在1:10000至1000:1w/w。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂与环肽组分之比在1:10000至10:1w/w。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂与环肽组分之比在1:5000至1000:1w/w。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂与环肽组分之比在1:5000至10:1w/w。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂与环肽组分之比在1:2000至10:1w/w。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂与环肽组分之比在1:1000至1000:1的范围内，优选1:100至1:100，更优选1:10至10:1和仍更优选1:1w/w。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂与环肽组分之比在1:1000至1:1；1:900至1:1；1:800至1:1；1:700至1:1；1:600至1:1；或1:500至1:1w/w的范围内。在一个实施方案中，蛋白酶体抑制剂与环肽组分之比在1:400至1:1的范围内；1:450至1:1；1:400至1:1；1:350至1:1；1:300至1:1；或1:250至1:1w/w。在一个实施方案中，环肽:蛋白酶体抑制剂之比在50:1和200:1w/w之间，在60:1和190:1w/w之间，在70:1和180:1w/w之间或在70:1和170:1w/w之间。
本发明提供蛋白酶体抑制剂和含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分的环肽的组合，其相对于蛋白酶体抑制剂和含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分的环肽的每一个表现出协同的治疗效果。例如，本发明组合的治疗效果相对于蛋白酶体抑制剂和含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分的环肽的每一个至少是相加的。优选地，本发明的组合的治疗效果大于相加。例如，在本文的实施例中说明了协同效应。
可使用本发明的组合治疗的疾病
在一个实施方案中，可使用本发明的组合治疗的疾病包括选自包括多发性骨髓瘤和套细胞淋巴瘤的组的病症。
在一个实施方案中，可使用本发明的组合治疗的疾病包括选自包括弥漫性大B细胞淋巴瘤、前列腺癌、肺癌、非特异性实体瘤和复发/难治性骨髓瘤的组的病症。
在一个实施方案中，可使用本发明的组合治疗的疾病包括肿瘤疾病。
在一个实施方案中，可使用本发明的组合治疗的疾病涉及肿瘤形成的治疗。
在一个实施方案中，可使用本发明的组合治疗的疾病包括选自由以下组成的组的病症：多发性骨髓瘤(例如转移性多发性骨髓瘤)；肺癌；非小细胞肺癌(例如转移性非小细胞肺癌，非小细胞肺上皮癌或转移性非小细胞肺癌)；小细胞肺上皮癌；实体瘤；淋巴瘤(例如淋巴浆细胞淋巴瘤，弥漫性大B细胞淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤或外周T细胞淋巴瘤)；慢性淋巴样白血病；T细胞幼淋巴细胞白血病；乳腺癌(例如转移性乳腺癌)；宫颈癌；结直肠癌；结肠癌；黑色素瘤；前列腺癌(例如激素难治性前列腺癌)；胰腺癌(例如转移性胰腺癌)；卵巢癌；成胶质细胞瘤(例如多形性成胶质细胞瘤)；头鳞状细胞癌；颈鳞状细胞癌；淀粉样变性(例如原发性系统性淀粉样变性)；骨病症；血液恶性肿瘤(haematologicalmalignancies)；移植物抗宿主病，或其组合。
在一个实施方案中，可使用本发明的组合治疗的疾病包括选自由以下组成的组的病症：华氏巨球蛋白血症(Macroglobulinaemia)，冒烟性骨髓瘤(Smoldering Myeloma)和未知意义的单克隆丙种球蛋白病(monoclonal gammopathy ofunknown significance,MGUS)。
在一个实施方案中，本发明的组合对于表达RGD敏感性整联蛋白如αvβ3或αvβ5整联蛋白的细胞表现出改善的细胞毒性和/或改善的抗粘附性(相对于蛋白酶体抑制剂的作用和/或含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分的环肽的作用)。整联蛋白的表达是肿瘤血管生成和细胞附着的因素。
在一个实施方案中，本发明的组合对于由RGD敏感性整联蛋白如αvβ3或αvβ5整联蛋白调节的癌症表现出改善的细胞毒性和/或改善的抗粘附性(相对于蛋白酶体抑制剂的作用和/或含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分的环肽的作用)。整联蛋白可以直接在肿瘤细胞上表达，或者在不是肿瘤细胞但与肿瘤细胞相互作用(例如通过粘附或血管发生)的细胞上表达。
定义：
本发明包括具体公开的化合物的互变异构体，以及其中化学上可能的几何和光学异构体。因此，当具体公开的化合物包括烯烃双键(例如，具有部分的化合物)时，所述结构意欲包括E-和Z-几何异构体二者。
术语“氨基酸侧链残基”包括天然和合成氨基酸的残基。天然氨基酸类包括蛋白氨基酸和天然存在的非蛋白氨基酸。这些天然存在的非蛋白氨基酸是可以在例如体内或菜肴食品中发现但不参与蛋白质生物合成的氨基酸。存在二十二种蛋白氨基酸，并且这二十二种中只有二十种直接由通用遗传密码编码。剩余的两种，硒代半胱氨酸和吡咯赖氨酸，通过独特的合成机制掺入蛋白质中。本发明意欲涵盖二十种通用编码的氨基酸加上上述剩余的两种。因此，术语“氨基酸侧链残基”包括以下氨基酸的侧链：丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、酪氨酸、硒代半胱氨酸和吡咯赖氨酸。
上述氨基酸的侧链可以为(R)或(S)构型。因此，L-和D-氨基酸均在本发明的范围内，尽管D-氨基酸当然不是天然存在的。
如上所述，术语“氨基酸侧链残基”还包括非蛋白氨基酸，例如可以在翻译期间掺入蛋白质中的氨基酸(包括吡咯赖氨酸、鸟氨酸和硒代半胱氨酸)。术语“非蛋白氨基酸”还包括蛋白氨基酸的同系物，例如但不限于高精氨酸。术语“非蛋白氨基酸”还包括β氨基酸，例如但不限于β-丙氨酸。术语“氨基酸”还包括天然氨基酸的内酰胺类似物，例如但不限于焦谷氨酰胺(pyroglutamine)。
“非蛋白氨基酸”是有机化合物，其是氨基酸，但不在由标准遗传密码编码的那些中，或在翻译过程中掺入蛋白质中。因此，非蛋白氨基酸包括除20种蛋白氨基酸以外的氨基酸或氨基酸类似物，并且包括但不限于蛋白氨基酸的D-立体异构体(isostereomers)。非蛋白氨基酸的实例包括但不限于：瓜氨酸、高瓜氨酸、羟脯氨酸、高精氨酸、高丝氨酸、高酪氨酸、高脯氨酸、鸟氨酸、4-氨基-苯丙氨酸、肌氨酸、联苯丙氨酸、高苯丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、4-氟-苯丙氨酸、2,3,4,5,6-五氟-苯丙氨酸、正亮氨酸、环己基丙氨酸、N-乙酸、O-甲基丝氨酸(即具有式的氨基酸侧链)、乙酰氨基丙氨酸(即具有式的氨基酸侧链)、β-丙氨酸、β-(乙酰氨基)丙氨酸、β-氨基丙氨酸、β-氯代丙氨酸、α-氨基异丁酸、N-甲基-丙氨酸、N-甲基-甘氨酸、N-甲基谷氨酸、叔丁基甘氨酸、α-氨基丁酸、α-氨基异丁酸、醋酸(acedic acid)、2-氨基异丁酸、2-氨基茚满-2-羧酸、硒代甲硫氨酸、羊毛硫氨酸(lanthionine)、脱氢丙氨酸、γ-氨基丁酸、萘基丙氨酸、氨基己酸、苯基甘氨酸、哌啶酸、2,3-二氨基丙酸、四氢异喹啉-3-羧酸、叔亮氨酸、叔丁基丙氨酸、环己基甘氨酸、二乙基甘氨酸、二丙基甘氨酸、及它们的其中胺氮已被单烷基化或二烷基化的衍生物。非蛋白氨基酸的其他实例包括对氨基苯甲酸(PABA)、5-氨基水杨酸(5-ASA)和4-氨基水杨酸(4-ASA)。
术语“氨基”包括–NH2基团。
术语“载体”包括与活性化合物一起施用的稀释剂、赋形剂和/或媒介物。本发明的药物组合物可以含有多于一种载体的组合。这样的药物载体可以是无菌液体，例如水，盐水溶液，葡萄糖水溶液，甘油水溶液，和油类，包括石油，动物、植物或合成来源的那些，例如花生油，大豆油，矿物油和芝麻油等。在某些情况下，有机溶剂如乙醇、DMA(二甲基乙酰胺)、NMP(N-甲基吡咯烷)、DMSO(二甲基亚砜)等可以单独或与水组合作为载体使用。优选采用水或水溶液盐水溶液和葡萄糖水溶液和甘油水溶液作为载体，特别用于可注射溶液。合适的药物载体记述于E.W.Martin的“Remington's Pharmaceutical Sciences”第18版中。
术语“药学上可接受的”包括通常认为是安全的分子实体(molecular entities)和组合物。特别地，在本发明的实践中使用的药学上可接受的载体在生理上是可耐受的，并且在向患者施用时通常不会产生过敏或类似的不良反应(例如，胃不适和头晕等)。优选地，如本文所用，术语“药学上可接受的”意指由适当的政府机构的管理机构批准或在美国药典或其他公认的药典中列出的，用于动物、更特别是人的。
“药学上可接受的赋形剂”包括赋形剂，其用于制备药物组合物，通常是安全和无毒的并且没有生物学或其他方面的不良作用，并且包括对于兽医用途以及人体药物用途是可接受的赋形剂。本申请中使用的“药学上可接受的赋形剂”包括一种和多于一种这样的赋形剂。
术语“治疗”包括：(1)在可能患有或易患于状态、病症或病况但尚未经历或显示该状态、病症或病况的临床或亚临床症状的动物中防止该状态、病症或病况的临床症状的出现；(2)抑制该状态、病症或病况(例如阻止、减少或延缓疾病的发展，或在维持治疗的情况下其至少一种临床或亚临床症状的复发)；和/或(3)缓解病况(即导致状态、病症或病况或其至少一种临床或亚临床症状的消退)。对于待治疗患者的益处在于对患者或医生统计学显著性或者至少可感知的。
术语“受试者”包括人类和其他哺乳动物，例如家畜(如狗和猫)。
“有效量”意指足以产生所需治疗反应的本发明组合的量。治疗反应可以是使用者(例如，临床医生)将认识到对治疗的有效反应的任何反应。基于治疗反应的评价，本领域普通技术人员进一步确定适当的治疗持续时间、适当剂量和任何潜在的组合治疗。
术语“盐”可以包括酸加成盐或游离碱的加成盐。合适的药学上可接受的盐(例如，氨基酸或肽的羧基末端的)包括但不限于金属盐如钠钾和铯盐；碱土金属盐如钙和镁盐；有机胺盐如三乙胺、胍、N-取代胍盐、乙脒和N-取代乙脒、吡啶、甲基吡啶、乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺和N,N'–二苄基乙二胺盐。药学上可接受的盐(碱性氮中心的)包括但不限于无机酸盐如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐；有机酸盐如三氟乙酸盐和马来酸盐；磺酸盐如甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、樟脑磺酸盐和萘磺酸盐；和氨基酸盐如精氨酸盐、葡萄糖酸盐、半乳糖醛酸盐、丙氨酸盐、天冬氨酸盐和谷氨酸盐(参见，例如Berge等人，“Pharmaceutical Salts,”J.Pharma.Sci.1977；66:1)。
本发明还包括本发明的所有药学上可接受的同位素标记的化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子数、但原子质量或质量数不同于自然界中最常见的原子质量或质量数的原子代替。
适用于包含在本发明化合物中的同位素的实例包括氢的同位素，例如2H和3H，碳的同位素如11C、13C和14C，氯的同位素，如36Cl，氟的同位素，如18F，碘的同位素，如123I和125I，氮的同位素，如13N和15N，氧的同位素，如15O、17O和18O，磷的同位素，如32P，和硫的同位素，如35S。适于包含在本发明化合物中的同位素的其它实例包括硼的同位素，例如11B和10B。
某些同位素标记的化合物如掺入放射性同位素的化合物用于药物和/或底物组织分布研究。鉴于其容易掺入和现成的检测手段，放射性同位素氚(即3H)和碳-14(即14C)对于此目的特别有用。
用较重的同位素如氘(即2H)取代可以提供由于更大的代谢稳定性例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求而产生的某些治疗优点，因此在一些情况下可以是优选的。
用正电子发射同位素(如11C，18F，15O和13N)进行取代可用于正电子发射成像(PET)研究中以供检查底物受体占有率。
通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于使用适当的同位素标记的试剂代替先前使用的非标记试剂所记述的方法来制备同位素标记的化合物。
本发明的用途和方法
本发明包括的组合可以与其它疗法组合施用和/或与其它补充活性剂进一步组合施用。在这种组合疗法中，本发明所涵盖的组合可以在其它疗法和/或活性剂之前、同时或之后施用。本发明和(一种或多种)其它活性剂的组合也可以掺入单一剂型中。
本发明所涵盖的组合可以作为唯一疗法应用，或者可以涉及除了本发明组合之外的常规手术或放射疗法或化学疗法。此类化学疗法可以包括以下类别的抗肿瘤剂中的一种或多种：-
(i)在医学肿瘤学中使用的其它抗增殖/抗肿瘤药物及其组合，诸如烷化剂(例如顺铂、奥沙利铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、替莫唑胺和亚硝基脲)；抗代谢物(例如吉西他滨和抗叶酸剂如5-氟尿嘧啶和替加氟(tegafur)等氟嘧啶，雷替曲塞，甲氨蝶呤，阿糖胞苷和羟基脲)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类抗生素，如阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、更生霉素和光辉霉素)；抗有丝分裂药物(例如长春花生物碱类如长春新碱、长春花碱、长春地辛和长春瑞滨，紫杉烷类如紫杉醇和紫衫特尔，以及polokinase抑制剂)；和拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，如依托泊苷和替尼泊苷，胺苯吖啶，托泊替康和喜树碱)；
(ii)细胞生长抑制剂，如抗雌激素(例如他莫昔芬，氟维司群，托瑞米芬，雷洛昔芬，屈洛昔芬和碘氧芬)，抗雄激素(例如比卡鲁胺，氟他胺，尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)，LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林，亮丙瑞林和布舍瑞林)，孕激素(例如醋酸甲地孕酮)，芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑，来曲唑，伏立唑和依西美坦)和5α-还原酶抑制剂如非那雄胺；
(iii)抗入侵剂[例如c-Src激酶家族抑制剂如4-(6-氯-2,3-亚甲二氧基苯胺基)-7-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]-5-四氢吡喃-4-基氧基喹唑啉(AZD0530；国际专利申请WO 01/94341)，A-(2-氯-6-甲基苯基)-2-{6-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲基嘧啶-4-基氨基}噻唑-5-甲酰胺(达沙替尼,BMS-354825；J.Med.Chem.,2004,47,6658-6661)和波舒替尼(SKI-606)，和金属蛋白酶抑制剂如马马司他(marimastat)，尿激酶纤溶酶原激活受体功能抑制剂或抗类肝素酶的抗体]；
(iv)生长因子功能抑制剂：例如此类抑制剂包括生长因子抗体和生长因子受体抗体(例如抗erbB2抗体曲妥珠单抗[Herceptin(TM)]，抗EGFR抗体帕尼单抗，抗erbB1抗体西妥昔单抗[Erbitux，C225]以及Stern等人Critical reviews in oncology/haematology,2005,Vol.54,pp1 1-29)公开的任何生长因子或生长因子受体抗体；此类抑制剂还包括酪氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族的抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，例如A/-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，ZD1839)，A/-(3-乙炔基苯基)-6,7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(厄洛替尼，OSI-774)和6-丙烯酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI1033)，erbB2酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼)；肝细胞生长因子家族的抑制剂；胰岛素生长因子家族的抑制剂；血小板衍生生长因子家族的抑制剂，如伊马替尼和/或尼洛替尼(AMN107)；丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂(例如Ras/Raf信号传导抑制剂，如法呢基转移酶抑制剂，例如索拉非尼(BAY43-9006)，替伐非尼(R115777)和洛卡非尼(SCH66336))，通过MEK和/或AKT激酶的细胞信号传导抑制剂，c-kit抑制剂，abl激酶抑制剂，PI3激酶抑制剂，Plt3激酶抑制剂，CSF-1R激酶抑制剂，IGF受体(胰岛素样生长因子)激酶抑制剂；极光激酶抑制剂(例如AZD1 152、PH739358、VX-680、MLN8054、R763、MP235、MP529、VX-528和AX39459)，和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂如CDK2和/或CDK4抑制剂；
(v)抗血管生成剂，例如抑制血管内皮生长因子的作用的那些，(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐珠单抗(Avastin(TM))，和例如VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂如凡德他尼(ZD6474)，瓦他拉尼(PTK787)，舒尼替尼(SUI 1248)，阿昔替尼(AG-013736)，帕唑帕尼(GW 786034)和4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹唑啉(AZD2171；WO 00/47212中的实施例240)，化合物如国际专利申请WO97/22596、WO97/30035、WO97/32856和WO98/13354中公开的化合物和通过其他机制工作的化合物(例如利诺胺、整联蛋白αvβ3功能抑制剂和血管抑素)]；
(vi)血管损伤剂如康普瑞汀A4和国际专利申请WO 99/02166、WO 00/40529、WO00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434和WO 02/08213中公开的化合物；
(vii)内皮素受体拮抗剂，例如齐泊他坦(zibotentan)(ZD4054)或阿曲斯坦(atrasentan)；
(viii)反义治疗，例如针对上述靶标的那些，例如ISIS 2503，抗ras反义；
(ix)基因治疗方法，包括例如取代异常基因如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的方法，GDEPT(基因定向酶前药治疗)方法，例如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的方法，和增加患者对化疗或放疗的耐受性的方法，如多药耐药基因治疗；
(x)免疫治疗方法，包括例如离体和体内方法来增加患者肿瘤细胞的免疫原性，例如用细胞因子如白细胞介素2、白细胞介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转染的方法，降低T细胞无反应性的方法，使用转染的免疫细胞如细胞因子转染的树突状细胞的方法，使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法和使用抗独特型抗体的方法；
(xi)免疫调节剂(IMiD)，包括例如沙利度胺、来那度胺或泊马度胺；
(xii)类固醇，包括例如地塞米松或泼尼松；
(xiii)组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂，包括例如帕比司他或伏立诺他；和
(xiv)单克隆抗体，包括例如达雷木单抗(daratumumab)或埃罗妥珠单抗(elotuzumab)。
此类组合产物采用在上文所述的剂量范围内的本发明组合和在其批准的剂量范围内的其它药物活性剂。
