CN106967656A - 一种地衣芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一种地衣芽孢杆菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106967656A
CN106967656A CN201710399782.4A CN201710399782A CN106967656A CN 106967656 A CN106967656 A CN 106967656A CN 201710399782 A CN201710399782 A CN 201710399782A CN 106967656 A CN106967656 A CN 106967656A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus licheniformis
grape
complex
content
zhongshengmycin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710399782.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106967656B (zh
Inventor
郭继平
马光
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hengshui University
Original Assignee
Hengshui University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hengshui University filed Critical Hengshui University
Priority to CN201710399782.4A priority Critical patent/CN106967656B/zh
Publication of CN106967656A publication Critical patent/CN106967656A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106967656B publication Critical patent/CN106967656B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/10—Bacillus licheniformis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
    • A01N47/10—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof
    • A01N47/18—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof containing a —O—CO—N< group, or a thio analogue thereof, directly attached to a heterocyclic or cycloaliphatic ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明提供了一种地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2015年9月25日，保藏编号为CGMCC No.11448。将该菌株与中生菌素复配后，具有协同增效作用，能增强对葡萄白腐病的防治效果。通过复配组合物和复配制剂的使用，在葡萄园生态环境中引入大量有益微生物，恶化病原菌的生存环境；结合栽培管理等农业措施，形成一个稳定的、平衡的、生物多样化的葡萄园生态系统，达到一药多治、持久地控制葡萄病害流行的目的。

Description

一种地衣芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及生物防治植物病害领域，具体涉及一种地衣芽孢杆菌、该菌株与中生菌素复配及其在葡萄白腐病防治中的应用。
背景技术
近年绿色食品生产是当前国际农产品生产的主要方向，随着科学发展和人类对环境保护及人类自己健康认识的不断加深，绿色食品生产已愈来愈受到世界各国的重视。葡萄在全世界果树中占重要地位，无论栽培面积和产量均位于第二位。在中国，葡萄也具有悠久的栽培历史，根据史书记载己超过两千年。葡萄的生物学和栽培方式具有特殊性，因此，在其生长发育过程中容易受到病菌危害，其病害种类之多、造成的损失之大倍受关注。目前，葡萄白腐病是葡萄种植中的主要病害之一。如何高效低毒的防治葡萄白腐病，已经成为农业行业面临的一个重要课题。
葡萄白腐病(Coniothyrium diplodiella)又称腐烂病，是葡萄生长期引起果实腐烂的主要病害，葡萄园地发生较普遍，果实损失率在10-15％，在严重的年份里可损失60％以上，甚至失收，高温高湿季节，该病危害相当严重。果梗和穗轴上发病处先产生淡褐色水浸状近圆形病斑，病部腐烂变褐色，很快蔓延至果粒，果粒变褐软，失去经济价值。目前葡萄白腐病的防治方法主要是加强田间管理、培育抗病品种和化学防治。防治葡萄白腐病的药剂有50％退菌特可湿性粉剂800～1000倍液、70％代森猛锌可湿性粉剂700倍液和50％福美双可湿粉剂600～800倍液等。
长期大量的使用化学合成类农药，对自然生态环境造成污染，使农副产品中的农药残留量增加，病虫草害的抗药性也日趋严重。据国外近几年研究报导，已经发现447种害虫和害螨，100余种植物病原菌对一到数种化学农药产生了抗药性，而且分析预测今后将以每5年约10％的数量递增。本研究采用生物防治葡萄白腐病对保障我国葡萄的安全生产和稳产，减少因化学农药的大量投入使用产生的环境污染等问题起着重要的意义。
由于生物防治具有对环境、生态和人类健康安全的优点，在世界各国得到了广泛的重视并发挥着越来越重要的作用。目前，成功应用于植物病害生物防治的微生物涉及到真菌、细菌、放线菌等很多生物种群，其中细菌中芽孢杆菌属的一些芽孢杆菌是近年来科研工作者研究的热点。芽孢杆菌是一个多样性十分丰富的微生物类群，分布广泛，能产生抗逆性强的芽孢，其抑制植物病原菌的范围很广，包括根部、叶部、枝干、花部和收获后果实等多种病害，是一种理想的生防微生物。
芽孢杆菌中的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)还具有许多优良性能，如：有较广的抑菌谱、生长速度快、适应环境能力强、能在土壤和植物表面定殖并形成优势种群、诱导寄主产生抗病性和分泌产生多种抗菌物质。本研究前期从葡萄叶片分离到一株地衣芽孢杆菌，该菌株对葡萄白腐病有良好的防治效果，同时也是一种对人畜十分安全的细菌性生防菌。为了提高杀菌剂的田间防治效果，延缓菌株对葡萄白腐病的抗药性，延长现有药剂的使用年限，开发新的复配药剂是较为有效的方法之一。
中生菌素是中国农科院生防所研制成功的一种新型农用抗生素，是由淡紫灰链霉菌海南变种产生的抗生素，属N－糖苷类碱性水溶性物质。80年代末90年代中期对中生菌素进行了毒性测定、温室实验和田间试验示范，结果表明中生菌素是一种低毒、广谱的农用抗生素，其对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、丝状真菌都有强烈的抑制或杀死作用。
目前，将地衣芽孢杆菌和中生菌素复配的生物杀菌剂并未见报道。
发明内容
针对以上所述的生产上大量使用化学农药防治葡萄白腐病，严重污染了葡萄园的生态环境，导致农药残留超标并影响葡萄的品质等问题，本发明提供了一种对葡萄白腐病具有良好防治效果的地衣芽孢杆菌的复配组合物和复配制剂。地衣芽孢杆菌和中生菌素复配后，具有协同增效作用，能增强对葡萄白腐病的防治效果。通过该复配组合物和复配制剂的使用，在葡萄园生态环境中引入大量有益微生物，恶化病原菌的生存环境；结合栽培管理等农业措施，形成一个稳定的、平衡的、生物多样化的葡萄园生态系统，达到一药多治、持久地控制葡萄病害流行的目的。
本发明的地衣芽孢杆菌的复配组合物和复配制剂在葡萄白腐病的生物防治中具有防治效果好、无污染、对人畜安全、无残留和特异性强等优点，且对保护环境、维持生态平衡具有重要的现实意义。
根据本发明的一个方面提供一种地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2015年9月25日，保藏编号为CGMCC No.11448。
其中，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株分离于葡萄叶片。
根据本发明的另一个方面提供一种复配组合物，包含地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)Y24菌株，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株的活芽孢数为4～16亿/毫升，复配组合物还包括中生菌素，其含量为0.6～2.4％。
其中，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株的活芽孢数为10亿/毫升，中生菌素含量为1.5％。
根据本发明的第三个方面提供一种复配制剂，包含地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)Y24菌株和中生菌素，还包括载体、分散剂、崩解剂和粘结剂，各组分的含量为:
其中，载体为高岭土，分散剂为木质素磺酸钠，崩解剂为硫酸铵，粘结剂为聚乙二醇。
其中，复配制剂中各组分的含量为：
本发明还提供地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株，复配组合物或复配制剂在用于抑制葡萄白腐病菌生长、防治葡萄白腐病的药物的制备中的应用。
为了达到上述目的，本发明提供了一种地衣芽孢杆菌与中生菌素的复配组合物，包括地衣芽孢杆菌和中生菌素，将地衣芽孢杆菌活芽孢发酵液制成的水剂与中生菌素按质量比4:1、2:1、1:1、1:2和1:4进行混合，其对应的地衣芽孢杆菌芽孢数为4～16亿/毫升，中生菌素含量为0.6～2.4％。
复配组合物抑制葡萄白腐病菌的生长均好于单一菌剂，其中地衣芽孢杆菌Y24活芽孢的含量为10亿/毫升，中生菌素含量为1.5％，抑菌效果最好。
复配制剂由复配组合物并加入一定量的载体、分散剂、崩解剂和粘结剂制成。具体地，复配制剂中地衣芽孢杆菌活芽孢的含量为6.2～6.4亿/毫升，中生菌素含量为0.9～1％，高岭土含量为31.4～32.7％，木质素磺酸钠含量为1～2.1％，硫酸铵含量为0.6～1.9％，聚乙二醇含量为0.3～0.9％。
复配制剂的室内离体果防治葡萄白腐病研究中发现，复配制剂各组分含量优选的为，地衣芽孢杆菌Y24活芽孢的含量为6.4亿/毫升，中生菌素含量为0.9％，高岭土含量为32.1％，木质素磺酸钠含量为1.6％，硫酸铵含量为1.3％，聚乙二醇含量为0.6％，防治效果最好。
本发明复配制剂在葡萄白腐病田间防治应用中的使用方法为：将复配制剂稀释100倍，将稀释后的复配制剂在葡萄生长期喷洒在果粒和叶面上，用于防治葡萄白腐病。采用手动式喷雾器喷药，每隔6天喷药一次，共喷9次，每亩复配生物制剂的用量为5kg。每株均匀喷雾，喷药量以叶片和果实的正反面湿润、树体均匀着药、稍有药滴下淌为度。
本发明的优点在于将生防微生物地衣芽孢杆菌和中生菌素按一定比例混合使用，不仅能发挥地衣芽孢杆菌诱导葡萄植株抗病性、调控微生态环境来防治白腐病的作用，又能发挥中生菌素有效控制白腐病的作用。通过复配、协同作用，达到优势互补、扩大防治范围、减少用药次数、降低用药成本、提高防治效果的目的。由于有效成分含量高，便于存储和运输，使用时取水稀释，非常方便。
经测试表明，本发明复配杀菌剂产品中的中生菌素对地衣芽孢杆菌的生长、繁殖无干扰作用，使产品具有稳定的药效。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。
本发明提供的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株，于2015年9月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，中科院微生物研究所，邮编：100101)，其保藏号为CGMCC No.11448。该菌株分离于葡萄叶片。
一种包含地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株的复配组合物，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株的活芽孢数为4～16亿/毫升，优选的，为10亿/毫升；还包含中生菌素0.6～2.4％，优选的，为1.5％。
包含该复配组合物的复配制剂，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株活芽孢的含量为6.2～6.4亿/毫升，中生菌素含量为0.9～1％，高岭土含量为31.4～32.7％，木质素磺酸钠含量为1～2.1％，硫酸铵含量为0.6～1.9％，聚乙二醇含量为0.3～0.9％。优选的，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株活芽孢的含量为6.4亿/毫升，中生菌素含量为0.9％，高岭土含量为32.1％，木质素磺酸钠含量为1.6％，硫酸铵含量为1.3％，聚乙二醇含量为0.6％。
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株及其复配组合物和复配制剂在用于抑制葡萄白腐病菌生长、防治葡萄白腐病的药物的制备中的应用。
实施例
实施例1地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株的获得
于河北省衡水市赵圈镇的葡萄种植园的葡萄叶片进行样品采集，用无菌纸袋带回实验室进行分离。采用稀释平板分离法，将葡萄叶片剪碎后悬浮于含有1％吐温80的无菌水中，取100μL悬浮液涂布于YEPD固体培养基上，28℃培养3d，挑取单菌落进行鉴定。
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株，在NA培养基上的菌落为扁平、边缘不整齐、微黄色、表面粗糙不透明，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。细胞形态和排列呈杆状、单生。革兰氏阳性，长2.5～3.5μm；宽0.8～1.5μm，产生近中生的椭圆状芽孢，孢囊稍膨大。无荚膜，无鞭毛，能运动。最佳生长温度为30℃；最适生长pH为7.0。V-P反应阳性；接触酶阳性，卵磷脂阳性，还原硝酸盐；在7％NaCl和pH 5-7肉汤中生长良好；可利用葡萄糖、木糖、甘露醇、柠檬酸盐、淀粉和酪素，但不能利用阿拉伯糖。通过菌落特征、细胞形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列特征，鉴定其为地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)Y24菌株。
实施例2复配组合物
20亿地衣芽孢杆菌Y24活芽孢/毫升水剂的制备方法是在芽孢含量为20亿/毫升的发酵液中加入1％吐温80、0.5％山梨醇制成。
中生菌素原药：深圳诺普信农化股份有限公司生产，剂型为可湿性粉剂，中生菌素含量为3％。
将20亿地衣芽孢杆菌Y24活芽孢/毫升水剂和中生菌素原药按表1中质量百分比混合。
表1复配组合物实施例列表
实施例3复配制剂
复配制剂一
取20亿地衣芽孢杆菌Y24活芽孢/毫升水剂100mL，100g中生菌素原药，加入95g高岭土，3g木质素磺酸钠，2g硫酸铵，1g聚乙二醇，混合均匀后进行干燥、粉碎，320目筛分，得到复配制剂。其中地衣芽孢杆菌Y24活芽孢的含量为6.6亿/毫升，中生菌素含量为1％，高岭土含量为31.4％，木质素磺酸钠含量为1％，硫酸铵含量为0.6％，聚乙二醇含量为0.3％。
复配制剂二
取20亿地衣芽孢杆菌Y24活芽孢/毫升水剂100mL，100g中生菌素原药，加入100g高岭土，5g木质素磺酸钠，4g硫酸铵，2g聚乙二醇，混合均匀后进行干燥、粉碎，320目筛分，得到复配制剂。其中地衣芽孢杆菌Y24活芽孢的含量为6.4亿/毫升，中生菌素含量为0.9％，高岭土含量为32.1％，木质素磺酸钠含量为1.6％，硫酸铵含量为1.3％，聚乙二醇含量为0.6％。
复配制剂三
取20亿地衣芽孢杆菌Y24活芽孢/毫升水剂100mL，100g中生菌素原药，加入105g高岭土，7g木质素磺酸钠，6g硫酸铵，3g聚乙二醇，混合均匀后进行干燥、粉碎，320目筛分，得到复配制剂。其中地衣芽孢杆菌Y24活芽孢的含量为6.2亿/毫升，中生菌素含量为0.9％，高岭土含量为32.7％，木质素磺酸钠含量为2.1％，硫酸铵含量为1.9％，聚乙二醇含量为0.9％。
测试例
测试例1 复配组合物抑制葡萄白腐病菌生长的增效作用测定
供试菌株：葡萄白腐病菌cfcc83954购于北京豫鼎新捷有限公司。
被测药剂：实施例2中提供的复配组合物一至五。
对比药剂：20亿地衣芽孢杆菌Y24活芽孢/毫升水剂由衡水学院生命科学系微生物学实验室提供。
3％中生菌素由深圳诺普信农化股份有限公司提供。
1.室内增效作用测定：
供试葡萄白腐病菌cfcc83954菌株在PDA(每升中含马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、自然pH)培养基上活化直到长出黑色的分生孢子器，用接种环刮取后溶于无菌蒸馏水中，振荡后使分生孢子浓度达到105个/mL，吸取100μL均匀涂在PDA平板上晾干，将1个直径为6mm灭菌滤纸片放在平板中央备用。
将20亿地衣芽孢杆菌Y24活芽孢/毫升水剂稀释成8×106cfu/mL、4×106cfu/mL、8×105cfu/mL、4×105cfu/mL、8×104cfu/mL、4×104cfu/mL 6个不同梯度。
将3％中生菌素稀释成800ppm、400ppm、80ppm、40ppm、8ppm、4ppm6个不同梯度。
将复配组合物一至五稀释5倍、10倍、50倍、100倍、500倍、1000倍6个不同梯度。
将3种待测药剂稀释成6个不同梯度，然后分别吸取50μL不同浓度的待测药液滴在灭菌滤纸片上，同时设立空白对照(将无菌水滴入灭菌滤纸片)，每处理3个重复。当空白对照平板长满葡萄白腐病菌时，测量抑菌圈直径，并计算抑制率。
抑制率(％)＝(对照组菌落直径-处理组菌落直径)/对照组菌落直径×100
采用毒力曲线法即取剂量对数为横坐标(x)，抑菌百分率值为纵坐标(y)，在计算机上绘制毒力曲线，求出两种药剂毒力回归方程(y＝a+bx)、相关系数(r)，进而计算出EC50值。
复配剂的理论EC50＝单剂ⅠEC50×配比数+单剂ⅡEC50×配比数
增效系数SR＝混合物的理论EC50/混合物的实测EC50
参考Wadley公式，增效系数SR>1.5为增效作用，1.5>SR>1为相加作用，SR<1.0为拮抗作用。
室内试验结果表明(表2)，被测的复配组合物均对抑制葡萄白腐病菌的生长均好于单一菌剂。复配组合物一、二、四、五的增效系数在这个范围(1.5>SR>1)，所以这几个复配组合表现出对抑制葡萄白腐病菌的生长有相加作用。特别是复配组合物三的增效系数达到2.26，其值>1.5，说明这个组合具有增效作用。
表2复配组合物抑制葡萄白腐病菌生长的增效测定
药剂 回归方程 EC50(μg/mL) 增效系数
20亿活芽孢/毫升水剂 y＝0.5214x+4.369 16.22 /
3％中生菌素 y＝0.2811+4.543 42.45 /
复配组合物一 y＝0.6367+4.167 20.34 1.05
复配组合物二 y＝0.1608+4.814 14.76 1.45
复配组合物三 y＝0.7756+4.242 9.49 2.26
复配组合物四 y＝0.2773+4.655 17.25 1.24
复配组合物五 y＝0.0778+4.897 21.08 1.02
测试例2 复配制剂防治葡萄白腐病的室内离体果试验
试验葡萄品种：巨峰
被测药剂：实施例3中提供的复配制剂一至三。
对比药剂：20亿地衣芽孢杆菌Y24活芽孢/毫升水剂由衡水学院生命科学系微生物学实验室提供。
3％中生菌素由深圳诺普信农化股份有限公司提供。
1.室内离体果试验设计：
试验共6个处理：A、稀释100倍的20亿地衣芽孢杆菌Y24活芽孢/毫升水剂；B、稀释100倍的3％中生菌素；C、稀释100倍的复配制剂一；D、稀释100倍的复配制剂二；E、稀释100倍的复配制剂三；F、无菌水对照。每处理喷施100粒葡萄，重复3次。先喷布单一菌剂或复配制剂，一天后用医用采血针刺伤同一深度后接种白腐病菌孢子悬液(1×106个孢子/mL)，每个葡萄刺伤2个点，27℃保温、保湿4日后观察病斑大小。
病情分级标准如下：
0级：无病斑；
1级：病斑面积占果实面积5％以下；
3级：病斑面积占果实面积6-15％；
5级：病斑面积占果实面积16-30％；
7级：病斑面积占果实面积31-50％；
9级：病斑面积占果实面积50％以上。
试验结果表明(表3)，复配制剂的室内离体果的防治效果均好于单一菌剂，说明该菌剂复配后更有利于抑菌作用的发挥。在三种配比的复配制剂中，复配制剂二防治效果最好，防效可达89.77％。该复配制剂的防效好于复配制剂一和复配制剂三(防效分别为80.39％和75.68％)，明显好于20亿活芽孢/毫升水剂和3％中生菌素对葡萄白腐病的离体防治效果(防效分别为72.38％和64.31％)。
表3复配制剂对葡萄白腐病的室内离体果试验
处理 病情指数 防治效果(％)
20亿活芽孢/毫升水剂 24.67±1.47c 72.38±1.36b
3％中生菌素 31.88±1.39b 64.31±1.19c
复配制剂一 17.52±0.42d 80.39±2.44a
复配制剂二 9.13±0.36d 89.77±2.78a
复配制剂三 23.73±0.89c 75.68±1.89b
无菌水对照 89.34±3.55a -
注：表中数据为平均数±标准差。同列数据后不同小写字母表示经Duncan氏新复极差法检验在P<0.05水平差异显著。
测试例3 复配制剂防治葡萄白腐病的田间试验
试验葡萄品种：巨峰
被测药剂：实施例3提供的复配制剂一至三。
对比药剂：20亿地衣芽孢杆菌Y24活芽孢/毫升水剂由衡水学院生命科学系微生物学实验室提供。
3％中生菌素由深圳诺普信农化股份有限公司提供。
1.田间药效试验设计：
试验共6个处理：A、稀释100倍的20亿地衣芽孢杆菌Y24活芽孢/毫升水剂；B、稀释100倍的3％中生菌素；C、稀释100倍的复配制剂一；D、稀释100倍的复配制剂二；E、稀释100倍的复配制剂三；F、无菌水对照。每处理喷施150株葡萄树，重复3次，每亩复配生物杀菌剂的用量为5kg。采用手动式喷雾器喷药，每隔6天喷药一次，共喷9次。每株均匀喷雾，喷药量以叶片和果实的正反面湿润、树体均匀着药、稍有药滴下淌为度。试验期间无降雨，无灾难性气候和其他病虫害影响。45日后，调查各个处理区的葡萄白腐病发病指数，计算防治效果。
病情的分级标准、病情指数和防治效果的计算方法同测试例2。
田间试验结果表明(表4)，复配制剂的田间防效均好于单一菌剂，说明该菌剂复配后可以增强田间的防治效果。在三种配比的复配制剂中，复配制剂二防治效果最好，防效可达83.24％。该复配制剂的防效好于复配制剂一和复配制剂三(防效分别为78.65％和71.14％)，明显好于20亿活芽孢/毫升水剂和3％中生菌素对葡萄白腐病的防治效果(防效分别为65.87％和59.44％)。
表4复配制剂对葡萄白腐病的田间防效试验
处理 喷雾4次后病情指数 防治效果(％)
20亿活芽孢/毫升水剂 28.15±1.83c 65.87±1.49b
3％中生菌素 33.45±1.26b 59.44±1.24c
复配制剂一 17.61±0.38d 78.65±2.35a
复配制剂二 13.82±0.41d 83.24±2.14a
复配制剂三 23.81±0.82c 71.14±1.29b
无菌水对照 82.47±3.96a -
注：表中数据为平均数±标准差。同列数据后不同小写字母表示经Duncan氏新复极差法检验在P<0.05水平差异显著。
综上，本发明所涉及的地衣芽孢杆菌的复配组合物和复配制剂，具有协同增效作用，能增强对葡萄白腐病的防治效果。通过该复配组合物和复配制剂的使用，在葡萄园生态环境中引入大量有益微生物，恶化病原菌的生存环境；结合栽培管理等农业措施，形成一个稳定的、平衡的、生物多样化的葡萄园生态系统，达到一药多治、持久地控制葡萄病害流行的目的。防治效果好、无污染、对人畜安全、无残留和特异性强等优点，且对保护环境、维持生态平衡具有重要的现实意义。
最后应说明的是：在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包含一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个…”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制。尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (8)

1.一种地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2015年9月25日，保藏编号为CGMCCNo.11448。
2.如权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株分离于葡萄叶片。
3.一种复配组合物，其特征在于，包含如权利要求1或2所述的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)Y24菌株，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株的活芽孢数为4～16亿/毫升，
所述复配组合物还包括中生菌素，其含量为0.6～2.4％。
4.如权利要求3所述的复配组合物，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)Y24菌株的活芽孢数为10亿/毫升，所述中生菌素含量为1.5％。
5.一种复配制剂，其特征在于，包含如权利要求3所述的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)Y24菌株和中生菌素，还包括载体、分散剂、崩解剂和粘结剂，所述各组分的含量为:
6.如权利要求5所述的复配制剂，其特征在于，所述载体为高岭土，所述分散剂为木质素磺酸钠，所述崩解剂为硫酸铵，所述粘结剂为聚乙二醇。
7.如权利要求6所述的复配制剂，其特征在于，所述复配制剂中各组分的含量为：
8.如权利要求1-2任一项所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y24菌株，如权利要求3-4任一项所述的复配组合物或如权利要求5-7任一项所述的复配制剂在用于抑制葡萄白腐病菌生长、防治葡萄白腐病的药物的制备中的应用。
CN201710399782.4A 2017-05-31 2017-05-31 一种地衣芽孢杆菌及其应用 Active CN106967656B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710399782.4A CN106967656B (zh) 2017-05-31 2017-05-31 一种地衣芽孢杆菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710399782.4A CN106967656B (zh) 2017-05-31 2017-05-31 一种地衣芽孢杆菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106967656A true CN106967656A (zh) 2017-07-21
CN106967656B CN106967656B (zh) 2020-04-28

Family

ID=59326633

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710399782.4A Active CN106967656B (zh) 2017-05-31 2017-05-31 一种地衣芽孢杆菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106967656B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112322611A (zh) * 2020-11-27 2021-02-05 陕西麦可罗生物科技有限公司 一种筛选中生菌素高产菌株的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101653131A (zh) * 2009-07-31 2010-02-24 深圳诺普信农化股份有限公司 一种含有嘧菌酯的杀菌组合物
CN106942284A (zh) * 2017-03-22 2017-07-14 衡水学院 一种防治葡萄病害的复配生物杀菌剂及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101653131A (zh) * 2009-07-31 2010-02-24 深圳诺普信农化股份有限公司 一种含有嘧菌酯的杀菌组合物
CN106942284A (zh) * 2017-03-22 2017-07-14 衡水学院 一种防治葡萄病害的复配生物杀菌剂及其应用

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112322611A (zh) * 2020-11-27 2021-02-05 陕西麦可罗生物科技有限公司 一种筛选中生菌素高产菌株的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN106967656B (zh) 2020-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Vetrivelkalai et al. Biocontrol potential of endophytic bacteria on Meloidogyne incognita and its effect on plant growth in bhendi
CN102433282B (zh) 枯草芽孢杆菌nb12及其培养方法和应用
CN101250495B (zh) 一株植物病原真菌拮抗菌及其在防治植物病害中的应用
CN106591185A (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌植物亚种及其菌剂的制备和应用
CN106508970B (zh) 一种复配杀菌组合物及其应用
CN102827790B (zh) 一种枯草芽孢杆菌菌株a97、菌剂及制备方法和应用
CN101463332A (zh) 抗生链霉菌
CN104673705B (zh) 一株防治小麦赤霉病的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN104017749B (zh) 一种内生枯草芽孢杆菌正突变株、制备方法和制备的生防菌剂及其防治石榴干腐病的应用
CN102199558A (zh) 桔黄假单胞菌的培育方法及应用
CN104130958A (zh) 一株枯草芽孢杆菌及其在防治牡丹根结线虫病上的应用
CN106011030B (zh) 一种诱变菌株Bs6602v及其应用
Qiao et al. Management of bacterial spot of tomato caused by copper-resistant Xanthomonas perforans using a small molecule compound carvacrol
CN104789509B (zh) 一株杜仲内生短小芽孢杆菌及其应用
CN108611287A (zh) 一株控制桃果采后病害的膜醭毕赤酵母
CN104904751A (zh) 一种小麦赤霉病液体生防菌剂及其制备方法
CN102021122A (zh) 一种高效杀虫真菌及其用途
CN106222121B (zh) 一种巨大芽孢杆菌菌株、生防菌剂及其制备方法与应用
CN109182217B (zh) 一种生防用甲基营养型芽孢杆菌菌株及其用途
CN107760630B (zh) 一种甲基营养型芽孢杆菌b18及其菌剂和应用
CN103749545A (zh) 玫烟色棒束孢与苏云金杆菌可湿性粉剂
CN106591168B (zh) 一种烟嘧磺隆降解赤红球菌ymhl-1及其应用
CN106942284B (zh) 一种防治葡萄病害的复配生物杀菌剂及其应用
İşçi et al. Effects of IBA and plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR) on rooting of Ramsey American grapevine rootstock.
CN106701614A (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其组合物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Ma Guang

Inventor after: Guo Jiping

Inventor before: Guo Jiping

Inventor before: Ma Guang

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant