CN106963981A - 一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法 - Google Patents

一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106963981A
CN106963981A CN201710264324.XA CN201710264324A CN106963981A CN 106963981 A CN106963981 A CN 106963981A CN 201710264324 A CN201710264324 A CN 201710264324A CN 106963981 A CN106963981 A CN 106963981A
Authority
CN
China
Prior art keywords
chitin
cell
placenta
preparation
tissue
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710264324.XA
Other languages
English (en)
Inventor
张春松
吴长应
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhu Yangzhan New Material Technology Service Co Ltd
Original Assignee
Wuhu Yangzhan New Material Technology Service Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuhu Yangzhan New Material Technology Service Co Ltd filed Critical Wuhu Yangzhan New Material Technology Service Co Ltd
Priority to CN201710264324.XA priority Critical patent/CN106963981A/zh
Publication of CN106963981A publication Critical patent/CN106963981A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/20—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/58—Materials at least partially resorbable by the body
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/60—Materials for use in artificial skin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法，属于复合生物材料制备领域，包括：胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)体外培养、甲壳素膜的制备、胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)的接种。本发明制得的胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料取材的便利，不涉及社会伦理等问题，可以加快皮肤修复，具有优良的组织修复的功效。

Description

一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法
技术领域
本发明属于复合生物材料制备领域，具体涉及一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法。
背景技术
近年来，具有增殖和分化潜能的干细胞己经成为皮肤组织工程中好的种子细胞。胚胎干细胞在皮肤组织工程中应用研究，为构建组织工程皮肤在皮肤损伤修复的应用提供了理论依据。但是胚胎干细胞在医学应用上存在道德伦理问题和致瘤性等限制因素，而具有多向分化潜能的多能干细胞一一间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)作为良好的种子细胞，在皮肤组织工程研究中倍受关注。以往的研究主要是集中于骨髓来源的BMSCs但BMSCs需要通过骨髓穿刺而获得，且数量随年龄增长而下降，这都限制了BMSCs的应用，且支架材料的选择和应用一直影响该技术发展的重要难题。
发明内容
根据现有技术中存在问题，本发明采用新生儿娩后“废弃物”的胎盘组织获取CMSCs，并选用甲壳素材料作为支架材料，制得胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料。
本发明采用以下技术方案：
一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：机械剥除胎盘羊膜组织，将剥离后剩下的绒毛组织，过质量浓度75％的酒精，再用PBS冲洗洗尽血渍，并将其剪成1mm2小块后，浸没于含有质量浓度0.1％的IV型胶原酶的低糖基础培养基(L-DMEM)中，37℃消化15-45分钟,得细胞组织液；
步骤二：细胞组织液经200目筛网过筛后转移至干净的离心管，1200rpm离心lOmin，弃上清液后接种于含有质量浓度10％的胎牛血清的低糖基础培养基(L-DMEM)中，于37℃、5％CO2的培养箱中培养5天后进行第一次换液，随后每隔两天进行换液，待细胞融合至90％使用质量浓度0.25％的胰酶进行消化，得胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)；
步骤三：将160g甲壳素粉末加入到616mL、46wt％的NaOH溶液,于冰浴中溶胀6h,于-20℃冷冻24h,解冻、过滤,制得甲壳素钠盐溶液；
步骤四：将甲壳素钠盐溶液真空脱泡后于洁净的玻璃板上刮膜,待膜流平后,依次于5wt％CaCl2和1wt％HCl溶液中凝固30min和5min，取膜，并用去离子水洗净,将湿膜固定于有机玻璃板上自然晾干，得甲壳素膜；
步骤五：取生长状况良好的胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)接种于甲壳素膜上，接种时间为2-12h，即得胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料。
优选的，所述的步骤一还包括：将剥离后剩下的绒毛组织制成面积为10cm2。
优选的，步骤一中所述的PBS中含有质量浓度0.1％的青-链霉素。
优选的，所述的步骤三中甲壳素粉末的乙酰度和粘均分子量分别为92.5％和1.31×106。
优选的，所述的步骤四还包括：将甲壳素膜置于24孔板中，于放射CO60辐射消毒。
本发明的有益效果在于：
1)胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)具有较强的增殖、分化能力，且取材的便利，不涉及社会伦理等问题的优势，其作为种子细胞在皮肤组织工程中具有极大的运用前景。
2)甲壳素生物相容性好，可降解，具有良好的抗凝血性和较低的人体免疫原性,其膜对尿素、尿酸、肌肝等物质透过性能良好并可抑止Na+、K+等金属离子和血清蛋白的透过。
3)本发明制得的组织修复材料，可以加快皮肤修复，具有优良的组织修复的功效。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明。
一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：机械剥除胎盘羊膜组织，将剥离后剩下的绒毛组织制成面积为10cm2，过质量浓度75％的酒精，再用含有质量浓度0.1％的青-链霉素的PBS冲洗洗尽血渍，并将其剪成1mm2小块后，浸没于含有质量浓度0.1％的IV型胶原酶的低糖基础培养基(L-DMEM)中，37℃消化15-45分钟,得细胞组织液；
步骤二：细胞组织液经200目筛网过筛后转移至干净的离心管，1200rpm离心lOmin，弃上清液后接种于含有质量浓度10％的胎牛血清的低糖基础培养基(L-DMEM)中，于37℃、5％CO2的培养箱中培养5天后进行第一次换液，随后每隔两天进行换液，待细胞融合至90％使用质量浓度0.25％的胰酶进行消化，得胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)；
步骤三：将160g甲壳素粉末加入到616mL、46wt％的NaOH溶液,于冰浴中溶胀6h,于-20℃冷冻24h,解冻、过滤,制得甲壳素钠盐溶液；
步骤四：将甲壳素钠盐溶液真空脱泡后于洁净的玻璃板上刮膜,待膜流平后,依次于5wt％CaCl2和1wt％HCl溶液中凝固30min和5min，取膜，并用去离子水洗净,将湿膜固定于有机玻璃板上自然晾干，得甲壳素膜，将甲壳素膜置于24孔板中，于放射CO60辐射消毒；
步骤五：取生长状况良好的胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)接种于消毒后的甲壳素膜上，接种时间为2-12h，即得胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料。
所述的步骤三中甲壳素粉末的乙酰度和粘均分子量分别为92.5％和1.31×106。
取200g左右SD大鼠12只，将SD大鼠麻醉后造模处理，背部剃毛消毒灭菌后，剪开5cm直径大小圆形皮肤缺损创面，将实施例制得的胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料植入其中，得实验组；空白对照组在相同创面处，覆盖凡士林纱布。于术后每天观察创面情况，并于30天后进行组织切片HE染色，将实验组、空白组进行比较。
实验结果显示，与未加入任何材料的空白对照组相比，本发明制得的胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料能够更好更快的修复大鼠皮肤损伤。手术5天后，实验组大鼠背部创面伤口缝线处己经愈合，创面干燥，无分泌物。lOd后，实验组大鼠的创面基本愈合，创口伴有鲜红色的肉芽组织生成，空白对照组创面可见大量脓性分泌物。30天后，实验组的大鼠创面面积缩小，创面完全愈合，创面处己生长毛发，与周围皮肤几乎融为一体；空白对照组创面结痴，暗红色血块，皮肤未修复完成。

Claims (5)

1.一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：机械剥除胎盘羊膜组织，将剥离后剩下的绒毛组织，过质量浓度75％的酒精，再用PBS冲洗洗尽血渍，并将其剪成1mm2小块后，浸没于含有质量浓度0.1％的IV型胶原酶的低糖基础培养基中，37℃消化15-45分钟,得细胞组织液；
步骤二：细胞组织液经200目筛网过筛后转移至干净的离心管，1200rpm离心lOmin，弃上清液后接种于含有质量浓度10％的胎牛血清的低糖基础培养基中，于37℃、5％CO2的培养箱中培养5天后进行第一次换液，随后每隔两天进行换液，待细胞融合至90％使用质量浓度0.25％的胰酶进行消化，得胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)；
步骤三：将160g甲壳素粉末加入到616mL、46wt％的NaOH溶液,于冰浴中溶胀6h,于-20℃冷冻24h,解冻、过滤,制得甲壳素钠盐溶液；
步骤四：将甲壳素钠盐溶液真空脱泡后于洁净的玻璃板上刮膜,待膜流平后,依次于5wt％CaCl2和1wt％HCl溶液中凝固30min和5min，取膜，并用去离子水洗净,将湿膜固定于有机玻璃板上自然晾干，得甲壳素膜；
步骤五：取生长状况良好的胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)接种于甲壳素膜上，接种时间为2-12h，即得胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料。
2.根据权利要求1所述的一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法，其特征在于，所述的步骤一还包括：将剥离后剩下的绒毛组织制成面积为10cm2。
3.根据权利要求1所述的一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法，其特征在于：步骤一中所述的PBS中含有质量浓度0.1％的青-链霉素。
4.根据权利要求1所述的一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法，其特征在于：所述的步骤三中甲壳素粉末的乙酰度和粘均分子量分别为92.5％和1.31×106。
5.根据权利要求1所述的一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法，其特征在于，所述的步骤四还包括：将甲壳素膜置于24孔板中，于放射CO60辐射消毒。
CN201710264324.XA 2017-04-21 2017-04-21 一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法 Pending CN106963981A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710264324.XA CN106963981A (zh) 2017-04-21 2017-04-21 一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710264324.XA CN106963981A (zh) 2017-04-21 2017-04-21 一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106963981A true CN106963981A (zh) 2017-07-21

Family

ID=59333958

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710264324.XA Pending CN106963981A (zh) 2017-04-21 2017-04-21 一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106963981A (zh)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1318583A (zh) * 2001-04-30 2001-10-24 武汉大学 甲壳素/纤维素共混材料及其制法和用途
CN1746193A (zh) * 2005-09-15 2006-03-15 武汉大学 一种低分子量壳聚糖或壳寡糖的制备方法
CN101062428A (zh) * 2006-04-24 2007-10-31 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 一种组织工程化皮肤的构建方法与应用
CN101177802A (zh) * 2007-11-12 2008-05-14 青岛海之锦科技有限公司 甲壳素与纤维素皮芯复合纤维及其制备方法
CN101230110A (zh) * 2008-01-17 2008-07-30 江汉大学 甲壳素的溶解方法
CN103239762A (zh) * 2013-05-23 2013-08-14 中国海洋大学 一种甲壳素膜及其在眼科治疗中的应用
CN104710629A (zh) * 2015-03-30 2015-06-17 武汉大学 一种甲壳素膜及其制备方法
CN104726403A (zh) * 2015-03-19 2015-06-24 河南中科干细胞基因工程有限公司 一种人胎盘来源间充质干细胞的分离、培养方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1318583A (zh) * 2001-04-30 2001-10-24 武汉大学 甲壳素/纤维素共混材料及其制法和用途
CN1746193A (zh) * 2005-09-15 2006-03-15 武汉大学 一种低分子量壳聚糖或壳寡糖的制备方法
CN101062428A (zh) * 2006-04-24 2007-10-31 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 一种组织工程化皮肤的构建方法与应用
CN101177802A (zh) * 2007-11-12 2008-05-14 青岛海之锦科技有限公司 甲壳素与纤维素皮芯复合纤维及其制备方法
CN101230110A (zh) * 2008-01-17 2008-07-30 江汉大学 甲壳素的溶解方法
CN103239762A (zh) * 2013-05-23 2013-08-14 中国海洋大学 一种甲壳素膜及其在眼科治疗中的应用
CN104726403A (zh) * 2015-03-19 2015-06-24 河南中科干细胞基因工程有限公司 一种人胎盘来源间充质干细胞的分离、培养方法
CN104710629A (zh) * 2015-03-30 2015-06-17 武汉大学 一种甲壳素膜及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李涛等: "天然高分子外敷材料研究进展", 《化学通报》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101613478B1 (ko) 중간엽줄기세포-하이드로겔을 함유하는 조성물 및 이의 제조방법
KR101585032B1 (ko) 중간엽줄기세포-하이드로겔을 함유하는 조성물 및 이의 제조방법
CN101954124A (zh) 含基底膜的组织工程皮肤及其构建方法
CN105013014A (zh) 一种无细胞基质生物材料的制备方法和用途
CN104587528A (zh) 人心脏瓣膜组织脱细胞基质及其制备和应用
CN105079783A (zh) 药物组合物及其制备方法和用途
CN107233623A (zh) 一种可用于组织工程皮肤生物支架的脱细胞羊膜的制备方法
Wang et al. Hybrid hydrogel composed of hyaluronic acid, gelatin, and extracellular cartilage matrix for perforated TM repair
CN1775302A (zh) 壳聚糖－明胶海绵伤口敷料的制备方法
Fitriani et al. Application of amniotic membrane in skin regeneration
CN105169494A (zh) 一种组织工程皮肤的制备方法
CN104971382B (zh) 一种用无血清和牛垂体提取物培养液构建的创口贴式人工活性组织及其构建方法
CN103113627B (zh) 一种用于细胞培养的多糖/Matrigel复合凝胶膜及其制备方法和应用
CN105031724A (zh) 一种组织工程软骨支架及其制备方法
CN209092278U (zh) 一种复合抑菌生物硬脑膜补片
CN110694096A (zh) 一种活性创面皮肤修复敷料及其制备方法
CN106963981A (zh) 一种胎盘干细胞复合甲壳素组织修复材料的制备方法
CN106938054A (zh) 一种胎盘干细胞复合生物活性玻璃敷料的制备方法
CN105193847A (zh) 一种含有脂肪干细胞的凝胶制剂及其制备方法和医用敷料
Liu et al. Development of a biodegradable foam for use in negative pressure wound therapy
Li et al. Human acellular amniotic membrane as skin substitute and biological scaffold: a review of its preparation, preclinical research, and clinical application
CN102114272A (zh) 一种负载季铵化壳聚糖和质粒dna复合粒子的皮肤再生材料的制备方法
CN105497984A (zh) 一种羊膜生物制剂的制备及其保存方法
Jiang et al. Application of collagen-chondroitin sulfate scaffolds with different pore sizes combined with acidic fibroblast growth factor in repairing full thickness skin defects in nude mice
CN107126581A (zh) 一种胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170721

RJ01 Rejection of invention patent application after publication