CN106977403B - 一种具有抗癌活性的化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种具有抗癌活性的化合物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种具有抗癌活性的化合物，所述化合物具有如通式I所示的结构。所述化合物可采用简便、易操作的方法从青钱柳中提取得到。本发明提供的化合物可有效抑制人乳腺癌细胞和肝癌细胞增殖，效果由于经典的抗癌化合物顺铂，抗癌活性良好，可用于制备药品和保健品，具有潜在的应用价值。

Description

一种具有抗癌活性的化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及天然产物化学领域，具体涉及一种具有抗癌活性的化合物及其制备方法与应用。
背景技术
青钱柳(拉丁文名：Cyclocarya paliurus.),别名：摇钱树、麻柳，青钱李、山麻柳、山化树。胡桃科、青钱柳属植物，我国南方多省均有发现，多以零星分布。青钱柳乃冰川四纪幸存下来的珍稀树种，仅存于中国。青钱柳被誉为植物界的大熊猫，医学界的第三棵树。人们知道，医学界的第一棵树——柳树，产生了阿司匹林，消炎杀菌、抗血栓，揭开了人类健康史的第一次变革。继心脑血管、癌症、癌之后，高血糖现已成为人类的第二大杀手，这时人们发现了青钱柳，并将其芽叶炮制成青钱柳茶。
《中国中药资源志要》记载，青钱柳叶具清热消渴解毒之效。《全国中草药名鉴》记载：青钱柳树皮、叶、根有杀虫止痒，消炎止痛祛风之功效。中医临床用于治疗糖尿病,因其有药理作用能明显降低血糖、减脂肪和尿糖。
目前，尚未有从青钱柳中发现具有抗癌活性化合物的报道。
发明内容
本发明的目的在于，克服现有技术的缺陷，从青钱柳中提取一种一种具有抗癌活性的化合物，所述化合物具有良好的抗癌活性。
具体而言，本发明提供的化合物具有如通式I所示的结构：
所述通式I中，R1代表-OH或-OCH3；
R2代表-OH、-OCH3或
R3代表C5～C6的直链或支链烯烃。
本发明优选所述R3代表所述R4代表-OH或-OCH3。
具体地，所述R3代表
作为本发明的优选方案，所述化合物选自如下具体化合物1～9：
本发明进一步提供了所述的化合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取钱柳青原料，用乙醇充分提取；将所得乙醇提取物溶于水，加入乙酸乙酯进行萃取，收集有机层；
(2)将所述有机层上样于硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂或乙酸乙酯-甲醇混合溶剂为流动相进行洗脱，收集洗脱产物，即得。
作为本发明的一种优选方案，为了获得化合物1或2，所述步骤(2)具体为：将所述有机层上样于硅胶柱，以体积比为1:0～5:1的乙酸乙酯-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比为80:1～5:1的二氯甲烷-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比为20:1～5:1的乙酸乙酯-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于Sephadex LH-20柱，以体积比为1:1的氯仿:甲醇为流动相进行洗脱；再将所得洗脱产物上样于半制备液相色谱，以体积比为7:3的乙腈-水为流动相进行洗脱，依据保留时间收集化合物1和/或化合物2。
作为本发明的一种优选方案，为了获得化合物3或4，所述步骤(2)具体为：将所述有机层上样于硅胶柱，以体积比为1:0～10:1的乙酸乙酯-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比为80:1～5:1的二氯甲烷-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于Sephadex LH-20柱，以体积比1:1的氯仿-甲醇为流动相进行洗脱；再将所得洗脱产物上样于半制备液相色谱，以体积比为6.5:3.5的乙腈-水为流动相进行洗脱，依据保留时间收集化合物3和/或化合物4。
