CN106995853B - 筛选与少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法 - Google Patents
筛选与少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106995853B CN106995853B CN201710344852.6A CN201710344852A CN106995853B CN 106995853 B CN106995853 B CN 106995853B CN 201710344852 A CN201710344852 A CN 201710344852A CN 106995853 B CN106995853 B CN 106995853B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- duckweed
- growth
- microsatellite
- leaf
- reference material
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 244000207740 Lemna minor Species 0.000 title claims abstract description 45
- 235000006439 Lemna minor Nutrition 0.000 title claims abstract description 45
- 230000012010 growth Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 24
- 238000012216 screening Methods 0.000 title abstract description 10
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 239000012925 reference material Substances 0.000 claims description 34
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 claims description 5
- 235000001855 Portulaca oleracea Nutrition 0.000 abstract description 38
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 abstract description 20
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 15
- 239000003550 marker Substances 0.000 abstract description 6
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 abstract description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 5
- 238000013461 design Methods 0.000 abstract description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 abstract description 2
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 abstract description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 abstract description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 22
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 14
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 8
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N tetraphosphorus decaoxide Chemical compound O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000921895 Charybdis feriata Species 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 4
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 4
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 4
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 4
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 4
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N potassium oxide Chemical compound [O-2].[K+].[K+] CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910001950 potassium oxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 4
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 4
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 4
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 3
