CN110312517A - 促黄体激素释放激素受体(lhrh-r)缀合物及其用途 - Google Patents

促黄体激素释放激素受体(lhrh-r)缀合物及其用途 Download PDF

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Abstract

本教导大体上涉及用于使患者的肿瘤微环境成像的缀合物和方法，以及涉及用于治疗患者的表达LHRH‑R的癌症的缀合物和方法。本教导大体上涉及制备包含LHRH‑R拮抗剂的缀合物的方法。

Description

促黄体激素释放激素受体(LHRH-R)缀合物及其用途
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2016年12月14日提交的美国临时申请序列号62/434,383和2017年3月6日提交的美国临时申请序列号62/467,297的优先权，其中两者通过引用以其整体结合到本文中。
技术领域
本教导大体上涉及用于使患者的肿瘤微环境成像的缀合物和方法，以及涉及用于治疗患者的表达LHRH-R的癌症的缀合物和方法。本教导大体上涉及制备包含LHRH-R拮抗剂的缀合物的方法。
背景
常规癌症治疗药物缺乏区分癌细胞和健康细胞的能力，这导致轻微至严重的副作用，例如恶心、脱发、骨髓抑制和心脏毒性。克服这些副作用的策略涉及通过在癌症中过表达但在健康细胞中具有受限制表达的受体或蛋白质直接靶向癌症。这允许细胞毒性药物特异性地递送到癌细胞，而不伤害健康细胞。
此外，放射性成像技术已在疾病进展的识别、分期和监测中获得了普及。已放射性标记了靶向分子，包括小分子、肽和抗体，以研发用于癌症中过表达的各种受体或蛋白质的显像剂。荧光引导手术是改善手术结果和患者生存的有效方法。目前，有多种NIR染料缀合物靶向各种受体，如叶酸、PSMA、CAIX、CCK2R和NK1R等。尽管有这些靶向NIR染料缀合物可利用，但由于这些受体的存在或数量非常少或完全缺失，很多癌症无法成像。因此，需要更多的靶向染料缀合物。
促黄体激素释放激素受体(LHRH-R)，也称为促性腺激素释放激素受体，已被接受作为将有效载荷(如细胞毒性药物和显像剂)特异性递送到表达该受体的肿瘤的靶标。LHRH-R属于G蛋白偶联受体家族，并具有暴露于细胞外空间的结合位点。LHRH-R在垂体腺中表达，并调节促黄体激素释放激素(LHRH)和促卵泡激素(FSH)的产生和释放。LHRH-R也存在于卵巢、子宫内膜、睾丸和前列腺的下丘脑外组织中。还有报道表明该受体在肾脏中表达。
不仅关于激素依赖性癌症报道了LHRH-R的表达，而且还关于前列腺、乳腺、卵巢、子宫内膜、肾脏、胰腺、脑、皮肤的激素非依赖性癌症报道了LHRH-R的表达。癌症中的LHRH-R受体在癌的生长和增殖中起作用。目前，LHRH-R的激动剂和拮抗剂二者均用于削弱肿瘤生长。LHRH-R在健康组织上的表达通常限于垂体和生殖器官。
目前，天然肽配体LHRH或其类似物用于靶向LHRH-R。尽管已经研发了LHRH-R靶向显像剂，但这些研究是用LHRH肽或其类似物或抗体研发LHRH-R靶向显像剂。然而，这些肽试剂受肝脏和肾脏非特异性摄取倾向的限制。肝脏和肾脏是涉及回收肽的重要器官。由于这个原因，这些器官表达肽清道夫受体，其导致基于肽的细胞毒性药物缀合物的非特异性摄取，并对这些器官造成损害。
概述
本发明的范围只由附加权利要求限定，并且不受本概述内陈述的任何程度的影响。
在一个方面，本公开提供式B-L-A的缀合物或其药学上可接受的盐，其中B为下式的LHRH-R结合性拮抗剂
其中各R1独立为卤素、C1-C6烷基或-OC1-C6烷基；各R2独立为H、C1-C6烷基或C3-C6环烷基；R3为C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基或C1-C6烷基-(C6-C10芳基)；R4为C1-C6烷基；各R5独立选自卤素、C1-C6烷基、-OC1-C6烷基、-SC1-C6烷基和-OC6-C10芳基；X和Y各自独立为N、CH或CR1；其条件为当X为N时，Y为CH或CR1，且当Y为N时，X为CH或CR1；m为0至4的整数；n为0至3的整数；且*表示到L的共价键；L为接头；且A为药物或显像剂。
在另一个方面，本公开提供一种药物组合物，该组合物包含本文所述的缀合物或其药学上可接受的盐和任选至少一种药学上可接受的赋形剂。
在另一个方面，本公开提供一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括a.给予受试者有效量的本文所述的缀合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本公开提供本文所述的缀合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗受试者的表达LHRH-R的癌症的方法中。
在另一个方面，本公开提供本文所述的缀合物或其药学上可接受的盐在制备可用于治疗受试者的表达LHRH-R的癌症的药物中的用途。
在另一个方面，本公开提供一种使细胞群体外成像的方法，所述方法包括a.使细胞与本文所述的缀合物接触，以提供经标记细胞；和b.使经标记细胞可视化。
在另一个方面，本公开提供本文所述的缀合物，其用于使细胞群体外成像的方法中。
在另一个方面，本公开提供一种使细胞群体内成像的方法，所述方法包括a.给予患者有效量的本文所述的缀合物或其药学上可接受的盐，以提供经标记细胞；和b.通过成像使经标记细胞可视化。
在另一个方面，本公开提供本文所述的缀合物，其用于使细胞群体外成像的方法中。
本发明的数个实施方案描述于以下列举项：
1.式B-L-A的缀合物或其药学上可接受的盐，其中B为下式的LHRH-R结合性拮抗剂
其中
各R1独立为卤素、C1-C6烷基或-OC1-C6烷基；
各R2独立为H、C1-C6烷基或C3-C6环烷基；
R3为C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基或C1-C6烷基-(C6-C10芳基)；
R4为C1-C6烷基；
各R5独立选自卤素、C1-C6烷基、-OC1-C6烷基、-SC1-C6烷基和-OC6-C10芳基；
X和Y各自独立为N、CH或CR1；其条件为当X为N时，Y为CH或CR1，且当Y为N时，X为CH或CR1；
m为0至4的整数；
n为0至3的整数；并且
*表示到L的共价键；
L为接头；并且
A为药物或显像剂。
2.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，所述缀合物具有下式：
3.第1或2项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中n为2。
4.第1、2或3项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中m为0。
5.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中各R1在存在的情况下为F。
6.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中各R1在存在的情况下为F，处于各R1连接到的环的2-和6-位。
7.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中各R2为H。
8.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中R3为C1-C6烷基-(C6-C10芳基)。
9.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中R3为-CH2-C6H5。
10.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中R4为甲基。
11.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中各R5，当存在时，为F、Cl、-CH3、-OCH3、-OC6H5或-SC6H5。
12.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中X为N，且Y为CH。
13.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中Y为N，且X为CH。
14.第1至11项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中X为CR1，且Y为CH或CR1。
15.第14项的缀合物，其中X为-CF，且Y为CH。
16.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中B具有下式
其中*表示到L的共价键。
17.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含至少一个氨基酸。
18.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含至少一个选自Lys、Asn、Thr、Ser、Ile、Met、Pro、His、Gln、Arg、Gly、Asp、Glu、Ala、Val、Phe、Leu、Tyr、Cys和Trp的氨基酸。
19.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含至少两个独立选自Glu和Cys的氨基酸。
20.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含式Glu-Glu的氨基酸部分，其中所述谷氨酸通过羧酸侧链相互共价键合。
21.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含一个或多个包含多个羟基官能团的亲水间隔物接头。
22.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含下式的部分：
其中p为3至10的整数，q为3至100的整数；并且各*表示到缀合物的其余部分的共价键。
23.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含选自下列的部分：
其中R6为H或C1-C6烷基；并且
各*表示到缀合物的其余部分的共价键。
24.第23项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头具有下式
25.第1至22项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含选自下列的部分：
其中
R7和R8各自独立为H或C1-C6烷基；
t为1至8的整数；并且
各*表示到缀合物的其余部分的共价键。
26.第25项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头具有下式
27.第25或26项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中R7和R8为H；并且
t为2。
28.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含肼。
29.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
30.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
31.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
32.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
33.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
34.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
35.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
36.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
37.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
38.前述项中任一项的缀合物，其中A为选自长春花生物碱、念珠藻素(cryptophycin)、硼替佐米、硫代硼替佐米(thiobortezomib)、微管溶素(tubulysin)、氨基蝶呤、雷帕霉素、紫杉醇、多西他赛、多柔比星、柔红霉素、依维莫司、α-鹅膏毒素(amanatin)、疣孢菌素(verucarin)、膜海鞘素(didemnin)B、格尔德霉素(geldanomycin)、purvalanol A、伊匹尼塞、布地奈德、达沙替尼、埃坡霉素、美登素和酪氨酸激酶抑制剂的药物。
39.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中药物为微管溶素。
40.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中药物为下式的四肽：
其中
R1a、R3a、R3a’和R3a”各自独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和C3-C6环烷基，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和C3-C6环烷基中的各氢原子独立地任选被卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基、-OR13a、-OC(O)R13a、-OC(O)NR13aR13a’、-OS(O)R13a、-OS(O)2R13a、-SR13a、-SC(O)R13a、-S(O)R13a、-S(O)2R13a、-S(O)2OR13a、-S(O)NR13aR13a’、-S(O)2NR13aR13a’、-OS(O)NR13aR13a’、-OS(O)2NR13aR13a’、-NR13aR13a’、-NR13aC(O)R14a、-NR13aC(O)OR14a、-NR13aC(O)NR14aR14a’、-NR13aS(O)R14a、-NR13aS(O)2R14a、-NR13aS(O)NR13aR14a’、-NR13aS(O)2NR14aR14a’、-P(O)(OR13a)2、-C(O)R13a、-C(O)OR13a或-C(O)NR13aR13a’取代；
R2a、R4a和R12a各自独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
R5a和R6a各自独立选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-OR15a、-SR15a和–NR15aR15a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR16a、-SR16a、-NR16aR16a’、-C(O)R16a、-C(O)OR16a或-C(O)NR16aR16a’取代；或者R5a和R6a与它们所连接的碳原子一起形成–C(O)-；
各R7a、R8a、R9a、R10a和R11a独立选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-CN、-NO2、-NCO、-OR17a、-SR17a、-S(O)2OR17a、–NR17aR17a’、-P(O)(OR17a)2、-C(O)R17a、-C(O)OR17a和-C(O)NR17aR17a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR18a、-SR18a、-NR18aR18a’、-C(O)R18a、-C(O)OR18a或-C(O)NR18aR18a’取代；
各R13a、R13a’、R14a、R14a’、R15a、R15a’、R16a、R16a’、R17a和R17a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基，其中C1-C7烷基、C2-C7烯基、C2-C7炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基或5至7元杂芳基中的各氢原子独立地任选被卤素、-OH、-SH、-NH2或-CO2H取代；
各R18a和R18a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基-C(O)R19a、-P(O)(OR19a)2和-S(O)2OR19a；
各R19a独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基；
a为1、2或3；并且
*表示到缀合物的其余部分的共价键。
41.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中D为下式的四肽：
其中
R1a、R3a、R3a’和R3a”各自独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和C3-C6环烷基，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和C3-C6环烷基中的各氢原子独立地任选被卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基、-OR13a、-OC(O)R13a、-OC(O)NR13aR13a’、-OS(O)R13a、-OS(O)2R13a、-SR13a、-SC(O)R13a、-S(O)R13a、-S(O)2R13a、-S(O)2OR13a、-S(O)NR13aR13a’、-S(O)2NR13aR13a’、-OS(O)NR13aR13a’、-OS(O)2NR13aR13a’、-NR13aR13a’、-NR13aC(O)R14a、-NR13aC(O)OR14a、-NR13aC(O)NR14aR14a’、-NR13aS(O)R14a、-NR13aS(O)2R14a、-NR13aS(O)NR13aR14a’、-NR13aS(O)2NR14aR14a’、-P(O)(OR13a)2、-C(O)R13a、-C(O)OR13a或-C(O)NR13aR13a’取代；