作为本发明的一种优选方案，为了获得化合物5，所述步骤(2)具体为：将所述有机层上样于硅胶柱，以体积比为1:0～10:1的乙酸乙酯-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比为80:1～5:1的二氯甲烷-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比20:1～2:1的二氯甲烷-甲醇进行洗脱；再将所得洗脱产物上样于半制备液相色谱，以体积比为9:1的乙腈-水为流动相进行洗脱，得化合物5。
作为本发明的一种优选方案，为了获得化合物6，所述步骤(2)具体为：将所述有机层上样于硅胶柱，以体积比为1:0～10:1的乙酸乙酯-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比为80:1～5:1的二氯甲烷-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比为40:1～15:1的二氯甲烷-甲醇为流动相进行洗脱；再将所得洗脱产物上样于半制备液相色谱，以体积比为9:1的乙腈-水为流动相进行洗脱，得化合物6。
作为本发明的一种优选方案，为了获得化合物7，所述步骤(2)具体为：将所述有机层上样于硅胶柱，以体积比为1:0～1:1的石油醚-乙酸乙酯为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比为20:0～10:1的二氯甲烷-乙酸乙酯为流动相进行洗脱，纯化后，得化合物7。
作为本发明的一种优选方案，为了获得化合物8，所述步骤(2)具体为：将所述有机层上样于硅胶柱，以体积比为1:0～1:1的乙酸乙酯-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比为20:1～1:1的乙酸乙酯-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比为20:1～1:1的乙酸乙酯-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于Sephadex LH-20柱，以体积比1:1的氯仿-甲醇为流动相进行洗脱；再将所得洗脱产物上样于半制备液相色谱，以体积比6:1的乙腈-水为流动相进行洗脱，得化合物8。
作为本发明的一种优选方案，为了获得化合物9，所述步骤(2)具体为：将所述有机层上样于硅胶柱，以体积比为1:0～10:1的乙酸乙酯-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比为80:1～5:1的二氯甲烷-甲醇为流动相进行洗脱；将所得洗脱产物上样于硅胶柱，以体积比为40:1～15:1的二氯甲烷-甲醇为流动相进行洗脱；再将所得洗脱产物上样于半制备液相色谱，以体积比为8.5:1的乙腈-水为流动相进行洗脱，得化合物9。
本发明进一步保护所述化合物在制备抗癌药物和保健品中的应用；优选为在制备抗乳腺癌和/或肝癌药物和保健品中的应用。
本发明提供的化合物可有效抑制人乳腺癌细胞和肝癌细胞增殖，效果由于经典的抗癌化合物顺铂，抗癌活性良好，可用于制备药品和保健品，具有潜在的应用价值。
附图说明
图1～图6分别为化合物1的氢谱、碳谱、COSY谱、HSQC谱、HMBC谱以及ROESY谱；
图7～图12分别为化合物2的氢谱、碳谱、COSY谱、HSQC谱、HMBC谱以及ROESY谱；
图13～图18分别为化合物3的氢谱、碳谱、COSY谱、HSQC谱、HMBC谱以及ROESY谱；
图19～图24分别为化合物4的氢谱、碳谱、COSY谱、HSQC谱、HMBC谱以及ROESY谱；
图25～图30分别为化合物5的氢谱、碳谱、COSY谱、HSQC谱、HMBC谱以及ROESY谱；
图31～图36分别为化合物6的氢谱、碳谱、COSY谱、HSQC谱、HMBC谱以及ROESY谱；
图37～图42分别为化合物7的氢谱、碳谱、COSY谱、HSQC谱、HMBC谱以及ROESY谱；
图43～图48分别为化合物8的氢谱、碳谱、COSY谱、HSQC谱、HMBC谱以及ROESY谱；
图49～图53分别化合物9的氢谱、碳谱、COSY谱、HSQC谱以及HMBC谱；
图54为化合物1-9对BT-549细胞系的增殖抑制率示意图；
图55为化合物1-9对SMMC-7721细胞系的增殖抑制率示意图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本实施例提供了一种具有抗癌活性的化合物1，其结构如下所示：
所述化合物1的表征信息如图1～6所示。
实施例2
本实施例提供了一种具有抗癌活性的化合物2，其结构如下所示：
所述化合物2的表征信息如图7～12所示。
实施例3
本实施例提供了一种具有抗癌活性的化合物3，其结构如下所示：
所述化合物3的表征信息如图13～18所示。
实施例4
本实施例提供了一种具有抗癌活性的化合物4，其结构如下所示：
所述化合物4的表征信息如图19～24所示。
实施例5
本实施例提供了一种具有抗癌活性的化合物5，其结构如下所示：
所述化合物5的表征信息如图25～30所示。
实施例6
本实施例提供了一种具有抗癌活性的化合物6，其结构如下所示：
所述化合物6的表征信息如图31～36所示。
实施例7
本实施例提供了一种具有抗癌活性的化合物7，其结构如下所示：
所述化合物7的表征信息如图37～42所示。
实施例8
本实施例提供了一种具有抗癌活性的化合物8，其结构如下所示：
所述化合物8的表征信息如图43～48所示。
实施例9
本实施例提供了一种具有抗癌活性的化合物9，其结构如下所示：
所述化合物9的表征信息如图49～53所示。
实验例：化合物抗癌活性的验证
1、实验原理
活细胞的线粒体内膜上存在琥珀酸脱氢酶，该酶可将黄绿色的噻唑蓝(简称为MTT，为一种接受氢离子的染料)降解成蓝紫色的甲臜，活细胞越多，生成的蓝紫色的甲臜就越多，而死细胞因其线粒体内膜上的琥珀酸脱氢酶活性消失，无此功能。使用二甲基亚砜容解蓝紫色的甲臜，并用酶标仪在490nm波长处测定吸光度值，可以定量反应出活细胞数量。
2、实验方法
(1)实验分组：实验分为化合物1～9组、顺铂组及对照组。对照组不加药；各组均设置4个浓度梯度，按终浓度2.5、5、10、20μM(μmol/L)加药。以上每组均设3个复孔。
(2)细胞培养：取对数生长期的BT-549(人乳腺癌细胞)及SMMC-7721(人肝癌细胞)细胞，吸出原培养液，无菌磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤两次后加入适量的胰酶进行消化，并离心收集细胞，制成细胞悬液；对细胞进行计数，并稀释细胞浓度为7x104/mL，准备无菌的96孔细胞培养板并进行相应的标记，然后每孔加入100μL细胞悬液，置37℃，5％CO2培养箱内培养。待细胞贴壁生长至80％左右时，实验组每孔加入相应的药物，置37℃，5％CO2培养箱内培养48h。
培养48h后，吸出原培养液，无菌PBS洗涤两次后每孔加入含0.5mg/mL MTT的培养基继续培养4h。4h后小心吸出孔内培养基，每孔加入150μL二甲基亚砜，置摇床上匀速摇10min，使结晶充分溶解。再用酶标仪在490nm波长处测定各组吸光度值，计算细胞增殖抑制率，求出半数抑制率(IC50)。
3、实验结果
运用不同浓度梯度青钱柳化合物作用于BT-549及SMMC-7721细胞48h后，酶标仪测定各个孔吸光度，并计算细胞增殖抑制率。
化合物1-9对BT-549细胞系的增殖抑制率的IC50在14.66～31.94μM之间，其中化合物1、2、3、5、7、8、9对BT-549细胞增殖抑制率比对照品顺铂的活性更强(见图54，表1)
化合物1-9对SMMC-7721细胞系的增殖抑制率的IC50在16.73～33.37μM之间，其中化合物1对SMMC-7721细胞增殖抑制率比对照品顺铂的活性更强(见图55，表1)。
表1：化合物对SMMC-77细胞系和BT-549细胞系的抑制率
由以上结果可知，本发明提供的化合物对乳腺癌及肝癌均具有良好的抗癌活性。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (5)

1.具有如通式I所示结构的化合物在制备抗癌药物和保健品中的应用；
所述通式I中，R1代表-OH或-OCH3；R2代表-OH、-OCH3或R3代表C5～C6的直链或支链烯烃。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述R3代表 所述R4代表-OH或-OCH3。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述R3代表
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物选自如下具体化合物1～9中的一种或多种：
5.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述应用为在制备抗乳腺癌和/或肝癌药物和保健品中的应用。
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