根据本发明的该方面，提供了适用于治疗癌症(例如涉及实体瘤或白血病的癌症)的组合，所述组合包括如上文定义的本发明的组合、或其药学上可接受的盐或溶剂合物，以及另一种抗肿瘤剂。
根据本发明的该方面，提供了适用于治疗癌症(例如涉及实体肿瘤或白血病的癌症)的组合，所述组合包括如上文定义的本发明的组合或其药学上可接受的盐或溶剂合物，以及上述(i)-(xiv)中列出的任何一种抗肿瘤剂。
在本发明的另一方面，提供了本发明的组合或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其与选自本文上述(i)-(xiv)中所列的抗肿瘤剂组合。
在这里，当使用术语“组合”时，应当理解，这是指同时、单独或顺次施用。在本发明的一个方面，“组合”是指同时施用。在本发明的另一方面，“组合”是指单独施用。在本发明的另一方面，“组合”是指顺次施用。在施用为顺次或单独的情况下，第二组分的施用延迟不应当使得失去组合的有益效果。
根据本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含本发明的组合或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其与选自本文上述(i)-(xiv)所列的抗肿瘤剂组合，并与药学上可接受的稀释剂或载体联合。
本发明组合的盐、溶剂合物和衍生物
本发明的组合、组合物和方法还涵盖本文所述组合的组分的盐和溶剂合物的使用。在一个实施方案中，本文公开的发明旨在涵盖组合的组分的所有药学上可接受的盐(包括氨基酸的任何羧基末端的那些以及任何碱性氮的那些)。
通常，本发明组合的组分的药学上可接受的盐是通过将该组分与所需的酸或碱(如适用)反应来制备的。盐可以从溶液中沉淀出来并通过过滤收集，或者可以通过蒸发溶剂来回收。例如，可将酸如盐酸的水溶液加入到组分的水性悬浮液中，并将所得混合物蒸发至干燥(冻干)，从而得到固体酸加成盐。或者，组分可以溶解在合适的溶剂例如醇如异丙醇中，并且酸可以加入到相同的溶剂或其它合适的溶剂中。然后可将所得酸加成盐直接沉淀，或通过加入极性较小的溶剂如二异丙基醚或己烷沉淀，并过滤分离。
本发明的组合的组分的酸加成盐可以通过使游离碱形式与足量的所需酸接触、以常规方式生产盐来制备。可以通过使盐形式与碱接触并以常规方式分离游离碱而再生游离碱形式。游离碱形式在某些物理性质例如在极性溶剂中的溶解性方面与它们各自的盐形式不同，但在其他方面，出于本发明的目的，盐与其各自的游离碱相当。
药学上可接受的碱加成盐利用金属或胺，例如碱金属和碱土金属或有机胺形成。用作阳离子的金属的实例是钠、钾、镁和钙等。合适的胺的实例是N,N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、二环己胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因。
酸性化合物的碱加成盐通过使游离酸形式与足量的所需碱接触、以常规方式生产盐来制备。可以通过使盐形式与酸接触并分离游离酸来再生游离酸形式。
用于本发明实践的化合物可以具有碱性和酸性中心，因此可以是两性离子的形式。
有机化学领域的技术人员将理解，许多有机化合物可以与它们在其中反应的或者它们从其中沉淀或结晶的溶剂形成配合物，即溶剂合物，例如与水形成的水合物。用于本发明的化合物的盐可以形成溶剂合物，例如本文使用的水合物。用于制备溶剂合物的技术在本领域中是公知的(参见例如Brittain(1999).Polymorphism in Pharmaceuticalsolids.Marcel Decker,New York)。用于本发明实践的化合物可以具有一个或多个手性中心，并且根据各取代基的性质，它们也可以具有几何异构体。
本发明的药物组合物
尽管对于本发明方法的使用中，本发明的组合(或本发明的组合的各组分)可以作为散装物质(bulk substance(s))施用，但优选呈现药物制剂中的各活性成分，例如，其中各药剂与根据预期给药途径和标准药学实践选择的药学上可接受的载体混合。
在一个实施方案中，提供本发明的组合的组合物(即，包括(i)选自由硼替佐米、德兰佐米、艾沙佐米、卡非佐米、奥普佐米、MG132和麻日佐米组成的组的蛋白酶体抑制剂及其药学上可接受的盐；和(ii)环肽二者的组合物，其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分)。
在一个实施方案中，本发明的组合物以单位剂型呈现。
在替代的实施方案中，提供一种试剂盒，其包括包含本发明组合的一种组分的组合物(即，包括(i)选自由硼替佐米、德兰佐米、艾沙佐米、卡非佐米、奥普佐米、MG132和麻日佐米组成的组的蛋白酶体抑制剂，及其药学上可接受的盐；和(ii)环肽(其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分)中的一个的组合物)以及包含本发明组合的其它组分的组合物(即，包括(i)选自由硼替佐米、德兰佐米、艾沙佐米、卡非佐米、奥普佐米、MG132和麻日佐米组成的组的蛋白酶体抑制剂，及其药学上可接受的盐；和(ii)环肽(其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分)中另一个的组合物)。
所述组合物包括本发明的组合的至少一种组分，和至少一种药学上可接受的赋形剂或载体。优选地，本发明的组合的至少一种组分以治疗有效量存在于组合物中。
本发明的组合物可以是即释剂型，即在吸收部位立即释放组合(或组合的各组分)的剂型，或控释剂型，即组合(或组合的各组分)在预定时间段内释放的剂型。控释剂型可以是任何常规类型，例如以贮库或基质型扩散控制剂型的形式；基质、包封或肠溶衣溶解控制剂型；或渗透剂型。例如在Remington，The Science and Practice of Pharmacy，第20版，2000，第858-914页中公开了这些类型的剂型。
根据剂型和剂量，本发明的组合物可以每天施用一至六次。在一个实施方案中，期望每天施用本发明的组合的环肽部分。例如，本发明的组合可以涉及西仑吉肽的每日施用。在一个实施方案中，期望每周或每两周一次地施用本发明组合的蛋白酶体抑制剂部分。
本发明中采用的组合本身可以与其它疗法和/或活性剂组合使用。因此，在另一个实施方案中，本发明提供用于本发明实践的如上所述的药物组合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，另外的活性剂，和任选的药学上可接受的载体或赋形剂。
当在相同的制剂中结合时，应当理解本发明的组合的两种组分优选在彼此以及制剂的其它组分的存在下稳定并且与彼此以及与制剂的其它组分相容。当分开配制时，它们可方便地依照本领域对这样的化合物的已知方法，以任何方便的制剂提供。
本文提供的组合(或组合的各组分)可以用方便应用于人或兽医学的任何方式配制用于施用。因此，本发明包括药物组合物，其包含适于在人或兽医学中使用的本发明的组合(或组合的各组分)。借助于一种或多种合适的载体，此类组合物可以以常规方式使用。用于治疗用途的可接受的载体在制药领域中是公知的，并且记述于例如Remington'sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro编，1985)中。药物载体的候选可以根据预期的施用途径和标准药学实践来选择。药物组合物除了载体之外还可以包含任何合适的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂和/或增溶剂。
蛋白酶体抑制剂可以口服、静脉内或皮下施用。环肽可以静脉内或皮下施用。
可以在药物组合物中提供防腐剂、稳定剂、染料和甚至是调味剂。防腐剂的实例包括苯甲酸钠、抗坏血酸和对羟基苯甲酸的酯。还可以使用抗氧化剂和悬浮剂。
本发明的组合(或本发明的组合的各组分)可以使用已知的研磨程序如湿研磨来研磨，以获得适合于片剂形成和其它制剂类型的粒度。化合物的细分的(纳米颗粒)制剂可以通过本领域已知的方法制备，参见例如国际专利申请WO 02/00196(SmithKlineBeecham)。
用于本文的药学上可接受的缓冲剂的合适实例包括但不限于柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、氧化镁、碳酸钙和氢氧化镁。
用于本文的药学上可接受的表面活性剂的合适实例包括但不限于十二烷基硫酸钠和聚山梨醇酯。
药学上可接受的防腐剂的合适实例包括但不限于各种抗细菌和抗真菌剂如溶剂，例如乙醇、丙二醇、苄醇、氯丁醇、季铵盐和对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯等)。
药学上可接受的稳定剂和抗氧化剂的合适实例包括但不限于乙二胺三乙酸(EDTA)、硫脲、生育酚和丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyan)。
本发明的药物组合物可以含有0.01至99％重量/体积的本发明包括的组合(或本发明的组合的各组分)。
剂量
根据本发明的方法治疗的合适的患者包括需要此类治疗的任何人或动物。用于疾病病况的诊断和临床评估(包括其在动物或人体中的严重性)的方法在本领域中是公知的。因此，确定患者是否需要治疗在本领域的普通从业者(例如，医生或兽医)的技能范围内。患者优选为哺乳动物，更优选为人，但可以是任何受试者或动物，包括临床试验、筛选或使用动物模型的活动实验的背景下的实验室动物。因此，如本领域普通技术人员可以容易地理解的，本发明的方法和组合物特别适合于施用于任何动物或受试者，特别是哺乳动物，并且包括但不限于家畜如猫科或犬科受试者，农场动物例如但不限于牛、马、山羊(caprine)、绵羊(caprine)和猪受试者，研究动物如小鼠、大鼠、兔、山羊(goats)、绵羊(goats)、猪、狗、猫等，禽类如鸡、火鸡、鸣禽等。
通常，医生将确定最适合个体受试者的实际剂量。任何特定个体的具体剂量水平和剂量频率可以变化，并且将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、施用方式和时间、排泄率、药物组合、特定病况的严重程度以及个体正接受的治疗。
根据要治疗的病况的严重性，可以将本领域技术人员容易确定的合适的治疗有效和安全的剂量施用于受试者。对于人的口服施用，组合物的日剂量可以是单剂量或分剂量。治疗的持续时间可以由本领域普通技术人员确定，并且应当反映病况的性质和/或对治疗的治疗性反应的速率和程度。通常，医生将确定最适合个体受试者的实际剂量。
任何特定个体的具体剂量水平和剂量频率可以变化，并且将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、施用方式和时间、排泄率、药物组合、特定病况的严重程度以及个体正接受的治疗。
在治疗方法中，本发明包括的组合本身可以与其它疗法组合施用，和/或与其它活性剂组合施用。例如，本发明包括的组合可以与用于治疗该病况的其它活性剂组合施用于患者。活性剂将与本发明包括的组合组合施用。在这种组合疗法中，本发明包括的组合可以在其它治疗和/或活性剂之前、同时或之后施用。
当本发明包括的组合连同另一种活性剂一起施用时，这种组合的单独组分可以通过任何方便的途径依次或同时以单独或组合的药物制剂施用。当施用是顺次时，可以首先施用本发明包括的组合或第二活性剂。例如，在与另一种活性剂的组合疗法情况下，本发明包括的组合可以在将提供药物组合的有益作用的方案中以顺次方式施用。当同时施用时，组合可以以相同或不同的药物组合物施用。例如，本发明包括的组合与另一种活性剂可以以基本上同时的方式施用，例如在具有这些药剂的固定比例的单个胶囊或片剂中，或以每种药剂的多种分开的剂型施用。
当将本发明的组合与用于治疗该病况的方法中有活性的另一种药剂组合使用时，各化合物的剂量可能与单独使用该化合物时的剂量不同。本领域普通技术人员将容易理解适当的剂量。
实施例
通过参考以下实施例进一步说明本发明。然而，应当注意的是，这些实施例，如上所述的实施方案，是说明性的而不应被解释为以任何方式限制本发明的实施范围。
实施例1-当硼替佐米和环状RGD肽组合时相对于这些组分的单独作用的总和表现 出协同效应。
零假设：10μM BTZ与10μM RGDfC(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-苯丙氨酸-半胱氨酸)肽的组合对HEK293细胞不比只有BTZ时更有毒。
方法
使用建立的方法学在T75烧瓶中制备80-100％融合的单层HEK293细胞。将细胞在补充有10％FBS(Gibco)、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM(Lonza)(“完全DMEM”)中培养。
将T75烧瓶中的细胞用胰蛋白酶消化并重悬于完全DMEM中。使用Neubauer室计数细胞，并在96孔平底组织培养板(Corning)中以约3×104个细胞/cm2和7500个细胞/cm2的密度接种细胞，每孔0.1mL细胞悬液。将细胞在37℃/5％CO2(加湿)下孵育24小时。
将硼替佐米(Fluorochem)在DMSO中制备成30mM，并且直至需要之前储存在-70℃以下。为了提供工作原料，将BTZ在DMSO中稀释至10mM。
将冻干肽(Anaspec Inc.,Fremont CA，产品63785-1)溶解在1mg/mL的磷酸盐缓冲盐水pH7.5(PBS)中制备肽贮液(stock)。将等分试样储存在-70℃以下，解冻并在PBS中稀释至500μM的工作浓度。
将一体积BTZ与479体积的完全DMEM和20体积的500μM肽(或PBS用于阴性对照)组合。这产生大约等摩尔量(20μM)的BTZ:肽的混合物。
除了使用PBS代替肽贮液和/或DMSO代替BTZ之外，以类似的方式制备对照混合物。
在使用的各细胞接种密度下，将三个0.1mL等分试样加入各混合物(BTZ+肽和BTZ+PBS，DMSO+肽，DMSO+PBS‘仅稀释剂’)的各板的三个孔中。