R2a、R4a和R12a各自独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
R5a选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-OR15a、-SR15a和–NR15aR15a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR16a、-SR16a、-NR16aR16a’、-C(O)R16a、-C(O)OR16a或-C(O)NR16aR16a’取代；
各R7a、R8a、R9a、R10a和R11a独立选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-CN、-NO2、-NCO、-OR17a、-SR17a、-S(O)2OR17a、–NR17aR17a’、-P(O)(OR17a)2、-C(O)R17a、-C(O)OR17a和-C(O)NR17aR17a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR18a、-SR18a、-NR18aR18a’、-C(O)R18a、-C(O)OR18a或-C(O)NR18aR18a’取代；
各R13a、R13a’、R14a、R14a’、R15a、R15a’、R16a、R16a’、R17a和R17a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基，其中C1-C7烷基、C2-C7烯基、C2-C7炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基或5至7元杂芳基中的各氢原子独立地任选被卤素、-OH、-SH、-NH2或-CO2H取代；
各R18a和R18a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基-C(O)R19a、-P(O)(OR19a)2和-S(O)2OR19a；
各R19a独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基；
a为1、2或3；并且
*表示到缀合物的其余部分的共价键。
42.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中D为下式的四肽：
其中
R9a选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-CN、-NO2、-NCO、-OR17a、-SR17a、-S(O)2OR17a、–NR17aR17a’、-P(O)(OR17a)2、-C(O)R17a、-C(O)OR17a和-C(O)NR17aR17a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR18a、-SR18a、-NR18aR18a’、-C(O)R18a、-C(O)OR18a或-C(O)NR18aR18a’取代；
各R13a、R17a和R17a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基，其中C1-C7烷基、C2-C7烯基、C2-C7炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基或5至7元杂芳基中的各氢原子独立地任选被卤素、-OH、-SH、-NH2或-CO2H取代；
各R18a和R18a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基-C(O)R19a、-P(O)(OR19a)2和-S(O)2OR19a；
各R19a独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基；并且
*表示到缀合物的其余部分的共价键。
43.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A为天然存在的微管溶素。
44.第43项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A选自微管溶素A、微管溶素B、微管溶素C、微管溶素D、微管溶素E、微管溶素F、微管溶素G、微管溶素H和微管溶素I。
45.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中药物为微管溶素B。
46.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A具有下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
47.前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A具有下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
48.第1至34项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A为显像剂。
49.第1至34项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A为选自若丹明染料、荧光素染料、PET显像剂或放射性标记的试剂的显像剂。
50.第48或49项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A选自S0456、5-羧基四甲基若丹明(5-TAMRA)、若丹明B、若丹明6G、TRITC、德克萨斯红、若丹明123、磺基若丹明101、荧光素、5-氨基荧光素、6-氨基荧光素、荧光素异氰酸酯(FITC)、NHS-荧光素、俄勒冈绿、东京绿、新加坡绿和费城绿。
51.第1至34项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A为与螯合基团配位的放射性同位素，例如金属的放射性同位素。
52.第51项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中螯合基团具有下式
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
53.第51项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中螯合基团包含与其配位的选自锝、铼、镓、钆、铟和铜的同位素的放射性金属同位素。
54.第51项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中螯合基团包含与其配位的选自111In、99mTc、64Cu、67Cu、67Ga和68Ga的放射性金属同位素。
55.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，所述缀合物选自
56.第55项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中缀合物包含与其配位的选自111In、99mTc、64Cu、67Cu、67Ga和68Ga的放射性金属同位素。
57.第56项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中放射性金属同位素为99mTc。
58.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，所述缀合物选自
59.第1项的缀合物或其药学上可接受的盐，所述缀合物具有下式：
60.一种药物组合物，所述药物组合物包含前述项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，和任选的至少一种药学上可接受的赋形剂。
61.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：
a.给予受试者有效量的第1至47或第59项中任一项的缀合物或组合物，或其药学上可接受的盐。
62.第61项的方法，其中受试者患有表达LHRH-R的癌症。
63.第61或62项的方法，其中表达LHRH-R的癌症为原发性或转移性的。
64.第61至63项中任一项的方法，其中癌症选自前列腺癌、子宫内膜癌、皮肤癌、胰腺癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌和脑癌。
65.第1至47或第59项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗受试者的表达LHRH-R的癌症的方法中。
66.第65项的缀合物，其中方法包括给予受试者有效于治疗表达LHRH-R的癌症的量的缀合物。
67.第65或66项的缀合物，其中表达LHRH-R的癌症选自前列腺癌、子宫内膜癌、皮肤癌、胰腺癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌和脑癌。
68.第1至47或第59项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐在制备可用于治疗受试者的表达LHRH-R的癌症的药物中的用途。
69.第68项的用途，其中表达LHRH-R的癌症选自前列腺癌、子宫内膜癌、皮肤癌、胰腺癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌和脑癌。
70.一种使细胞群体外成像的方法，所述方法包括：
a.使细胞与第1至37或第48至58项中任一项的缀合物接触，以提供经标记细胞；和b.使经标记细胞可视化。
71.第1至37或第48至58项中任一项的缀合物，其用于使细胞群体外成像的方法中。
72.第71项的缀合物，其中所述方法包括
a.使细胞与第1至37或第48至58项中任一项的缀合物接触，以提供经标记细胞；和b.使经标记细胞可视化。
73.一种使细胞群体内成像的方法，所述方法包括：
a.给予患者有效量的第1至37或第48至58项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，以提供经标记细胞；和b.通过成像使经标记细胞可视化。
74.第1至37或第48至58项中任一项的缀合物，其用于使细胞群体外成像的方法中。
75.第74项的缀合物，其中所述方法包括
a.给予患者有效量的第1至37或第48至58项中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，以提供经标记细胞；和b.通过成像使经标记细胞可视化。
附图简述
图1显示JR-L1-S0456的化学结构和LC/MS迹线。
图2显示JR-L2-S0456的化学结构和LC/MS迹线。
图3显示JR-L2-S0456的化学结构和LC/MS迹线。
图4显示JR-L3-A的化学结构和放射性HPLC分布图。
图5显示JR-L2-若丹明的化学结构和LC/MS迹线。
图6显示JR-L3的化学结构和LC/MS迹线。
图7显示JR-L3-TubBH的化学结构和LC/MS迹线。
图8显示S0456马来酰亚胺的化学结构和LC/MS迹线。
图9显示通过荧光-浓度测定的JL-L3-S0456对表达LHRH-R的MDA-MB231乳腺癌细胞的体外结合。
图10A显示在MCF-7肿瘤异种移植物中JL-L1-S0456染料缀合物的体内摄取。
图10B显示图10A的小鼠中JL-L1-S0456由各种器官的摄取。
图11A显示在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L2-S0456染料缀合物的体内摄取。
图11B显示图11A的小鼠中JL-L2-S0456由各种器官的摄取。
图12A显示在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L3-S0456染料缀合物的体内摄取。
图12B显示图12A的小鼠中JL-L3-S0456由各种器官的摄取。
图13A显示在HEC-1B肿瘤异种移植物中JL-L3-S0456染料缀合物的体内摄取。
图13B显示图13A的小鼠中JL-L3-S0456由各种器官的摄取。
图14A显示在OVCAR3肿瘤异种移植物中JL-L3-S0456染料缀合物的体内摄取。
图14B显示图14A的小鼠中JL-L3-S0456由各种器官的摄取。
图15A显示在注射后2小时在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L3-S0456染料缀合物的体内摄取。
图15B显示在注射后8小时在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L3-S0456染料缀合物的体内摄取。
图15C显示在注射后12小时在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L3-S0456染料缀合物的体内摄取。
图15D显示图15A的小鼠中JL-L3-S0456由各种器官的摄取。
图15E显示图15B的小鼠中JL-L3-S0456由各种器官的摄取。
图15F显示图15C的小鼠中JL-L3-S0456由各种器官的摄取。
图16显示通过放射性-浓度测定的JL-L3A对表达LHRH-R的MDA-MB231乳腺癌细胞的体外结合。
图17A显示在经治疗和竞争小鼠中JL-L1A的体内摄取。
图17B显示在经治疗和竞争小鼠中JL-L2A的体内摄取。
图17C显示在经治疗和竞争小鼠中JL-L3A的体内摄取。
图18A显示在注射后2小时和4小时在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L1A的体内生物分布。
图18B显示在注射后2小时和4小时在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L2A的体内生物分布。
图18C显示在注射后2小时和4小时在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L3A的体内生物分布。
图19A显示在注射后2小时在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L1A缀合物的体内摄取。
图19B显示在注射后4小时在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L2A缀合物的体内摄取。
图19C显示在注射后8小时在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L3A缀合物的体内摄取。
图19D显示在2小时、4小时和8小时各个器官的百分数注射剂量/g组织。
图20显示共焦成像，其显示JL-L3-若丹明缀合物对MDA-MB-231(受体阳性)和SKVO3(受体阴性)细胞的体外结合。
图21A显示通过3H胸苷掺入-浓度测定的TubBH和JL-L3-TubBH对LHRH-R阳性细胞(MDA-MB-231)JL-L3-S0456的体外结合。
图21B显示通过3H胸苷掺入-浓度测定的TubBH和JL-L3-TubBH对LHRH-R阴性细胞(SKOV3)JL-L3-S0456的体外结合。
图22A显示通过随时间推移的肿瘤体积测定的JL-L3-TubBH对LHRH-R阳性细胞的治疗效力。
图22B显示通过随时间推移的肿瘤体积测定的JL-L3-TubBH对LHRH-R阴性细胞的治疗效力。
图22C显示通过随时间推移的重量变化测定的JL-L3-TubBH对LHRH-R阳性细胞的毒性。
图22D显示通过随时间推移的肿瘤体积测定的JL-L3-TubBH对LHRH-R阳性细胞的毒性。
图23A显示通过随时间推移的肿瘤体积测定的JL-L3-TubBH对皮下LHRH-R阳性MDA-MB231肿瘤生长的治疗效力。
图23B显示通过随时间推移的重量变化测定的JL-L3-TubBH对皮下LHRH-R阳性MDA-MB231肿瘤生长的毒性。
定义
本文所用术语“烷基”包括碳原子链，该碳原子链任选支化，并包含1至20个碳原子。应进一步理解，在某些实施方案中，烷基可有利地具有限制长度，包括C1-C12、C1-C10、C1-C9、C1-C8、C1-C7、C1-C6和C1-C4。作为说明，这些具体限制长度烷基基团，包括C1-C8、C1-C7、C1-C6和C1-C4等，可被称为“低级烷基”。示例性烷基基团包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、3-戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等。烷基可经取代或未取代。典型取代基包括环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、氰基、卤代、羰基、氧代、(＝O)、硫代羰基、O-氨甲酰基、N-氨甲酰基、O-硫代氨甲酰基、N-硫代氨甲酰基、C-酰胺基、N-酰胺基、C-羧基、O-羧基、硝基和氨基或如本文提供的各种实施方案中所述。应理解，“烷基”可与其它基团(如以上提供的那些基团)组合，以形成官能化烷基。例如，本文所述“烷基”基团与“羧基”基团的组合可被称为“羧基烷基”基团。其它非限制实例包括羟基烷基、氨基烷基等。在其它实施方案中，“烷基”基团可以与另一种基团例如芳基基团组合，例如C6-C10芳基-(C1-C6烷基)，它提供诸如苄基(即C6H5-CH2-)的基团。
本文所用术语“烯基”包括碳原子链，该碳原子链任选支化并包含2至20个碳原子，并且还包括至少一个碳-碳双键(即C＝C)。应理解，在某些实施方案中，烯基可有利地具有限制长度，包括C2-C12、C2-C9、C2-C8、C2-C7、C2-C6和C2-C4。作为说明，这些具体限制长度烯基基团，包括C2-C8、C2-C7、C2-C6和C2-C4，可被称为“低级烯基”。烯基可未取代，或如关于烷基所述或如本文提供的各种实施方案中所述地经取代。示例性烯基基团包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。
