CN106994110B - 猪胎盘冻干粉的抗氧化用途 - Google Patents

猪胎盘冻干粉的抗氧化用途 Download PDF

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Abstract

本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种猪胎盘冻干粉的抗氧化用途。针对现有技术中没有将猪胎盘冻干粉应用于肌肤抗氧化上的问题，本发明提供一种猪胎盘冻干粉用于制备抵抗肌肤衰老的护肤品。该猪胎盘冻干粉的制备方法为：a、取‑50℃～‑30℃下冷冻的猪胎盘，于4～10℃下解冻；b、将猪胎盘经高速组织捣碎机粉碎后，倒入冷冻干燥盘，进行第一次冷冻干燥；c、待步骤b完成后，将冷冻干燥盘中的猪胎盘完整翻面，进行第二次冷冻干燥；d、将步骤c中干燥后的猪胎盘装入铝箔袋，抽真空，于4℃保存待用。本发明方法操作简单，可最大限度地保持猪胎盘中的营养成分和抗氧化的有效成分，制备的猪胎盘冻干粉具有抗氧化的功效，具有重要的经济效益。

Description

猪胎盘冻干粉的抗氧化用途
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域，具体涉及一种猪胎盘冻干粉的抗氧化用途。
背景技术
皮肤衰老的一个显著特征是皮肤表皮层逐渐变薄，一方面是由于细胞活力降低，另一方面是机体内自由基的过量累计等因素所致。自由基是具有高度氧化活性带有一个或几个不配对电子的分子或原子，有很强的氧化活性。虽然适量自由基对细胞的分裂、生长、消炎和解毒等具有积极作用，但过剩自由基又可诱发炎症，免疫失调，恶性肿瘤等多种疾病，是导致皮肤衰老的最主要杀手。
祖国医学中将人胎盘称为紫河车，其药效在《本草纲目》中有明确记载：“味甘、成、性温，有安神养血、补气、益精、解毒、补血的作用；对疲劳、消瘦、衰弱者有奇效；久服者，耳聪目明，须发黑，延年益寿，有夺造化之功”。现代生物医药研究表明，人胎盘中含有丰富的铁、鋅、锰等微量元素和18种常见氨基酸、磷脂、多糖，以及多种抗体、干扰素、催乳素、促性腺激素等生物活性物质，是一种较为理想的免疫调节剂和营养美容保健品。
然而，目前人胎盘获取的有限性及伦理学等问题严重阻碍了人们对人胎盘的开发和应用。于是，与人胎盘具有相似组织结构的动物胎盘近年来逐渐成为人们的研究热点。随着对动物胎盘研究的不断深入，人们发现某些动物胎盘与人胎盘的功能十分相近，如羊胎盘、猪胎盘等。
冷冻干燥是快速冻结、真空冰状脱水的一种特殊食物加工方法，可以最大限度地保持原新鲜食品的色香味及营养成分、物料外观等，无须防腐剂就可在常温下保存5年以上，且成品重量轻，便于携带、运输和加工。
本发明拟提供一种采用冷冻干燥技术制备猪胎盘冻干粉的方法，并提供一种该方法制备得到的猪胎盘冻干粉在抗氧化方面的用途。
发明内容
本发明要解决的技术问题为：现有技术中没有将猪胎盘冻干粉应用于肌肤抗氧化的问题。
本发明解决技术问题的技术方案为：提供一种猪胎盘冻干粉的抗氧化用途，用于制备抵抗肌肤衰老的护肤品。
其中，上述猪胎盘冻干粉的抗氧化用途中，所述的护肤品包括：洗面奶、爽肤水、乳液、乳霜、眼霜、精华素、面膜或眼膜中的至少一种。
其中，上述猪胎盘冻干粉的抗氧化用途中，所述的抵抗皮肤衰老包括：提高表皮细胞存活率和提高表皮细胞抗氧化活力。
其中，上述猪胎盘冻干粉的抗氧化用途中，所述的猪胎盘冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
a、取-50℃～-30℃下冷冻的猪胎盘，于4～10℃下解冻，解冻后洗净表面血水；
b、将步骤a得到的猪胎盘经组织捣碎机粉碎后，倒入冷冻干燥盘，进行第一次冷冻干燥，先于-50℃～-40℃预冻1.5～2.5h，转入升华温度为-40℃～-35℃的条件下冷冻干燥14～16h，之后转入10～15℃干燥3～5h，再于25～30℃干燥3～5h；
c、待步骤b完成后，将冷冻干燥盘中的猪胎盘完整翻面，进行第二次冷冻干燥，先于-50℃～-40℃预冻0.5～1.5h；转入升华温度为-40℃～-35℃的条件下冷冻干燥6～10h，之后转入10～15℃干燥3～5h，再于25～30℃干燥3～5h；
d、将步骤c中干燥后的猪胎盘装入铝箔袋，抽真空，于0～10℃保存待用。
本发明还提供一种上述具有抗氧化用途的猪胎盘冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
a、取-50℃～-30℃下冷冻的猪胎盘，于4～10℃下解冻，解冻后洗净表面血水；
b、将步骤a得到的猪胎盘经组织捣碎机粉碎后，倒入冷冻干燥盘，进行第一次冷冻干燥，先于-50℃～-40℃预冻1.5～2.5h，转入升华温度为-40℃～-35℃的条件下冷冻干燥14～16h，之后转入10～15℃干燥3～5h，再于25～30℃干燥3～5h；
c、待步骤b完成后，将冷冻干燥盘中的猪胎盘完整翻面，进行第二次冷冻干燥，先于-50℃～-40℃预冻0.5～1.5h；转入升华温度为-40℃～-35℃的条件下冷冻干燥6～10h，之后转入10～15℃干燥3～5h，再于25～30℃干燥3～5h；
d、将步骤c中干燥后的猪胎盘装入铝箔袋，抽真空，于0～10℃保存待用。
其中，上述猪胎盘冻干粉的制备方法中，步骤b中冷冻干燥盘中的猪胎盘厚度为3～7cm。
其中，上述猪胎盘冻干粉的制备方法中，步骤b中所述的粉碎时组织捣碎机的转速为800～1200r/min，粉碎时间为25～45s。
其中，上述猪胎盘冻干粉的制备方法中，步骤b中所述的第一次冷冻干燥具体操作为：-45℃预冻2h，转入升华温度为-38℃条件下冷冻干燥15h，之后转入10℃干燥4h，再于30℃干燥4h。
其中，上述猪胎盘冻干粉的制备方法中，步骤c中所述的第二次冷冻干燥具体操作为：-45℃预冻1h；转入升华温度为-38℃条件下冷冻干燥8h，之后转入10℃干燥4h，再于30℃干燥4h。
本发明的有益效果为：本发明提供一种猪胎盘冻干粉在制备抵抗肌肤衰老的护肤品中的用途，并且提供一种可以抗氧化作用的猪胎盘冻干粉的制备方法，该方法操作简单，可最大限度地保持猪胎盘中的营养成分，制备的猪胎盘冻干粉铅、砷、汞等重金属含量在国标GB2762-2012要求范围内，且钙、磷含量比猪胎盘鲜重提高了近十倍；并且，有效的保持了猪胎盘抗氧化的有效成分，制备得到的猪胎盘冻干粉具有抗氧化的功效，成品重量轻，便于携带、运输和加工，具有重要的经济效益。
说明书附图
图1、所示为猪胎盘提取液和冻干粉对HACAT细胞DNA含量的影响。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明的具体实施方式做进一步的解释说明，但不表示将本发明的保护范围限制在实施例所述范围内。
实施例 用本发明方法制备猪胎盘冻干粉
制备方法如下：
a、取新鲜猪胎盘，于-40℃下冷冻，制备时置于4℃下完全解冻后，洗净表面血水；
b、将洗净后的猪胎盘采用高速组织捣碎机粉碎30s后，倒入冷冻干燥盘，将胎盘平铺至厚度为5cm，进行第一次冷冻干燥：置于-45℃预冻2h，升华温度为-38℃冷冻干燥15h，10℃干燥4h，再于30℃干燥4h；
c、待步骤b完成后，将冷冻干燥盘中的猪胎盘翻面，进行第二次冷冻干燥：-45℃预冻1h；升华温度为-38℃冷冻干燥8h，10℃干燥4h，再于30℃干燥4h；
d、将步骤c中干燥后的猪胎盘装入铝箔袋，抽真空，于4℃保存待用。
所述粉碎采用浙江荣浩工贸有限公司生产的RH-600A型粉碎机进行；所述的冷冻干燥采用北京松源华兴科技发展有限公司生产的LGJ-30F冷冻干燥机；所述的抽真空采用上海凯鸣电子机械有限公司生产的DZ-400真空包装机进行。
取实施例制备得到的猪胎盘冻干粉，测定其中矿物质含量，得到如下表1所示的实验结果。其中，铅含量采用石墨炉原子吸收法测定，砷含量采用ICP-MS法测定，汞含量采用原子荧光法测定，钙含量采用火焰原子吸收法测定，磷含量采用ICP-OES法进行测定。
表1采用本发明方法制备的猪胎盘冻干粉成分
Figure BDA0001274582920000031
Figure BDA0001274582920000041
由表1可知，采用本发明方法制备的冻干粉，铅、砷、汞含量都在标准规定的范围内，钙、磷含量显著提高。
本发明制备的猪胎盘冻干粉对细胞抗氧化能力的影响
采用猪胎盘提取液作为对照，进行猪胎盘冻干粉对细胞抗氧化能力的研究。
其中，猪胎盘提取液的制备方法如下：
收集新鲜猪胎盘，用无菌PBS反复冲洗去除残留淤血，并减去筋、膜等组织。再将胎盘尽可能的剪碎，加入适量PBS后放入组织匀浆机，充分匀浆组织，3min/次，进行6-8次。再将获得的组织匀浆于-80℃冻存20min后，马上置入42℃水浴20min，每5min摇匀1次，反复此过程4次后，再进行8000r/min、离心10min，之后收集上清液保存于-20℃、备用。注意：每次使用前需用0.22μm微孔过滤器过滤灭菌，得到猪胎盘提取液。
