CN106999519B - 生发和育发促进剂以及它们的利用 - Google Patents
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Abstract
根据本发明，能够提供含有卵黄蛋白水解物作为有效成分的生发促进剂。由于卵黄蛋白水解物是来源于天然物的安全的物质，因此能够广泛作为可日常摄取的饮食品、药物、饲料、补充剂、食品添加剂等使用。此外，本发明在可口服摄取这一点上是非常优良的。
Description
技术领域
本发明涉及生发促进剂及其利用。另外，本发明涉及生发促进方法。
背景技术
因年龄增加、遗传因素、社会压力等原因所致的脱发症而苦恼的人很多，正在对促进生发的育发剂、防止脱发的抗脱发剂等进行各种开发。
例如，已知含有具有特定序列的大豆蛋白来源的肽作为有效成分的抗脱发剂(专利文献1)。
另一方面，本申请发明人从以前就对卵黄蛋白水解物的功能进行了研究，发现了抗氧化作用(专利文献2)、骨强化作用(专利文献3)、软骨细胞增殖促进作用(专利文献4)等。但是，未报道过卵黄蛋白水解物的生发促进作用，抗氧化作用、骨强化作用或软骨细胞增殖促进作用与生发促进作用也没有任何相关性。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2008-247874号公报
专利文献2：日本特开2001-328919号公报
专利文献3：国际公开第WO2006/075558号
专利文献4：国际公开第WO2014/007318号
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的目的在于提供卵黄蛋白水解物的新用途。
用于解决问题的方法
为了解决上述问题，本发明包含下述各发明。
[1]一种生发促进剂，其特征在于，含有卵黄蛋白水解物作为有效成分。
[2]如[1]所述的药剂，其特征在于，具有促进毛乳头细胞的生长因子产生的作用。
[3]如[2]所述的药剂，其特征在于，生长因子为选自由血管内皮细胞生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子-7(FGF-7)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组成的组中的一种以上。
[4]如[1]～[3]中任一项所述的药剂，其特征在于，其为口服剂。
[5]一种药物，其为用于促进生发的药物，其含有[1]～[3]中任一项所述的药剂。
[6]一种补充剂，其为用于促进生发的补充剂，其含有[1]～[3]中任一项所述的药剂。
[7]一种食品添加剂，其为用于促进生发的食品添加剂，其含有[1]～[3]中任一项所述的药剂。
[8]卵黄蛋白水解物在制造生发促进剂中的应用。
[9]一种非治疗性的生发促进方法，其特征在于，使需要促进生发的人口服摄取卵黄蛋白水解物。
本发明进一步包含下述各发明。
[10]一种生发促进方法，其特征在于，对需要促进生发的动物给用[1]～[3]中任一项所述的药剂的有效量。
[11][1]～[3]中任一项所述的药剂在生发促进中的应用。
[12]如[1]～[3]中任一项所述的药剂，其用于生发促进。
[13]一种特定保健用食品、补充剂、营养辅助食品或功能性食品，其包含显示出以生发促进为概念的宗旨的[1]～[3]中任一项所述的药剂。
发明效果
根据本发明，能够提供含有卵黄蛋白水解物作为有效成分的生发促进剂。由于卵黄蛋白水解物是来源于天然物的安全的物质，因此能够广泛作为可日常摄取的饮食品、药物、饲料、补充剂、食品添加剂等使用。此外，本发明在可口服摄取这一点上是非常优良的。
附图说明
图1是示出实施例1中制造的卵黄蛋白水解物的利用凝胶过滤色谱法进行的分子量分析的结果的图。
图2是示出卵黄蛋白水解物混合饲料口服摄取第17天时的小鼠被毛再生面积的结果的图。
图3是示出将普通饲料或卵黄蛋白水解物混合饲料口服摄取第17天时的小鼠背部被毛的情况进行比较的结果的图。
图4是示出卵黄蛋白水解物的毛乳头细胞的VEGF产生促进效果的图。