本文所用术语“炔基”包括碳原子链，该碳原子链任选支化并包含2至20个碳原子，并且还包括至少一个碳-碳三键(即C≡C)。应理解，在某些实施方案中，炔基可各自有利地具有限制长度，包括C2-C12、C2-C9、C2-C8、C2-C7、C2-C6和C2-C4。作为说明，这些具体限制长度炔基基团，包括C2-C8、C2-C7、C2-C6和C2-C4，可被称为“低级炔基”。烯基(炔基)可未取代，或如关于烷基所述或如本文提供的各种实施方案中所述地经取代。示例性烯基基团包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。
本文所用术语“芳基”指具有完全共轭π电子体系的6至12个碳原子的全碳单环或稠环多环基团。应理解，在某些实施方案中，芳基可有利地具有限制大小，例如C6-C10芳基。示例性芳基基团包括但不限于苯基、萘基和蒽基。芳基基团可未取代，或如关于烷基所述或如本文提供的各种实施方案中所述地经取代。
本文所用术语“环烷基”指3至15元全碳单环、全碳5元/6元或6元/6元稠合双环或者多环稠环(“稠”环体系意指体系中的各环与体系中的各其它环共享相邻的碳原子对)基团，其中一个或多个环可含有一个或多个双键，但环烷基不含完全共轭的π电子体系。应理解，在某些实施方案中，环烷基可有利地具有限制大小，例如C3-C13、C3-C6、C3-C6和C4-C6。环烷基可未取代，或如关于烷基所述或如本文提供的各种实施方案中所述地经取代。示例性环烷基基团包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环戊二烯基、环己基、环己烯基、环庚基、金刚烷基、降冰片基、降冰片烯基、9H-芴-9-基等。
本文所用术语“杂环烷基”指在环中具有3至12个环原子的单环或稠环基团，其中至少一个环原子为杂原子，例如氮、氧或硫，其余环原子为碳原子。杂环烷基可任选包含1、2、3或4个杂原子。杂环烷基也可具有一个或多个双键，包括到氮的双键(例如C＝N或N＝N)，但不含完全共轭的π电子体系。应理解，在某些实施方案中，杂环烷基可有利地具有限制大小，例如3-至7-元杂环烷基、5-至7-元杂环烷基等。杂环烷基可未取代，或如关于烷基所述或如本文提供的各种实施方案中所述地经取代。示例性杂环烷基基团包括但不限于环氧乙烷基、硫化环戊烷基(thianaryl)、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基、哌啶基、1,4-二氧杂环己烷基、吗啉基、1,4-二噻烷基、哌嗪基、氧杂环庚烷基、3,4-二氢-2H-吡喃基、5,6-二氢-2H-吡喃基、2H-吡喃基、1,2,3,4-四氢吡啶基等。
本文所用术语“杂芳基”指5至12个环原子的单环或稠环基团，该基团包含一、二、三或四个选自氮、氧和硫的环杂原子，其余环原子为碳原子，并且还具有完全共轭的π电子体系。应理解，在某些实施方案中，杂芳基可有利地具有限制大小，例如3-至7-元杂芳基、5-至7-元杂芳基等。杂芳基可未取代，或如关于烷基所述或如本文提供的各种实施方案中所述地经取代。示例性杂芳基基团包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基(thiophenyl)、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、嘌呤基、四唑基、三嗪基、吡嗪基、四嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、噻吩基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基和咔唑基等。
本文所用“羟基”(hydroxy或hydroxyl)指-OH基团。
本文所用“烷氧基”指-O-(烷基)或-O-(未取代的环烷基)基团二者。代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
本文所用“芳氧基”指-O-芳基或-O-杂芳基基团。代表性实例包括但不限于苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基、噻吩氧基、嘧啶氧基、吡嗪氧基等。
本文所用“巯基”指-SH基团。
本文所用“烷硫基”指-S-(烷基)或-S-(未取代的环烷基)基团。代表性实例包括但不限于甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基、环丙硫基、环丁硫基、环戊硫基、环己硫基等。
本文所用“芳硫基”指-S-芳基或-S-杂芳基基团。代表性实例包括但不限于苯硫基、吡啶硫基、呋喃硫基、噻吩硫基、嘧啶硫基等。
本文所用“卤代”或“卤素”指氟、氯、溴或碘。
本文所用“三卤甲基”指具有三个卤素取代基的甲基基团，例如三氟甲基基团。
本文所用“氰基”指-CN基团。
本文所用“亚磺酰基”指-S(O)R"基团，其中R"为如本文提供的各种实施方案中所述的任何R基团，或者R"可以为羟基基团。
本文所用“磺酰基”指-S(O)2R"基团，其中R"为如本文提供的各种实施方案中所述的任何R基团，或者R"可以为羟基基团。
本文所用“S-磺酰氨基”指-S(O)2NR"R"基团，其中R"为如本文提供的各种实施方案中所述的任何R基团。
本文所用“N-磺酰氨基”指-NR"S(O)2R"基团，其中R"为如本文提供的各种实施方案中所述的任何R基团。
本文所用“O-氨甲酰基”指-OC(O)NR"R"基团，其中R"为如本文提供的各种实施方案中所述的任何R基团。
本文所用“N-氨甲酰基”指R"OC(O)NR"-基团，其中R"为如本文提供的各种实施方案中所述的任何R基团。
本文所用“O-硫代氨甲酰基”指-OC(S)NR"R"基团，其中R"为如本文提供的各种实施方案中所述的任何R基团。
本文所用“N-硫代氨甲酰基”指R"OC(S)NR"-基团，其中R"为如本文提供的各种实施方案中所述的任何R基团。
本文所用“氨基”指-NR"R"基团，其中R"为如本文提供的各种实施方案中所述的任何R基团。
本文所用“C-酰胺基”指-C(O)NR"R"基团，其中R"为如本文提供的各种实施方案中所述的任何R基团。
本文所用“N-酰胺基”指R"C(O)NR"-基团，其中R"为如本文提供的各种实施方案中所述的任何R基团。
本文所用“硝基”指–NO2基团。
本文所用“键”指共价键。
本文所用“任选”或“任选地”意指随后描述的事件或状况可发生但不必发生，并且该描述包括事件或状况发生的情况和不发生的情况。例如，“任选用烷基取代的杂环基团”指烷基可存在但不必存在，并且该描述包括杂环基团用烷基取代的情况和杂环基团未用烷基取代的情况。
本文所用“独立”指随后描述的事件或状况应相对于其它类似事件或状况独自阅读。例如，在一种状况下，其中几个等同的氢基团任选地被该状况下所述的另一个基团取代，则“独立地任选”的使用意指该基团上的各氢原子的情况都可以被另一个基团取代，其中代替各氢原子的基团可相同或不同。或比如，在均可选自一组可能性的多个基团存在时，“独立”的使用意指各基团可与任何其它基团分开地选自该组可能性，并且在这种状况下选择的基团可相同或不同。
本文所用“氨基酸”(也称为“AA”)指包含与氨基基团和酸基团共价键合的α-碳原子的任何分子。酸基团可包括羧基。“氨基酸”可包括具有下式之一的分子：
其中R’为侧基，并且Φ包括至少3个碳原子。“氨基酸”包括立体异构体，例如D-氨基酸和L-氨基酸型。示例性氨基酸基团包括但不限于二十种内源性人氨基酸及其衍生物，例如赖氨酸(Lys)、天冬酰胺(Asn)、苏氨酸(Thr)、丝氨酸(Ser)、异亮氨酸(Ile)、蛋氨酸(Met)、脯氨酸(Pro)、组氨酸(His)、谷氨酰胺(Gln)、精氨酸(Arg)、甘氨酸(Gly)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、苯丙氨酸(Phe)、亮氨酸(Leu)、酪氨酸(Tyr)、半胱氨酸(Cys)、色氨酸(Trp)、磷酸丝氨酸(PSER)、磺基半胱氨酸、精氨琥珀酸(ASA)、羟脯氨酸、磷酸乙醇胺(PEA)、肌氨酸(SARC)、牛磺酸(TAU)、肌肽(CARN)、瓜氨酸(CIT)、鹅肌肽(ANS)、1,3-甲基组氨酸(ME-HIS)、α-氨基己二酸(AAA)、β-丙氨酸(BALA)、乙醇胺(ETN)、γ-氨基-丁酸(GABA)、β-氨基-异丁酸(BAIA)、α-氨基-丁酸(BABA)、L-别-胱硫醚(胱硫醚-A；CYSTA-A)、L-胱硫醚(胱硫醚-B；CYSTA-B)、胱氨酸、别-异亮氨酸(ALLO-ILE)、DL-羟赖氨酸(羟赖氨酸(I))、DL-别-羟赖氨酸(羟赖氨酸(2))、鸟氨酸(ORN)、高胱氨酸(HCY)及其衍生物。结合本文所述的实施方案，氨基酸可通过其α-氨基和羧基官能团(即以肽键构造)或通过其侧链官能团(例如，谷氨酸中的侧链羧基)及其α-氨基或羧基官能团共价连接到本文所述缀合物的其它部分。应理解，当与本文所述缀合物结合使用时，氨基酸可作为两性离子存在于它们所掺入的缀合物中。
本文所用“前药”指，可以药理学非活性形式给予受试者，然后可通过正常代谢过程(例如噁唑烷的水解)转化成药理学活性形式的化合物。应理解，前药可由此转化成活性药物的代谢过程包括但不限于一种或多种自发化学反应、酶催化化学反应和/或其它代谢化学反应或其组合。应理解，在本领域已知多种代谢过程，并且本文所述的前药由此转化成活性药物的代谢过程为非限制性。前药可以为对受试者有治疗效果的药物的前体化合物。
本文所用术语“治疗有效量”是指的药物或药剂的量，所述量引起受试者(即组织系统、动物或人)的生物或药物反应，其被研究人员、兽医、医生或其它临床医师所寻求，包括但不限于减轻所治疗疾病或紊乱的症状。在一个方面，治疗有效量为可以以适用于任何医学治疗的合理收益/风险比治疗或减轻疾病或疾病症状的活性物质的量。在另一个方面，治疗有效量为在通过正常代谢过程转化时产生能够引起所寻求的受试者的生物或药物反应的活性药物量的非活性前药的量。
还应理解，剂量，无论涉及单一疗法还是联合疗法，都有利地参考在给予一种或多种本文所述缀合物期间可能发生的任何毒性或其它不希望的副作用来选择。此外，应理解，本文所述的联合疗法可允许给予显示这种毒性或其它不希望的副作用的缀合物的较低剂量，其中那些较低剂量低于毒性阈值，或者在该治疗窗中比没有联合疗法的情况下否则会给予的低。
本文所用“给予”包括将本文所述的缀合物和组合物引入宿主动物的所有方式，包括但不限于口服(po)、静脉内(iv)、肌肉内(im)、皮下(sc)、透皮、吸入、口含、眼、舌下、阴道、直肠等。本文所述缀合物和组合物可以含有常规非毒性药学上可接受的载体、佐剂和/或媒介物的单位剂型和/或制剂给予。
本文所用“药物组合物”或“组合物”指一种或多种本文所述缀合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物与其它化学组分(例如药学上可接受的赋形剂)的混合物。药物组合物的用途是促进缀合物给予受试者。适用于递送所述缀合物的药物组合物及其制备方法对本领域技术人员而言容易显而易见。这些组合物及其制备方法可发现于例如《Remington's Pharmaceutical Sciences》，第19版(Mack Publishing Company,1995)。
如本文和附加权利要求中所用，除非上下文另外清楚地指明，否则单数形式“一”(a)、“一个”(an)和“该”(the)包括复数引用对象。
除非另外定义，本文所用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。现在描述优选的方法、装置和材料，尽管可在本发明的实践或试验中使用类似或等同于本文所述那些的任何方法、装置和材料。
详述
通过以下列举项描述本发明的数个实施方案，并且预期这些实施方案与此详述部分中所述实施方案的任何组合。应理解，以下所述的各种代表性实施方案的要素和特征可以不同方式组合，以产生同样落入本教导范围内的新实施方案。
在各前述和各以下实施方案中，应理解，所述式不仅包括和代表缀合物的所有药学上可接受的盐，而且包括缀合物式的任何和所有水合物和/或溶剂化物。应理解，在缀合物的各种物理形式中，某些官能团，例如羟基、氨基等基团，与水和/或各种溶剂形成络合物和/或配位缀合物。因此，上述式应理解为包括并代表那些各种各样的水合物和/或溶剂化物。还应理解，通过这样的式描述缀合物式的非水合物和/或非溶剂化物以及缀合物式的水合物和/或溶剂化物。
应理解，可关于本公开使用的LHRH-R拮抗剂不受结构的特别限制。可用的LHRH-R拮抗剂可以为对LHRH-R显示结合亲和力的任何药物或化合物。
在一些实施方案中，LHRH-R拮抗剂为下式的化合物或其药学上可接受的盐
其中
各R1独立为卤素、C1-C6烷基或-OC1-C6烷基；各R2独立为H、C1-C6烷基或C3-C6环烷基；R3为C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基或C1-C6烷基-(C6-C10芳基)；R4为C1-C6烷基；各R5独立选自卤素、C1-C6烷基、-OC1-C6烷基、-SC1-C6烷基和-OC6-C10芳基；X和Y各自独立为N、CH或CR1；其条件为当X为N时，Y为CH或CR1，且当Y为N时，X为CH或CR1；m为0至4的整数；n为0至3的整数；且*表示到L的共价键；L为接头；并且A为药物或显像剂。
在一些实施方案中，n为0。在一些实施方案中，n为1。在一些实施方案中，n为2。在一些实施方案中，n为3。在一些实施方案中，m为0。在一些实施方案中，m为1。在一些实施方案中，m为2。
在一些实施方案中，R1当存在时为卤素。在一些实施方案中，R1当存在时为F。在一些实施方案中，R1当存在时为Cl。在一些实施方案中，R1当存在时为CH3。在一些实施方案中，R1当存在时为-OCH3。在一些实施方案中，各R1当存在时为F，处于各R1所连接的环的2-和6-位。在一些实施方案中，各R1当存在时为F，处于取代模式以提供2,6-二氟苯基。
在一些实施方案中，R2为H。在一些实施方案中，R2为-CH3。在一些实施方案中，R3为C1-C6烷基-(C6-C10芳基)。在一些实施方案中，R3为-CH2-C6H5。在一些实施方案中，R3为C1-C6烷基。在一些实施方案中，R3为C3-C6环烷基。在一些实施方案中，R4为甲基。在一些实施方案中，各R5当存在时为F、Cl、-CH3、-OCH3、-OC6H5或-SC6H5。在一些实施方案中，X为N，且Y为CH。在一些实施方案中，Y为N，且X为CH。在一些实施方案中，X为CR1，且Y为CH或CR1。在一些实施方案中，X为-CF，且Y为CH。
在一些实施方案中，B具有下式
其中*表示到L的共价键。
应理解，可关于本公开使用的接头不受结构的特别限制。可用的接头可具有宽范围结构和本文所述接头部分的任何组合。
在一些实施方案中，接头包含可释放的接头，其中术语“可释放的接头”指包含至少一个可在生理条件下断裂的键的接头，例如pH不稳定键、酸不稳定键、碱不稳定键、氧化不稳定键、代谢不稳定键、生化不稳定键或酶不稳定键。应理解，导致键断裂的这种生理条件不一定包括生物或代谢过程，而是可包括标准化学反应，例如水解反应，例如，在生理pH下，或者由于划分入细胞器，例如具有低于胞质pH的pH的内体。在一些实施方案中，可释放的接头包含二硫键。
在一些实施方案中，接头包含选自下列的部分：
其中R6为H或C1-C6烷基；并且
各*表示到缀合物的其余部分的共价键。
在一些实施方案中，接头包含下式的部分：
其中p为3至10的整数，q为3至100的整数；并且各*表示到缀合物的其余部分的共价键。
在一些实施方案中，接头包含选自下列的部分：
其中
R7和R8各自独立为H或C1-C6烷基；
t为1至8的整数；并且
各*表示到缀合物的其余部分的共价键。
在一些实施方案中，根据本教导的缀合物包括显像剂，例如近红外(NIR)染料或放射性显像剂。可用作本教导的显像剂的代表性化合物包括但不限于染料(例如若丹明染料、菁染料、荧光素染料等)、PET显像剂、放射性标记的试剂等。若丹明染料的代表性实例包括但不限于5-羧基四甲基若丹明(5-TAMRA)、若丹明B、若丹明6G、TRITC、德克萨斯红、若丹明123、磺基若丹明101等。荧光素染料的实例包括但不限于荧光素、5-氨基荧光素、6-氨基荧光素、荧光素异氰酸酯(FITC)、NHS-荧光素、俄勒冈绿、东京绿、新加坡绿、费城绿等。可根据本教导使用的代表性近红外染料包括但不限于LS288、IR800、SP054、S0121、KODAK、IRD28、S2076、S0456及其衍生物。
在一些实施方案中，放射性标记的试剂可用作根据本教导的显像剂。在一些实施方案中，若丹明染料或荧光素染料可经同位素标记。适合包含在缀合物中的同位素的实例包括如下的同位素：氢(例如，2H和3H)、碳(例如，11C、13C和14C)、氯(例如，36Cl)、氟(例如，18F)、碘(例如，123I和125I)、氮(例如，13N和15N)、氧(例如，15O、17O和18O)、磷(例如，32P)和硫(例如，35S)。
某些同位素标记的缀合物(例如掺入放射性同位素的缀合物)可用于药物和/或底物组织分布研究。鉴于其易于掺入和现成的检测手段，放射性同位素氚(即3H)和碳-14(即14C)对此用途特别有用。
用正电子发射同位素(例如11C、18F和13N)取代可用于正电子发射断层扫描(PET)研究中以检查底物受体占有率。通常，通过本领域技术人员已知的常规技术或类似于附加实施例中所述那些的方法，用适合的同位素标记的试剂代替以前所用的未标记的试剂，可制备同位素标记的缀合物。
在一些实施方案中，A为与螯合基团配位的放射性同位素，例如金属的放射性同位素。在一些实施方案中，螯合基团具有下式
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
在一些实施方案中，螯合基团包含与其配位的选自锝、铼、镓、钆、铟和铜的同位素的放射性金属同位素。在一些实施方案中，螯合基团包含与其配位的选自111In、99mTc、64Cu、67Cu、67Ga和68Ga的放射性金属同位素。
在一些实施方案中，本公开提供用于使细胞群或组织体外或体内成像的方法。应理解，这种体外方法可通过在本领域已知的任何方法进行。在一些实施方案中，本文所述的体外成像方法可包括(a)使细胞群与本教导的适用于成像的缀合物接触，以提供结合到表达LHRH-R蛋白的细胞的缀合物；和(b)通过用光照射使结合到细胞的缀合物可视化。应理解，通过用光照射使结合到细胞的缀合物可视化可包括在激发波长照射和在发射波长检测。因此，在一些实施方案中，本文所述的体外成像方法可包括(a)使细胞群与本教导的适用于成像的缀合物接触，以提供结合到表达LHRH-R蛋白的细胞的缀合物；(b)用激发波长光照射结合到表达LHRH-R蛋白的细胞的缀合物；和(c)在发射波长检测从癌细胞发射的光。