分别将猪胎盘提取液、猪胎盘冻干粉采用生理盐水配制成浓度为1.6ug/mL、2.4ug/mL的溶液，进行下述实验，实验操作及实验结果如下：
1)细胞培养：人体表皮细胞HACAT，购自上海细胞所；细胞培养基为DMEM、10％的小牛血清，于37℃5％CO2细胞培养箱中培养。
2)细胞形态观察：将生长状态良好的人表皮细胞HACAT铺入6孔板中，12-18h后，加入不同浓度的猪胎盘提取液和冻干粉处理48h，采用光学显微镜观察细胞形态，经猪胎盘提取液、冻干粉处理48h后，细胞形态饱满、死细胞数目明显减少且无细胞毒副作用。
3)细胞活力监测：XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(Cat:KGA313)购自凯基生物，检测严格按照说明书进行。将生长状态良好的人表皮细胞HACAT，按100μL/孔(约1×104)的量铺入96孔板中，置37℃、5％CO2细胞培养箱培养12-18h，再用猪胎盘冻干粉和提取液处理48、72h后，向各孔中加入50μl XTT工作液，37℃下孵育2h后，酶标仪450nm处读取吸光值。细胞的存活率以T/C％表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。细胞存活率％＝(加药细胞OD/对照细胞OD)×100。细胞活力的检测结果如表2所示。
从表2中可以看出，2.4ug/mL的胎盘提取液处理细胞48h和72h，细胞活力增加19.1％和22.5％，而采用1.6ug/mL的冻干粉处理细胞48h和72h，细胞活力增加21.6％和18.6％，说明采用1.6ug/mL的猪胎盘冻干粉处理细胞48h，即可达到提升细胞活力的效果，相比胎盘提取液，猪胎盘冻干粉提升细胞活力的剂量使用更少。
4)抗氧化活性检测：随着细胞培养液中H2O2的终浓度增大，细胞活力逐渐下降，为避免细胞的过度损伤，最终选择细胞活力为55-65％时的H2O2浓度为最适氧化剂浓度。不同浓度的猪胎盘提取液和冻干粉处理HACAT 48h、72h后，添加最适浓度H2O2处理1h后，XTT检测细胞活力，结果如表3所示。
对比H2O2处理组，猪胎盘提取液2.4ug/mL处理细胞48、72h后，细胞活力分别提高了54.9％、39.8％；1.6ug/mL冻干粉处理48、72h后，细胞活力分别提高了48.1％、26.8％，说明猪胎盘冻干粉同猪胎盘提取液一样，均具有抗氧化活力。
5)细胞DNA含量检测：
Figure BDA0001274582920000053
NF Cell Proliferation Assay Kit(Cat：C35007)购自invitrogen，检测严格按照说明书进行：为了避免各孔荧光之间的互相干扰，将生长状态良好的人表皮细胞HACAT按照100μL/孔(约3×103)铺入不透光的白色96孔板中，12-18h后，加入适当浓度猪胎盘冻干粉和提取液分别处理24h、48h和72h，缓慢去除微孔中的培养基，每空加入100ul的1×染料结合溶液.(将22ul的CyQUANT NF染色液，即成分A加入11ml的1×HBSS缓冲液(采用去离子水将5×HBSS即成分C稀释至工作浓度中，制备1×染料结合溶液)；将96孔板放入37℃、5％CO2细胞培养箱孵育1h；在荧光酶标仪下，激发波长485nm，检测波长530nm，检测荧光强度，得到如图1所示的结果。
由图1可知，猪胎盘提取液和冻干粉处理细胞，24h、48h和72h DNA含量变化不显著，说明猪胎盘冻干粉及提取液对细胞增殖无影响，说明细胞活力提升并不是因为细胞数量增殖引起，并且，猪胎盘冻干粉并不会使正常细胞增值，无致肿瘤风险。
其中，上述实验中，实验数据以平均数±标准差(x±s)表示，各组之间的差异显著性采用t检验，以p<0.05表示差异有统计学意义。
表2不同浓度猪胎盘提取液和冻干粉处理HACAT，48h、72h检测细胞活力
Figure BDA0001274582920000051
表3猪胎盘提取液和冻干粉抗氧化能力功能
Figure BDA0001274582920000052
由实施例可知，采用本发明方法制备的猪胎盘冻干粉在抗氧化效果上能够匹及猪胎盘提取液，但本发明方法操作更为简单，并且猪胎盘冻干粉更容易储藏，能够用于制备抗氧化的护肤品中，节约生产成本，具有重要的经济效益和现实意义。

