CN106906222A - 小麦TaMADS6 基因及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了小麦TaMADS6基因及其应用，属于作物分子生物学领域。本发明设计引物从中国春幼穗的cDNA中克隆TaMADS6的编码区序列，利用中国春缺体‑四体将TaMADS6定位在小麦第六同源群上，TaMADS6基因编码区序列在A、B、D同源染色体中的序列分别如SEQ ID NO.1‑3所示。本发明通过将TaMADS6基因的D同源染色体的编码区序列转化短柄草Bd21‑3，该基因能够使短柄草明显提早开花，且通过提高BdFT1、BdFT2和BdVRN1的表达促进开花。

Description

小麦TaMADS6基因及其应用
技术领域
本发明涉及作物分子生物学和分子育种领域，更具体地，涉及小麦TaMADS6基因及其在染色体中的定位、以及该基因的应用。
背景技术
小麦作为一种重要的粮食作物，全世界约有40％的人以小麦为主要粮食。同时作为三大谷物之一，产量几乎全做食用，是世界上总产量仅次于玉米的粮食作物。随着水稻、玉米、小麦等在内的多种植物全基因组测序的完成，人类开始进入功能基因的时代。利用物种已知功能的目标基因进行序列比对和分析，利用高保守序列对研究物种进行引物设计和同源序列克隆，是发现新基因的常用方法之一。
MADS-box基因是一类在植物生长发育过程中起重要作用的基因。在调控植物生长和生殖阶段转变、花器官和果实发育等多种发育过程中发挥重要作用。MADS-box基因一般有四个结构域：分别为M，I，K，C。M区最为保守，主要负责结合下游DNA顺式元件(即CArG-box)，调控靶基因的表达；I区保守性较弱，在蛋白二聚体的形成过程中起辅助作用；K区保守性较强，在蛋白复合体的形成过程中起重要作用；C区保守性很弱，在调控下游转录激活过程中起重要作用。
目前，在水稻中，对MADS-box基因有了比较详尽的认识。小麦作为人类重要的粮食作物，但是关于MADS-box基因家族在小麦中结构和功能分析还是知之甚少。对该基因在小麦中的生物学功能和分子机制尚不清楚。
发明内容
本发明的目的在于提供小麦TaMADS6基因及其应用。
利用水稻MADS-box基因保守的M、K结构域和小麦二倍体AA、DD基因草图和小麦六倍体AABBDD基因草图测序结果，在六倍体小麦中国春的幼穗中克隆MADS-box基因，得到在A、B、D同源染色体上的基因序列，分别如SEQ ID NO.1-3所示，该基因命名为TaMADS6。该基因定位于第六染色体同源群上。
本发明提供了小麦TaMADS6基因在小麦育种中的应用。
本发明提供了小麦TaMADS6基因在促进植物生长中的应用。
本发明提供了小麦TaMADS6基因在制备转基因植物中的应用。
本发明提供了小麦TaMADS6基因在促进植物提早开花中的应用。
本发明提供了小麦TaMADS6基因在植物种质资源改良中的应用。
所述植物包括但不限于短柄草和小麦。
具体地，本发明所述的小麦TaMADS6基因位于小麦第六同源群上，其在小麦6A同源染色体的序列如SEQ ID NO.1所示，其在小麦6B同源染色体的序列如SEQ ID NO.2所示，其在小麦6D同源染色体的序列如SEQ ID NO.3所示。
本发明提供了用于克隆小麦TaMADS6基因的引物组合，其核苷酸序列如SEQ IDNO.4-6和/或SEQ ID NO.5-6所示。
相应地，本发明提供了小麦TaMADS6基因的克隆方法，利用SEQ ID NO.4-6和/或SEQ ID NO.5-6所示的特异性引物组合，以小麦穗子cDNA为模板，PCR扩增得到小麦TaMADS6基因。
用于检测小麦TaMADS6基因A、B、D的引物组合，含有分别检测小麦TaMADS6-A基因、TaMADS6-B基因、TaMADS6-D基因的3对引物，分别如SEQ ID NO.7-8、SEQ ID NO.9-10，SEQID NO.11-12所示。
本发明提供了TaMADS6-A/B/D染色体定位的方法，利用SEQ ID NO.7-8、SEQ IDNO.9-10，SEQ ID NO.11-12分别特异区分TaMADS6-A、TaMADS6-B和TaMADS6-D。
本发明还提供了小麦TaMADS6基因的过表达载体，其通过以下方法构建得到，包括如下步骤：
(1)以SEQ ID NO.5-6为引物，以中国春幼穗cDNA为模板，进行PCR扩增，回收PCR产物进行测序；
(2)以SEQ ID NO.13-14为引物，以(1)测序正确质粒为模板，进行PCR扩增，回收PCR产物；