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 241000209501 Spirodela Species 0.000 description 1
- 240000000067 Spirodela polyrhiza Species 0.000 description 1
- 235000014249 Spirodela polyrhiza Nutrition 0.000 description 1
- 230000011681 asexual reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000013465 asexual reproduction Methods 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002015 leaf growth Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/13—Plant traits
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种筛选少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法，包括克隆体培养、基因组DNA提取、设计微卫星引物、PCR扩增和数据统计与分析。有益效果为：本发明可快速得到大量的经微卫星引物标记的少根紫萍的DNA序列，微卫星标记检测速度快，可快速获得少根紫萍Sp10、Sp14、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53遗传标记基因座呈现高度遗传变异的多态性图谱。少根紫萍叶长和叶宽均与Sp10、Sp14、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53显著相关（除Sp51位点P<0.05，其余P<0.001）。了解基因型差异对紫萍生长以及污染物净化能力的影响，提高废水的生物治理效率。
Description
技术领域
本发明涉及DNA分子标记技术领域，具体是一种筛选少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法。
背景技术
在自然环境中，少根紫萍基本以无性生殖进行繁殖，当环境条件适宜时2天即可克隆出一代，种群遗传多样性水平较低。
现有技术提供多种卫星标记的检测方法，例如，中国发明授权专利文献一种锈斑蟳微卫星标记的快速检测方法授权公告号CN 103305611 B该发明涉及一种锈斑蟳微卫星标记的快速检测方法，包括：(1)锈斑蟳基因组DNA的提取；(2)根据GeneBank数据库中锈斑蟳的功能基因序列，获得含有微卫星重复的基因序列；(3)微卫星标记引物的设计；(4)锈斑蟳不同个体的基因组DNA的PCR扩增；(5)PCR产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。该发明的检测方法具有快速、准确、灵敏等优点，能够直观地检测出锈斑蟳不同个体的基因型，从而快速获得锈斑蟳在功能基因微卫星位点遗传变异的多态性图谱，该微卫星标记可应用于锈斑蟳遗传变异与种群遗传多样性分析等领域，但微卫星标记检测速度还有提升空间。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速筛选与少根紫萍叶生长相关的分子标记方法，清晰少根紫萍的叶数/株、叶长和叶宽与相关DNA位点的关系。
本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：筛选少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法，包括克隆体培养、基因组DNA提取、设计微卫星引物、PCR扩增和数据统计与分析。
作为优选，植株克隆体培养的营养液成份及其浓度为：氮0.3～0.4g/L、磷酐0.1～0.15g/L、氧化钾0.16～0.23g/L、氧化镁0.01～0.015g/L和硫0.012～0.02g/L。上述营养液能全面提供少根紫萍生长所需的大量元素和微量元素，无性繁殖速度快，基因突变的概率低，可得到大量基因相同的植株，样本量足。
作为优选，植株克隆体在光照培养箱中进行室内培养50～70d，培养条件为22.5～23.5℃，湿度73～83％，光照强度为1800～2200lux，光暗时间14～16h:10～8h。上述培养条件下，少根紫萍的光合作用强，生长速度快。
作为优选，微卫星引物为：Sp 10：F:CCATCTGTCGTCCTTTTTCCC；R:CGCCCCATCACTTATTTCGTA；Sp14：F:GTCCATCCTTCTCAGCACAAT；R:CCGTACAAGATCTAAGCCTTT；Sp42：F:TGAGATCAGGCTGGAGCAGTG；R:GTTTACGTGGGCTACCAAACA；Sp47：F:TGGGCCTATGGCGATTAGGGG；R:GCGGCATCCACGGAGAAAATG；Sp51：F:CTCGCACATCAGTTCACAGGA；R:TCAGACATCTGGCGCAGTAGA；Sp52：F:GTCCTCCCTTTGATTGCTCGTC；R:AAGCATCATGGGCTCTTCAGG；Sp53：F:AGGACGACGACCTCTACTGCC；R:TACGAGTTCTGCGGACCATCA。
作为优选，PCR扩增体系为18～22ul，其中包括3.4～4.2U Taq DNA聚合酶(Sangon)、1.6～2.2ul10×PCRbuffer、0.7～0.9mMdNTP、上游引物0.3mM、下游引物0.3mM、50～100ng DNA模板，ddH2O补至终体积20ul；在Bio-Rad PCR扩增仪上进行扩增，扩增程序为92～96℃预变性4.5～5.6min；93～96℃变性28～33s，52～56℃复性33～37s，70～75℃延伸36～43s，共33～38个循环；最终70～75℃延伸2.5～3.4min。上述PCR扩增可快速得到大量的经微卫星引物标记的少根紫萍的DNA序列。