图5是示出由卵黄蛋白水解物产生的毛乳头细胞的FGF-7mRNA表达增加效果的图。
图6是示出由卵黄蛋白水解物产生的毛乳头细胞的IGF-1mRNA表达增加效果的图。
图7是示出将普通饲料或卵黄蛋白水解物混合饲料口服摄取第14天时的诱导了毛发周期静止期的小鼠背部被毛的情况进行比较的结果的图。
具体实施方式
本发明提供含有卵黄蛋白水解物作为有效成分的生发促进剂。
卵黄蛋白水解物只要是将卵黄蛋白水解而得到的物质即可。作为卵黄蛋白水解物的原料使用的卵黄可以列举鸡、鸭、鹌鹑等的卵黄，从生产率的观点出发，优选使用鸡的卵黄。卵黄可以使用卵黄液、卵黄粉末、脱脂卵黄粉末等，其中优选使用卵黄粉末、脱脂卵黄粉末。另外，从资源的有效利用和成本的观点出发，优选使用在从卵黄制造卵黄油、卵黄卵磷脂时作为副产物产生的脱脂卵黄。卵黄的脱脂处理优选通过使食品加工中可使用的有机溶剂(例如乙醇、异丙醇、己烷等中的至少一种)作用于卵黄来实施。通常，通过在卵黄中添加这些溶剂、搅拌后收集生成的固体物质来进行。可以将该操作重复进行多次。从简便性和安全性的观点出发，优选使用乙醇。
为了将卵黄蛋白水解而使用的蛋白水解酶没有特别限定，优选具有蛋白酶活性或羧肽酶活性且可用于食品制造的酶。可以列举例如胃蛋白酶(EC.3.4.23.1)、胰蛋白酶(EC.3.4.21.4)、肾素(EC.3.4.23.15)、含有肾素的乳酪用途的粗制凝乳酶、羧肽酶A(EC.3.4.17.1)、芽孢杆菌属细菌来源的蛋白酶(商品名“アルカラーゼ”诺维信公司制、商品名“オリエンターゼ22BF”HBI株式会社制、商品名“ヌクレイシン”HBI株式会社制、商品名“プロテアーゼS‘アマノ’G”天野酶制品株式会社制、商品名“サモアーゼPC10”大和化成株式会社制等)、曲霉属曲霉菌来源蛋白酶(商品名“オリエンターゼONS”HBI株式会社制、商品名“オリエンターゼ20A”HBI株式会社制、商品名“プロテアーゼP‘アマノ’3G”天野酶制品株式会社制、商品名“フレーバーザイム”诺维信公司制等)等。蛋白水解酶可以仅使用一种，也可以组合使用两种以上。优选为芽孢杆菌属细菌来源的蛋白酶、胃蛋白酶或它们的组合。
蛋白水解酶的浓度根据所使用的原料卵黄和酶进行适当变动，在原料使用脱脂卵黄的情况下，酶与脱脂卵黄的质量比优选约1:20至约1:1000的范围。另外，酶反应温度、反应时间也根据所使用的原料卵黄和酶而不同，优选在约25℃～约75℃下进行约1小时～约24小时的水解。
所得到的卵黄蛋白水解物可以适当脱盐后直接使用。另外，也可以通过利用超滤膜、凝胶过滤、各种柱层析、膜滤器、等电点的方法等进行纯化、分级后使用。纯化、分级后的卵黄蛋白水解物具有生发促进作用这一点例如可以通过实施例2、3中记载的方法等来确认。
所得到的卵黄蛋白水解物在利用凝胶过滤色谱法进行的分子量分布分析中，相对于蛋白质、肽、氨基酸的合计的面积比，分子量约100以上且约20000以下的部分的面积比优选占约65％以上，更优选上述面积比占约75％以上，进一步优选上述面积比占约85％以上，进一步优选上述面积比占约90％以上。
另外，作为更优选的卵黄蛋白水解物，可以列举如下的卵黄蛋白水解物：其为通过使用分子量1000的超滤膜的分级而得到的卵黄蛋白水解物，其中，在利用凝胶过滤色谱法的分子量分布分析中，相对于蛋白质、肽、氨基酸的总面积比，分子量约500以上且约20000以下的部分的面积比占约85％以上、优选占约90％以上。
如此得到的卵黄蛋白水解物具有生发促进作用、育发促进作用、养发作用、抗脱发作用等，因此能够适合用作生发促进剂、育发促进剂、养发剂、抗脱发剂等的有效成分。本发明的生发促进剂可以改称为育发促进剂、养发剂、抗脱发剂。
本发明的生发促进剂中，卵黄蛋白水解物的含量没有特别限定，优选含有约0.05质量％～约50质量％的卵黄蛋白水解物，更优选含有约0.1质量％～约25质量％。另外，卵黄蛋白水解物的每1天的给药量根据给药对象而不同，例如在对象为成人的情况下，通常为约0.05mg/天～约2000mg/天，优选为约0.1mg/天～约1000mg/天。
本发明的生发促进剂能够促进毛乳头细胞的生长因子产生。生长因子没有特别限定，可以列举例如血管内皮细胞生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子-7(FGF-7)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等，优选为选自由VEGF、FGF-7和IGF-1组成的组中的一种以上，进一步优选为VEGF、FGF-7和IGF-1。本发明的生发促进剂可以改称为毛乳头细胞的生长因子产生促进剂、毛乳头细胞的血管内皮细胞生长因子(VEGF)产生促进剂、毛乳头细胞的成纤维细胞生长因子-7(FGF-7)产生促进剂、毛乳头细胞的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)产生促进剂。
本发明的生发促进剂可以通过口服或非口服中的任意一种途径对哺乳动物进行给药。作为口服剂，可以列举颗粒剂、散剂、片剂(包含糖衣片)、丸剂、胶囊剂、糖浆剂、乳剂、悬浊剂等。作为非口服剂，可以列举注射剂(例如皮下注射剂、静脉内注射剂、肌肉内注射剂、腹腔内注射剂)、点滴剂、外用剂(例如经鼻给药制剂、经皮制剂、软膏剂)、栓剂(例如直肠栓剂、阴道栓剂)等。这些制剂可以利用本领域中通常进行的方法使用药学上容许的载体进行制剂化。作为药学上容许的载体，可以列举赋形剂、粘结剂、稀释剂、添加剂、香料、缓冲剂、增稠剂、着色剂、稳定剂、乳化剂、分散剂、助悬剂、防腐剂等，例如可以使用碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、砂糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等作为载体。
口服用的固体剂(片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂等)可以优选将有效成分与例如赋形剂(乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、微晶纤维素、淀粉等)、粘结剂(羟丙基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、偏硅酸铝酸镁等)、崩解剂(纤维素乙醇酸钙等)、润滑剂(硬脂酸镁等)、稳定剂、助溶剂(谷氨酸、天冬氨酸等)等添加剂混合，按照常法进行制剂化。根据需要，可以用包衣剂(白糖、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯等)进行包覆，或者可以用两个以上的层进行包覆。
口服用的液剂(水剂、悬浊剂、乳剂、糖浆剂、酏剂等)通过将有效成分溶解、悬浊或乳化到通常使用的稀释剂(纯化水、乙醇或它们的混合液等)中来进行制剂化。该液剂可以进一步含有润湿剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、风味剂、芳香剂、保存剂、缓冲剂等。
作为非口服剂，可以列举例如皮肤外用剂。皮肤外用剂可以应用于液剂、霜剂、软膏剂、凝胶剂、气溶胶剂等，只要是适合于外用的剂型，则不限定于这些。
皮肤外用剂中，可以根据需要配合水、低级醇、助溶剂、表面活性剂、乳化稳定剂、凝胶化剂、粘合剂、以及为了得到所期望的剂型而通常使用的基剂成分，也可以根据使用目的在不损害本发明效果的范围内适当配合血管扩张剂、肾上腺皮质激素、保湿剂、杀菌剂、清凉剂、维生素类、香料、色素等。
作为非口服剂，可以列举例如注射剂。注射剂包含溶液、悬浊液、乳浊液和使用时溶解或悬浊于溶剂中来使用的固体的注射剂。注射剂通过将有效成分溶解、悬浊或乳化于溶剂中来进行制剂化。作为溶剂，例如可以使用注射用蒸馏水、生理盐水、植物油、丙二醇、聚乙二醇、乙醇之类的醇类等和它们的组合。该注射剂中可以进一步含有稳定剂、助溶剂(谷氨酸、天冬氨酸、聚山梨醇酯80(注册商标)等)、助悬剂、乳化剂、无痛化剂、缓冲剂、保存剂等。这些注射剂在最终工序中灭菌或者通过无菌操作法来制造。另外，也可以制造无菌的固体剂、例如冷冻干燥品，在其使用前进行无菌化或者溶解在无菌的注射用蒸馏水或其他溶剂中来使用。
本发明提供用于促进生发的药物。本发明的药物只要含有上述本发明的生发促进剂即可。本发明的药物可以以口服用的固体剂(片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂等)、口服用的液剂等形态实施。这些制剂可以通过与上述同样的方法进行制剂化。
本发明提供用于促进生发的补充剂。本发明的补充剂只要含有上述本发明的生发促进剂即可。本发明的补充剂可以以口服用的固体剂(片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂等)或口服用的液剂等形态实施。这些制剂可以通过与上述同样的方法进行制剂化。
本发明提供添加有用于促进生发的卵黄蛋白水解物或者增加了卵黄蛋白水解物的量的饮食品而非饮食品本身。本发明的饮食品只要含有上述本发明的生发促进剂即可。饮食品包括健康食品、功能性食品、特定保健用食品、患者用食品。饮食品的形态没有特别限定，例如可以制成自然流食、半消化态营养食品或成分营养食品、或者饮料剂等加工形态。作为饮食品的形态，可以列举例如茶饮料、清凉饮料、碳酸饮料、营养饮料、果实饮料、乳酸饮料等饮料、荞麦面、乌冬面、中华面、速食面等面类、糖、糖果、口香糖、巧克力、零食点心、饼干、果冻、果酱、奶油、烘焙糕点、面包等糕点和面包类、鱼糕、火腿、香肠等水产畜产加工食品、加工乳、发酵乳等乳制品、色拉油、天妇罗油、人造奶油、蛋黄酱、起酥油、鲜奶油、调味汁等油脂和油脂加工食品、沙司、调料汁等调味料、咖喱、炖菜、盖饭、粥、菜粥等蒸煮袋食品、冰激凌、沙冰、刨冰等冰制食品等。另外，本发明的饮食品包括显示出以生发促进为概念的宗旨的特定保健用食品、补充剂、营养辅助食品、功能性食品等。另外，本发明的饮食品可以含有乳糖、淀粉、结晶纤维素、磷酸钠等药物用赋形剂。
本发明提供用于促进生发的食品添加剂而非饮食品本身。本发明的食品添加剂只要含有上述本发明的生发促进剂即可。本发明的食品添加剂的形态没有特别限定，可以列举例如液状、糊状、粉末状、鳞片状、颗粒状等。本发明的食品添加剂也包括饮料用的添加剂。本发明的食品添加剂可以基于通常的食品添加剂的制造方法来制造。
本发明提供用于促进生发的饲料。本发明的饲料只要含有上述本发明的生发促进剂即可。作为饲料，可以列举例如牛、马、猪、绵羊、山羊、美洲鸵、羊驼、骆驼、兔、水貂、狐狸、毛丝鼠、鹅、鸭等的家畜用饲料、狗、猫等的宠物用饲料等。本发明的饲料除了在饲料中添加本发明的生发促进剂等以外，可以使用通常的饲料制造方法来加工制造。
作为本发明的生发促进剂的有效成分的卵黄蛋白水解物是存在于食用经验长的卵黄中的成分，因此安全性高，作用温和，可以进行长期的摄取或使用。另外，有效成分的卵黄蛋白水解物为兼具多种作用的多功能成分，通过与用于生发促进而使用的其他有效成分组合使用，可以期待叠加或协同性的效果的提高。作为用于生发促进而使用的其他有效成分，可以列举米诺地尔、非那雄胺等。
本发明包含对需要促进生发的人给用卵黄蛋白水解物的有效量的生发促进方法。另外，还包含使需要促进生发的人口服摄取卵黄蛋白水解物的非治疗性的生发促进方法。需要说明的是，“非治疗性的”是不包括医疗行为、即通过治疗对人体或动物的身体进行处置的行为的概念。
本发明包含对需要促进生发的动物给用本发明的生发促进剂的有效量的生发促进方法。动物没有特别限定，例如可以为人、人以外的哺乳动物等。人以外的哺乳动物没有特别限定，可以列举牛、马、猪、绵羊、山羊、美洲鸵、羊驼、骆驼、兔、水貂、狐狸、毛丝鼠、鹅、鸭等。
本发明包含用于促进生发的本发明的生发促进剂的应用。
本发明包含用于促进生发而使用的本发明的生发促进剂。
[实施例]
以下，通过实施例详细地对本发明进行说明，但本发明并不限定于这些实施例。
[实施例1：卵黄蛋白水解物的制造]
(1)脱脂卵黄的制备
向卵黄粉末1kg中添加乙醇5L，使用混合机搅拌30分钟后，回收固体物质。将该操作重复3次，由卵黄进行脱脂，风干，得到568g的脱脂卵黄粉末。
(2)卵黄蛋白水解物的制备
向(1)中得到的脱脂卵黄粉末500g中添加水2.5kg和诺维信公司制的アルカラーゼ(商品名、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)来源的蛋白酶)25g，将pH调节为7，在55℃下进行3小时酶反应，然后，通过80℃下15分钟的热处理使酶失活，以3000×g进行20分钟的离心分离，除去不溶物，过滤后，将滤液喷雾干燥，得到约140g的卵黄蛋白水解物。
利用下述条件的凝胶过滤色谱法对所得到的卵黄蛋白水解物进行分子量的分析。
柱：Diol 60(6.0×300mm)(商品名、YMC公司制)
洗脱液：0.2M磷酸钾缓冲液、0.2M NaCl(pH6.9)/乙腈(70:30)
流速：0.7ml/分钟
检测波长：280nm
将分子量分析的结果示于图1。由图1可知，实施例1的卵黄蛋白水解物相对于表示蛋白质、肽、氨基酸的合计的总面积，分子量100以上且20000以下的部分的面积比占约90％。
[实施例2：动物试验(使用C3H小鼠的育发作用的评价)]
小鼠使用日本SLC株式会社处理的SPF C3H/HeN Slc(雄性)。以各试验组的平均体重尽量均等的方式随机地分配个体。小鼠的饲育条件设定为：每笼5只，室温25℃，明暗12小时循环。
购入6周龄的小鼠后，进行1周的预饲育，使其熟悉试验环境。使用安全剃刀剃去达到7周龄的小鼠的背部被毛。
在试验开始前，使小鼠自由地摄取固体饲料CRF-1(东方酵母工业株式会社)作为饲料，摄取公共自来水作为饮用水。
将试验条件示于表1。
[表1]
在剃毛的3天后开始试验。具体而言，使各样本给药组口服摄取将表1记载的量的卵黄蛋白水解物与普通饲料(CRF-1)混合而成的饲料，使阴性对照组口服摄取普通饲料(CRF-1)。
在最终观察日(第17天)，在麻醉后使全部试验组的小鼠安乐死，固定到摄影台上，对剃毛部进行拍摄。根据所拍摄的图像，使用图像分析软件对被毛再生部的面积进行定量化，判定生发促进效果的有无。
将卵黄蛋白水解物混合饲料口服摄取第17天时的小鼠被毛再生面积的结果示于图2。另外，将对普通饲料或卵黄蛋白水解物混合饲料口服摄取第17天时的小鼠背部被毛的情况进行比较而得到的结果示于图3。在卵黄蛋白水解物的口服摄取组中，依赖于卵黄蛋白水解物的摄取量，被毛再生得到促进，在100mg/kg以上观察到显著差异。
[实施例3：细胞试验(使用毛乳头细胞的生长因子的测定)]
(1)血管内皮细胞生长因子(VEGF)产生量的测定
将处于对数增殖期的人头发毛乳头细胞(HFDPC、Cell Applications,Inc.)在毛乳头细胞增殖培养基(PCGM、Cell Applications,Inc.)中制备成3×104个细胞/ml，将1ml接种到24孔板(胶原蛋白包被)中进行预培养。
通过显微镜观察确认细胞的生育状况后，更换全部培养液。
向培养液中添加各样品，开始培养。此时，将卵黄蛋白水解物以达到100mg/ml或500mg/ml的方式溶解于PBS(-)中，分别以相对于培养液总量为1％的方式进行添加(终浓度1mg/ml或5mg/ml)。另外，作为促进VEGF产生的模型药剂，将米诺地尔(Sigma-AldrichCo.LLC.)以达到3mM的方式溶解于乙醇中，以相对于培养液总量为1％的方式进行添加(终浓度30μM)。
培养2天后，使用人VEGF ELISA试剂盒(R&D SYSTEMS)测定培养液中的VEGF浓度。
将结果示于图4。确认到：依赖于卵黄蛋白水解物的添加浓度，由毛乳头细胞分泌到培养液中的VEGF量增加。
(2)成纤维细胞生长因子-7(FGF-7)mRNA表达量的测定
将处于对数增殖期的人头发毛乳头细胞在DMEM培养基(10％血清)中制备成3×104个细胞/ml，将1ml接种到24孔板(胶原蛋白包被)中进行预培养。
除去全部培养液，置换为无血清DMEM培养基。然后，迅速将各样品添加到培养液中，在CO2培养箱内培养2小时。此时，将卵黄蛋白水解物以达到100mg/ml的方式溶解于PBS(-)中，以相对于培养液总量为1％的方式进行添加(终浓度1mg/ml)。另外，作为FGF-7的表达诱导剂，将腺苷(和光纯药工业株式会社制)以达到10mM的方式溶解于DMSO中，以相对于培养液总量为1％的方式进行添加(终浓度100μM)。
除去全部培养液，迅速将细胞溶解于1ml的ISOGEN2(日本基因)中，按照制造公司推荐的操作规程对总RNA进行纯化。将其作为模板，使用PrimeScript RT reagent试剂盒(Takara)，按照制造公司推荐的操作规程来合成cDNA。将该反应液作为模板，使用SYBRPremix EX Taq(Takara)和LightCycler 480(Roche)，分别按照制造公司推荐的操作规程进行实时PCR。将此时使用的引物的碱基序列示于表2。
[表2]
| 正向 | 反向 | |
| FGF-7 | TCTGTCGAACACAGTGGTACCTGAG(序列号1) | AGTACCTTTAGTCCTGTCACCG(序列号2) |
| GAPDH | GCACCGTCAAGGCTGAGAAC(序列号3) | ATGGTGGTGAAGACGCCAGT(序列号4) |
将结果示于图5。表明通过向培养液中添加卵黄蛋白水解物，FGF-7的mRNA量增加。
(3)胰岛素样生长因子(IGF-1)mRNA表达量的测定
将处于对数增殖期的人头发毛乳头细胞在DMEM培养基(10％血清)中制备成3×104个细胞/ml，将1ml接种到24孔板(胶原蛋白包被)中进行预培养。
除去全部培养液，置换为无血清DMEM培养基。然后，迅速将样品添加到培养液中，在CO2培养箱内培养4小时。此时，将卵黄蛋白水解物以达到100mg/ml的方式溶解于PBS(-)中，以相对于培养液总量为1％的方式进行添加(终浓度1mg/ml)。另外，作为IGF-1的表达诱导剂，将腺苷以达到10mM的方式溶解于DMSO中，以相对于培养液总量为1％的方式进行添加(终浓度100μM)。
除去全部培养液，迅速将细胞溶解于1ml的ISOGEN2(日本基因)中，按照制造公司推荐的操作规程对总RNA进行纯化。将其作为模板，使用PrimeScript RT reagent试剂盒(Takara)，按照制造公司推荐的操作规程来合成cDNA。将该反应液作为模板，使用SYBRPremix EX Taq(Takara)和LightCycler 480(Roche)，分别按照制造公司推荐的操作规程进行实时PCR。将此时使用的引物的碱基序列示于表3。
[表3]
| 正向 | 反向 | |
| IGF-1 | TTTCAAGCCACCCATTGACC(序列号5) | GCGGGTACAAGATAAATATCCAAAC(序列号6) |
| GAPDH | GCACCGTCAAGGCTGAGAAC(序列号3) | ATGGTGGTGAAGACGCCAGT(序列号4) |
将结果示于图6。表明通过向培养液中添加卵黄蛋白水解物，IGF-1的mRNA量增加。
[实施例4：动物试验(使用C57BL/6小鼠的生长期诱导作用的评价)]
小鼠使用日本查尔斯河株式会社处理的C57BL/6(雌性)。以各试验组的平均体重尽量均等的方式随机地分配个体。小鼠的饲育条件设定为：每笼5只，室温25℃，明暗12小时循环。
购入6周龄的小鼠后，进行1周的预饲育，使其熟悉试验环境。使用市售的除毛膏对达到7周龄的小鼠的背部被毛进行脱毛。
在试验开始前，使小鼠自由地摄取固体饲料CRF-1(东方酵母工业株式会社)作为饲料，摄取公共自来水作为饮用水。
将试验条件示于表4。
[表4]
| 划分 | 试验组 | 摄取量(mg/kg) | 只数 |
| 阴性对照 | 酪蛋白混合饲料 | 100 | 5 |
| 样本 | 卵黄蛋白水解物混合饲料 | 100 | 5 |
7周龄的C57BL/6小鼠的毛发周期处于静止期，但由于脱毛刺激而逐渐转移至生长期。在自脱毛起3天后开始试验。具体而言，使各样本给药组口服摄取将表4记载的量的卵黄蛋白水解物与普通饲料(CRF-1)混合而成的饲料，使阴性对照组口服摄取混合有酪蛋白的普通饲料(CRF-1)。
在最终观察日(给药第9天)，在麻醉后使全部试验组的小鼠安乐死，利用电动剃刀将背部皮肤剃毛，摘取正中线的两侧的皮肤(从耳根起靠下侧)。将摘取的皮肤固定到10％中性缓冲福尔马林液中，制作与体轴平行的4μm的石蜡切片，进行HE染色。此时，对各组观察500个毛囊，计测处于成熟的生长期(Anagen VI)的毛囊的频率。