在添加BTZ-肽/PBS混合物之前，通过用Skehan等人改进的方法(J.Nat.CancerInst.1990,82：1107-1112)，通过磺酰罗丹明B染色分析在所用各接种密度下的含有细胞的一个平板，以便在时间＝零时建立细胞密度。简言之：从孔中取出培养基并用等体积的PBS代替。轻轻加入四分之一体积的50％三氯乙酸，将板在4℃下孵育1-3小时。将孔用自来水洗涤4次并使其风干。将磺酰罗丹明B(Sigma Aldrich，0.4％w/v，1％v/v乙酸)加入到各孔中并孵育15-30分钟。将孔用1％v/v乙酸洗涤4次并使其风干。通过加入10mM无缓冲的Tris碱溶液(0.1mL/孔)溶解染料。使用ELISA板读数器(Dynex MRX，Dynex Technologies)测定光密度(OD570nm)。
总共进行了5次重复实验。用肽/BTZ混合物或对照混合物处理的细胞在37℃/5％CO2(加湿)下孵育24小时，然后通过磺酰罗丹明B测定法分析。
根据http://web.archive.org/web/20150414025026/http://www.dtp.nci.nih.gov/branches/btb/ivclsp.html.中给出的美国国家研究所的方法进行数据分析。从各读数中减去背景测量(即，没有细胞，仅培养基)的平均值。“Ti”为用药物处理24小时后的OD570nm。Tz是时间＝0(减去背景)的OD570nm的平均值。“C”是用PBS/DMSO处理的对照孔(无肽或BTZ)给出的OD570nm的平均值。
％相对细胞生长由下式给出：
[(Ti-Tz)/(C-Tz)]x100(对于Ti≥Tz的结果)
[(Ti-Tz)/(Tz)]x100(对于Ti<Tz的结果)
使用这些方程，将对照细胞生长赋予100％的相对细胞生长值，并相对于该数值计算所有细胞生长值。当时间＝零时的OD大于药物孵育后的OD时，返回负值。
进行学生T检验以确定是否有证据拒绝零假设(见上文)。从五次实验重复返回的最终相对细胞生长值用于通过实验重复配对的双尾T检验，返回P值。P值小于0.05被认为是足以拒绝零假设。
结果
显示在BTZ或BTZ+肽存在下平均百分比细胞生长的直方图示于图1。学生T检验的结果返回P值为0.0042，意味着在这种情况下，零假设的拒绝是有效。
结论
图1中示出的结果清楚地说明了当用10μM BTZ、10μM BTZ与10μM RGDfC(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-苯丙氨酸-半胱氨酸)肽的组合、或无BTZ的10μM RGDfC(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-苯丙氨酸-半胱氨酸)肽处理时，与未处理的HEK293细胞相比的％相对细胞生长值。该图表明，与BTZ组合的肽在10μM浓度下比无BTZ的肽或无肽的BTZ的毒性更大。
实施例2-环肽(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-苯丙氨酸-赖氨酸)+蛋白酶体抑制剂 对αvβ3整联蛋白阳性细胞vsαvβ3整联蛋白阴性细胞的作用
总结：
在HEK293细胞中(可能是αvβ3整联蛋白阳性，Stoneham CA等人，Clathrin-mediated endocytosis and subsequent endo-lysosomal trafficking of Adeno-associated virus/phage.J.Biol.Chemistry 2012 287(43)35849-35859。Przystal JM等人，Proteasome inhibition in cancer is associated with enhanced tumortargeting by the adeno-associated virus/phage.Molecular Oncology 2013,7(1)；55-66)，对于测试的各蛋白酶体抑制剂，相对于单独的肽或单独的蛋白酶体抑制剂，肽+蛋白酶体抑制剂导致增加的抑制/杀伤。结果见图2。
使用指定的蛋白酶体抑制剂代替BTZ，以与实施例1相同的方式进行该分析。艾沙佐米(MLN2238)源自Stratech Scientific Ltd.(Oaks Drive，Newmarket,Suffolk)。德兰佐米(CEP-18770)是从Source Bioscience(Orchard Place，Nottingham)获得的。卡非佐米和奥普佐米购自Cambridge Bioscience。MG132(Z-Leu-Leu-al)购自Sigma-Aldrich。将所有抑制剂溶解于DMSO中，以10μM的最终浓度使用。
同时，评估混合物对Cos7细胞的毒性，据报道Cos7细胞以极低的水平表达癌症相关的整联蛋白(Xu等人，Scientific Reports 2013 3：2679，Neff S等人，High-EfficiencyUtilization of the Bovine Integrinαvβ3 as a Receptor for Foot-and-MouthDisease Virus Is Dependent on the Bovineβ3 Subunit.J Virol.2000 Aug；74(16):7298–7306)。除了Cos7细胞以1.2×104个细胞/cm2和3000个细胞/cm2的密度接种以外，以与HEK293细胞相同的方式处理Cos7细胞。在HEK 293细胞中，与单独的肽相比，RGD肽的存在显着增加细胞杀伤的水平，而在Cos7细胞中，RGD肽对毒性没有可感知的影响。这表明RGD环肽和蛋白酶体抑制剂之间的协同作用对于以较高水平表达癌症相关整联蛋白的细胞是特异性的，并且不会在每种细胞类型上起作用。
详细说明：
细胞系HEK293(αvβ3+ve)或COS-7(αvβ3-ve)用10μM浓度的各种蛋白酶体抑制剂±10μM的环肽cRGDfK(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-苯丙氨酸-赖氨酸)处理。相对于未处理的对照细胞(归一化至100％)的生长示于图2。进行了三次独立实验，显示的值是平均值的标准误差。正值<100％代表细胞生长抑制，而负值代表细胞杀伤(-100％表示全部细胞死亡)。(BTZ-硼替佐米；IXZ-艾沙佐米；DLZ-德兰佐米；CFZ-卡非佐米；OPZ-奥普佐米；MG132)。
可以看出，与未处理的对照细胞相比，10μM浓度的各蛋白酶体抑制剂引起细胞生长的抑制。对于αvβ3-ve细胞(COS-7)和αvβ3+ve细胞(HEK293)，单独的各蛋白酶体抑制剂的抑制效果大致相同。也清楚的是，在10μM浓度下，一些蛋白酶体抑制剂比其他蛋白酶体抑制剂更有活性，不管细胞的αvβ3状态如何，是否存在cRGDfK(在没有cRGDfK的情况下两种细胞类型中卡非佐米和硼替佐米比艾沙佐米、德兰佐米和奥普佐米示出更大的活性)。
与未处理的对照细胞相比，10μM浓度的各蛋白酶体抑制剂本身导致细胞生长的延迟而不是细胞死亡。相比之下，当RGD环肽cRGDfK也以10μM浓度加入时，在αvβ3+ve细胞(HEK293)中观察到明显更大的细胞毒性作用，但在αvβ3-ve细胞(COS-7)中未见。这时蛋白酶体抑制剂不是简单地延缓细胞生长而是导致细胞死亡。细胞死亡的数量取决于具体的蛋白酶体抑制剂，但其范围从18％的细胞死亡(MG132+RGDfK，在αvβ3+ve细胞(HEK293)中)多至高达30％以上的细胞死亡(卡非佐米或硼替佐米+RGDfK，在αvβ3+ve细胞中)。
在αvβ3-ve细胞(COS-7)中没有观察到这种增强，表明将RGD肽加入表达αvβ3整联蛋白的细胞是特异性作用。
实施例3-当(i)硼替佐米或卡非佐米；和(ii)西仑吉肽肽组合时相对于这些组分 的单独作用的总和显示协同作用。
零假设：10μM BTZ或10μM CFZ与1μM或10μM西仑吉肽组合对HEK293细胞，不比单独的BTZ或CFZ更有毒性。
方法
将HEK293细胞按照[0124]段接种在96孔板中，并按照实施例2用蛋白酶体抑制剂(PI)硼替佐米(BTZ)或卡非佐米(CFZ)(10μM)±西伦吉肽(1μM或10μM)处理24小时。
西伦吉肽得自Bioquote Ltd.(产品代码A8660)，并在加入培养基之前制备成PBS(pH7.5)中的500μM，以达到所需的最终浓度。进行5次实验重复(仅在4次实验重复中含有较低浓度的西仑吉肽)。注意，所显示的数据来自较低的细胞接种密度(7500个细胞/cm2)。
结果
在图3中示出了在BTZ、CFZ、BTZ+西仑吉肽肽、或CFZ+西仑吉肽的存在下平均百分比细胞生长的直方图。
相对于未处理的对照细胞(归一化至100％)的生长示于图3。进行了三个独立实验，显示的值是平均值的标准误差。正值<100％代表细胞生长抑制，而负值代表细胞杀伤(-100％表示全部细胞死亡)。
结论
图3中显示的结果清楚地示出了当用10μM BTZ、10μM BTZ与1μM西仑吉肽肽组合、10μM BTZ与10μM西仑吉肽肽组合、10μM CFZ、10μM CFZ与1μM西仑吉肽肽组合、10μM CFZ与10μM西仑吉肽肽组合、1μM无BTZ或CFZ的西仑吉肽肽、10μM无BTZ或CFZ的西仑吉肽肽、以及无西仑吉肽和无BTZ或CFZ处理时，与未处理的HEK293细胞相比的％相对细胞生长值。该图说明，与BTZ或CFZ组合的肽比无肽的BTZ或CFZ、或者无BTZ或CFZ的肽的毒性更大。
实施例4：西仑吉肽和BTZ对T47D乳腺癌细胞系的作用。
T47D细胞如HEK293和Cos7细胞一样培养(实施例1)。为了评估组合的BTZ和西仑吉肽的毒性，将T47D细胞以7500个细胞/cm2的密度接种在96孔细胞培养板中并孵育24小时。西仑吉肽在完全DMEM中稀释至20μM，然后在完全DMEM中进行3次连续十倍稀释(2μM、200nM和20nM)。提供不含西仑吉肽的完全DMEM用于阴性对照。
在DMSO中制备连续十倍稀释的硼替佐米(3mM至300nM)。将这些稀释液(或不含BTZ的孔的DMSO)加入含有0-20μM西仑吉肽的完全DMEM等分试样中，1/150稀释。将各混合物的等分试样(0.1mL)加入已经含有0.1mL培养基的孔中(一式两份)，得到西仑吉肽(10nM-10μM)和/或BTZ(1nM-10μM)或没有药剂(仅稀释剂)的基质。
将板孵育24小时，然后根据实施例1通过磺酰罗丹明B测定进行分析。将OD570nm读数除以由阴性对照(仅稀释剂)孔产生的读数，并以百分比表示。进行本实验的三次独立重复。
结果示于图4，其示出使用西仑吉肽(1μM)和/或硼替佐米(10nM)获得的数据。相对于未处理的对照细胞(归一化至100％)的生存力示于图4。
虽然当以10nM浓度单独施用时，T47D乳腺癌细胞对硼替佐米显示非常边缘的敏感性(与未处理的对照相比为80％生存力)，然而当与1μM西仑吉肽共同施用时，观察到极大增加的敏感性(与对照相比小于20％的生存力)。
实施例5：T47D乳腺细胞中硼替佐米和西仑吉肽的体外协同测定(合用指数 (combination index))。
为了鉴定两种药剂的组合作用是否是相加或超加的(即协同作用)，将导致生存力降低50％的浓度对绘制在等效线图中(Tallarida:J Pharmacol Exp Ther.2001；298:865-72)，从而将各药剂的浓度列于x和y轴上，并且在各药剂的导致作为单个药剂递送的生存力降低50％(即，IC50)的浓度之间绘制线。通过由％生存力相对于药剂浓度的线图外推代表生存力降低50％的点来估算单个药剂的IC50。类似地，通过由％生存力相对于浓度(一种药剂浓度可变而另一种药剂供以固定浓度)的线图外推代表生存力降低50％的点来获得等效线(isobole)。
该图上的点的位置(图6)表示组合效应是否是协同的(落在线的下方/左侧)、拮抗的(落在线的上方/右侧)或相加的(落在线上或接近线)。根据Zhao等人给出的方程式(Clin.Cancer Res.2004；10:7994-8004)，计算该等效线图上所有点的合用指数(combination indices,CI)，并示于下表1中。
CA,x和CB,x是组合使用以达到x％药物作用的药物A和药物B的浓度。ICA,x和ICB,x是单个药剂达到相同效果的浓度。这些指数表明当西仑吉肽:BTZ的摩尔比在70:1(CI＝0.22)和170:1(CI＝0.23)之间时，显示出最显著的协同作用。
表1：使用不同比例的西仑吉肽:BTZ获得的合用指数(CI)。合用指数<1表示协同作用，>1表示拮抗作用，CI＝1表示相加作用。
因此，乳腺癌细胞系T47D中西仑吉肽和硼替佐米之间可见明显的协同作用。
实施例6：BTZ和西仑吉肽组合疗法对体内骨髓瘤异种移植物的作用：
雌性(8-12周龄)CB.17 SCID小鼠在侧肋通过皮下注射植入在50％Matrigel中的1×107个NCI-H929肿瘤细胞。使肿瘤达到90-130mm3的平均大小，将小鼠分组，每组N＝10，然后开始给药(第1天)。动物在第1天用硼替佐米(BTZ)或媒介物(0.9％盐水)静脉给药。在第1、2和3天腹膜内注射西仑吉肽(45mg/kg)或媒介物(0.9％盐水)。
肿瘤体积计算为＝[长度*(宽度2)]/2
绘制的数据是第4天每组的平均肿瘤大小。治疗组为：(1)媒介物+媒介物；(2)媒介物+西仑吉肽；(3)0.2mg/kg BTZ+媒介物；(4)0.2mg/kg BTZ+西仑吉肽；(5)1mg/kg BTZ+媒介物；(6)1mg/kg BTZ+西仑吉肽。结果示于图5。
实施例7：西仑吉肽和硼替佐米组合治疗NCI H-929多发性骨髓瘤细胞系的体内皮 下肿瘤研究。
使用NCI H-929人多发性骨髓瘤细胞在SCID小鼠皮下异种移植模型中进行范围界定研究以在体内比较硼替佐米与硼替佐米/西仑吉肽组合方案的功效。测试的硼替佐米的剂量为1mg/kg。植入H929细胞并使其生长，直到在第1天达到101-103mm3的平均肿瘤体积，然后开始治疗。然后继续进行到第21天。
虽然大多数给予“仅硼替佐米”的小鼠对该药物反应良好，总体反应率为90％，但给予硼替佐米+西仑吉肽组合的小鼠在几个方面显示出明显改善(表2)。反应率和反应的速度都得到提高。到第4天，30％的仅硼替佐米治疗小鼠显示出反应；组合疗法组为60％。到第8天，只有10％的仅硼替佐米治疗小鼠显示出完全反应，组合疗法组的数字为50％。给予组合疗法的所有小鼠在第12天作出反应，而在最后一个治疗日(第21天)，一个(10％)的仅硼替佐米组仍完全无反应。
在第21天停止治疗，并且将所有小鼠再追加3周以监测肿瘤再现的速率和发生率。在第42天，在两组中60％的动物保持“治愈”(即在此期间肿瘤没有再生长)。对于每组中剩余的4只动物，结果如下。对于仅用硼替佐米治疗的组，3只动物显示完全复发(即，根据表2中详述的标准，肿瘤未显示部分或全部反应)，而1只动物达到终点并被剔除(肿瘤体积>2000mm3)。对于用组合疗法治疗的组，2只动物复发，而2只仍然表现出部分反应。组合疗法组中没有动物达到终点。
表2在“高”硼替佐米剂量下，在NCI-H929皮下异种移植小鼠肿瘤模型中硼替佐米和硼替佐米+西仑吉肽的疗效结果总结
部分反应(PR)被定义为对于在研究过程中三次连续测量，第一次测量的肿瘤体积为第一天体积的50％以下，并且对于这三次测量的一次或多次，肿瘤体积等于或大于13.5mm3。在完全反应(CR)中，在研究过程中三次连续测量的肿瘤体积小于13.5mm3。总反应率(RR)是PR+CR的总和。治疗开始于第1天，并在第21天停止。硼替佐米以Velcade(每两周一次静脉注射1mg/kg)与西仑吉肽(45mg/kg IP,QD)一起给予。
实施例8：组合西仑吉肽和硼替佐米治疗NCI H-929多发性骨髓瘤细胞系的体内皮 下肿瘤研究
为了确认和扩展实施例7中所述的观察结果，进行了类似的实验，其中改变了BTZ剂量(通过每两周一次静脉内注射0.2、0.5、0.7和0.9mg/kg)。西仑吉肽或媒介物以每日腹膜内注射(45mg/kg)提供。在研究的主要终点(第21天或媒介物处理的对照动物达到平均肿瘤体积为2000mm3的那一天-在该情况下，在第18天达到该终点)，评估肿瘤生长抑制(TGI)。
此后，接受0.2mg/kg和0.5mg/kg BTZ±西仑吉肽的组持续给药直到第31天，以允许比较肿瘤生长延迟(即到达终点的时间(time to endpoint,TTE)的差异)。终点体积定义为2000mm3，达到或超过该体积后将动物处死，TTE计算为TTE＝[log(终点体积)-b]/m，其中TTE以天数表示，终点体积以mm3表示，b为截距，m是通过对数转化肿瘤生长数据集的线性回归获得的线的斜率，将TTE值绘制在Kaplan-Meier图中(图9和10)。
BTZ表现出尖锐的剂量效应曲线，表明其狭窄的治疗窗口。0.7mg/kg以上的剂量达到几乎完全的TGI，因此为检测TGI而延长给药不太可能是具有信息性的。0.5mg/kg及以下的BTZ浓度，在无西仑吉肽的情况下，实际上是无效的，导致没有明显的肿瘤生长抑制作用。
组间个体的TGI差异由于在组内高水平的变化性而无统计学意义，但在西仑吉肽存在下观察到肿瘤生长抑制趋势(图7)。无论硼替佐米浓度如何，当将来自所有组的数据组合并分为两组，即n＝40只小鼠/组(即加或减西仑吉肽)时，这种趋势更加明显。使用非参数Kruskal-Wallis检验来评估该发现的统计学显著性(P＝3.465×10-7，图8)。西仑吉肽也增加了用0.2或0.5mg/kg BTZ治疗的动物的TTE(图9和10)。

Claims (21)

1.一种组合，其包括：(i)蛋白酶体抑制剂及其药学上可接受的盐；和(ii)环肽，其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分。
2.根据权利要求1所述的组合，其中所述蛋白酶体抑制剂为硼酸酯化合物。
3.根据权利要求2所述的组合，其中所述硼酸酯化合物选自由硼替佐米、德兰佐米和艾沙佐米组成的组。
4.根据权利要求1所述的组合，其中所述蛋白酶体抑制剂为环氧酮化合物。
5.根据权利要求4所述的组合，其中所述环氧酮化合物选自由卡非佐米和奥普佐米组成的组。
6.根据权利要求1所述的组合，其中所述蛋白酶体抑制剂为肽醛化合物。
7.根据权利要求6所述的组合，其中所述肽醛化合物为MG132。
8.根据权利要求1所述的组合，其中所述蛋白酶体抑制剂为β-内酯蛋白酶抑制剂化合物。
9.根据权利要求8所述的组合，其中所述β-内酯蛋白酶抑制剂化合物为麻日佐米。
10.根据前述权利要求任一项所述的组合，其中所述环肽具有如下结构：
其中：
Ra、Rb和Rc为氨基酸侧链残基；
Rd各自独立地选自由H、C1烷基、C2烷基和C3烷基组成的组；
m为0、1或2；
n为0、1或2；
条件是n+m的值为0、1或2。
11.根据前述权利要求任一项所述的组合，其中所述环肽具有如下结构：
其中：
Ra、Rb和Rc为氨基酸侧链残基；
m为0、1或2；
n为0、1或2；
条件是n+m的值为0、1或2。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的组合，其Ra、Rb和Rc为如下的氨基酸侧链残基：丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、酪氨酸、硒代半胱氨酸或吡咯赖氨酸。
13.根据权利要求10至12任一项所述的组合，其中m为0且n为0；m为1且n为0；或m为0且n为1。
14.根据权利要求10至13任一项所述的组合，其中所述环肽组分具有如下结构：
15.根据权利要求10至12任一项所述的组合，其中所述环肽组分的氨基酸残基的氨基酸的各胺氮可以独立地为单烷基化的。
16.根据权利要求10至15任一项所述的组合，其中所述环肽组分为西仑吉肽，即，其具有如下结构：
17.根据前述权利要求任一项所述的组合，其用作药剂。
18.根据前述权利要求任一项所述的组合，其用于治疗选自由以下组成的组的病症：肿瘤学病症；肿瘤形成；套细胞淋巴瘤；多发性骨髓瘤(例如转移性多发性骨髓瘤)；肺癌；非小细胞肺癌(例如转移性非小细胞肺癌，非小细胞肺上皮癌或转移性非小细胞肺癌)；小细胞肺上皮癌；实体瘤；淋巴瘤(例如淋巴浆细胞淋巴瘤，弥漫性大B细胞淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤或外周T细胞淋巴瘤)；慢性淋巴样白血病；T细胞幼淋巴细胞白血病；乳腺癌(例如转移性乳腺癌)；宫颈癌；结直肠癌；结肠癌；黑色素瘤；前列腺癌(例如激素难治性前列腺癌)；胰腺癌(例如转移性胰腺癌)；卵巢癌；成胶质细胞瘤(例如多形性成胶质细胞瘤)；头鳞状细胞癌；颈鳞状细胞癌；淀粉样变性(例如原发性系统性淀粉样变性)；骨病症；血液恶性肿瘤；移植物抗宿主病，华氏巨球蛋白血症，冒烟性骨髓瘤和未知意义的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)，或其组合。
19.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至16任一项所述的组合和药学上可接受的赋形剂。
20.一种试剂盒，其包括作为独立组分的：(i)蛋白酶体抑制剂及其药学上可接受的盐；和(ii)环肽，其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分。
21.一种环肽用于改进蛋白酶体抑制剂及其药学上可接受的盐的治疗活性的用途，其中所述环肽含有暴露的Arg-Gly-Asp(RGD)部分。
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