作为优选，数据统计与分析为对紫萍克隆的叶数/株、叶长和叶宽进行统计描述，应用单因素方差分析和最小显著差数法或Dunnett T3非参数多重比较两两基因型生长性状特征之间的差异性；应用一般线性模型过程对叶数/株、叶长和叶宽性状与微卫星位点的关联性进行最小二乘分析,并对同一位点的各基因型进行多重比较。少根紫萍叶长和叶宽均与Sp10、Sp14、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53显著相关(除Sp51位点P<0.05，其余P<0.001)。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明可快速得到大量的经微卫星引物标记的少根紫萍的DNA序列，微卫星标记检测速度快，可快速获得少根紫萍Sp10、Sp14、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53遗传标记基因座呈现高度遗传变异的多态性图谱。少根紫萍叶长和叶宽均与Sp10、Sp14、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53显著相关(除Sp51位点P<0.05，其余P<0.001)。了解基因型差异对紫萍生长以及污染物净化能力的影响，提高废水的生物治理效率。
具体实施例
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
筛选少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法，包括克隆体培养、基因组DNA提取、设计微卫星引物、PCR扩增和数据统计与分析。
植株克隆体培养的营养液成份及其浓度为：氮0.3～0.4g/L、磷酐0.1～0.15g/L、氧化钾0.16～0.23g/L、氧化镁0.01～0.015g/L和硫0.012～0.02g/L。上述营养液能全面提供少根紫萍生长所需的大量元素和微量元素，无性繁殖速度快，基因突变的概率低，可得到大量基因相同的植株，样本量足。
植株克隆体在光照培养箱中进行室内培养50～70d，培养条件为22.5～23.5℃，湿度73～83％，光照强度为1800～2200lux，光暗时间14～16h:10～8h。上述培养条件下，少根紫萍的光合作用强，生长速度快。
微卫星引物为：Sp 10：F:CCATCTGTCGTCCTTTTTCCC；R:CGCCCCATCACTTATTTCGTA；Sp14：F:GTCCATCCTTCTCAGCACAAT；R:CCGTACAAGATCTAAGCCTTT；Sp42：F:TGAGATCAGGCTGGAGCAGTG；R:GTTTACGTGGGCTACCAAACA；Sp47：F:TGGGCCTATGGCGATTAGGGG；R:GCGGCATCCACGGAGAAAATG；Sp51：F:CTCGCACATCAGTTCACAGGA；R:TCAGACATCTGGCGCAGTAGA；Sp52：F:GTCCTCCCTTTGATTGCTCGTC；R:AAGCATCATGGGCTCTTCAGG；Sp53：F:AGGACGACGACCTCTACTGCC；R:TACGAGTTCTGCGGACCATCA。
PCR扩增体系为18～22ul，其中包括3.4～4.2U Taq DNA聚合酶(Sangon)、1.6～2.2ul10×PCRbuffer、0.7～0.9mMdNTP、上游引物0.3mM、下游引物0.3mM、50～100ng DNA模板，ddH2O补至终体积20ul；在Bio-Rad PCR扩增仪上进行扩增，扩增程序为92～96℃预变性4.5～5.6min；93～96℃变性28～33s，52～56℃复性33～37s，70～75℃延伸36～43s，共33～38个循环；最终70～75℃延伸2.5～3.4min。上述PCR扩增可快速得到大量的经微卫星引物标记的少根紫萍的DNA序列。
数据统计与分析为对紫萍克隆的叶数/株、叶长和叶宽进行统计描述，应用单因素方差分析和最小显著差数法或Dunnett T3非参数多重比较两两基因型生长性状特征之间的差异性；应用一般线性模型过程对叶数/株、叶长和叶宽性状与微卫星位点的关联性进行最小二乘分析,并对同一位点的各基因型进行多重比较。少根紫萍叶长和叶宽均与Sp10、Sp14、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53显著相关(除Sp51位点P<0.05，其余P<0.001)。
实施例2：
筛选少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法，包括克隆体培养、基因组DNA提取、设计微卫星引物、PCR扩增和数据统计与分析。
植株克隆体培养的营养液成份及其浓度为：氮0.32g/L、磷酐0.12g/L、氧化钾0.19g/L、氧化镁0.012g/L和硫0.016g/L。上述营养液能全面提供少根紫萍生长所需的大量元素和微量元素，无性繁殖速度快，基因突变的概率低，可得到大量基因相同的植株，样本量足。
植株克隆体在光照培养箱中进行室内培养60d，培养条件为23℃，湿度78％，光照强度为2000lux，光暗时间16:8h。上述培养条件下，少根紫萍的光合作用强，生长速度快。
微卫星引物为：Sp 10：F:CCATCTGTCGTCCTTTTTCCC；R:CGCCCCATCACTTATTTCGTA；Sp14：F:GTCCATCCTTCTCAGCACAAT；R:CCGTACAAGATCTAAGCCTTT；Sp42：F:TGAGATCAGGCTGGAGCAGTG；R:GTTTACGTGGGCTACCAAACA；Sp47：F:TGGGCCTATGGCGATTAGGGG；R:GCGGCATCCACGGAGAAAATG；Sp51：F:CTCGCACATCAGTTCACAGGA；R:TCAGACATCTGGCGCAGTAGA；Sp52：F:GTCCTCCCTTTGATTGCTCGTC；R:AAGCATCATGGGCTCTTCAGG；Sp53：F:AGGACGACGACCTCTACTGCC；R:TACGAGTTCTGCGGACCATCA。
PCR扩增体系为20ul，其中包括4U Taq DNA聚合酶(Sangon)、2ul10×PCRbuffer、0.8mMdNTP、上游引物0.3mM、下游引物0.3mM、50-100ng DNA模板，ddH2O补至终体积20ul。在Bio-Rad PCR扩增仪上进行扩增，扩增程序为94℃预变性5min；94℃变性30s，54℃复性35s，72℃延伸40s，共35个循环；最终72℃延伸3min。PCR扩增产物在3730XL测序仪上进行毛细管电泳检测。上述PCR扩增可快速得到大量的经微卫星引物标记的少根紫萍的DNA序列。
数据统计与分析为对紫萍克隆的叶数/株、叶长和叶宽进行统计描述，应用单因素方差分析和最小显著差数法或Dunnett T3非参数多重比较两两基因型生长性状特征之间的差异性；应用一般线性模型过程对叶数/株、叶长和叶宽性状与微卫星位点的关联性进行最小二乘分析,并对同一位点的各基因型进行多重比较。少根紫萍叶长和叶宽均与Sp10、Sp14、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53显著相关(除Sp51位点P<0.05，其余P<0.001)。
实施例3：
筛选少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法，包括克隆体培养、基因组DNA提取、设计微卫星引物、PCR扩增和数据统计与分析。
植株克隆体培养的营养液成份及其浓度为：氮0.32g/L、磷酐0.12g/L、氧化钾0.2g/L、氧化镁0.013g/L和硫0.017g/L。上述营养液能全面提供少根紫萍生长所需的大量元素和微量元素，无性繁殖速度快，基因突变的概率低，可得到大量基因相同的植株，样本量足。
对不同培养系中的每一植株(叶片相连)计数叶片的数量，使用游标卡尺测量叶片的叶长(叶片最长长度)、叶宽(叶片最短长度)及每条根的长度。
微卫星引物为：Sp 10：F:CCATCTGTCGTCCTTTTTCCC；R:CGCCCCATCACTTATTTCGTA；Sp14：F:GTCCATCCTTCTCAGCACAAT；R:CCGTACAAGATCTAAGCCTTT；Sp42：F:TGAGATCAGGCTGGAGCAGTG；R:GTTTACGTGGGCTACCAAACA；Sp47：F:TGGGCCTATGGCGATTAGGGG；R:GCGGCATCCACGGAGAAAATG；Sp51：F:CTCGCACATCAGTTCACAGGA；R:TCAGACATCTGGCGCAGTAGA；Sp52：F:GTCCTCCCTTTGATTGCTCGTC；R:AAGCATCATGGGCTCTTCAGG；Sp53：F:AGGACGACGACCTCTACTGCC；R:TACGAGTTCTGCGGACCATCA。
采用改良的CTAB方法提取少根紫萍和少根紫萍基因组DNA。PCR扩增体系为20ul，其中包括4U Taq DNA聚合酶(Sangon)、2ul10×PCRbuffer、0.8mMdNTP、上游引物0.3mM、下游引物0.3mM、50-100ng DNA模板，ddH2O补至终体积20ul。在Bio-Rad PCR扩增仪上进行扩增，扩增程序为94℃预变性5min；94℃变性30s，54℃复性35s，72℃延伸40s，共35个循环；最终72℃延伸3min。PCR扩增产物在3730XL测序仪上进行毛细管电泳检测。
数据统计与分析为采用SPSS19.0对实验数据进行统计分析。对紫萍克隆的叶数/株、叶长和叶宽进行统计描述，应用单因素方差分析(One-way ANOVA)和最小显著差数法(Least-significant difference，LSD)或Dunnett T3非参数多重比较两两基因型生长性状特征之间的差异性；应用一般线性模型(General linear models,GLM)过程对叶数/株、叶长和叶宽性状与微卫星位点的关联性进行最小二乘分析,并对同一位点的各基因型进行多重比较。少根紫萍叶长和叶宽均与Sp10、Sp14、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53显著相关(除Sp51位点P<0.05，其余P<0.001)。
微卫星标记扫描：
用毛细管电泳检测2个微卫星标记的少根紫萍。结果显示，3个少根紫萍克隆为3个不同的MLGs。
表1少根紫萍3个克隆在2个微卫星位点的基因型
表2七个微卫星位点不同基因型在少根紫萍叶生长性状的多重比较
少根紫萍3个克隆经培养获得143～165个分株，叶片总数为448～581。由表2可看出少根紫萍叶长和叶宽均与Sp10、Sp14、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53显著相关(除Sp51位点P<0.05，其余P<0.001)。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 浙江海洋大学
<120> 筛选与少根浮萍叶生长相关的分子标记的方法
<130> 1
<160> 14
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 1
ccatctgtcg tcctttttcc c 21
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 2
cgccccatca cttatttcgt a 21
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 3
gtccatcctt ctcagcacaa t 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 4
ccgtacaaga tctaagcctt t 21
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 5
tgagatcagg ctggagcagt g 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 6
gtttacgtgg gctaccaaac a 21
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 7
tgggcctatg gcgattaggg g 21
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 8
gcggcatcca cggagaaaat g 21
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 9
ctcgcacatc agttcacagg a 21
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 10
tcagacatct ggcgcagtag a 21
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 11
gtcctccctt tgattgctcg tc 22
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 12
aagcatcatg ggctcttcag g 21
<210> 13
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 13
aggacgacga cctctactgc c 21
<210> 14
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 14
tacgagttct gcggaccatc a 21
Claims (1)
1.与少根紫萍叶生长相关的分子标记的微卫星引物，其特征在于，所述微卫星引物为：Sp10：F: CCATCTGTCGTCCTTTTTCCC；R: CGCCCCATCACTTATTTCGTA；Sp14：F:GTCCATCCTTCTCAGCACAAT；R: CCGTACAAGATCTAAGCCTTT；Sp42：F: TGAGATCAGGCTGGAGCAGTG；R: GTTTACGTGGGCTACCAAACA；Sp47：F: TGGGCCTATGGCGATTAGGGG；R:GCGGCATCCACGGAGAAAATG ；Sp51：F: CTCGCACATCAGTTCACAGGA；R: TCAGACATCTGGCGCAGTAGA和Sp52：F: GTCCTCCCTTTGATTGCTCGTC；R: AAGCATCATGGGCTCTTCAGG。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710344852.6A CN106995853B (zh) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | 筛选与少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710344852.6A CN106995853B (zh) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | 筛选与少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106995853A CN106995853A (zh) | 2017-08-01 |
| CN106995853B true CN106995853B (zh) | 2020-08-25 |
Family
ID=59434605
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710344852.6A Active CN106995853B (zh) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | 筛选与少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106995853B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003000904A2 (en) * | 2001-06-22 | 2003-01-03 | Syngenta Participations Ag | Identification and characterization of plant genes |
| CN1459226A (zh) * | 2003-01-28 | 2003-12-03 | 江苏省农业科学院 | 小麦赤霉病抗性主效qtl连锁的分子标记及其应用 |
| CN103305611A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-18 | 中国水产科学研究院东海水产研究所 | 一种锈斑蟳微卫星标记的快速检测方法 |
| CN103773760A (zh) * | 2014-01-14 | 2014-05-07 | 北京林业大学 | 菊属及近缘属植物通用ssr分子标记cssr1及应用 |
| CN106222283A (zh) * | 2016-08-11 | 2016-12-14 | 集美大学 | 一种坛紫菜核心种质库的构建方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040010815A1 (en) * | 2001-09-26 | 2004-01-15 | Lange B. Markus | Identification and characterization of plant genes |
| WO2012177089A2 (ko) * | 2011-06-24 | 2012-12-27 | 한국생명공학연구원 | 클로렐라의 종간 및 종 내의 균주 특이적 마이크로새틀라이트 분자 마커 |
| CN102304512B (zh) * | 2011-08-19 | 2013-03-20 | 山东东方海洋科技股份有限公司 | 大叶藻微卫星标记及其筛选方法和应用 |
| CN104263835B (zh) * | 2014-10-09 | 2016-06-08 | 凯里学院 | 一种采用ssr分子标记技术鉴别百合品种的方法 |
-
2017
- 2017-05-16 CN CN201710344852.6A patent/CN106995853B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003000904A2 (en) * | 2001-06-22 | 2003-01-03 | Syngenta Participations Ag | Identification and characterization of plant genes |
| CN1459226A (zh) * | 2003-01-28 | 2003-12-03 | 江苏省农业科学院 | 小麦赤霉病抗性主效qtl连锁的分子标记及其应用 |
| CN103305611A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-18 | 中国水产科学研究院东海水产研究所 | 一种锈斑蟳微卫星标记的快速检测方法 |
| CN103773760A (zh) * | 2014-01-14 | 2014-05-07 | 北京林业大学 | 菊属及近缘属植物通用ssr分子标记cssr1及应用 |
| CN106222283A (zh) * | 2016-08-11 | 2016-12-14 | 集美大学 | 一种坛紫菜核心种质库的构建方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| "CPDNA MICROSATELLITE MARKERS FOR LEMNA MINOR (ARACEAE )：PHYLOGEOGRAPHIC IMPLICATIONS";Wani GA等;《APPLICATIONS IN PLANT SCIENCES》;20140702;第2卷(第7期);第1页左栏第1段、右栏第2段，第2页左栏第1-2段，右栏第1-2段 * |
| "Genetic diversity and geographic differentiation analysis of duckweed using inter-simple sequence repeat markers";Huiling Xue等;《Mol Biol Rep》;20110622(第39期);第547页摘要，第548页右栏第1-5段，第549页右栏第2-3段、表1，第550页表3 * |
| "SSR标记与扁穗牛鞭草农艺性状关联分析";陈永霞等;《湖北农业科学》;20110405;第50卷(第7期);第1494页摘要、第1495-1497页第1.2-2.3节 * |
| "浮萍转录组数据SSR位点的生物信息学分析";孙蛟龙等;《应用与环境生物学报》;20150625;第21卷(第3期);第401-405页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106995853A (zh) | 2017-08-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Krause et al. | Biochar affects community composition of nitrous oxide reducers in a field experiment | |
| CN108411028B (zh) | 水稻耐盐基因skc1基因内特异snp共显性分子标记引物及应用 | |
| CN108048597B (zh) | 与水稻抗旱相关的snp分子标记及其应用 | |
| CN113637789B (zh) | 小麦抗条锈病基因YrTD121连锁的KASP分子标记及引物、试剂盒和应用 | |
| CN111690767A (zh) | 一种小麦分子标记及其在鉴定小麦耐盐性中的应用 | |
| CN109811074B (zh) | 一种用于辅助检测小麦高单穗小穗数性状的标记及其应用 | |
| CN106222262B (zh) | 引物对及其在鉴别水稻氮高效利用基因nrt1.1b基因型中的应用 | |
| CN108220467B (zh) | 分子标记及其应用 | |
| CN106995853B (zh) | 筛选与少根紫萍叶生长相关的分子标记的方法 | |
| CN111334597B (zh) | 用于检测西瓜白粉病抗性的snp位点、kasp标记及其应用 | |
| CN114752702B (zh) | 一种与油菜钙含量性状QTL紧密连锁的分子标记BnCa-2C2及其应用 | |
| CN107201399B (zh) | 筛选与少根浮萍根生长相关的分子标记的方法 | |
| CN106967827B (zh) | 筛选与紫背浮萍根生长相关的分子标记的方法 | |
| CN114381544B (zh) | 西瓜叶片黄化致死主效基因及鉴定该主效基因的dCAPS分子标记和应用 | |
| CN107164469B (zh) | 筛选与紫背浮萍叶生长相关的分子标记的方法 | |
| Pan et al. | DNA extraction of birch leaves by improved CTAB method and optimization of its ISSR system | |
| CN111235305B (zh) | 一组玉米植株铅转运系数相关snp分子标记及其应用 | |
| CN110878372B (zh) | 银缕梅微卫星标记组合及其引物和应用 | |
| Mohsenzadeh et al. | Cadmium-induced genotoxicity detected by the random amplification of polymorphism DNA in the maize seedling roots | |
| CN113151572A (zh) | 与苦瓜白粉病抗性主效QTL Pm3.1紧密连锁的InDel分子标记与应用 | |
| Ramakrishna et al. | Expansion of a (GA) dinucleotide at a microsatellite locus associated with domestication in rice | |
| CN114774578B (zh) | 与油菜镁含量性状QTL紧密连锁的分子标记BnMg-1A1及其应用 | |
| CN114574608B (zh) | 一种与黄瓜抗靶斑病相关的snp标记及其应用 | |
| CN114836561B (zh) | 与西兰花中萝卜硫苷含量相关的snp标记及引物和应用 | |
| KR102526682B1 (ko) | 고추 착과 방향성 예측용 분자마커 및 이의 용도 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |