CN106969960A - 一种检测鲜切莲藕产品腐败的便捷方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种检测鲜切莲藕产品腐败的便捷方法，无需检测细菌总数和真菌总数等卫生指标，通过莲藕腐败微生物的荧光显色技术实现其冷藏过程中腐败变质的快速检测。该方法的主要步骤是：莲藕样品剪碎，加入无菌生理盐水制成样品悬液，接入金氏培养基斜面培养一段时间后于紫外灯暗室中观察，产生黄绿色荧光的即已腐败变质。

Description

一种检测鲜切莲藕产品腐败的便捷方法
技术领域
本发明涉及食品质量安全检测领域，具体涉及一种检测鲜切莲藕产品腐败的便捷方法。
技术背景
莲藕为睡莲科草本植物莲的根茎，在我国有3000多年的种植历史，全国栽培面积估计达50～70万公顷，产量近1000万吨，居世界前茅。莲藕口感脆嫩味微甜，营养丰富，同时又具有消食止泻，开胃清热，是优良的水生蔬菜和副食佳品，同时又具有滋补养性等药用价值，深受广大消费者喜爱。目前，国内外市场对莲藕制品需求很大，尤其是清洁、卫生、新鲜和方便的鲜切莲藕制品最为畅销。然而，莲藕鲜切过程中由于去皮、切分等工序，使其细胞受损，汁液外渗（汁液中营养成分含量较高，有利于微生物的生长），加之加工机械、空气及加工用水中的各种微生物污染，导致鲜切莲藕产品在贮藏过程中极易受微生物影响而腐烂变质，严重威胁产品的质量安全。因此，研究鲜切莲藕产品的腐败检测技术具有重要的现实意义。
然而，鲜切蔬菜腐败是一个非常复杂的过程，国内还没有统一的界定标准和评价方法，各级食品药品监督管理部门均未将腐败列为食品质量安全的监管项目，而仅是从传统的微生物菌落总数、大肠菌群数和致病菌是否检出等卫生指标判断其质量品质。目前，现行的食品卫生标准中微生物菌落总数、食品大肠菌群最近似数等传统的检测方法操作步骤繁琐，检测周期较长，结果判定也受现行标准的局限。因此，研究建立一种相对简单地检测鲜切莲藕腐败的方法，明确鲜切莲藕的生物安全问题，对鲜切莲藕产业的发展、人们生活质量的提高有重要的意义。
发明内容
在当今快节奏社会，方便卫生的鲜切蔬菜产品需求量日益增加，但鲜切蔬菜极易腐烂变质，严重影响其销售和质量安全。为更好地评估鲜切莲藕产品的腐败变质问题，本发明提出了一种检测鲜切莲藕产品腐败的便捷方法，其相对与传统方法操作简单，方便快捷，结果准确。
本发明方法的主要步骤是：鲜切莲藕产品随机抽样，剪碎后以无菌生理盐水制成样品悬液，接入金氏B培养基斜面培养一段时间后于紫外灯照射下检查是否产生荧光，有明显黄绿色荧光的即已腐败变质。
本发明方法具体包括以下步骤：
（1）样品采集：随机取鲜切莲藕样品；
（2）样品悬液制备：将样品剪碎成小粒，将小粒加入无菌生理盐水中，充分摇匀即得样品悬液，所述小粒与无菌生理盐水的质量体积比为1:8至1:10，所述质量体积比中质量单位为g，体积单位为mL；
（3）接种培养：取样品悬液，用体积8—12倍于样品悬液的无菌生理盐水稀释后，移取4—6 μL稀释后的样品悬液接种至KB培养基斜面，于28 ℃培养箱中培养2—3 d，得培养好的斜面；同时做3—5个平行实验和一个阴性对照；
（4）荧光检测：将培养好的斜面从培养箱取出，在紫外灯照射下检查是否产生荧光，有明显荧光出现则表明样品腐败。
优选地，步骤（2）中，所述小粒与无菌生理盐水的质量体积比为1:9。步骤（2）中，所述小粒的尺寸为5 mm×5 mm。步骤（3）所述阴性对照是在KB培养基斜面接种大肠杆菌悬液。步骤（3）所述KB培养基为金氏B培养基，金氏B培养基配方为：水解蛋白胨 20.0g/L，磷酸氢二钾 1.5g/L，硫酸镁1.5 g/L，琼脂15.0g/L， pH为7.0—7.4。
下面对本发明作进一步说明：
本发明随机抽取鲜切莲藕样品10~20份，装入洁净保鲜袋。然后将样品以无菌剪刀剪碎成大小约5 mm×5 mm的小粒，称取25 g加入225 mL无菌生理盐水中，充分摇匀即为样品悬液。取1mL样品悬液按体积比用无菌生理盐水稀释8~12倍，移取4~6 μL接种至KB培养基斜面，于28 ℃培养箱中培养48~72 h；同时做3~5个平行实验和一个阴性对照【阴性对照为KB培养基斜面按相同方法接种大肠杆菌（Escherichia coli，ATCC25922）悬液】。所述的KB培养基为金氏B培养基（King’s B medium），其配方为：水解蛋白胨 20.0g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁1.5 g/L，琼脂15.0g/L；其用法为称取适量KB培养基，按质量体积比（m/mL）加入25倍体积蒸馏水或去离子水和1/4体积的甘油，搅拌加热煮沸至完全溶解，调节pH为7.0~7.4, 分装包扎后于121 ℃高压灭菌15 min，摆成斜面备用。斜面培养完成后，取出置于紫外灯暗室或荧光成像系统中检查是否有蓝色荧光出现，有明显蓝色荧光出现则表明样品腐败，以同期培养的大肠杆菌（Escherichia coli，ATCC25922）斜面作为阴性对照。
本发明根据鲜切莲藕冷藏过程中特异腐败微生物产生自发荧光的特征，通过样品预处理方法、样品悬液稀释度比例及接种量等条件的优化，准确的将样品开始观察到明显荧光的时间点与其卫生指标超标的腐败时间点对应，建立了一种基于腐败指示菌自发荧光检测来判断鲜切莲藕产品是否腐败变质的方法，操作简单便捷，结果准确率可达95%以上。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
（1） 在特定条件下，以检测到样品腐败指示菌的固有荧光表征样品腐败，准确率95%以上。
（2）腐败指示菌产生的荧光强度与样品微生物菌落总数具有高度一致性，以荧光显色技术替代传统食品卫生指标测定，操作方便快捷。
具体实施方式：
实施例1
随机抽取鲜切莲藕样品10份，装入洁净保鲜袋。上述样品以无菌剪刀剪碎成大小约5mm×5 mm的小粒，称取25 g加入225 mL无菌生理盐水中，充分摇匀制得样品表面菌悬液。取1mL上述悬液加入预先准备的9mL无菌生理盐水中，重复振荡均匀，以微量移液器移取5.0 μL接种至金氏B培养基斜面，同时做5个平行实验，并以接种大肠杆菌（Escherichia coli，ATCC25922）的金氏B培养基斜面为阴性对照，于28 ℃培养箱中培养；72 h后从培养箱取出斜面，置于紫外灯暗室观察是否产生荧光，有明显荧光出现表明样品腐败。该方法腐败样品检出率可达95%以上。
其中金氏B培养基（King’s B medium）配方为：水解蛋白胨 20.0g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁1.5 g/L，琼脂15.0g/L；其用法为称取适量KB培养基，按质量体积比（m/mL）加入25倍体积蒸馏水或去离子水和1/4体积的甘油，搅拌加热煮沸至完全溶解，调节pH为7.0~7.4, 分装包扎后于121 ℃高压灭菌15 min，摆成斜面备用。
实施例2
随机抽取鲜切莲藕样品15份，装入洁净保鲜袋。上述样品以无菌剪刀剪碎成大小约5.0mm×5.0 mm的小粒，称取25.0 g加入225.0 mL无菌生理盐水中，充分摇匀制得样品表面菌悬液。取1.0mL上述悬液加入预先准备的11.0 mL无菌生理盐水中，重复振荡均匀，以微量移液器移取6.0 μL接种至金氏B培养基斜面，同时做3个平行实验，并以接种大肠杆菌（Escherichia coli，ATCC25922）的金氏B培养基斜面为阴性对照，于28 ℃培养箱中培养；60 h后从培养箱取出斜面，置于凝胶成像系统的紫外灯下观察是否产生荧光，有明显荧光出现表明样品腐败。该方法腐败样品检出率可达95%以上。
其中金氏B培养基（King’s B medium）配方为：水解蛋白胨 20.0g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁1.5 g/L，琼脂15.0g/L；其用法为称取适量KB培养基，按质量体积比（m/mL）加入25倍体积蒸馏水或去离子水和1/4体积的甘油，搅拌加热煮沸至完全溶解，调节pH为7.0~7.4, 分装包扎后于121 ℃高压灭菌15 min，摆成斜面备用。

Claims (5)

1.一种检测鲜切莲藕产品腐败的便捷方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）样品采集：随机取鲜切莲藕样品；
（2）样品悬液制备：将样品剪碎成小粒，将小粒加入无菌生理盐水中，充分摇匀即得样品悬液，所述小粒与无菌生理盐水的质量体积比为1:8至1:10，所述质量体积比中质量单位为g，体积单位为mL；
（3）接种培养：取样品悬液，用体积8—12倍于样品悬液的无菌生理盐水稀释后，移取4—6 μL稀释后的样品悬液接种至KB培养基斜面，于28 ℃培养箱中培养2—3 d，得培养好的斜面；同时做3—5个平行实验和一个阴性对照；
（4）荧光检测：将培养好的斜面从培养箱取出，在紫外灯照射下检查是否产生荧光，有明显荧光出现则表明样品腐败。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述小粒与无菌生理盐水的质量体积比为1:9。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述小粒的尺寸为5 mm×5 mm。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述阴性对照是在KB培养基斜面接种大肠杆菌悬液。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述KB培养基为金氏B培养基，金氏B培养基配方为：水解蛋白胨 20.0g/L，磷酸氢二钾 1.5g/L，硫酸镁1.5 g/L，琼脂15.0g/L，pH为7.0—7.4。
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