在一些实施方案中，可根据本文所述方法使组织(例如癌性肿瘤)成像。例如，在一些实施方案中，根据本教导的体内成像方法可包括(a)给予患者适合于成像的本教导的缀合物或其药学上可接受的盐，以提供结合到表达LHRH-R蛋白的细胞的缀合物；和(b)通过用光照射使结合到表达LHRH-R蛋白的细胞的缀合物可视化。应理解，通过用光照射使结合到细胞的缀合物可视化可包括在激发波长照射和在发射波长检测。因此，在一些实施方案中，本文所述的体内成像方法可包括(a)给予患者适于成像的本文所述的缀合物或其药学上可接受的盐，以提供结合到表达LHRH-R蛋白的细胞的缀合物；(b)用激发波长光照射结合到表达LHRH-R蛋白的细胞的缀合物；和(c)在发射波长检测从癌细胞发射的光。应理解，通过用光照射使结合到细胞的缀合物可视化可用在本领域已知的任何已知成像技术(诊断或其它)或仪器来进行。
在一些实施方案中，根据本教导的缀合物包括治疗剂，在一些实施方案中，该治疗剂对癌细胞和/或癌相关的成纤维细胞(CAF)治疗有效。根据本教导使用的治疗剂可以为能够调节或以其它方式改变细胞功能的任何分子，包括药学活性化合物(例如治疗剂)，或能够为成像或可视化细胞或组织提供可测信号的任何分子(例如，显像剂)。
可用作治疗剂的适合分子包括但不限于肽、寡肽、逆反转寡肽(retro-inversooligopeptide)、蛋白质、其中至少一个非肽键代替肽键的蛋白质类似物、脱辅基蛋白质、糖蛋白、酶、辅酶、酶抑制剂、氨基酸及其衍生物、受体和其它膜蛋白；抗原及其抗体；半抗原及其抗体；激素、脂质、磷脂、脂质体；毒素；抗生素；止痛剂；支气管扩张剂；β-受体阻断剂；抗微生物剂；抗高血压药；心血管药，包括抗心律失常药、强心苷、抗心绞痛剂和血管扩张剂；中枢神经系统药，包括兴奋剂、精神药物、抗躁狂剂和抑制剂；抗病毒剂；抗组胺剂；癌症药物，包括化疗药剂；镇静剂；抗抑郁剂；H-2拮抗剂；抗惊厥剂；止恶心药；前列腺素和前列腺素类似物；肌肉松弛剂；抗炎物质；兴奋剂；减充血剂；止吐剂；利尿剂；解痉剂；平喘剂；抗帕金森剂；祛痰剂；止咳剂；粘液溶解剂；和矿物质及营养添加剂。
在一些实施方案中，治疗剂可以为微管溶素。天然微管溶素一般为由N-甲基哌啶酸(Mep)、异亮氨酸(Ile)、称为tubuvaline(Tuv)的非天然氨基酸、以及称为tubutyrosine(Tut，酪氨酸的类似物)的非天然氨基酸或称为tubuphenylalanine(Tup，苯丙氨酸的类似物)的非天然氨基酸组成的线性四肽。
在一些实施方案中，治疗剂为下式的四肽
其中
R1a、R3a、R3a’和R3a”各自独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和C3-C6环烷基，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和C3-C6环烷基中的各氢原子独立地任选被卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基、-OR13a、-OC(O)R13a、-OC(O)NR13aR13a’、-OS(O)R13a、-OS(O)2R13a、-SR13a、-SC(O)R13a、-S(O)R13a、-S(O)2R13a、-S(O)2OR13a、-S(O)NR13aR13a’、-S(O)2NR13aR13a’、-OS(O)NR13aR13a’、-OS(O)2NR13aR13a’、-NR13aR13a’、-NR13aC(O)R14a、-NR13aC(O)OR14a、-NR13aC(O)NR14aR14a’、-NR13aS(O)R14a、-NR13aS(O)2R14a、-NR13aS(O)NR13aR14a’、-NR13aS(O)2NR14aR14a’、-P(O)(OR13a)2、-C(O)R13a、-C(O)OR13a或-C(O)NR13aR13a’取代；
R2a、R4a和R12a各自独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
R5a和R6a各自独立选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-OR15a、-SR15a和–NR15aR15a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR16a、-SR16a、-NR16aR16a’、-C(O)R16a、-C(O)OR16a或-C(O)NR16aR16a’取代；或者R5a和R6a与它们所连接的碳原子一起形成–C(O)-；
各R7a、R8a、R9a、R10a和R11a独立选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-CN、-NO2、-NCO、-OR17a、-SR17a、-S(O)2OR17a、–NR17aR17a’、-P(O)(OR17a)2、-C(O)R17a、-C(O)OR17a和-C(O)NR17aR17a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR18a、-SR18a、-NR18aR18a’、-C(O)R18a、-C(O)OR18a或-C(O)NR18aR18a’取代；
各R13a、R13a’、R14a、R14a’、R15a、R15a’、R16a、R16a’、R17a和R17a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基，其中C1-C7烷基、C2-C7烯基、C2-C7炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基或5至7元杂芳基中的各氢原子独立地任选被卤素、-OH、-SH、-NH2或-CO2H取代；
各R18a和R18a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基-C(O)R19a、-P(O)(OR19a)2和-S(O)2OR19a；
各R19独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基；
a为1、2或3；并且
*表示到缀合物的其余部分的共价键。
在一些实施方案中，治疗剂具有下式
其中R1a、R2a、R3a、R3a’、R3a”、R4a、R5a、R7a、R8a、R9a、R10a、R11a和R12a如本文所述，并且*表示到缀合物的其余部分的共价键。
在另一个实施方案中，治疗剂可以为以下通式的天然存在的微管溶素或其类似物或衍生物
其中R9a和R13a如本文所述，并且*表示到缀合物的其余部分的共价键。
本文描述了前述微管溶素各自的缀合物。
在一些实施方案中，治疗剂可以为以下通式的天然存在的微管溶素
因子 R<sup>13a</sup> R<sup>9a</sup>
A (CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>CHCH<sub>2</sub> OH
B CH<sub>3</sub>(CH<sub>2</sub>)<sub>2</sub> OH
C CH<sub>3</sub>CH<sub>2</sub> OH
D (CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>CHCH<sub>2</sub> H
E CH<sub>3</sub>(CH<sub>2</sub>)<sub>2</sub> H
F CH<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> H
G (CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>C＝CH OH
H CH<sub>3</sub> H
I CH<sub>3</sub> OH
并且*表示到缀合物的其余部分的共价键。
在一些实施方案中，根据本教导的方法可用于作为“受试者”的人临床医学和兽医应用二者。因此，可给予“受试者”根据本教导的缀合物，且“受试者”可以为人(“患者”)，或者在兽医应用的情况下，可以为实验室、农业、家养或野生动物。在一些实施方案中，受试者可以为人类患者，实验室动物例如啮齿动物(例如、小鼠、大鼠、仓鼠等)、兔、猴子、黑猩猩，家养动物(例如狗、猫和兔)，农业动物(如母牛、马、猪、绵羊、山羊)，和圈养野生动物(如熊、熊猫、狮子、老虎、豹、大象、斑马、长颈鹿、大猩猩、海豚和鲸鱼)。
在一些实施方案中，本文描述的癌症可以为致瘤的癌细胞群，包括良性肿瘤和恶性肿瘤，或者癌症可以为非致瘤性。癌症可自发或通过诸如患者生殖系中存在的突变或体细胞突变之类的过程产生，或者癌症可以是化学、病毒或辐射诱导的。适用于本教导的癌症包括但不限于恶性肿瘤、肉瘤、淋巴瘤、黑素瘤、间皮瘤、鼻咽癌、白血病、腺癌和骨髓瘤。
在一些实施方案中，癌症可以为肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头部癌症、颈部癌症、皮肤黑素瘤、眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、子宫内膜癌、平滑肌肉瘤、直肠癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性白血病、急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、胸膜间皮瘤、膀胱癌、伯基特淋巴瘤、输尿管癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、胆管癌、Hurthle细胞甲状腺癌或胃食管结合部腺癌。
在本文所述方法的一些实施方案中，提供根据本教导的缀合物的药学上可接受的盐。根据本教导的缀合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐。
适合的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。说明性实例包括但不限于乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐(camsylate)、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐(naphthylate)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。
本文所述缀合物的适合碱盐由形成无毒盐的碱形成。说明性实例包括但不限于精氨酸盐、苄星盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、乙醇胺盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇盐和锌盐。也可形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。
在一些实施方案中，根据本教导的缀合物可作为与一种或多种药学上可接受的载体联合的制剂给予。载体可以为赋形剂。载体的选择可取决于多种因素，例如，具体给予方式、载体对溶解度和稳定性的影响以及剂型的性质。适用于递送本文所述缀合物的药物组合物及其制备方法对本领域技术人员而言容易显而易见。这些组合物及其制备方法可发现于例如Remington:The Science&Practice of Pharmacy,第21版(Lippincott Williams&Wilkins,2005)。
在一些实施方案中，药学上可接受的载体包括任何和所有生理上相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等及其组合。在一些实施方案中，载体适用于肠胃外给予。药学上可接受的载体包括无菌水溶液或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。辅助活性化合物也可掺入本发明的组合物中。
在一些实施方案中，液体制剂可包括混悬液和溶液。此类制剂可包含载体(例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素或适合的油)和一种或多种乳化剂和/或悬浮剂。液体制剂也可通过固体的重构来制备。
在一些实施方案中，水性混悬液可包含与适当赋形剂混合的活性物质。这些赋形剂为：悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂，其可以为天然存在的磷脂，例如卵磷脂；环氧烷与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯；环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，例如十七(亚乙基氧基)鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxycetanol)；环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯；或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。水性混悬液也可包含一种或多种防腐剂，例如抗坏血酸、乙基、正丙基或对羟基苯甲酸酯；或一种或多种着色剂。
在一些实施方案中，适合于通过加水制备水性混悬液的可分散粉末和颗粒提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。也可存在另外的赋形剂，例如着色剂。
适合的乳化剂可以为天然存在的胶，例如阿拉伯树胶或黄蓍胶；天然存在的磷脂，例如大豆卵磷脂；和酯，包括衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯，例如脱水山梨糖醇单油酸酯，和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。
在一些实施方案中，可在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨糖醇或氯化钠。通过在组合物中包含延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸盐和明胶，可延长可注射组合物的吸收。
用于口服给予的说明性形式包括但不限于片剂、胶囊、酏剂、糖浆等。
根据本文所述的癌症类型、给予途径和/或缀合物是局部还是全身给予，在本文中预期宽范围的容许剂量，包括落在约1μg/kg至约1g/kg范围内的剂量。剂量可以为单剂量或分开剂量，并且可根据多种方案给予，包括每日1次(q.d.)、每日2次(b.i.d.)、每日3次(t.i.d.)或甚至每隔一天、每两星期(biw)、每星期一次、每月一次、每季度一次等。在这些情况的每一种情况下，应理解，本文所述的治疗有效量对应于给予的情况，或者对应于通过给予方案确定的每日、每星期、每月或每季度总剂量。
在一些实施方案中，根据本教导的缀合物可以直接给予到血流中、肌肉中或内部器官中。用于这种肠胃外给予的适合途径包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、硬膜外、脑室内、尿道内、胸骨内、颅内、肿瘤内、肌肉内和皮下递送。用于肠胃外给予的适合方法包括针(包括微针)注射器、无针注射器和输注技术。
在一些实施方案中，肠胃外制剂通常为水溶液，该水溶液可含有载体或赋形剂，例如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选pH为3至9)，但对一些应用，它们可能更适合地配制成无菌非水溶液或要与适合媒介物(如无菌无热原水)结合使用的干燥形式。在其它实施方案中，本文所述的任何液体制剂可适用于本文所述缀合物的肠胃外给予。在无菌条件下制备肠胃外制剂，例如通过在无菌条件下冻干，可用本领域技术人员熟知的标准制药技术容易地完成。在一些实施方案中，通过使用适合的配制技术，例如掺入增溶剂，可增加用于制备肠胃外制剂的本文所述缀合物的溶解度。
在一些实施方案中，用于肠胃外给予的制剂可配制用于立即和/或调节释放。在一些实施方案中，根据本教导的活性剂(即，本文所述的缀合物)可以延时释放制剂给予，例如在包含缓释聚合物的组合物中。可用将保护缀合物免于快速释放的载体制备活性剂，例如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可使用生物可降解的生物相容性聚合物，例如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、聚乳酸和聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PGLA)。制备这些制剂的方法通常为本领域技术人员已知。在其它实施方案中，在适当时，可连续给予根据本教导的缀合物或包含缀合物的组合物。
在一些实施方案中提供试剂盒。如果要给予本文所述活性缀合物的组合，则可以适于组合物的顺序给予或共同给予的试剂盒的形式组合两种或更多种药物组合物。这样的试剂盒可包括：两种或更多种分开的药物组合物，其中至少一种包含根据本教导的缀合物；和用于分开地保持组合物的工具，例如容器、分瓶或分箔包装。在一些实施方案中，提供在具有标签的容器中的包含一种或多种本文所述缀合物的组合物，标签提供使用本文所述缀合物的说明书用于患者选择和/或治疗。
本文所用术语“试剂盒”指用于实施根据本教导的方法的材料的组合件。试剂盒的组分可根据它们的交叉反应性和稳定性和以液体或以固体形式在相同或分开的容器中以包装的组合提供。可选择在试剂盒中提供的组分的量和比例，以便为特定应用提供最佳的结果。虽然在一些实施方案中要给予的组分(例如，给予患者)可以分开的物理形式提供(例如，包含一种或多种组合物和一种或多种流体的试剂盒)，但应理解，在其它实施方案中，要引入患者的所有组分可以一种共同的物理形式(例如，一种组合物或一种流体)一起提供。
包含在本教导的试剂盒中的组分可在所有方式的容器中提供，使得不同组分的活性实质上保持，而组分本身实质上不被容器的材料吸附或改变。适合的容器包括但不限于安瓿、瓶子、试管、小瓶、烧瓶、注射器、袋子和封套(例如箔衬里的)等。容器可由任何适合材料形成，包括但不限于玻璃、有机聚合物(例如，聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯等)、陶瓷、金属(例如铝)、金属合金(例如钢)、软木等。另外，容器可包含一个或多个进入口(例如，用于通过针进入)，例如，可由隔片提供。用于隔片的优选材料包括橡胶和聚合物，包括但不限于例如DuPont(Wilmington,Del.)以商品名TEFLON销售的类型的聚四氟乙烯。另外，容器可包含两个或更多个由隔板或隔膜隔开的隔室，隔板或隔膜可移除，以允许混合组分。
