CN106906244A - 一种香灰菌黑色素发酵制备方法 - Google Patents

一种香灰菌黑色素发酵制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106906244A
CN106906244A CN201710297412.XA CN201710297412A CN106906244A CN 106906244 A CN106906244 A CN 106906244A CN 201710297412 A CN201710297412 A CN 201710297412A CN 106906244 A CN106906244 A CN 106906244A
Authority
CN
China
Prior art keywords
melanin
incense ashes
fermentation
bacterium
zymotic fluid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710297412.XA
Other languages
English (en)
Inventor
傅俊生
戚梦
刘建兵
赵强
林文雄
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujian Agriculture and Forestry University
Original Assignee
Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujian Agriculture and Forestry University filed Critical Fujian Agriculture and Forestry University
Priority to CN201710297412.XA priority Critical patent/CN106906244A/zh
Publication of CN106906244A publication Critical patent/CN106906244A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供一种香灰菌黑色素发酵制备方法，将从银耳菌包中分离的高产黑色素香灰菌株发酵液除去菌丝体后，用强酸破坏发酵液中的蛋白质，在将黑色素通过碱性溶液沉淀出来，收集沉淀得到黑色素粗提物，在进行纯化，发酵7d时其黑色素得率可达2500‑3000mg/L，高于黑木耳液体发酵所得。经红外质谱测定发现，该黑色素结构与黑木耳子实体中提取的黑色素相似，经动物实验表明，该黑色素具有保肝、抗氧化等活性。

Description

一种香灰菌黑色素发酵制备方法
技术领域
本发明涉及微生物，具体是一种香灰菌黑色素发酵制备方法。
背景技术
黑色素是目前应用最多最广的生物天然色素之一，是一类由酚和（或）吲哚化合物聚合氧化而成的高分子聚合物，其广泛存在于动物、植物中，从乌贼、核桃皮等中提得的黑色素均被报道具有较强的抗氧化、清除自由基等功效且具有延缓衰老、乌发润肤、舒气止胀、清热解毒、壮阳补肾、软化血管、下淤血、消浮肿、抗肥胖、制风热、添精神等功效，还可防治各种中老年疾病，如高血压、心脏病、糖尿病、肾炎、血管硬化、癌症及肝脏疾病等。传统的黑色素合成主要釆用酶法和化学法，但是由于原料以及酪氨酸酶价格昂贵，合成流程复杂，成本较高，不利于大规模工厂化生产。如今已有许多学者利用细菌、霉菌或者真菌生产黑色素，考虑到菌种安全性，大多数菌株（如：大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌等）生产的黑色素难以在食品加工中使用。香灰菌作为银耳菌株的伴生菌其菌丝体和发酵液中都含有黑色素经研究表明，该黑色素结构与黑木耳中黑色素、合成黑色素的结构基本一致，且其抗氧化活性强于合成黑色素。
发明内容
本发明的目的在于提供一种香灰菌黑色素发酵制备方法。
通过从银耳菌包中分离出的优质高产黑色素的香灰菌株，通过摇瓶发酵可产黑色素。提取发酵液中的黑色素并测定其含量。
本发明采用的技术方案是：
一种香灰菌黑色素发酵制备方法，包括以下步骤：将从银耳菌包中分离的高产黑色素香灰菌株发酵液除去菌丝体后，用强酸破坏发酵液中的蛋白质，在将黑色素通过碱性溶液沉淀出来，收集沉淀得到黑色素粗提物，再进行纯化。再通过动物实验发现所提取的黑色素具有一定的保肝功效。具体为：
将获得的香灰菌株接入液体培养基中，摇瓶发酵3d时即开始产黑色素，发酵7天时提取其发酵液中的黑色素。
除去发酵液中菌丝体，将发酵液于3mol/L盐酸中，发酵液与盐酸的体积比为1：10
，在60~70℃水浴1.5小时后心，留沉淀，向上述所得沉淀中加入150ml 2mol/L NaOH ，超声提取2h后再通过离心弃沉淀留上清。用盐酸调节上清液pH至1.5~2.0。将上清液放入70℃水浴锅中14h。之后再通过离心，弃上清。最后将沉淀用去离子水洗涤3~5次。
检测得到其色素含量为2500-3000mg/L，经红外质谱测定发现，该黑色素结构与黑木耳子实体中提取的黑色素相似且高于黑木耳液体发酵所得。
本发明的优点在于：通过从香灰菌菌株发酵液中提取黑色素方法，提高黑色素产量。采用香灰菌菌株发酵法制备黑色素，缩短黑色素提取时间成本较低，得到黑色素的率为5%左右,适用于大规模工厂化生产，并可促进其后续生物产品的开发。
附图说明
图1 香灰菌黑色素红外光谱图。
具体实施方式
实施例1
将香灰菌株接入100ml液体培养基中，接种量为3%，摇瓶发酵7天；除去发酵液中菌丝体，将发酵液于3mol/L盐酸中，体积比为1：10，在65℃水浴1.5小时后离心，留沉淀，向上述所得沉淀中加入150ml 2mol/L NaOH， 超声提取2h后再通过离心弃沉淀留上清；用盐酸调节上清液pH至2.0；将上清液放入70℃水浴锅中14h；之后再通过离心，弃上清；最后将沉淀用去离子水洗涤4次；得到黑色素。
得到较纯的黑色素。检测的其色素含量为2500-3000mg/L，经红外质谱测定发现，该黑色素结构与黑木耳子实体中提取的黑色素相似且高于黑木耳液体发酵所得。
对提取到的黑色素进行红外光谱分析发现其结构有以下特征：1 ) 在波数3432.57cm-1 处都有较宽而强的吸收峰，说明存在－ NH 结构；1456.46 cm-1 处的吸收峰是自由羧基基团－ COOH 引起的振动；1652.56cm-1 处吸收峰是C=O 的非对称振动及N－H变角振动形成，说明可能存在－COOH；1384.73cm-1 处吸收峰是C － CH3 的弯曲和骨架振动吸收参与形成；600～700cm-1 范围的吸收带很弱，表明苯环被取代，形成共轭体系。2)香灰菌黑色素都在波数2923.88cm-1 与2852.23cm-1 左右处有吸收峰可能是由于C －H 伸缩振动形成，即为－ CH 和－ CH2 的共振吸收峰。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (2)

1.一种香灰菌黑色素发酵制备方法，其特征在于：将从银耳菌包中分离的高产黑色素香灰菌株发酵液除去菌丝体后，用强酸破坏发酵液中的蛋白质，在将黑色素通过碱性溶液沉淀出来，收集沉淀得到黑色素粗提物，再进行纯化。
2.根据权利要求1所述的一种香灰菌黑色素发酵制备方法，其特征在于：具体方法为：将香灰菌接入液体培养基中，摇瓶发酵7天；除去发酵液中菌丝体，将发酵液于3mol/L盐酸中，发酵液与盐酸的体积比为1：10，在60~70℃水浴1.5小时后离心，留沉淀，向上述所得沉淀中加入150ml 2mol/L NaOH，超声提取2h后再通过离心弃沉淀留上清；用盐酸调节上清液pH至1.5~2.0；将上清液放入70℃水浴锅中14h；之后再通过离心，弃上清；最后将沉淀用去离子水洗涤3~5次；得到黑色素。
CN201710297412.XA 2017-04-28 2017-04-28 一种香灰菌黑色素发酵制备方法 Pending CN106906244A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710297412.XA CN106906244A (zh) 2017-04-28 2017-04-28 一种香灰菌黑色素发酵制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710297412.XA CN106906244A (zh) 2017-04-28 2017-04-28 一种香灰菌黑色素发酵制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106906244A true CN106906244A (zh) 2017-06-30

Family

ID=59210876

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710297412.XA Pending CN106906244A (zh) 2017-04-28 2017-04-28 一种香灰菌黑色素发酵制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106906244A (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5538752A (en) * 1992-08-04 1996-07-23 Regents Of The Univ. Of Minnesota Melanin compositions and uses thereof and resulting products
CN102199545A (zh) * 2011-03-24 2011-09-28 合肥工业大学 一株辛格粒毛盘菌及其液态发酵制备胞内黑色素的方法
CN102517336A (zh) * 2011-12-16 2012-06-27 天津北洋百川生物技术有限公司 一种利用氧化胁迫提高出芽短梗霉黑色素产量的方法
CN102517335A (zh) * 2011-12-16 2012-06-27 天津北洋百川生物技术有限公司 一种新型天然黑色素的生产方法
CN105112297A (zh) * 2015-08-05 2015-12-02 福建农林大学 一种香灰菌不产黑色素的培养基

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5538752A (en) * 1992-08-04 1996-07-23 Regents Of The Univ. Of Minnesota Melanin compositions and uses thereof and resulting products
CN102199545A (zh) * 2011-03-24 2011-09-28 合肥工业大学 一株辛格粒毛盘菌及其液态发酵制备胞内黑色素的方法
CN102517336A (zh) * 2011-12-16 2012-06-27 天津北洋百川生物技术有限公司 一种利用氧化胁迫提高出芽短梗霉黑色素产量的方法
CN102517335A (zh) * 2011-12-16 2012-06-27 天津北洋百川生物技术有限公司 一种新型天然黑色素的生产方法
CN105112297A (zh) * 2015-08-05 2015-12-02 福建农林大学 一种香灰菌不产黑色素的培养基

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴尧等: "香灰菌黑色素的分离及抗氧化活性研究", 《天然产物研究与开发》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mishra et al. Isolation and characterization of extracellular polymeric substances from micro-algae Dunaliella salina under salt stress
CN103255076B (zh) 一种芽孢杆菌、一种透明质酸酶及其制备方法和用途
CN110386860B (zh) 一种大麻二酚的高效提取方法
Hsu et al. Enhanced active extracellular polysaccharide production from Ganoderma formosanum using computational modeling
CN101942035B (zh) 一种根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法
CN102154395A (zh) 一种无机盐、有机溶剂共沉作用提取γ-聚谷氨酸的方法
CN105886408B (zh) 海洋裂褶菌菌株的筛选及其应用
CN105801690B (zh) 一种胰蛋白酶抑制剂及其制备方法和应用
CN103484513A (zh) 一种酶法制备小分子寡聚透明质酸的方法
CN111088300A (zh) 一种冠突散囊菌黑色素发酵制备方法
CN102517335B (zh) 一种生产天然黑色素的新方法
CN103898011A (zh) 一种甲基营养菌及其发酵生产吡咯喹啉醌的方法
CN106916861A (zh) 一种同时生产木耳多糖和黑色素的方法
CN102229894B (zh) 内生真菌hl-02及其在制备d-泛解酸内酯中的应用
CN102653737A (zh) 海洋微生物发酵生产低温超氧化物歧化酶的方法
CN104151385A (zh) 一种提取环磷酸腺苷的方法及应用
CN106906244A (zh) 一种香灰菌黑色素发酵制备方法
CN103898012B (zh) 一株海旋菌及制备琼胶酶的方法
CN102924420A (zh) 一种从落叶松树根提取二氢槲皮素的方法
CN112608956A (zh) 一种利用超声波提高细菌胞外多糖产量的方法
CN104830734B (zh) 一株费氏丙酸杆菌菌株及其发酵生产细菌素的方法
CN107058395A (zh) 一种通过发酵制备桦褐孔菌黑色素的方法
CN104140933B (zh) 土曲霉zrv2011f5及其应用
JP4180108B1 (ja) 醗酵生成物の製造方法および醗酵生成物
Thuy et al. Deproteinization in purification of exopolysaccharide from Ophiocordyceps sinensis olive oil-stimulated culture.

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170630

RJ01 Rejection of invention patent application after publication