CN106939028B - 炔苷类化合物及其提取分离方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及炔苷类化合物及其提取分离方法和应用，属于天然化合物提取分离领域，该提取分离方法为将桔梗的粉末用甲醇超声提取，将提取液浓缩得第一浸膏；第一浸膏加水溶解并加入到吸附树脂用乙醇进行梯度洗脱，将梯度洗脱的洗脱液第二次浓缩得第二浸膏；将第二浸膏用体积比为1:28‑32:1:28‑32的正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的溶剂系统进行逆流色谱分离纯化，收集聚炔类成分流出液；将聚炔类成分流出液第三次浓缩后用高效液相色谱仪，以乙腈‑水作流动相进行制备；该方法高效、快速，提纯出的炔苷类化合物具有抗微生物、抗肿瘤等活性，能够被应用于制备抗生物毒性药物。

Description

炔苷类化合物及其提取分离方法和应用
技术领域
本发明涉及天然化合物提取分离领域，且特别涉及炔苷类化合物及其提取分离方法和应用。
背景技术
聚炔类成分是一种较为特殊的天然化合物，主要分布在菊科、桔梗科、五加科、伞形科和海桐花科等植物组织中，其在抗微生物、细胞毒及抗肿瘤活性等方面具有良好的生物活性。现有的炔苷类化合物的种类有限，含量很低；并且现有的萃取方法耗时，溶剂消耗大，回收溶剂繁琐。
发明内容
本发明的目的在于提供一种炔苷类化合物，其在抗微生物、细胞毒以及抗肿瘤活性等方面具有良好的生物活性，能够被应用于制备相关的药物等。
本发明的另一目的在于提供一种炔苷类化合物在制备抗生物毒性药物中的应用，其能够发挥出突出的抗微生物、抗细胞毒以及抗肿瘤等作用。
本发明还有一目的在于提供一种炔苷类化合物的提取分离方法，此提取分离方法能够简单、高效、快速提纯桔梗中的炔苷类化合物，以便提取分离出更多的炔苷类化合物，满足市场对炔苷类化合物的需求量。
本发明采用以下技术方案来实现。
本发明提出一种炔苷类化合物，结构通式为
其中R为cis-丙烯基或1-丙炔基。
本发明提出一种炔苷类化合物在制备抗生物毒性药物中的应用。
本发明提出一种上述炔苷类化合物的提取分离方法，包括：
将桔梗的粉末，用甲醇超声提取后，将提取液第一次浓缩得第一浸膏；
将第一浸膏加水溶解并加入到AB-8弱极性大孔树脂用乙醇进行梯度洗脱，梯度洗脱按以下方式进行：以水和体积分数为20％-40％的乙醇作为洗脱液进行第一次洗脱，再以体积分数为50％-60％的乙醇作为洗脱液进行第二次洗脱，将梯度洗脱后的洗脱液第二次浓缩得第二浸膏；
将第二浸膏用体积比为1:28-32:1:28-32的正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的溶剂系统进行逆流色谱分离纯化，收集聚炔类成分流出液；逆流色谱分离的流速为4-6mL/min，转速为800r/s；
将聚炔类成分流出液第三次浓缩后用乙腈-水作流动相，应用高效液相色谱进行制备；高效液相色谱的应用按以下方式进行：以水为流动相A，以乙腈为流动相B，设置高效液相色谱的程序为：0-5min，乙腈的体积分数为0％→5％；5-15min，乙腈的体积分数为5％→20％；15-30min，乙腈的体积分数为20％→30％；30-35min，乙腈的体积分数为30％→100％；35-40min，乙腈的体积分数为100％；设置高效液相色谱的检测波长为254nm，流速为1mL/min，进样体积为20μL；
根据液相色谱图接取目标组分后，待洗脱液挥发后，得到炔苷类化合物；
炔苷类化合物的结构通式为：
其中R为cis-丙烯基或1-丙炔基。
本发明实施例的炔苷类化合物及其提取分离方法和应用的有益效果是：该炔苷类化合物具有抗微生物、细胞毒以及抗肿瘤等良好生物活性，并能够被应用于制备抗生物毒性药物；炔苷类化合物的提取分离方法能够简单、高效、快速提纯桔梗中的炔苷类化合物，以便提取分离出更多的炔苷类化合物，满足市场对炔苷类化合物的需求量。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的炔苷类化合物及其提取分离方法和应用进行具体说明。
本发明的炔苷类化合物的结构通式为：
上式R为cis-丙烯基或1-丙炔基。
该化合物能够被应用于制备抗生物毒性药物当中，其中，抗生物毒性药物可以是抗细胞毒性药物，上述细胞可以是细菌、常态细胞、肿瘤细胞等；进一步地，上述抗细胞毒性药物可以是抗微生物药物和抗肿瘤等药物，即上述炔苷类化合物具有良好的抗微生物、细胞毒、抗肿瘤等生物活性。
具体地，上述炔苷类化合物可以从桔梗中分离纯化而得，其具体提取分离方法如下：
将桔梗粉碎为粉末，准备进行提取步骤。作为优选，可以对桔梗粉末进行过筛处理，过筛后的桔梗粉末的粒度为200-300目，在进行提取时，桔梗粉末越细腻，对有效物质的提取越多，即提高提取时对桔梗的利用率。
将桔梗的粉末用甲醇进行超声提取，并对提取液进行第一次浓缩，得到第一浸膏。
具体地，上述超声提取是指利用超声波振动的方法进行提取的新工艺，使溶剂快速地进入固体物质中，将固体物质中所含的有机成分尽可能完全地溶于溶剂之中。超声提取可以强化提取分离过程，可以有效地提高提取分离率，缩短提取时间、节约成本，还可以提高产品的质量和产量。
进一步地，用6-10倍量的甲醇对上述桔梗粉末进行提取。采用6-10倍量的甲醇进行提取，能够尽可能的提高桔梗中炔苷类化合物的提取率。
更进一步地，先用10倍量的甲醇对桔梗粉末提取第一次，提取的时间为0.3-0.7h，提取后过滤，收集滤液；再用8倍量的甲醇对经过一次提取的桔梗粉末提取第二次，提取时间为0.3-0.7h，提取后过滤收集滤液；最后，用6倍量的甲醇对经过二次提取的桔梗粉末提取第三次，提取时间为0.3-0.7h，提取后过滤，收集滤液。
用不同倍量的甲醇对桔梗粉末进行分次提取，能够使桔梗中的炔苷类化合物更加充分的被提取出来，即充分提高桔梗中有机物的提取率，以增加炔苷类化合物的提取分离量。
具体地，前述的第一次浓缩例如可以采用减压浓缩。减压浓缩通常是在较低的温度下进行，可以有效地避免滤液中的有效成分不耐高温，避免了不稳定成分被破坏和损失。而且，减压浓缩虽然浓缩温度低，但其蒸发的速率快，可以加快炔苷类化合物提纯分离的速率。
将前述第一浸膏加水溶解后加入吸附树脂用乙醇进行梯度洗脱，具体地，先以水和体积分数为20％-40％的乙醇作为洗脱液进行第一次洗脱，再以体积分数为50％-60％的乙醇作为洗脱液进行第二次洗脱，最后对第二次洗脱后的洗脱液进行第二次浓缩，得到第二浸膏。
上述第一次洗脱的目的在于将第一浸膏中的糖、无机盐等物质除去，以提高炔苷类提取分离物的纯度；第二次洗脱的目的在于将第一浸膏中的聚炔类成分富集于洗脱液中，以便于后续步骤中进一步的分离纯化。
作为优选，第一次洗脱时的乙醇的体积分数为30％，乙醇在此体积分数下，能够将第一浸膏中的糖、无机盐等杂质充分除去，同时又能够减少提纯分离的溶剂消耗；第二次洗脱时的乙醇的体积分数为50％，乙醇在此体积分数下，能够将第一浸膏中的聚炔类成分充分的富集于第二次洗脱的洗脱液当中，进一步提高聚炔类成分的富集量，同时进一步减少了提纯分离时溶剂的消耗。
进一步优选地，上述的吸附树脂为AB-8弱极性大孔树脂，且以8倍柱体积的水和体积分数为30％的乙醇进行洗脱。AB-8弱极性大孔树脂对于杂质的吸附效果突出，能够快速、准确的吸附第一浸膏中的杂质，提高聚炔类成分的纯度。
进一步地，上述的第二次浓缩可以采用和第一次浓缩相同的减压浓缩，有利于避免洗脱液中的聚炔类成分在高温中分解和损失。
将第二浸膏分离纯化后收集聚炔类成分流出液。
具体地，第二浸膏的分离纯化采用逆流色谱进行；优选地，逆流色谱分离纯化按照以下方式进行为：用体积比为1:28-32:1:28-32的正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的溶剂系统，在流速为4-6mL/min，转速为800r/s条件下进行分离。经过逆流色谱分离纯化后能够进一步的去除第二浸膏中的杂质，并可以按照色谱图接取所需的聚炔类成分。采用逆流色谱对炔苷类化合物进行分离纯化，消除了样品在固相载体上的不可逆吸附和降解造成的损失，故具有高回收率；多次进样，其分离过程都保持很稳定，而且重现性好；逆流色谱能够实现梯度洗脱和反相洗脱，亦能进行重复进样，提纯产品的纯度大，制备量大。
将经过逆流色谱分离提纯的聚炔类成分流出液第三次浓缩后，进行液相制备，用乙腈-水作流动相进行梯度洗脱(制备分离)，根据液相色谱图接取目标组分后，待洗脱液挥发后，即得本发明的炔苷类化合物。
利用高效液相色谱进行上述制备分离的具体条件如下：以水为流动相A，以乙腈为流动相B；梯度洗脱程序为：0-5min，乙腈的体积分数为0％→5％；5-15min，乙腈的体积分数为5％→20％；15-30min，乙腈的体积分数为20％→30％；30-35min，乙腈的体积分数为30％→100％；35-40min，乙腈的体积分数为100％；进一步地，高效液相色谱制备分离的检测波长为254nm，流速1mL/min，进样体积20μL。在此梯度洗脱条件下，能够进一步除去目标组分中的杂质，并且提高目标组分的提出率。需要说明的是，本发明中涉及的水可以为蒸馏水，也可以是去离子水、双蒸水等。需要说明的是，例如：0-5min，乙腈的体积分数为0％→5％；5-15min，乙腈的体积分数为5％→20％，具体是指，在梯度洗脱进行0-5min时，乙腈的体积分数从0％增加到5％，梯度洗脱进行到5-15min时，乙腈的体积分数从5％增加到20％，后续梯度洗脱程序以此类推。
将聚炔类成分洗脱液进行浓缩干燥，对得到的炔苷类化合物进行质谱和核磁的鉴定，即通过质谱确定得到的炔苷类化合物的分子量，通过核磁确定得到的炔苷类化合物的结构。表1为在400MHz，以氘代甲醇所得的核磁氢谱数据，表2为在100MHz，以氘代甲醇为溶剂所得的核磁碳谱数据，经分析表明，由本发明的提取分离方法制备出的化合物是前述的炔苷类化合物，如下所示：
桔梗炔苷A的分子式为C20H26O8，分子量为394
桔梗炔苷B的分子式为C20H28O8，分子量为396
党参炔苷的分子式为C20H28O8，分子量为396表1三种化合物的氢谱数据
表2三种化合物的碳谱数据
以下结合实施例对本发明炔苷类化合物及其提取分离方法和应用作进一步的详细描述。
实施例1
取过200目筛的桔梗粉末，依次以10、8、6倍量的甲醇超声提取，每次提取的时间均为0.5h，将每次提取的液体过滤后合并得提取液，减压浓缩得第一浸膏；用蒸馏水溶解第一浸膏，将得到的溶液用AB-8弱极性大孔树脂进行吸附，先以8倍柱体积的水和体积分数为30％的乙醇进行第一次洗脱除去溶液当中的部分糖和无机盐等物质，再用体积分数为50％的乙醇进行第二次洗脱富集聚炔类成分，将第二次洗脱后的洗脱液第二次浓缩，得第二浸膏；用逆流色谱以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:31:1:31,v/v/v/v)为溶剂系统，流速5mL/min，转速800r/s，分离纯化第二浸膏，并根据逆流色谱图接取聚炔类成分流出液；将该聚炔类成分流出液减压浓缩后，上液相用乙腈-水作流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱的条件为：流动相A为水，流动相B为乙腈，检测波长为254nm，流速1mL/min，进样体积20μL；梯度洗脱程序为：0-5min，乙腈的体积分数为0％→5％；5-15min，乙腈的体积分数为5％→20％；15-30min，乙腈的体积分数为20％→30％；30-35min，乙腈的体积分数为30％→100％；35-40min，乙腈的体积分数为100％；根据色谱接取目标组分，待其中的洗脱液挥发，即得炔苷类化合物，对上述炔苷类化合物进行质谱和核磁鉴定，即通过质谱确定得到的炔苷类化合物的分子量，通过核磁确定得到的炔苷类化合物的结构。经分析，制得的炔苷类化合物分别为：桔梗炔苷A，桔梗炔苷B和党参炔苷，具体的分子量和分子式如前述具体实施方式所示。上述炔苷类化合物均可应用于制备抗生物毒性药物。
实施例2
取过300目筛的桔梗粉末，依次以9、7倍量的甲醇超声提取，每次提取的时间均为0.7h，将每次提取的液体过滤后合并得提取液，减压浓缩得第一浸膏；用蒸馏水溶解第一浸膏，将得到的溶液用AB-8弱极性大孔树脂进行吸附，先以体积分数为40％的乙醇进行第一次洗脱除去溶液当中的部分糖和无机盐等物质，再用体积分数为60％的乙醇进行第二次洗脱富集聚炔类成分，将第二次洗脱后的洗脱液第二次浓缩，得第二浸膏；用逆流色谱以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:28:1:32,v/v/v/v)为溶剂系统，流速4mL/min，转速800r/s，分离纯化第二浸膏，并根据逆流色谱图接取聚炔类成分流出液；将该聚炔类成分流出液减压浓缩后，上液相用乙腈-水作流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱的条件为：流动相A为水，流动相B为乙腈，检测波长为254nm，流速1mL/min，进样体积20μL；梯度洗脱程序为：0-5min，乙腈的体积分数为0％→5％；5-15min，乙腈的体积分数为5％→20％；15-30min，乙腈的体积分数为20％→30％；30-35min，乙腈的体积分数为30％→100％；35-40min，乙腈的体积分数为100％；根据色谱接取目标组分，待其中的洗脱液挥发，即得炔苷类化合物，对上述炔苷类化合物进行质谱和核磁鉴定，即通过质谱确定得到的炔苷类化合物的分子量，通过核磁确定得到的炔苷类化合物的结构。经分析，制得的炔苷类化合物分别为：桔梗炔苷A，桔梗炔苷B和党参炔苷，具体的分子量和分子式如前述具体实施方式所示。上述炔苷类化合物均可应用于制备抗生物毒性药物。
实施例3
取过250目筛的桔梗粉末，依次以10、8倍量的甲醇超声提取，每次提取的时间均为0.3h，将每次提取的液体过滤后合并得提取液，减压浓缩得第一浸膏；用蒸馏水溶解第一浸膏，将得到的溶液用AB-8弱极性大孔树脂进行吸附，先以体积分数为20％的乙醇进行第一次洗脱除去溶液当中的部分糖和无机盐等物质，再用体积分数为55％的乙醇进行第二次洗脱富集聚炔类成分，将第二次洗脱后的洗脱液第二次浓缩，得第二浸膏；用逆流色谱以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:32:1:28,v/v/v/v)为溶剂系统，流速6mL/min，转速800r/s，分离纯化第二浸膏，并根据逆流色谱图接取聚炔类成分流出液；将该聚炔类成分流出液减压浓缩后，上液相用乙腈-水作流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱的条件为：流动相A为水，流动相B为乙腈，检测波长为254nm，流速1mL/min，进样体积20μL；梯度洗脱程序为：0-5min，乙腈的体积分数为0％→5％；5-15min，乙腈的体积分数为5％→20％；15-30min，乙腈的体积分数为20％→30％；30-35min，乙腈的体积分数为30％→100％；35-40min，乙腈的体积分数为100％；根据色谱接取目标组分，待其中的洗脱液挥发，即得炔苷类化合物，对上述炔苷类化合物进行质谱和核磁鉴定，即通过质谱确定得到的炔苷类化合物的分子量，通过核磁确定得到的炔苷类化合物的结构。经分析，制得的炔苷类化合物分别为：桔梗炔苷A，桔梗炔苷B和党参炔苷，具体的分子量和分子式如前述具体实施方式所示。上述炔苷类化合物均可应用于制备抗生物毒性药物。
实施例4
取过220目筛的桔梗粉末，以甲醇超声提取，提取的时间为0.6h，将提取液过滤、减压浓缩得第一浸膏；用蒸馏水溶解第一浸膏，将得到的溶液用AB-8弱极性大孔树脂进行吸附，先以8倍柱体积的水和体积分数为32％的乙醇进行第一次洗脱除去溶液当中的部分糖和无机盐等物质，再用体积分数为52％的乙醇进行第二次洗脱富集聚炔类成分，将第二次洗脱后的洗脱液第二次浓缩，得第二浸膏；用逆流色谱以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:30:1:30,v/v/v/v)为溶剂系统，流速5mL/min，转速800r/s，分离纯化第二浸膏，并根据逆流色谱图接取聚炔类成分流出液；将该聚炔类成分流出液减压浓缩后，上液相用乙腈-水作流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱的条件为：流动相A为水，流动相B为乙腈，检测波长为254nm，流速1mL/min，进样体积20μL；梯度洗脱程序为：0-5min，乙腈的体积分数为0％→5％；5-15min，乙腈的体积分数为5％→20％；15-30min，乙腈的体积分数为20％→30％；30-35min，乙腈的体积分数为30％→100％；35-40min，乙腈的体积分数为100％；根据色谱接取目标组分，待其中的洗脱液挥发，即得炔苷类化合物，对上述炔苷类化合物进行质谱和核磁鉴定，即通过质谱确定得到的炔苷类化合物的分子量，通过核磁确定得到的炔苷类化合物的结构。经分析，制得的炔苷类化合物分别为：桔梗炔苷A，桔梗炔苷B和党参炔苷，具体的分子量和分子式如前述具体实施方式所示。上述炔苷类化合物均可应用于制备抗生物毒性药物。
实施例5
取过270目筛的桔梗粉末，分别以10、9、8倍量的甲醇超声提取，提取的时间依次为0.7h、0.5h、0.3h，将每次提取的液体过滤后合并得提取液，减压浓缩得第一浸膏；用蒸馏水溶解第一浸膏，将得到的溶液用AB-8弱极性大孔树脂进行吸附，先以6倍柱体积的水和体积分数为28％的乙醇进行第一次洗脱除去溶液当中的部分糖和无机盐等物质，再用体积分数为56％的乙醇进行第二次洗脱富集聚炔类成分，将第二次洗脱后的洗脱液第二次浓缩，得第二浸膏；用逆流色谱以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:29:1:29,v/v/v/v)为溶剂系统，流速5mL/min，转速800r/s，分离纯化第二浸膏，并根据逆流色谱图接取聚炔类成分流出液；将该聚炔类成分流出液减压浓缩后，上液相用乙腈-水作流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱的条件为：流动相A为水，流动相B为乙腈，检测波长为254nm，流速1mL/min，进样体积20μL；梯度洗脱程序为：0-5min，乙腈的体积分数为0％→5％；5-15min，乙腈的体积分数为5％→20％；15-30min，乙腈的体积分数为20％→30％；30-35min，乙腈的体积分数为30％→100％；35-40min，乙腈的体积分数为100％；根据色谱接取目标组分，待其中的洗脱液挥发，即得炔苷类化合物，对上述炔苷类化合物进行质谱和核磁鉴定，即通过质谱确定得到的炔苷类化合物的分子量，通过核磁确定得到的炔苷类化合物的结构。经分析，制得的炔苷类化合物分别为：桔梗炔苷A，桔梗炔苷B和党参炔苷，具体的分子量和分子式如前述具体实施方式所示。上述炔苷类化合物均可应用于制备抗生物毒性药物。
实施例6
取过230目筛的桔梗粉末，依次以10、8、6倍量的甲醇超声提取，每次提取的时间均为0.5h，将每次提取的液体过滤后合并的提取液，减压浓缩得第一浸膏；用蒸馏水溶解第一浸膏，将得到的溶液用AB-8弱极性大孔树脂进行吸附，先以8倍柱体积的水和体积分数为30％的乙醇进行第一次洗脱除去溶液当中的部分糖和无机盐等物质，再用体积分数为50％的乙醇进行第二次洗脱富集聚炔类成分，将第二次洗脱后的洗脱液第二次浓缩，得第二浸膏；用逆流色谱以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:30:1:30,v/v/v/v)为溶剂系统，流速5mL/min，转速800r/s，分离纯化第二浸膏，并根据逆流色谱图接取聚炔类成分流出液；将该聚炔类成分流出液减压浓缩后，上液相用乙腈-水作流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱的条件为：流动相A为水，流动相B为乙腈，检测波长为254nm，流速1mL/min，进样体积20μL；梯度洗脱程序为：0-5min，乙腈的体积分数为0％→5％；5-15min，乙腈的体积分数为5％→20％；15-30min，乙腈的体积分数为20％→30％；30-35min，乙腈的体积分数为30％→100％；35-40min，乙腈的体积分数为100％；根据色谱接取目标组分，待其中的洗脱液挥发，即得炔苷类化合物，对上述炔苷类化合物进行质谱和核磁鉴定，即通过质谱确定得到的炔苷类化合物的分子量，通过核磁确定得到的炔苷类化合物的结构。经分析，制得的炔苷类化合物分别为：桔梗炔苷A，桔梗炔苷B和党参炔苷，具体的分子量和分子式如前述具体实施方式所示。上述炔苷类化合物均可应用于制备抗生物毒性药物。
实施例7
取过270目筛的桔梗粉末，依次以10、8、6倍量的甲醇超声提取，每次提取的时间均为0.6h，将每次提取的液体过滤后合并得提取液，减压浓缩得第一浸膏；用蒸馏水溶解第一浸膏，将得到的溶液用AB-8弱极性大孔树脂进行吸附，先以体积分数为30％的乙醇进行第一次洗脱除去溶液当中的部分糖和无机盐等物质，再用体积分数为50％的乙醇进行第二次洗脱富集聚炔类成分，将第二次洗脱后的洗脱液第二次浓缩，得第二浸膏；用逆流色谱以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:31:1:31,v/v/v/v)为溶剂系统，流速5mL/min，转速800r/s，分离纯化第二浸膏，并根据逆流色谱图接取聚炔类成分流出液；将该聚炔类成分流出液减压浓缩后，上液相用乙腈-水作流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱的条件为：流动相A为水，流动相B为乙腈，检测波长为254nm，流速1mL/min，进样体积20μL；梯度洗脱程序为：0-5min，乙腈的体积分数为0％→5％；5-15min，乙腈的体积分数为5％→20％；15-30min，乙腈的体积分数为20％→30％；30-35min，乙腈的体积分数为30％→100％；35-40min，乙腈的体积分数为100％；根据色谱接取目标组分，待其中的洗脱液挥发，即得炔苷类化合物，对上述炔苷类化合物进行质谱和核磁鉴定，即通过质谱确定得到的炔苷类化合物的分子量，通过核磁确定得到的炔苷类化合物的结构。经分析，制得的炔苷类化合物分别为：桔梗炔苷A，桔梗炔苷B和党参炔苷，具体的分子量和分子式如前述具体实施方式所示。上述炔苷类化合物均可应用于制备抗生物毒性药物。
综上所述，本发明实施例的炔苷类化合物的提取分离方法，能够简单、高效、快速地制备出炔苷类化合物，其中桔梗炔苷A和桔梗炔苷B为首次分离得到的新化合物；本发明的提取分离方法分离提纯出的炔苷类化合物具有良好的抗微生物、细胞毒及抗肿瘤活性等生物活性，可以将该炔苷类化合物应用于制备抗生物毒性药物，例如：抗细胞毒性药物，具体地，细胞又包括细菌、常态细胞和肿瘤细胞等，进而，该炔苷类化合物可以应用于制备抗微生物药物、抗细胞毒药物以及抗肿瘤药物等。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (4)

1.一种炔苷类化合物的提取分离方法，其特征在于，包括：
将桔梗的粉末，用甲醇超声提取后，将提取液第一次浓缩得第一浸膏；
将所述第一浸膏加水溶解并加入到AB-8弱极性大孔树脂用乙醇进行梯度洗脱，梯度洗脱按以下方式进行：以水和体积分数为20％-40％的乙醇作为洗脱液进行第一次洗脱，再以体积分数为50％-60％的乙醇作为洗脱液进行第二次洗脱，将梯度洗脱后的洗脱液第二次浓缩得第二浸膏；
将所述第二浸膏用体积比为1:28-32:1:28-32的正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的溶剂系统进行逆流色谱分离纯化，收集聚炔类成分流出液；所述逆流色谱分离的流速为4-6mL/min，转速为800r/s；
将所述聚炔类成分流出液第三次浓缩后用乙腈-水作流动相，应用高效液相色谱进行制备；所述高效液相色谱的应用按以下方式进行：以水为流动相A，以乙腈为流动相B，设置所述高效液相色谱的程序为：0-5min，乙腈的体积分数为0％→5％；5-15min，乙腈的体积分数为5％→20％；15-30min，乙腈的体积分数为20％→30％；30-35min，乙腈的体积分数为30％→100％；35-40min，乙腈的体积分数为100％；设置所述高效液相色谱的检测波长为254nm，流速为1mL/min，进样体积为20μL；
根据液相色谱图接取目标组分后，待洗脱液挥发后，得到所述炔苷类化合物；
所述炔苷类化合物的结构通式为：
其中R为cis-丙烯基或1-丙炔基。
2.根据权利要求1所述的炔苷类化合物的提取分离方法，其特征在于，将桔梗的粉末，用6-10倍重量的甲醇进行超声提取得所述提取液。
3.根据权利要求1所述的炔苷类化合物的提取分离方法，其特征在于，所述提取液按以下方式制备：将桔梗的粉末用10倍重量的甲醇第一次提取，过滤后再用8倍重量的甲醇第二次提取，过滤后再用6倍重量的甲醇第三次提取，合并每次提取的液体。
4.根据权利要求1所述的炔苷类化合物的提取分离方法，其特征在于，所述第一次洗脱以8倍柱体积的水和体积分数为30％的乙醇进行第一次洗脱。
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