Claims (8)

1.猪胎盘冻干粉的用途，其特征在于：用于制备抵抗肌肤衰老的护肤品；其中，所述冻干粉的制备方法包括以下步骤：
a、取-50℃～-30℃下冷冻的猪胎盘，于4～10℃下解冻，解冻后洗净表面血水；
b、将步骤a得到的猪胎盘经组织捣碎机粉碎后，倒入冷冻干燥盘，进行第一次冷冻干燥，先于-50℃～-40℃预冻1.5～2.5h，转入升华温度为-40℃～-35℃的条件下冷冻干燥14～16h，之后转入10～15℃干燥3～5h，再于25～30℃干燥3～5h；
c、待步骤b完成后，将冷冻干燥盘中的猪胎盘完整翻面，进行第二次冷冻干燥，先于-50℃～-40℃预冻0.5～1.5h；转入升华温度为-40℃～-35℃的条件下冷冻干燥6～10h，之后转入10～15℃干燥3～5h，再于25～30℃干燥3～5h；
d、将步骤c中干燥后的猪胎盘装入铝箔袋，抽真空，于0～10℃保存待用。
2.根据权利要求1所述的猪胎盘冻干粉的用途，其特征在于：所述的护肤品包括：洗面奶、爽肤水、乳液、乳霜、眼霜、精华素、面膜或眼膜中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的猪胎盘冻干粉的用途，其特征在于：所述的抵抗皮肤衰老包括：提高表皮细胞存活率和提高表皮细胞抗氧化活力。
4.猪胎盘冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、取-50℃～-30℃下冷冻的猪胎盘，于4～10℃下解冻，解冻后洗净表面血水；
b、将步骤a得到的猪胎盘经组织捣碎机粉碎后，倒入冷冻干燥盘，进行第一次冷冻干燥，先于-50℃～-40℃预冻1.5～2.5h，转入升华温度为-40℃～-35℃的条件下冷冻干燥14～16h，之后转入10～15℃干燥3～5h，再于25～30℃干燥3～5h；
c、待步骤b完成后，将冷冻干燥盘中的猪胎盘完整翻面，进行第二次冷冻干燥，先于-50℃～-40℃预冻0.5～1.5h；转入升华温度为-40℃～-35℃的条件下冷冻干燥6～10h，之后转入10～15℃干燥3～5h，再于25～30℃干燥3～5h；
d、将步骤c中干燥后的猪胎盘装入铝箔袋，抽真空，于0～10℃保存待用。
5.根据权利要求4所述的猪胎盘冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤b中冷冻干燥盘中的猪胎盘厚度为3～7cm。
6.根据权利要求4所述的猪胎盘冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤b中所述的粉碎时组织捣碎机的转速为800～1200r/min，粉碎时间为25～45s。
7.根据权利要求4所述的猪胎盘冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤b中所述的第一次冷冻干燥具体操作为：-45℃预冻2h，转入升华温度为-38℃条件下冷冻干燥15h，之后转入10℃干燥4h，再于30℃干燥4h。
8.根据权利要求4所述的猪胎盘冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤c中所述的第二次冷冻干燥具体操作为：-45℃预冻1h；转入升华温度为-38℃条件下冷冻干燥8h，之后转入10℃干燥4h，再于30℃干燥4h。
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