(3)将(2)的回收产物和pCUbi 1390载体，使用BamHI和SpeI进行双酶切，回收后连接测序，即构建成TaMADS6-D-pCUbi 1390过表达载体。
本发明提供了TaMADS6基因过表达植株的开花期，过表达植株开花期约32天，显著早于开花期约68天的野生型。
本发明提供了TaMADS6基因过表达植株中MADS6、BdFT1、BdFT2和BdVRN1基因相对野生型的表达量。
具体地，本发明提供了小麦TaMADS6基因在促进植物早花的应用。更具体地，本发明提供了小麦TaMADS6基因在促进转基因短柄草提前开花中的应用。
本发明提供了小麦TaMADS6基因的克隆方法、染色体定位以及小麦TaMADS6基因在促进植物早花的生物学功能，本发明的小麦TaMADS6基因可广泛应用于小麦遗传育种、种质资源改良和培育转TaMADS6基因的植物领域，对改进和改良小麦等作物的种质资源具有重要作用。
附图说明
图1为TaMADS6基因在小麦染色体中定位图，1-7分别表示N6A-T6B，N6A-T6D，N6B-T6D，N6D-T6A，N6D-T6B,CS是中国春对照，Control是阴性对照。
图2为TaMADS6-D转化短柄草T3代阳性植株鉴定图，M是2000bp Marker，1-7是T3代植株，8是野生型短柄草作为阴性对照，所用模板为三叶期幼苗的DNA。图中约750bp的条带代表植株内源基因组条带，约250bp条带代表外源编码区序列条带。
图3为短柄草野生型、转TaMADS6-D基因的短柄草的植株在32天的生长情况图，1表示短柄草野生型Col-0，2表示转TaMADS6-D过表达短柄草T3代植株。
图4为短柄草野生型和转TaMADS6-D基因的短柄草植株开花期统计图，1表示短柄草野生型，2表达转TaMADS6-D过表达短柄草T3代植株，n代表统计的植株数量，**代表差异极显著。
图5为短柄草野生型和转TaMADS6-D基因的短柄草植株基因表达鉴定图，野生型表达量为1，从左至右依次为MADS6、BdFT1、BdFT2和BdVRN1基因。MADS6*中，WT为BdMADS6基因表达量，OE为BdMADS6与TaMADS6-D表达量之和。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规市售试剂，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1小麦TaMADS6基因的克隆
1、小麦幼穗总RNA的提取
中国春(Triticum aestivum L.)幼穗总RNA的提取，使用Plant miniKit(QIAGEN)。
2、TaMADS6基因cDNA第一片段的合成
按照反转录酶M-MLV(Promega)的操作说明进行。
3、从中国春(Triticum aestivum L.)幼穗的cDNA中克隆TaMADS6的编码区序列；正向引物序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5，反向引物序列如SEQ ID NO.6。
PCR程序：94℃，10min；94℃，30s；56℃，30s；72℃，1min；重复35次；72℃，10分钟。
PCR体系(全式金公司)：
PCR产物切胶回收纯化后按照北京全式金生物技术有限公司提供的-Blunt Zero Cloning Kit克隆方法克隆连接到-Blunt Zero Cloning载体上，连接产物转化大肠杆菌DH5α，并在其中扩繁，阳性克隆经过测序筛选获得TaMADS6。对获得的片段送测序公司测序后，与六倍体克隆的TaMADS6比较，确定TaMADS6基因在A、B、D同源染色体序列分别如SEQ ID NO.1-3所示。
实施例2小麦TaMADS6基因的染色体定位
根据实施例1获得的TaMADS6基因在A、B、D同源染色体序列，经过对比分析，发现三者核苷酸序列存在多态性。设计3对特异性引物，以中国春缺体-四体的DNA为模板，进行PCR反应，通过琼脂糖凝胶电泳定位TaMADS6基因在染色体中的位置。
所述3对特异性引物为：
检测小麦TaMADS6-A基因通过以下引物实现：SEQ ID NO.7-8；
检测小麦TaMADS6-B基因通过以下引物实现：SEQ ID NO.9-10；
检测小麦TaMADS6-D基因通过以下引物实现：SEQ ID NO.11-12。
利用上述检测小麦TaMADS6基因的3对引物中任一对引物PCR扩增小麦基因组DNA，均可扩增得到200-400bp的目的条带。在检测时，若待测产物经上述引物对PCR扩增后，得到相应的目的条带，则意味着待测样品中存在TaMADS6基因(见图1)。
六倍体小麦(基因型AABBDD)有缺体-四体材料，是利用染色体替换形成的，N6A-T6B是指缺6A补6B，相当于用6B染色体代替6A染色体(基因型为BBBBDD),同理N6A-T6D(基因型DDBBDD)，N6B-T6A(基因型AAAADD),N6B-T6D(基因型AADDDD),N6D-T6A(基因型AABBAA),N6D-T6B(基因型AABBBB)，TaMADS6-A在N6A-T6B和N6A-T6D中扩不出来，在其他缺体-四体材料中可以扩出来，TaMADS6-B和TaMADS6-D同理。
实施例3小麦TaMADS6-D基因转化短柄草
诱导愈伤培养基(pH＝5.8)：10×MS大量元素100ml，100×MS微量元素10ml，100×Fe-EDTA 10ml，Sucrose 30g，2,4-D(1mg/ml)2.5ml，CuSO4(1mg/ml)0.6ml，Phytagel 2g，无菌水补足至990ml，100×M5vitamins(灭菌后加入)10ml。
MGL培养基(pH＝7.2)：Tryptone 5g，Yeast extract 2.5g，NaCl 5.2g，Mannitol10g，L-glutamic acid sodium salt 2.32g，KH2PO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.2g，Agar 10g，无菌水补足至1L，Biotin(1mg/ml，灭菌后加入)2μl，Acetosyringone(30mg/ml，灭菌后加入)1ml。
农杆菌悬浮培养基(pH＝5.5)：10×MS大量元素100ml，100×MS微量元素10ml，100×Fe-EDTA 10ml，Sucrose 10g，Mannitol 10g，无菌水补足至1L，Acetosyringone(30mg/ml，灭菌后加入)1.5ml。
共培养培养基(pH＝5.8)：10×MS大量元素100ml，100×MS微量元素10ml，100×Fe-EDTA 10ml，Sucrose 30g，2,4-D(1mg/ml)2.5ml，Phytagel 2g，无菌水补足至990ml，100×M5vitamins(灭菌后加入)10ml，Acetosyringone(30mg/ml，灭菌后加入)2ml。
愈伤筛选培养基(pH＝5.8)：10×MS大量元素100ml，100×MS微量元素10ml，100×Fe-EDTA 10ml，Sucrose 30g，2,4-D(1mg/ml)2.5ml，CuSO4(1mg/ml)0.6ml，Phytagel 2g，无菌水补足至990ml，Hygromycin B(50mg/ml，灭菌后加入)0.8ml，Timentin(320mg/ml，灭菌后加入)0.7ml，100×M5vitamins(灭菌后加入)10ml。
分化培养基(pH＝5.8)：10×MS大量元素100ml，100×MS微量元素10ml，100×Fe-EDTA 10ml，Sucrose 30g，Phytagel 2g，无菌水补足至990ml，100×M5vitamins(灭菌后加入)10ml，Kinetin(0.1mg/ml，灭菌后加入)2ml，Hygromycin B(50mg/ml，灭菌后加入)0.4ml，Timentin(320mg/ml，灭菌后加入)0.7ml。
生根培养基(pH＝5.8)：10×MS大量元素40ml，100×MS微量元素40ml，100×Fe-EDTA 10ml，Agar 6g，Phytagel 2g，无菌水补足至990ml，100×B5vitamins(灭菌后加入)10ml，Timentin(320mg/ml，灭菌后加入)0.35ml。
(1)诱导愈伤
a.在超净工作台内，剪下短柄草未成熟的种子，放在20ml的70％酒精内消毒30sec，无菌水清洗3次。然后加入20ml的1.3％次氯酸钠溶液，轻轻颠倒离心管消毒4min，无菌水清洗3次。
b.用尖头镊子在显微镜下剥去外稃，取短柄草幼胚，长度最好<0.3mm，否则诱导愈伤概率会降低。
c.将幼胚放在诱导愈伤培养基上，每个平板放10-20个，放于25℃培养室暗培养3周，期间如有茎长出，要将其切去，否则会影响诱导愈伤。
d.挑选呈奶黄色致密的愈伤，每块可分成2-4小块，再转移到新的诱导愈伤培养基上，放于25℃培养室暗培养2周。
e.继续挑选呈奶黄色致密的愈伤扩繁，每块分为3-5块，转移至新的诱导愈伤培养基上，放于25℃培养室暗培养1周。
(2)转化愈伤
a.将200μl过夜培养的农杆菌涂布在MGL培养基平板上，然后用封口膜密封，倒置于28℃培养箱，暗培养2天。
b.将固体平板上的农杆菌刮起来，用10ml悬浮培养基悬浮于离心管内。
c.在28℃摇床，220rpm培养45min，后用悬浮培养基调整菌液OD600＝1。
d.将愈伤放于菌液中，室温摇动5min，弃去菌液。把愈伤放在无菌纸上，超净工作台内放置6min，以使其变干。
e.把愈伤放在共培养基上，25℃暗培养2天。
(3)筛选愈伤
a.将共培养之后的愈伤转移到筛选培养基上，25℃暗培养3周。
b.正常存活的抗性愈伤需再次筛选，注意将之前每升筛选培养基中Hygromycin B的量改为0.6ml。25℃暗培养3周。
(4)分化
a.将抗潮霉素的愈伤转移到分化培养基上，25℃，16h光照条件下培养2周。
b.对于生芽较小的可以再转移到新的分化培养基上，25℃，16h光照条件下继续培养2周。
(5)生根及移栽
a.将分化出的小芽转移到生根培养基上，同时切除芽基部多余的愈伤。25℃，16h光照条件下继续培养2周。
b.选择根较长的苗，移栽到土里，并用保鲜膜覆盖，以避免水分蒸发。放在22℃，16h光照条件下培养，3天后，揭去保鲜膜。
对TaMADS6-D转化短柄草T3代植株进行阳性植株鉴定(见图2)，图中约750bp的条带代表植株内源基因组条带，约250bp条带代表外源编码区序列条带，有250bp条带的代表阳性植株。
短柄草转化实验结果(见图3和图4)，显示TaMADS6-D能使短柄草明显提前开花，野生型植株大约68天才能开花，而转TaMADS6-D植株仅仅只需要约32天就已开花。
短柄草野生型植株和转基因植株基因表达鉴定结果(见图5)，MADS6在转基因植株中的表达量远高于野生型植株的表达量，说明TaMADS6已在转基因植株中过表达；BdFT1、BdFT2和BdVRN1基因在转基因植株的表达量远高于野生型植株的表达量，说明转基因植株的早花表型是通过提高BdFT1、BdFT2和BdVRN1基因的表达量实现的。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国农业科学院作物科学研究所
<120> 小麦TaMADS6基因及其应用
<130> KHP171111365.6TQ
<160> 16
<170> PatentIn version 3.5
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<211> 780
<212> DNA
<213> TaMADS6D
<400> 3
atggggaggg gaagggtcga gctgaagcgc atcgagaaca agatcaatcg gcaggtcacc 60
ttctccaagc gccgcaacgg cctgctcaag aaggcctacg agctctccgt gctctgcgac 120
gccgaggtgg cgctcatcat cttctccagc cgcggcaagc tctacgagtt cggcagcgcc 180
ggcacaacaa aaacattgga aagataccaa cactgctgct ataatgctca agattccaat 240
ggcgcactat ctgaaactca gagctggtac caggaaatgt caaagctaaa ggcaaaattc 300
gaagctttgc agcgaactca gagacacttg cttggggagg accttggacc gctcagcgtg 360
aaagaactgc agcagctgga gaaacagcta gaatgttctc tgtcactggc cagacagcga 420
aagacacaac ttatgatgga gcaggtggag gaacttcgca ggaaggagcg tcagctggga 480
gacatcaaca ggcaactcaa gcacaagctc gacgctgaag gcagcaacag caacaactac 540
agggccatgc agcaaatcac ctgggctgcc ggcaccgtcg tggatgaagg cgccgccgca 600
tatcacatgc agcagcagca gcagcagcac cctaatcatt ccgctgctat ggactgtgaa 660
cccactctgc aaattgggta ccctcatcag ttcgcggctc ctgatcaggc agccaataat 720
attccacgga gcagcggccc cggaggggag aacaacttca tgctcgggtg ggttctttga 780
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ttatatgctc gctggggcac 20
<210> 5
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
ccccttgcct ccgctaata 19
<210> 6
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
cgcaggctac ttctcgtgta ga 22
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
gctttgcttg attttcttgc 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
gagaagatga taagcgccac 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
cagcatcagc aacaccctaa 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
cacgcatttt atttggtttc 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
gctgctggtt agcttgtcta 20
<210> 12
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
cgagtaaaaa taaagaaaga ggc 23
<210> 13
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
ccggatccat ggggagggga agggtc 26
<210> 14
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
ccactagttc aaagaaccca cccgag 26
<210> 15
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
actcggtatc tagaactagt atggg 25
<210> 16
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
cgctgccgaa ctcgtaga 18

Claims (10)

1.小麦TaMADS6基因在小麦育种中的应用，其特征在于，小麦TaMADS6基因位于小麦第六同源群上，其在小麦6A同源染色体的序列如SEQ ID NO.1所示，其在小麦6B同源染色体的序列如SEQ ID NO.2所示，其在小麦6D同源染色体的序列如SEQ ID NO.3所示。
2.小麦TaMADS6基因在促进植物生长中的应用，其特征在于，小麦TaMADS6基因位于小麦第六同源群上，其在小麦6A同源染色体的序列如SEQ ID NO.1所示，其在小麦6B同源染色体的序列如SEQ ID NO.2所示，其在小麦6D同源染色体的序列如SEQ ID NO.3所示。
3.用于克隆小麦TaMADS6基因的引物组合，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4-6和/或SEQ ID NO.5-6所示。
4.小麦TaMADS6基因的克隆方法，其特征在于，利用特异性引物组合，以小麦幼穗cDNA为模板，PCR扩增得到小麦TaMADS6基因，所述特异性引物组合核苷酸序列如SEQ ID NO.4-6和/或SEQ ID NO.5-6所示；SEQ ID NO.4-6引物可以扩增获得TaMADS6-A和TaMADS6-B，SEQID NO.5-6可以扩增获得TaMADS6-D。
5.用于检测小麦TaMADS6基因A、B、D的引物组合，其特征在于，含有分别检测小麦TaMADS6-A基因、TaMADS6-B基因、TaMADS6-D基因的3对引物，其核苷酸序列分别如SEQ IDNO.7-8、SEQ ID NO.9-10，SEQ ID NO.11-12所示。
6.小麦TaMADS6-D基因的过表达载体构建，其特征在于，通过以下方法构建得到，利用一对带有酶切位点的引物，扩增TaMADS6-D编码区序列，酶切后连接到的pCUbi 1390载体上，获得TaMADS6-D-pCUbi 1390过表达载体，所述引物核酸序列如SEQ ID NO.13-14所示。
7.小麦TaMADS6-D过表达植株的鉴定方法，其特征在于，根据小麦和短柄草编码区序列的高度同源性，设计一对位于两个外显子上的引物，所述引物酸序列如SEQ ID NO.15-16所示。
8.小麦TaMADS6基因在促进植物提早开花中的应用所述小麦TaMADS6基因位于小麦第六同源群上，其在小麦6A同源染色体的序列如SEQ ID NO.1所示，其在小麦6B同源染色体的序列如SEQ ID NO.2所示，其在小麦6D同源染色体的序列如SEQ ID NO.3所示。
9.小麦TaMADS6基因在制备转基因植物中的应用，所述小麦TaMADS6基因位于小麦第六同源群上，其在小麦6A同源染色体的序列如SEQ ID NO.1所示，其在小麦6B同源染色体的序列如SEQ ID NO.2所示，其在小麦6D同源染色体的序列如SEQ ID NO.3所示。
10.小麦TaMADS6基因在植物种质资源改良中的应用，所述小麦TaMADS6基因位于小麦第六同源群上，其在小麦6A同源染色体的序列如SEQ ID NO.1所示，其在小麦6B同源染色体的序列如SEQ ID NO.2所示，其在小麦6D同源染色体的序列如SEQ ID NO.3所示。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110804623A (zh) * 2019-11-28 2020-02-18 中国农业科学院作物科学研究所 小麦TaMADS6基因在调控植物穗和籽粒发育以及开花时间中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998054328A2 (en) * 1997-06-02 1998-12-03 Washington State University Research Foundation Genes controlling floral development and apical dominance in plants
CN104805092A (zh) * 2015-03-27 2015-07-29 中国农业科学院作物科学研究所 小麦TaSPL3基因及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5990386A (en) * 1994-10-14 1999-11-23 Washington State University Research Foundation Genes controlling floral development and apical dominance in plants
WO1998054328A2 (en) * 1997-06-02 1998-12-03 Washington State University Research Foundation Genes controlling floral development and apical dominance in plants
CN104805092A (zh) * 2015-03-27 2015-07-29 中国农业科学院作物科学研究所 小麦TaSPL3基因及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FRED Y. PENG等: "Bioinformatic prediction of transcription factor binding sites at promoter regions of genes for photoperiod and vernalization responses in model and temperate cereal plants", 《BMC GENOMICS》 *
HAIFENG LI等: "The AGL6-like gene OsMADS6 regulates floral organ and meristem identities in rice", 《CELL RESEARCH》 *
XIANG YU ZHAO等: "Overexpression of TaMADS1, a SEPALLATA-like gene in wheat, causes early flowering and the abnormal development of floral organs in Arabidopsis", 《PLANTA》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110804623A (zh) * 2019-11-28 2020-02-18 中国农业科学院作物科学研究所 小麦TaMADS6基因在调控植物穗和籽粒发育以及开花时间中的应用

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