根据本教导的试剂盒还可提供有在本领域已知和/或从商业和用户的观点可能合乎需要的其它物品，包括但不限于用于将试剂盒的组分加到热交换系统的说明书。
随本发明的试剂盒提供的说明材料可以印刷(例如，在纸上)，和/或在电子可读介质(例如，软盘、CD-ROM、DVD-ROM、压缩磁盘、录像带、录音带等)中提供。或者，通过将用户引导到因特网网站(例如，由试剂盒的制造商或分销商指定)和/或通过电子邮件、文本消息、社交媒体和/或类似物及其组合，可提供说明书。
在一些实施方案中，通过根据需要在具有上述成分之一或组合的适合溶剂中掺入所需量活性剂，随后过滤灭菌，可制备无菌可注射溶液。通常，通过将缀合物掺入无菌媒介物制备分散体，无菌媒介物包含分散介质和上述那些的任何另外的成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法为真空干燥和冷冻干燥，这得到活性成分加上任何另外的所需成分的粉末，所述另外的所需成分来自其先前经无菌过滤的溶液，或者这些成分可一起无菌过滤。
组合物可配制成溶液、微乳液、脂质体或适于高药物浓度的其它有序结构。载体可以为包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其适合混合物的溶剂或分散介质。在一些实施方案中，例如通过使用包衣(如卵磷脂)、通过保持所需的粒径(在分散体的情况下)及通过使用表面活性剂，可保持适合的流动性。
可使用用于给予本文所述缀合物的任何有效方案。例如，本文所述的缀合物可作为单剂量给予，或者可以将剂量分开并以多剂量每日方案给予。此外，交错方案，例如，每星期一至五天，可用作每日治疗的替代方案，并且出于本文所述方法的目的，这种间歇或交错的每日方案被认为等同于每天治疗并被考虑。在一些实施方案中，利用多次注射根据本教导的缀合物治疗患者来治疗癌症。在一些实施方案中，患者用本教导的缀合物注射多次(例如，约2至约50次)，例如，以12-72小时间隔或以48-72小时间隔。可在初始注射后以数天或数月的间隔向患者给予本教导的缀合物的额外注射，并且额外注射可预防癌症的复发。
可使用本教导的缀合物的任何适合疗程。在一些实施方案中，选择单独的剂量和剂量方案，以提供在一个月内给予约15mg的总剂量。在一些实例中，根据本教导的缀合物以每星期五天给予的单个日剂量给予，在每个4星期周期的第1、2和3星期给予，在第4星期不给予。在一个供选实例中，根据本教导的缀合物以每星期三天给予的单个日剂量给予，在每个4星期周期的第1和3星期给予，在第2和4星期没有剂量给予。在一个供选实例中，在第1星期和第2星期每星期两次给予根据本教导的缀合物(即，在3星期周期的第1、4、8、11天)。在一个供选实例中，在第1星期和第2星期每星期一次给予本文所述的缀合物(即，在3星期周期的第1天和第8天)。
根据本教导的缀合物的单位日剂量可根据患者状况、所治疗的癌症、本文所述的缀合物的给予途径和组织分布以及共同使用其它治疗处理(如放射疗法，或联合疗法中的另外的药物)的可能性显著变化。给予患者的有效量基于体表面积、质量和患者状况的医师评估。治疗有效剂量(在本文中也称为“治疗有效量”)可以为例如约0.5mg/m2至约20.0mg/m2的范围。
根据本教导的缀合物可包含一个或多个手性中心，或者可另外能够作为多种立体异构体存在。因此，应理解，本发明包括纯立体异构体以及立体异构体的混合物，例如对映异构体、非对映异构体和对映异构或非对映异构富集的混合物。根据本教导的缀合物可能够作为几何异构体存在。因此，应理解，本发明包括纯几何异构体或几何异构体的混合物。
应理解，根据本教导的缀合物可以非溶剂化形式和溶剂化形式存在，包括水合形式。通常，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，并且包括在本发明的范围内。本文所述的缀合物可以多种结晶或非晶形式存在。通常，所有物理形式对于本发明预期的用途是等同的，并且旨在本发明的范围内。
在一些实施方案中，用于根据本教导的缀合物的给予的组合物和/或剂型由纯度至少约90％、或约95％、或约96％、或约97％、或约98％、或约99％或约99.5％的缀合物制备。在其它实施方案中，用于根据本教导的缀合物的给予的组合物和/或剂型由纯度至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％或至少99.5％的缀合物制备。
在一些实施方案中，药物可以为顺铂、双萨拉唑、ERK抑制剂、PI3K/ERK抑制剂或吉西他滨。
与肽和抗体相比时，小分子靶向配体可有几个优点，包括但不限于：i)在宽pH和温度范围内的稳定性，这使得它们对位点特异性放射性标记更可行，ii)高肿瘤渗透性和有利地的药物动力学，iii)快速清除，和iv)非免疫原性。用LHRH-R的非肽小分子拮抗剂研发LHRH-R靶向近红外染料缀合物可克服使用肽靶向配体的缺点，例如肝脏和肾脏中清道夫受体的非特异性摄取、循环中肽的不稳定性等。
以下实施例和代表性程序说明根据本教导的特征，并且只作为说明提供。它们不旨在限制附加权利要求或其等同物的范围。
材料
六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷鎓(PyBop)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、六氟磷酸-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓甲铵(HATU)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(DIPEA)、异丙醇(IPA)、二氯甲烷(DCM)和三氟乙酸(TFA)、1,2-乙二硫醇、三异丙基硅烷(TIPS)、哌啶、二甲亚砜(DMSO)和所有其它化学试剂均购自Sigma-Aldrich。细胞培养试剂，如Roswell Park Memorial Institute培养基1640(RPMI 1640)和胎牛血清(FBS)购自GIBCO(Grand Island,NY)，而1％青霉素-链霉素、2Mm谷氨酰胺购自LifeTechnologies。99mTc-高锝酸钠由Syncor提供。H-Cys(Trt)-2-Cl-Trt树脂和经保护氨基酸购自Chem-Impex Intl.(Chicago,IL)。微管溶素B酰肼及其活化衍生物是来自EndocyteInc.(West Lafayette,IN)的友好赠品。谷氨酰胺、青霉素-链霉素和胰蛋白酶购自BDBiosciences(San Jose,CA)。
化合物实施例
化合物实施例1.JL-L1-S0456,JL-L2-S0456,JL-L3-S0456
方案1.JR-L1-S0456的合成，试剂和条件：(a)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)Fmoc-二氨基丙酸(DAP)，PyBop，DMF，DIPEA；(b)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)N-Fmoc-L-谷氨酸α-叔丁酯，PyBop，DMF，DIPEA；(c)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)N-Fmoc-L-谷氨酸α-叔丁酯，PyBop，DMF，DIPEA；(d)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)JL，PyBop，DMF，DIPEA，(iii)TFA/H2O/TIPS/EDT(92.5:2.5:2.5:2.5)，1小时；(e)JL-L1，S0456马来酰亚胺，无水DMSO，DIPEA，室温。
合成JL-L1：根据Tucci,F.C.等人(2005).Journal of medicinal chemistry,48(4),1169-1178和Struthers,R.S.等人(2007).Endocrinology,148(2),857-867中描述的方法合成LHRH-R配体，各文献通过引用结合到本文中。为了缀合的简单性，将所公开分子上存在的醚基团改性为具有羧酸基团。经改性的LHRH-R配体称为JL。如方案1中所述，通过标准固相肽合成制备接头。然后使JL偶联到固相上的接头。使用TFA:水:TIPS:乙二硫醇(95％:2.5％:2.5％:2.5％)的标准混合溶液，从H-Cys(Trt)2-氯三苯甲基树脂裂解最终产物。通过使用RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH 5.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗JL-L1，以得到所需产物。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C15H56F2N8O13的[M+H]+计算值，1027；实测值1028。
合成NIR缀合物JL-L1-S0456：如方案1中所述合成包含马来酰亚胺的S0456染料。使1当量S0456-马来酰亚胺和JL-L1溶于无水DMSO，随后加入5当量DIPEA。在氩气氛下搅拌反应混合物1小时。反应的完成用LC-MS监测。通过使用RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH7.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗JL-L1-S0456，以得到所需产物。JL-L1-S0456的LCMS表征如下。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C89H99F2N10Na3O22S3的[M+H]+计算值，1863；实测值1864。JR-L1-S0456的LRMS-LC/MS迹线显示于图1中。
方案2.JL-L2-S0456的合成，试剂和条件：(a)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)Fmoc-N-酰胺基-dPEG6-酸，PyBop，DMF，DIPEA；(b)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)JL，PyBop，DMF，DIPEA，(iii)TFA/H2O/TIPS/EDT(92.5:2.5:2.5:2.5)，1小时；(c)JL-L2，S0456马来酰亚胺，无水DMSO，DIPEA，室温。
合成JL-L2：如方案2中所述，通过标准固相肽合成制备接头。然后使JL偶联到固相上的接头。使用TFA:水:TIPS:乙二硫醇(95％:2.5％:2.5％:2.5％)的标准混合溶液，从H-Cys(Trt)2-氯三苯甲基树脂裂解最终产物。通过使用RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH5.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗JL-L2，以得到所需产物。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C47H61F2N5O12S的[M+H]+计算值，958.08；实测值959。
合成NIR缀合物JL-L2-S0456：如方案2中所述合成包含马来酰亚胺的S0456染料。使1当量S0456-马来酰亚胺和JL-L2溶于无水DMSO，随后加入5当量DIPEA。在氩气氛下搅拌反应混合物1小时。反应的完成用LC-MS监测。通过使用RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH7.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗JL-L2-S0456，以得到所需产物。通过与JL-L1-S0456相同的程序合成和纯化JL-L3S0456。JL-L2-S0456的LCMS表征如下。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C100H118F2N9Na3O28S5的[M+H]+计算值，2161.35；实测值2162。JR-L2-S0456的LRMS-LC/MS迹线显示于图2中。
方案3.JL-L3-S0456的合成，试剂和条件：(a)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)3,4,5,6-二异亚丙基-1-氨基-脱氧(Fmoc-Glu-OH)-D-葡萄糖醇，PyBop，DMF，DIPEA；(b)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)Fmoc-Glu(OtBu)-OH，PyBop，DMF，DIPEA；(c)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)3,4,5,6-二异亚丙基-1-氨基-脱氧(Fmoc-Glu-OH)-D-葡萄糖醇，PyBop，DMF，DIPEA；(d)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)Fmoc-8-氨基-辛酸，PyBop，DMF，DIPEA；(e)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)JL，PyBop，DMF，DIPEA，(iii)TFA/H2O/TIPS/EDT(92.5:2.5:2.5:2.5)，1小时；(f)JL-L2，S0456马来酰亚胺，无水DMSO，DIPEA，室温。
合成JL-L3：如方案3中所述，通过标准固相肽合成制备接头。如其它地方所述地合成肽聚糖亚基。然后使JL偶联到固相上的接头。使用TFA:水:TIPS:乙二硫醇(95％:2.5％:2.5％:2.5％)的标准混合溶液，从H-Cys(Trt)2-氯三苯甲基树脂裂解最终产物。通过使用RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH 5.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗JL-L3，以得到所需产物。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C67H94F2N10O23S的[M+H]+计算值，1477；实测值1478。
合成NIR缀合物JL-L3-S0456：如方案3中所述合成包含马来酰亚胺的S0456染料。使1当量S0456-马来酰亚胺和JL-L3溶于无水DMSO，随后加入5当量DIPEA。在氩气氛下搅拌反应混合物1小时。反应的完成用LC-MS监测。通过使用RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH7.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗JL-L3-S0456，以得到所需产物。JL-L3-S0456的LCMS表征如下。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C120H151F2N14Na3O39S5的[M+H]+计算值，2680.85；实测值2682。JR-L3-S0456的LRMS-LC/MS迹线显示于图3中。
化合物实施例2.JL-L1A,JL-L2A,JL-L3A
合成JL-L1A.根据Tucci,F.C.等人.Journal of medicinal chemistry,48(4),1169-1178中的公开程序合成LHRH-R靶向配体，该文献通过引用结合到本文中。使母体分子改性，以用羧酸基团代替分子的醚官能性。经改性的配体在本文中称为JL。通过标准固相肽合成进行所有缀合物的合成。缀合物的组分构建在H-Cys(Trt)2-氯三苯甲基树脂上。用TFA:水:TIPS:乙二硫醇(95％:2.5％:2.5％:2.5％)的标准混合溶液从树脂裂解最终缀合物。通过使用RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH 5.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗产物，以得到所需产物。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C49H57F2N9O15S的[M+H]+计算值，1082.1；实测值1083。
方案5.JL-L2A的合成，试剂和条件：(a)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)Fmoc-Asp(OtBu)，PyBop，DMF，DIPEA；(b)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)Fmoc-二氨基丙酸(DAP)，PyBop，DMF，DIPEA；(c)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)Fmoc-N-酰胺基-dPEG6-酸，PyBop，DMF，DIPEA；(d)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)JL，PyBop，DMF，DIPEA，(iii)TFA/H2O/TIPS/EDT(92.5:2.5:2.5:2.5)，1小时。
合成JL-L2A.根据Tucci,F.C.等人.Journal of medicinal chemistry,48(4),1169-1178中的公开程序合成LHRH-R靶向配体，该文献通过引用结合到本文中。使母体分子改性，以用羧酸基团代替分子的醚官能性。经改性的配体在本文中称为JL。通过标准固相肽合成进行所有缀合物的合成。缀合物的组分构建在H-Cys(Trt)2-氯三苯甲基树脂上。用TFA:水:TIPS:乙二硫醇(95％:2.5％:2.5％:2.5％)的标准混合溶液从树脂裂解最终缀合物。通过使用RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH 5.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗产物，以得到所需产物。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C54H72F2N8O16S的[M+H]+计算值，1159.27；实测值1160。
方案6.JL-L3A的合成，试剂和条件：(a)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)Fmoc-Asp(OtBu)，PyBop，DMF，DIPEA；(b)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)Fmoc-二氨基丙酸(DAP)，PyBop，DMF，DIPEA；(c)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)3,4,5,6-二异亚丙基-1-氨基-脱氧(Fmoc-Glu-OH)-D-葡萄糖醇，PyBop，DMF，DIPEA；(d)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)N-Fmoc-L-谷氨酸α-叔丁酯，PyBop，DMF，DIPEA；(e)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)3,4,5,6-二异亚丙基-1-氨基-脱氧(Fmoc-Glu-OH)-D-葡萄糖醇，PyBop，DMF，DIPEA；(f)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)Fmoc-8-氨基-辛酸，PyBop，DMF，DIPEA；(e)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟；(g)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)JL，PyBop，DMF，DIPEA，(iii)TFA/H2O/TIPS/EDT(92.5:2.5:2.5:2.5)，1小时。
合成JL-L3A.根据Tucci,F.C.等人.Journal of medicinal chemistry,48(4),1169-1178中的公开程序合成LHRH-R靶向配体，该文献通过引用结合到本文中。使母体分子改性，以用羧酸基团代替分子的醚官能性。经改性的配体在本文中称为JL。通过标准固相肽合成进行所有缀合物的合成。缀合物的组分构建在H-Cys(Trt)2-氯三苯甲基树脂上。用TFA:水:TIPS:乙二硫醇(95％:2.5％:2.5％:2.5％)的标准混合溶液从树脂裂解最终缀合物。通过使用RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH 5.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗产物，以得到所需产物。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C74H105F2N13O27S的[M+H]+计算值，1678.77；实测值1678。JL-L3A放射性HPLC分布图显示于图4中。
非放射性JL-L1A、JL-L2A和JL-L3A小瓶的配制.在用99mTc放射性标记之前，根据Leamon,C.P.等人Bioconjugate chemistry,13(6),1200-1210中公开的程序配制缀合物，该文献通过引用结合到本文中。使0.1mg JL-L1A、80mgα-D-葡庚糖酸钠和10mg盐酸锡(II)溶于氩吹扫的水中。用氢氧化钠或盐酸将溶液的pH调节到6.8±0.2。将最终体积调节到10ml，然后转移到10个小瓶中，各容纳1ml上述溶液，并冻干。在氩下在小瓶中密封经冻干粉末，并在-20℃储存。按照相同的程序配制JL-L2A和JL-L3A。
JL-L1A、JL-L2A和JL-L3A的99mTc标记.根据Leamon,C.P.等人Bioconjugatechemistry,13(6),1200-1210中公开的程序进行缀合物的放射性标记，该文献通过引用结合到本文中。向经配制的JL-L1A小瓶中加入1ml99mTc高锝酸钠，并在100℃加热～18分钟。使经螯合溶液冷却到室温，然后用其进行体外和体内研究。通过HPLC确定缀合物的螯合效率。所有三种缀合物均显示超过95％的螯合效率。
化合物实施例3.JL-L2-若丹明，JR-L3，JR-L3-TubBH
方案7.JR-L2-若丹明的合成，试剂和条件：(a)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)Fmoc-N-酰胺基-dPEG6-酸，PyBop，DMF，DIPEA；(b)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)JL，PyBop，DMF，DIPEA；(c)TFA/H2O/TIPS/EDT(92.5:2.5:2.5:2.5)，1小时；(d)JL-L2，若丹明马来酰亚胺，无水DMSO，DIPEA，室温。
合成JL-L2：根据先前公开的程序27合成LHRH-R拮抗剂(JL)，不同之处在于在最后步骤用羧酸衍生物代替反应物的醚衍生物。进行这一改性是为了容易与接头偶联。如SI图1中所述，通过标准固相肽合成制备接头。进一步使JL偶联到固相上的接头。在偶联完成后，用TFA:水:TIPS:乙二硫醇(95％:2.5％:2.5％:2.5％)的混合溶液从树脂裂解产物。通过使用RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH 5.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗JL-L2，以得到70％的所需产物。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C47H61F2N5O12S的[M+H]+计算值，958.08；实测值959。
合成JL-L2-若丹明：为了合成若丹明染料缀合物，使经纯化JL-L2和若丹明马来酰亚胺(1当量)溶于无水DMSO和DIPEA(2当量)。在氩气氛下在室温搅拌反应混合物。(SI图1)用分析型LRMS-LCMS监测反应进程。在1小时后，发现反应完成。通过制备型RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH 7.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至50％B，在35分钟内]纯化粗产物，以得到90％的所需产物。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C75H84F2N8O17S的[M+H]+计算值，1439.59；实测值1440。JR-L2-若丹明的LRMS-LC/MS迹线显示于图5中。
方案8.JR-L3的合成，试剂和条件：(a)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)3,4,5,6-二异亚丙基-1-氨基-脱氧(Fmoc-Glu-OH)-D-葡萄糖醇，PyBop，DMF，DIPEA；(b)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)Fmoc-Glu(OtBu)-OH，PyBop，DMF，DIPEA；(c)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)3,4,5,6-二异亚丙基-1-氨基-脱氧(Fmoc-Glu-OH)-D-葡萄糖醇，PyBop，DMF，DIPEA；d)(i)20％哌啶/DMF，室温，(ii)Fmoc-8-氨基-辛酸，PyBop，DMF，DIPEA，4小时；(e)(i)20％哌啶/DMF，室温，10分钟，(ii)JL，PyBop，DMF，DIPEA；(f)TFA/H2O/TIPS/EDT(92.5:2.5:2.5:2.5)，1小时。
合成JL-L3：如SI图2中所述，通过标准固相肽合成制备JL-L3。通过使用TFA:水:TIPS:乙二硫醇(95％:2.5％:2.5％:2.5％)的混合溶液从树脂裂解最终产物。通过使用RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH5.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗JL-L3，以得到80％的所需产物。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C67H94F2N10O23S的[M+H]+计算值，1477.59；实测值1478。JR-L3的LRMS-LC/MS迹线显示于图6中。
方案9.JR-L3-TubBH的合成，试剂和条件：(i)JL-L3，H2O/NaHCO3(pH＝7.0-7.2)，氩气，室温，(ii)经活化TubBH，无水THF，氩气，室温。
合成JL-L3-TubBH：如下所述合成微管溶素B酰肼缀合物。用氩气吹扫碳酸氢钠在HPLC级水中的饱和溶液15分钟。使JL-L3溶于HPLC级氩吹扫水中，然后用饱和碳酸氢钠溶液将pH调节到7.0。向此反应混合物加入二硫化物活化微管溶素B酰肼(1当量)的THF溶液。在室温氩气氛下搅拌反应混合物。用分析型LRMS-LCMS监测反应进程。在30分钟后，发现反应完成。通过制备型RP-HPLC[A＝2mM乙酸铵缓冲液(pH 7.0)，B＝乙腈，溶剂梯度0％B至80％B，在35分钟内]纯化粗产物，以得到90％的所需产物。LRMS-LC/MS(m/z)：对于C112H161F2N17O34S3的[M+H]+计算值，2423.78；实测值2424。
细胞培养：在补充有10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素的RPMI1640培养基中在37℃在95％加湿空气和5％CO2气氛中培养LHRH-R阳性乳腺癌细胞、MDA-MB231和LHRH-R阴性卵巢癌细胞SKVO3细胞系。JR-L3-TubBH的LRMS-LC/MS迹线显示于图7中。
方案10.S0456马来酰亚胺的合成.试剂和条件：a)KOH，H2O，室温-100℃；b)HATU，无水DIPEA，无水DMF，室温。S0456马来酰亚胺的LC/MS迹线显示于图8中。
方法实施例
方法实施例1.JL-L1-S0456,JL-L2-S0456,JL-L3-S0456
细胞培养：在补充有10％胎牛血清、1％2mM谷氨酰胺和1％青霉素-链霉素的RPMI1640培养基中在37℃5％CO2和95％加湿气氛中作为单层培养MDA-MB231乳腺癌细胞、HEC-1B子宫内膜癌细胞和OVCAR-3卵巢癌细胞。MDA-MB231细胞为经培养冷冻原种(stock)，而HEC-1B和OVCAR-3细胞购自ATCC。
荧光显微镜检查：将所有三种细胞接种，并使其经48小时在腔室盖玻片中生长成单层。在存在或不存在过量JL-L3的情况下，用100mM浓度的缀合物替换用过的培养基，并在37℃温育1小时。在温育后，用新鲜培养基洗涤细胞三次，以去除未结合的荧光缀合物。向细胞加入新鲜培养基(0.5ml)，并通过荧光显微镜(Nikon 90i)采集图像。
结合测定：将100,000个MCF7细胞接种到24孔板中，并使其经48小时生长成单层。在存在或不存在过量的未标记配体的情况下，用含有不同浓度染料缀合物的新鲜培养基替换用过的培养基。在37℃温育1小时后，细胞用新鲜培养基洗涤三次，并使其溶于0.5％SDS。用荧光计测定荧光。在用于体外和体内研究之前，通过HPLC纯化所有最终缀合物。
体外结合亲和力：对乳腺癌细胞MDA-MB231测定荧光缀合物(JL-L3-S0456)的结合亲和力。测定结果显示于图9中。使细胞暴露于不同浓度的NIR染料缀合物(JL-L3-S0456)，并通过检测细胞结合荧光来测定表观Kd。在存在或不存在100倍过量的未标记缀合物的情况下，在37℃将细胞与不同浓度的染料缀合物一起温育1小时。在温育后，洗涤细胞三次，然后溶于1％SDS。通过荧光计测定细胞结合荧光。发现缀合物的表观Kd为3.5nM，而据报道母体配体的Ki为0.19nM。这表明，在配体和NIR染料之间引入接头使靶向配体的结合亲和力保持在低的纳摩尔范围。加入100倍过量的未标记靶向配体(JL-L3)显著降低MDA-MB231与JL-L3-S0456的细胞结合荧光强度。这证实JL-L3-S0456与MDA-MB231细胞的结合是受体介导的。因此，在体外，JL-L3-S0456显示对受体的低纳摩尔结合亲和力和特异性。
动物饲养：从Harlan Laboratories获得5-6周龄的雌性无胸腺nu/nu小鼠。将动物圈养在标准12小时光暗循环中，并随意获得正常的啮齿动物食物和水。所有动物程序得到Purdue动物护理和使用委员会许可。
体内荧光成像和生物分布.为了产生皮下肿瘤异种移植物，将0.2ml无菌PBS中的MDA-MB231、OVCAR-3和HEC-1B 5×106个细胞皮下注射到雌性nu/nu小鼠的右后胁。一旦肿瘤体积达到200mm3至300mm3之间，就开始肿瘤成像。在存在或不存在100倍过量的未标记缀合物的情况下，给各荷瘤小鼠静脉内注射(通过尾静脉)10纳摩尔荧光染料缀合物。在注射后2小时用CO2使动物安乐死，并用Caliper IVIS Luminal II采集图像。在完成全身图像后，收获感兴趣的器官并成像，以检视这些器官中荧光的积累。图像采集参数如下：i)灯水平-高，ii)激发-745nm，iii)发射-ICG，iv)binning(M)4M，(v)f-stop-4，(vi)FOV-12.5，(vii)采集时间，1s。在用于体外和体内研究之前，通过HPLC纯化所有最终缀合物。
为了测定缀合物靶向体内受体阳性肿瘤的效率，给雌性nu/nu无胸腺裸小鼠皮下植入MCF7、MDA-MB231、OVCAR3或HEC-1B。一旦肿瘤达到适合体积，就在存在或不存在过量的未标记靶向分子的情况下，给小鼠静脉内注射染料缀合物(10nmol)。在注射后2小时对小鼠成像，以研究染料缀合物在肿瘤和其它重要器官中的积累。
图10A显示在MCF-7肿瘤异种移植物中JL-L1-S0456染料缀合物的体内摄取。在存在或不存在100倍过量的未标记缀合物的情况下，用染料缀合物静脉内处理小鼠。图10B显示JL-L1-S0456由各种器官的摄取。所有图像均在注射后2小时采集。从顶到底的器官列表：脑、肿瘤、脾脏、肾脏、小肠、大肠、肌肉、皮肤、心脏、肺脏、肝脏和胃。
当在745nm激发时，JL-L1-S0456染料缀合物在肿瘤或任何其它器官中未显示任何摄取，但在640nm激发时，发现荧光主要在肿瘤、肾脏和脑中积累，这被发现为非竞争性的。不旨在受理论束缚，据猜测JL-L1-S0456的这种意外行为有两个原因。在适合条件下，伯胺可置换染料酚基的羟基氧，以在染料和分子的其余部分之间形成C-N键。这种置换可导致染料的激发从745nm移动到640nm。
图11A显示在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L2-S0456染料缀合物的体内摄取。在存在或不存在100倍过量的未标记缀合物的情况下，用染料缀合物静脉内处理小鼠。图11B显示JL-L2-S0456由各种器官的摄取。所有图像均在注射后2小时采集。从顶到底的器官列表：肿瘤、心脏、肺脏、胰腺、脾脏、肌肉、皮肤、小肠、大肠、胃、肝脏和肾脏。
当在体内试验时，JL-L2-S0456显示在乳腺癌肿瘤中受体介导的摄取。还观察到非特异性肾脏和肝脏摄取。不旨在受理论束缚，由于肝脏和肾脏在排泄中起重要作用，因此，在这些器官中的荧光是由于通过肾脏和肝脏途径清除染料缀合物。
图12A显示在MDA-MB231肿瘤异种移植物中JL-L3-S0456染料缀合物的体内摄取。在存在或不存在100倍过量的未标记缀合物的情况下，用染料缀合物静脉内处理小鼠。图12B显示JL-L3-S0456由各种器官的摄取。所有图像均在注射后2小时采集。从顶到底的器官列表：肿瘤、脑、心脏、肺脏、胃、小肠、大肠、肌肉、胰腺、脾脏、肝脏和肾脏。
图13A显示在HEC-1B肿瘤异种移植物中JL-L3-S0456染料缀合物的体内摄取。在存在或不存在100倍过量的未标记缀合物的情况下，用染料缀合物静脉内处理小鼠。图13B显示JL-L3-S0456由各种器官的摄取。所有图像均在注射后2小时采集。从顶到底的器官列表：肿瘤、心脏、肺脏、脾脏、胰腺、肌肉、胃、小肠、大肠、肝脏和肾脏。
图14A显示在OVCAR3肿瘤异种移植物中JL-L3-S0456染料缀合物的体内摄取。在存在或不存在100倍过量的未标记缀合物的情况下，用染料缀合物静脉内处理小鼠。图14B显示JL-L3-S0456由各种器官的摄取。所有图像均在注射后2小时采集。从顶到底的器官列表：肿瘤、心脏、肺脏、脾脏、胰腺、肌肉、胃、小肠、大肠、肝脏和肾脏。
进一步用包含肽聚糖的接头JL-L3-S0456替换PEG接头。在注射后2小时，发现JL-L3-S0456在乳腺癌肿瘤中积累。未标记的靶向缀合物(JL-L3)能够竞争JL-L3-S0456的肿瘤摄取。生物分布研究表明，除肿瘤外，肾脏也表现出高荧光。肿瘤的荧光强度低于肾脏，但肿瘤中染料缀合物的积累是受体介导的，而肾脏的积累是由于染料缀合物通过肾脏途径排泄。在肝脏中观察到没有或非常小的荧光。
时程研究：通过在卵巢癌和子宫内膜异种移植物中注射染料缀合物，进一步检视JL-L3-S0456在受体阳性肿瘤中积累的有效性。在这两种模型中，JL-L3-S0456显示受体介导的摄取，并且发现通过肾脏途径排泄。除肿瘤和肾脏外，其它器官显示的信号很少到没有。为了研究染料缀合物在肿瘤中的保留时间，进行时程研究。给小鼠注射10纳摩尔染料缀合物，并在2小时、8小时和12小时成像。甚至在注射12小时后，也发现肿瘤的荧光强度高，并且与在注射后2小时拍摄的图像比较，只观察到强度很微小地降低。
利用JL-L3-S0456的MDA-MB231肿瘤的时程成像结果显示于图15A中。在注射后2小时、8小时、12小时和24小时拍摄图像，以研究染料缀合物的肿瘤保留。图15B显示在不同时间点观察到的JL-L3-S0456由各种器官的摄取。从顶到底的器官列表：肿瘤、脑、心脏、肺脏、胃、小肠、大肠、脾脏、胰腺、肌肉、皮肤和肝脏。
染料缀合物显示在肿瘤中受体介导的摄取，而肾脏中的摄取不是受体介导的，而是由于缀合物通过肾脏途径排泄。此外，NIR染料还具有较高的组织渗透性，这可以进一步帮助有效切除肿瘤块。总的来讲，小鼠模型中的体内结果支持JR-L3-S0456用于人类的荧光引导手术，以剖析表达LHRH-R的癌细胞。
进一步评价缀合物在人三阴性乳腺癌异种移植物中的体内放射性缀合物的肿瘤靶向效率。
方法实施例2.JL-L1A，JL-L2A，JL-L3A
细胞培养.使乳腺癌MDA-MB231细胞在补充有10％胎牛血清、1％青霉素-链霉素和2mm 1％谷氨酰胺的RPMI培养基中生长为单层。在37℃下5％CO2和95％空气加湿气氛中保持细胞。
动物饲养和体内肿瘤植入.从Harlan laboratories购得雌性无胸腺nu/nu小鼠。将动物圈养在无菌环境，并在12小时光暗循环中保持。动物随意获得啮齿动物食物和水。使2×106个MDA-MB23细胞悬浮于100微升无菌磷酸盐缓冲盐水，并皮下注射到每只小鼠的右胁中。
体外结合测定：将MDA-MB231细胞接种到24孔板中，并使其形成单层。在存在或不存在过量的未标记缀合物的情况下，用含有不同浓度放射性缀合物(JL-L1A或JL-L2A或JL-L3A)的无血清培养基替换用过的培养基。将细胞在37℃温育2小时，然后用培养基冲洗三次。冲洗后，通过向各孔加入0.5ml 0.25N NaOH溶解细胞20分钟。用Packcardγ计数器测定细胞结合放射性，并通过将细胞结合放射性对放射示踪剂浓度绘图，使用Graphpad Prism计算Kd。如图16中所示，在存在或不存在过量的未标记缀合物的情况下，将MDA-MB231细胞与不同浓度的放射性缀合物一起温育。实心圆表示99mTc螯合的缀合物，而空心圆表示竞争。
体内成像和生物分布.所有动物实验均按照Purdue动物护理和使用委员会批准的指南进行。一旦肿瘤体积达到约300-400mm3，就开始实验。肿瘤体积作为0.5×L×W2测定，其中L为最长轴，W为垂直于L的轴，以mm计。在侧尾静脉中，给小鼠注射100μl无菌磷酸盐缓冲盐水中的150μCi放射性缀合物(在存在或不存在过量的未标记缀合物的情况下)。对于成像，在注射后2小时通过CO2窒息使小鼠安乐死，并用Kodak Imaging Station成像。在成像后，对动物进行尸体剖检，以去除所选组织并称重。用γ计数器(Packard Gamma Counter)对组织结合放射性进行定量。对于时程研究，在注射后以下时间点处死动物：2小时、4小时、6小时和8小时。称重感兴趣的组织，并用γ计数器对组织结合放射性进行计数。对组织结合放射性的每分钟计数值进行衰减校正，并且转换成％注射剂量/g组织(％ID/g)。用Grpahpad Prism分析数据。
不旨在受理论束缚，所有三种接头均有助于i)最终化合物的亲水性和溶解性，ii)减少缀合物非特异性被动扩散进入缺乏靶向受体的细胞，iii)防止99mTc螯合基团干扰靶向配体的结合。所有三种缀合物均显示超过95％的螯合效率。
为了测定结合亲和力，在存在或不存在未标记缀合物的情况下，在37℃将MDA-MB231细胞与不同浓度的放射性缀合物JL-L1A一起温育2小时。缀合物JL-L3A显示对LHRH-R的低纳摩尔结合亲和力(Kd＝14.39nM)。这表明，由于与间隔物缀合，母体化合物的结合亲和力(Ki＝0.4nM)不受强烈影响，并且仍保持在低纳摩尔范围。不旨在受理论束缚，在过量的竞争配体存在下，细胞结合放射性减小，这表明JL-L3A与MDA-MB231细胞的结合是受体介导的。
JL-L1A、JL-L2A和JL-L3A的体内全身成像和生物分布.为了研究放射性缀合物在LHRH-R阳性肿瘤中的摄取，将所有三种缀合物(150μCi)注射到具有MDA-MB231肿瘤的小鼠的侧静脉。对于竞争研究，给小鼠另外注射100倍过量的未标记缀合物。给荷MDA-MB231肿瘤的小鼠在其侧尾静脉(标记为经治疗的小鼠)注射99mTc螯合的缀合物。给另一组小鼠注射99mTc标记的分子，但存在过量的未标记缀合物。在注射后2小时拍摄图像。图17A表示JL-L1A的全身成像，而图17B和图17C分别表示JL-L2A和JL-L3A的全身成像(n＝5)。所有三种放射性缀合物均显示在肿瘤中受体介导的摄取。JL-L1A在肿瘤中显示最高摄取，但也显示在其它重要器官中的摄取。相反，JL-L2A和JL-L3A在肾脏中显示最高摄取，但这不与未标记缀合物的共同给予竞争。缀合物的肾脏中的非特异性摄取和肝脏摄取表明分子通过肾脏和肝脏途径而消除。除了肾脏、肝脏和肿瘤外，JL-L2A还在脾脏中显示出显著的非特异性摄取，但给予JL-L3A只观察到最小的活性。
为了进一步研究99mTc螯合的JL-L3A的保留，将放射性缀合物注射给具有MDA-MB231异种移植物的小鼠。在注射后2小时、4小时和8小时使动物安乐死之后，对动物进行成像，并计数与感兴趣的器官相关的放射性。时间依赖性成像显示，注射后8小时肿瘤的放射性强度降低到小于注射后2小时强度的一半。如图18中所示，在4小时的时间依赖性生物分布与注射后2小时的生物分布相似。给荷MDA-MB231肿瘤的小鼠在其侧尾静脉(标记为治疗的小鼠)注射99mTc螯合的缀合物。给另一组小鼠注射99mTc标记的分子，但存在过量的未标记缀合物。在注射后2小时测定所有主要器官和血液的放射性，并绘制百分数注射剂量/g组织。图18A表示JL-L1A的生物分布，而图18B和图18C分别表示JL-L2A和JL-L3A的生物分布(n＝5)。误差条指示标准偏差。
图19A、B和C分别显示在注射后2小时、4小时和8小时JL-L1A的体内全身成像和生物分布。通过尾静脉内注射给荷MDA-MB231肿瘤的小鼠注射150μCi 99mTc螯合的JL-L1A。在注射后2小时、4小时和8小时使小鼠安乐死，并成像。对于生物分布，剖析感兴趣的器官，并用γ闪烁计数器对放射性进行计数。如图19D中所示，对各个器官绘制百分数注射剂量/g组织。误差条指示标准偏差。
在所有器官中观察到放射性的时间依赖性降低。所有三种缀合物均显示在肿瘤中受体介导的积累，但JL-L3A显示在注射后2小时最有利地的生物分布。在注射后4小时和8小时JL-L3A的组织分布显示与注射后2小时相同的模式。缀合物的肾脏和肝脏摄取为非特异性，并且为分子的肾脏和肝脏清除的结果。与LHRH-R靶向肽比较，JL-L3A具有优良的化学稳定性、合成容易性和位点特异放射性标记特性。
方法实施例3.L-L2-若丹明，JR-L3，JR-L3-TubBH
共焦显微镜检查：将50,000个MDA-MB231和SKVO3人癌细胞接种到腔室盖玻片的各孔中，并使其经48小时生长以汇合。用0.5mLFBS新鲜培养基替换用过的培养基，并在存在或不存在100倍过量JL-L2的情况下与100nM若丹明染料缀合物(JL-L2-若丹明)一起温育。在温育1小时后，细胞用温育溶液洗涤三次，然后用0.5ml培养基替换。用Olympus共焦显微镜检查采集图像。
体外测定细胞成活力.将MDA-MB231和SKVO3细胞以100,00个细胞/孔的浓度接种在24孔板上，并使其以单层生长。去除用过的培养基，在无FBS培养基中100倍过量的JL-L3存在或不存在的情况下，将细胞与不同浓度的JL-L3-TubBH一起温育。在37℃温育2小时后，用新鲜培养基冲洗细胞三次，然后在37℃在0.5ml新鲜培养基中温育另外66小时。然后用0.5ml含有3H-胸苷的培养基替换用过的培养基，并温育另外4小时。然后用新鲜培养基再次洗涤细胞三次，然后在室温与0.5ml 2.5％三氯乙酸一起温育10分钟。在去除三氯乙酸后，使细胞溶于0.25N NaOH。通过用闪烁计数器(Packard,Packard Instrument Company)对细胞中3H-胸苷的掺入计数，测定细胞成活力。IC50值来源于使用Graph Pad Prism 4的3H-胸苷掺入百分数对log浓度的绘图。
动物饲养：从Harlan laboratories购得无胸腺nu/nu小鼠。将小鼠圈养在基于标准12小时光暗循环的无菌环境,并维持正常啮齿动物食物。所有动物程序均由Purdue动物护理和使用委员会根据美国国立卫生研究院指南批准。
肿瘤模型和疗法：给5-6星期大的雌性nu/nu无胸腺裸小鼠向肩部内皮下注射5.0×106个乳腺癌细胞MDA-MB231和卵巢癌细胞SKVO3。用Vernier卡尺每星期3次在两个垂直方向测量肿瘤，它们的体积作为0.5×L×W2计算，其中L为最长轴(以毫米计)，W为垂直于L的轴(以毫米计)。一旦肿瘤体积达到～100mm3，就开始治疗。在无菌盐水中制备给药溶液，并静脉内注射。在存在或不存在100倍过量的JL-L3或盐水的情况下，每只小鼠接受2μmol/kg的JL-L3-TubBH。每星期3次对小鼠给予试验试剂，持续3个星期，并且在每次给药的同时给小鼠称重，作为总毒性的量度。
若丹明染料缀合物的结合和内化：在MDA-MB231和SKOV3细胞中试验LHRH-R靶向若丹明缀合物，以评价染料缀合物的结合和内化。为此，在存在或不存在过量JL-L2的情况下，将癌细胞与不同浓度的若丹明染料缀合物(JL-L2-若丹明)一起温育1小时。在洗掉过量的染料缀合物后，通过共焦显微镜检查来检查细胞。
在存在或不存在100倍过量的JL-L3的情况下，将细胞与100nM的JL-L3-若丹明一起温育。在1小时后，洗涤细胞三次，并用共焦显微镜拍摄白光和荧光图像。观察到若丹明缀合物存在于MDA-MB231细胞的细胞内部和表面上，而在SKOV3细胞中未观察到摄取，如图20中所示。
微管溶素B酰肼缀合物的体外细胞毒性：为了检视治疗缀合物的杀死效率，在存在或不存在过量JL-L3的情况下，将MDA-MB231和SKOV3癌细胞与不同浓度的JL-L3-TubBH在37℃一起温育2小时。在洗掉过量的缀合物后，将细胞在新鲜培养基中温育另外66小时，随后用含有3H-胸苷的培养基温育，以评价细胞成活力。放射性用PerkinElmer的闪烁计数器计数。在细胞暴露于游离微管溶素B酰肼后，重复相同的程序。发现癌细胞系MDA-MB231和SKOV3二者均对游离的微管溶素B酰肼敏感，分别显示67pM和5pM的IC50值，如图21中所示。在受体阳性的MDA-MB231细胞中，靶向缀合物(JL-L3-TubBH)显示26nM的IC50值，而在存在过量的竞争配体的情况下，效价剧烈下降到382nM。当发现从受体阴性细胞系得到的IC50值类似于MDA-MB231竞争(608nM)时，进一步证实靶向缀合物的受体介导细胞杀死能力。
微管溶素B酰肼缀合物的体内效力：为了研究JL微管溶素缀合物的效力，将荷LHRH-R阳性肿瘤(MDA-MB-231，乳腺癌)的nu/nu无胸腺裸小鼠随机分成三组：盐水对照、靶向和竞争，然后每星期3天用试验试剂治疗3星期。将LHRH-R阳性(MDA-MB-231)和阴性(SKOV3)癌细胞s.c植入nu/nu无胸腺小鼠，并且一旦肿瘤体积达到～100mm3，就开始治疗。将小鼠随机分成几组，每组5只小鼠。对照组小鼠中的接受盐水，而竞争和治疗组中的小鼠分别在存在或不存在100倍过量的JL-L3的情况下接受2μmol/kg的JL-L3-TubBH，每星期3次，持续3星期。通过尾静脉静脉内给予所有试验试剂。对照组和竞争组中的小鼠在最后的给药后安乐死，而对治疗组中的小鼠连续监测肿瘤复发和重量损失。接受靶向微管溶素B酰肼缀合物(JL-L3-TubBH)的荷MD-MB-231肿瘤的小鼠显示肿瘤完全消除，而接受盐水的小鼠未显示任何抗肿瘤作用。同样，与对照组比较，竞争组中的小鼠未显示肿瘤生长的任何减退。(图22A，虚线垂直线表示最终给药日(第36天))。不旨在受理论束缚，这进一步证实靶向微管溶素B酰肼缀合物的效力是受体介导的。另外，为了全面地试验靶向缀合物(JL-L3-TubBH)的抗肿瘤效力，将荷LHRH-R阴性肿瘤(SKOV3，卵巢癌)的小鼠与荷MDA-MB-231肿瘤小鼠相似地分组，并遵循相似的治疗方案。在荷受体阴性肿瘤的靶向组和对照组小鼠中没有观察到肿瘤体积减小(图22C)。不旨在受理论束缚，这些数据进一步加强：JL-L3-TubBH诱导的细胞毒性是受体介导的。荷MDA-MB-231或SKVO3的小鼠都没有经历显著的重量损失(22B&22D)。
在完成治疗后，监测MDA-MB-231靶向组中的小鼠，并在接下来的五个星期保持常规饮食。在此时间段内，每星期三次监测肿瘤体积和重量(图23)。用LHRH-R靶向微管溶素B酰肼缀合物(JR-L3-TubBH)处理小鼠，每星期三次，持续3星期(n＝5)。在研究完成后，连续监测肿瘤体积和小鼠重量，直至肿瘤植入后75天。虚线垂直线指定给药的最后一天。小鼠都没有表现出任何肿瘤生长和重量损失的迹象。该数据表明，LHRH-R靶向微管溶素B酰肼缀合物(JL-L3-TubBH)可治疗表达LHRH-R的癌症。
概括地讲，本研究证明了缀合到用于对LHRH-R的非肽小分子配体的细胞毒性药物的效力。该靶向缀合物能够消除受体阳性肿瘤，并且在药物的最后给药后至少五星期未观察到肿瘤复发。在竞争组或对照组中未观察到对小鼠的肿瘤效力。在用LHRH-R靶向微管溶素缀合物治疗时，受体阴性肿瘤未显示肿瘤体积的任何减小。不旨在受理论束缚，相信靶向微管溶素B缀合物的效力是受体介导的。在疗程中，没有观察到可观察的重量损失，这表明通过缀合到适合的靶向配体，可显著减小与游离药物相关的副作用。因此，这项研究的结果提供了支持LHRH-R靶向细胞毒性缀合物用于治疗表达LHRH-R的癌症的用途的数据。
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应理解，关于要素的不定冠词“一”和“一个”的使用不排除在一些实施方案中多个这样的要素的存在。
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应理解，附加权利要求中所述的要素和特征可以不同方式组合，以产生同样落入本发明范围内的新权利要求。因此，尽管下面附加的从属权利要求只从属于单个独立或从属权利要求，但应理解，这些从属权利要求可备选地成为在替代方案中从属于任何在前的权利要求(无论是独立还是从属)，并且这种新组合应理解为形成本说明书的一部分。

Claims (75)

1.式B-L-A的缀合物或其药学上可接受的盐，其中B为下式的LHRH-R结合性拮抗剂
其中
各R1独立为卤素、C1-C6烷基或-OC1-C6烷基；
各R2独立为H、C1-C6烷基或C3-C6环烷基；
R3为C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基或C1-C6烷基-(C6-C10芳基)；
R4为C1-C6烷基；
各R5独立选自卤素、C1-C6烷基、-OC1-C6烷基、-SC1-C6烷基和-OC6-C10芳基；
X和Y各自独立为N、CH或CR1；其条件为当X为N时，Y为CH或CR1，且当Y为N时，X为CH或CR1；
m为0至4的整数；
n为0至3的整数；并且
*表示到L的共价键；
L为接头；并且
A为药物或显像剂。
2.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，所述缀合物具有下式：
3.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中n为2。
4.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中m为0。
5.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中各R1在存在的情况下为F。
6.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中各R1在存在的情况下为F，处于各R1连接到的环的2-和6-位。
7.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中各R2为H。
8.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中R3为C1-C6烷基-(C6-C10芳基)。
9.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中R3为-CH2-C6H5。
10.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中R4为甲基。
11.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中各R5，当存在时，为F、Cl、-CH3、-OCH3、-OC6H5或-SC6H5。
12.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中X为N，且Y为CH。
13.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中Y为N，且X为CH。
14.权利要求1中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中X为CR1，且Y为CH或CR1。
15.权利要求14的缀合物，其中X为-CF，且Y为CH。
16.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中B具有下式
其中*表示到L的共价键。
17.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含至少一个氨基酸。
18.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含至少一个选自Lys、Asn、Thr、Ser、Ile、Met、Pro、His、Gln、Arg、Gly、Asp、Glu、Ala、Val、Phe、Leu、Tyr、Cys和Trp的氨基酸。
19.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含至少两个独立选自Glu和Cys的氨基酸。
20.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含式Glu-Glu的氨基酸部分，其中所述谷氨酸通过羧酸侧链相互共价键合。
21.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含一个或多个包含多个羟基官能团的亲水间隔物接头。
22.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含下式的部分
其中p为3至10的整数，q为3至100的整数；并且各*表示到缀合物的其余部分的共价键。
23.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含选自下列的部分：
其中R6为H或C1-C6烷基；并且
各*表示到缀合物的其余部分的共价键。
24.权利要求23的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头具有下式
25.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含选自下列的部分：
其中
R7和R8各自独立为H或C1-C6烷基；
t为1至8的整数；并且
各*表示到缀合物的其余部分的共价键。
26.权利要求25的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头具有下式
27.权利要求25的缀合物或其药学上可接受的盐，其中R7和R8为H；并且t为2。
28.权利要求的缀合物或其药学上可接受的盐，其中接头包含肼。
29.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
30.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
31.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
32.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
33.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
34.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
35.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
36.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
37.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，包含下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
38.权利要求1至37中任一项的缀合物，其中A为选自长春花生物碱、念珠藻素、硼替佐米、硫代硼替佐米、微管溶素(tubulysin)、氨基蝶呤、雷帕霉素、紫杉醇、多西他赛、多柔比星、柔红霉素、依维莫司、α-鹅膏毒素(amanatin)、疣孢菌素(verucarin)、膜海鞘素B、格尔德霉素(geldanomycin)、purvalanol A、伊匹尼塞、布地奈德、达沙替尼、埃坡霉素、美登素和酪氨酸激酶抑制剂的药物。
39.权利要求1至37中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中药物为微管溶素。
40.权利要求1至37中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中药物为下式的四肽：
其中
R1a、R3a、R3a’和R3a”各自独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和C3-C6环烷基，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和C3-C6环烷基中的各氢原子独立地任选被卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基、-OR13a、-OC(O)R13a、-OC(O)NR13aR13a’、-OS(O)R13a、-OS(O)2R13a、-SR13a、-SC(O)R13a、-S(O)R13a、-S(O)2R13a、-S(O)2OR13a、-S(O)NR13aR13a’、-S(O)2NR13aR13a’、-OS(O)NR13aR13a’、-OS(O)2NR13aR13a’、-NR13aR13a’、-NR13aC(O)R14a、-NR13aC(O)OR14a、-NR13aC(O)NR14aR14a’、-NR13aS(O)R14a、-NR13aS(O)2R14a、-NR13aS(O)NR13aR14a’、-NR13aS(O)2NR14aR14a’、-P(O)(OR13a)2、-C(O)R13a、-C(O)OR13a或-C(O)NR13aR13a’取代；
R2a、R4a和R12a各自独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
R5a和R6a各自独立选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-OR15a、-SR15a和–NR15aR15a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR16a、-SR16a、-NR16aR16a’、-C(O)R16a、-C(O)OR16a或-C(O)NR16aR16a’取代；或者R5a和R6a与它们所连接的碳原子一起形成–C(O)-；
各R7a、R8a、R9a、R10a和R11a独立选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-CN、-NO2、-NCO、-OR17a、-SR17a、-S(O)2OR17a、–NR17aR17a’、-P(O)(OR17a)2、-C(O)R17a、-C(O)OR17a和-C(O)NR17aR17a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR18a、-SR18a、-NR18aR18a’、-C(O)R18a、-C(O)OR18a或-C(O)NR18aR18a’取代；
各R13a、R13a’、R14a、R14a’、R15a、R15a’、R16a、R16a’、R17a和R17a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基，其中C1-C7烷基、C2-C7烯基、C2-C7炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基或5至7元杂芳基中的各氢原子独立地任选被卤素、-OH、-SH、-NH2或-CO2H取代；
各R18a和R18a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基-C(O)R19a、-P(O)(OR19a)2和-S(O)2OR19a；
各R19a独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基；
a为1、2或3；并且
*表示到缀合物的其余部分的共价键。
41.权利要求1至37中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中D为下式的四肽：
其中
R1a、R3a、R3a’和R3a”各自独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和C3-C6环烷基，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和C3-C6环烷基中的各氢原子独立地任选被卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基、-OR13a、-OC(O)R13a、-OC(O)NR13aR13a’、-OS(O)R13a、-OS(O)2R13a、-SR13a、-SC(O)R13a、-S(O)R13a、-S(O)2R13a、-S(O)2OR13a、-S(O)NR13aR13a’、-S(O)2NR13aR13a’、-OS(O)NR13aR13a’、-OS(O)2NR13aR13a’、-NR13aR13a’、-NR13aC(O)R14a、-NR13aC(O)OR14a、-NR13aC(O)NR14aR14a’、-NR13aS(O)R14a、-NR13aS(O)2R14a、-NR13aS(O)NR13aR14a’、-NR13aS(O)2NR14aR14a’、-P(O)(OR13a)2、-C(O)R13a、-C(O)OR13a或-C(O)NR13aR13a’取代；
R2a、R4a和R12a各自独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
R5a选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-OR15a、-SR15a和–NR15aR15a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR16a、-SR16a、-NR16aR16a’、-C(O)R16a、-C(O)OR16a或-C(O)NR16aR16a’取代；
各R7a、R8a、R9a、R10a和R11a独立选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-CN、-NO2、-NCO、-OR17a、-SR17a、-S(O)2OR17a、–NR17aR17a’、-P(O)(OR17a)2、-C(O)R17a、-C(O)OR17a和-C(O)NR17aR17a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR18a、-SR18a、-NR18aR18a’、-C(O)R18a、-C(O)OR18a或-C(O)NR18aR18a’取代；
各R13a、R13a’、R14a、R14a’、R15a、R15a’、R16a、R16a’、R17a和R17a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基，其中C1-C7烷基、C2-C7烯基、C2-C7炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基或5至7元杂芳基中的各氢原子独立地任选被卤素、-OH、-SH、-NH2或-CO2H取代；
各R18a和R18a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基-C(O)R19a、-P(O)(OR19a)2和-S(O)2OR19a；
各R19a独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基；
a为1、2或3；并且
*表示到缀合物的其余部分的共价键。
42.权利要求1至37中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中D为下式的四肽：
其中
R9a选自H、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-CN、-NO2、-NCO、-OR17a、-SR17a、-S(O)2OR17a、–NR17aR17a’、-P(O)(OR17a)2、-C(O)R17a、-C(O)OR17a和-C(O)NR17aR17a’，其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基中的各氢原子独立地任选被卤素、–OR18a、-SR18a、-NR18aR18a’、-C(O)R18a、-C(O)OR18a或-C(O)NR18aR18a’取代；
各R13a、R17a和R17a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基，其中C1-C7烷基、C2-C7烯基、C2-C7炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基或5至7元杂芳基中的各氢原子独立地任选被卤素、-OH、-SH、-NH2或-CO2H取代；
各R18a和R18a’独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基、5至7元杂芳基-C(O)R19a、-P(O)(OR19a)2和-S(O)2OR19a；
各R19a独立选自H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-C10芳基和5至7元杂芳基；并且
*表示到缀合物的其余部分的共价键。
43.权利要求1至37中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A为天然存在的微管溶素。
44.权利要求43的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A选自微管溶素A、微管溶素B、微管溶素C、微管溶素D、微管溶素E、微管溶素F、微管溶素G、微管溶素H和微管溶素I。
45.权利要求1至37中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中药物为微管溶素B。
46.权利要求1至37中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A具有下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
47.权利要求1至37中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A具有下式：
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
48.权利要求1至34中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A为显像剂。
49.权利要求1至34中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A为选自若丹明染料、荧光素染料、PET显像剂或放射性标记的试剂的显像剂。
50.权利要求48或49的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A选自S0456、5-羧基四甲基若丹明(5-TAMRA)、若丹明B、若丹明6G、TRITC、德克萨斯红、若丹明123、磺基若丹明101、荧光素、5-氨基荧光素、6-氨基荧光素、荧光素异氰酸酯(FITC)、NHS-荧光素、俄勒冈绿、东京绿、新加坡绿和费城绿。
51.权利要求1至34中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，其中A为与螯合基团配位的放射性同位素，例如金属的放射性同位素。
52.权利要求51的缀合物或其药学上可接受的盐，其中螯合基团具有下式
其中*表示到缀合物的其余部分的共价键。
53.权利要求51的缀合物或其药学上可接受的盐，其中螯合基团包含与其配位的选自锝、铼、镓、钆、铟和铜的同位素的放射性金属同位素。
54.权利要求51的缀合物或其药学上可接受的盐，其中螯合基团包含与其配位的选自111In、99mTc、64Cu、67Cu、67Ga和68Ga的放射性金属同位素。
55.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，所述缀合物选自
56.权利要求55的缀合物或其药学上可接受的盐，其中缀合物包含与其配位的选自111In、99mTc、64Cu、67Cu、67Ga和68Ga的放射性金属同位素。
57.权利要求56的缀合物或其药学上可接受的盐，其中放射性金属同位素为99mTc。
58.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，所述缀合物选自
59.权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，所述缀合物具有下式：
60.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，和任选的至少一种药学上可接受的赋形剂。
61.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：
a.给予受试者有效量的前述权利要求1中任一项的缀合物或组合物，或其药学上可接受的盐。
62.权利要求61的方法，其中受试者患有表达LHRH-R的癌症。
63.权利要求62的方法，其中表达LHRH-R的癌症为原发性或转移性的。
64.权利要求63的方法，其中癌症选自前列腺癌、子宫内膜癌、皮肤癌、胰腺癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌和脑癌。
65.根据权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗受试者的表达LHRH-R的癌症的方法中。
66.权利要求65的缀合物，其中方法包括给予受试者有效于治疗表达LHRH-R的癌症的量的缀合物。
67.权利要求66的缀合物，其中表达LHRH-R的癌症选自前列腺癌、子宫内膜癌、皮肤癌、胰腺癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌和脑癌。
68.根据权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐在制备可用于治疗受试者的表达LHRH-R的癌症的药物中的用途。
69.权利要求68的用途，其中表达LHRH-R的癌症选自前列腺癌、子宫内膜癌、皮肤癌、胰腺癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌和脑癌。
70.一种使细胞群体外成像的方法，所述方法包括：
a.使细胞与根据权利要求1的缀合物接触，以提供经标记细胞；和
b.使经标记细胞可视化。
71.权利要求1的缀合物，其用于使细胞群体外成像的方法中。
72.权利要求71的缀合物，其中所述方法包括
a.使细胞与根据权利要求1的缀合物接触，以提供经标记细胞；和
b.使经标记细胞可视化。
73.一种使细胞群体内成像的方法，所述方法包括：
a.给予患者有效量的根据前述权利要求1中任一项的缀合物或其药学上可接受的盐，以提供经标记细胞；和
b.通过成像使经标记细胞可视化。
74.前述权利要求1中任一项的缀合物，其用于使细胞群体外成像的方法中。
75.权利要求74的缀合物，其中所述方法包括
a.给予患者有效量的根据权利要求1的缀合物或其药学上可接受的盐，以提供经标记细胞；和
b.通过成像使经标记细胞可视化。
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