在卵黄蛋白水解物的口服摄取组中，与酪蛋白的口服摄取组相比，处于Anagen VI的毛囊的频率增加。由此表明，卵黄蛋白水解物通过口服摄取来诱导生长期毛囊的成熟化，显示出生发促进作用。
[实施例5：动物试验(在由男性激素所致的静止期诱导中的育发作用的评价)]
小鼠使用日本查尔斯河株式会社处理的C57BL/6(雌性)。以各试验组的平均体重尽量均等的方式随机地分配个体。小鼠的饲育条件设定为：每笼3只，室温25℃，明暗12小时循环。
购入6周龄的小鼠后，进行1周的预饲育，使其熟悉试验环境。使用市售的除毛膏对达到7周龄的小鼠的背部被毛进行脱毛。
在试验开始前，使小鼠自由地摄取固体饲料CRF-1(东方酵母工业株式会社)作为饲料，摄取公共自来水作为饮用水。
7周龄的C57BL/6小鼠的毛发周期处于静止期，但由于脱毛刺激而逐渐转移至生长期。因此，为了抑制这样的毛发周期的转移，从脱毛后开始进行男性激素的给用。具体而言，将二氢睾酮(DHT)以达到2mg/ml的方式溶解于含有20质量％乙醇的磷酸缓冲生理盐溶液中，每隔一天在脱毛部的皮下注射100μl。另外，从脱毛2天后开始给予表5所示的混合饲料，使其自由地摄取饲料。
[表5]
| DHT给药 | 试验组 | 混合率 | 只数 |
| 无 | 酪蛋白混合饲料 | 2质量％ | 3 |
| 有 | 酪蛋白混合饲料 | 2质量％ | 3 |
| 有 | 卵黄蛋白水解物混合饲料 | 2质量％ | 3 |
在最终观察日(给药第14天)，将全部试验组的小鼠在麻醉下固定到摄影台上，对脱毛部进行拍摄。如图7所示，在未给用DHT的酪蛋白混合饲料组中，背面变化为黑色，确认到毛发生长，但由于DHT的给药而抑制了这样的黑色化。另一方面，与给用DHT的酪蛋白混合饲料组相比，在卵黄蛋白水解物混合饲料组中，皮肤黑色化的部位增加，观察到毛发生长。由此表明，通过卵黄蛋白水解物的口服摄取，诱导了从静止期向生长期的转移，毛发生长得到促进。
需要说明的是，本发明并不限定于上述各实施方式和实施例，可以在权利要求所示的范围内进行各种变更，将不同实施方式中分别公开的技术手段适当组合而得到的实施方式也包含在本发明的技术范围内。
产业上的可利用性
本发明作为生发促进剂有用。
Claims (8)
1.卵黄蛋白水解物在制造生发或育发促进剂中的应用，其中，所述卵黄蛋白水解物是利用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)来源的碱性蛋白酶进行水解而得到的。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，生发或育发促进剂具有促进毛乳头细胞的生长因子产生的作用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，生长因子为选自由血管内皮细胞生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子-7(FGF-7)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组成的组中的一种以上。
4.如权利要求1～3中任一项所述的应用，其特征在于，生发或育发促进剂为口服剂。
5.如权利要求1～3中任一项所述的应用，其特征在于，生发或育发促进剂包含在用于促进生发或育发的药物中。
6.如权利要求1～3中任一项所述的应用，其特征在于，生发或育发促进剂包含在用于促进生发或育发的补充剂中。
7.如权利要求1～3中任一项所述的应用，其特征在于，生发或育发促进剂包含在用于促进生发或育发的食品添加剂中。
8.如权利要求1～3中任一项所述的应用，其特征在于，生发或育发促进剂包含在显示出以生发或育发促进为概念的宗旨的特定保健用食品、补充剂、营养辅助食品或功能性食品中。
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