CN110283829B - 调控水稻对稻瘟病抗性的中介复合体亚基OsMEDdiator16基因 - Google Patents

调控水稻对稻瘟病抗性的中介复合体亚基OsMEDdiator16基因 Download PDF

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Abstract

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及调控水稻对稻瘟病抗性的中介复合体亚基OsMediator16基因。筛选到一种受稻瘟病菌诱导表达的中介复合体亚基OsMediator16基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；该基因编码的蛋白质序列如SEQ ID NO:2所示。利用农杆菌介导的转化，获得OsMediator16超量表达转基因株系和CRISPR/Cas9突变株系。对转基因材料进行稻瘟病接种鉴定发现，OsMediator16超量表达株系对稻瘟病抗性增强，而突变株系更感稻瘟病菌，表明OsMediator16是水稻对稻瘟病抗性的正调控因子。OsMediator16基因在水稻稻瘟病抗性中起正向调控作用，超量表达该基因，能显著提高水稻对稻瘟病的抗性。

Description

调控水稻对稻瘟病抗性的中介复合体亚基OsMEDdiator16 基因
技术领域
本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及调控水稻对稻瘟病抗性的中介复合体亚基OsMediator16基因的功能鉴定及应用。
背景技术
水稻稻瘟病(Magnaporthe grisea,Anamorph:Pyricularia grisea)是我国南北稻区危害最严重的水稻病害之一，常年均有不同程度的发生，流行年份，重病地区一般减产10-20％，严重可达40-50％，局部甚至绝产(Inoue H,Hayashi N,Matsushita A,etal.Blast resistance of CC-NB-LRR protein Pb1is mediated by WRKY45throughprotein-protein interaction.PNAS,2013,110:9577-9582；Li W,Zhu Z,Chern M,etal.A Natural Allele of a Transcription Factor in Rice Confers Broad-SpectrumBlast Resistance.Cell,2017,170:114-126)。实践证明培育并推广具有持久抗性的水稻品种是防治稻瘟病最经济有效的途径，但因抗病品种的单一化、主栽品种的遗传同质性、稻瘟病菌的复杂性和变异迅速等特点，常常造成新的抗病品种在推广种植3-5年后抗性丧失，引起稻瘟病爆发和流行。因此，挖掘更多的抗性相关基因，利用现代分子育种方法，提高水稻的广谱抗性和持久抗性对防治稻瘟病有着重要的实践意义。
中介复合体是一个功能保守的多蛋白复合物，大约含有20-30个亚基，不同生物亚基数目不一样，但都可以形成一个具有四个亚结构的复合体，分别为头部，中部，尾部及细胞周期蛋白相关蛋白激酶。这四个亚基结构都具有相应的功能，头部结构参与RNA聚合酶II的识别与结合，在转录起始过程中起着重要作用；中部结构发挥着传递信号的功能；尾部可以转录因子发生互作；细胞周期蛋白相关蛋白激酶结构域在转录过程中起抑制作用(Chadick JZ,Asturias FJ.Structure of eukaryotic Mediator complexes.TrendsBiochem Sci,2005,30:264-271)。在后续的研究中发现该复合体存在着不同的异构形式，这表明中介复合体结构并不固定，可能与其参与不同信号的调控有关(Casamassimi A,Napoli C.Mediator complexes and eukaryotic transcription regulation:anoverview.Biochimie,2007,89:1439-1446)。中介复合体最初是在酵母中被发现，认为它可以作为RNA聚合酶II(RNA polymerase II)的辅助因子，在基因转录过程中作为桥梁连接转录因子和RNA聚合酶II(Thakur JK,Arthanari H,Yang F,et al.Mediator subunitGal11p/MED15is required for fatty acid-dependent gene activation by yeasttranscription factor Oaf1p.Journal of Biological Chemistry,2008,284:7)。后续研究发现，中介复合体不仅能够将RNA聚合酶II招募到启动子上，同时能够和相应的转录激活因子相结合，形成转录激活因子-中介复合体-RNA聚合酶II的复杂结构，共同启动基因转录(Vojnic E,Mourao A,Seizl M,et al.Structure and VP16binding of the MediatorMed25activator interaction domain.Nat Struct Mol Biol,2011,18:404-409)。
Figure BDA0002021910770000021
等研究发现拟南芥中介复合体的亚基序列相比于其他真核生物的亚基序列存在着较大差异，相似性极低，但在二级结构上保持了较高的相似性，说明在不同的真核生物中的Mediator Complex在二级结构上存在一定的保守性(
Figure BDA0002021910770000022
S,,Elfving N,NilssonR,et al.Purification of a plant mediator from Arabidopsis thaliana identifiesPFT1as the Med25subunit.Mol cell,2007,26:171-729)。
在拟南芥中发现的中介复合体包含27个亚基，其中有21个相对比较保守，余下6个亚基是植物特有的。研究表明，在植物中，中介复合体的不同亚基具有不同功能，涉及到细胞生命活动的各个方面，如非编码RNA的加工、基因的转录，蛋白质的稳定性、次生代谢调控以及对生物和非生物逆境的响应等。此外，研究发现MED8、MED12、MED13、MED16、MED21、MED25和CDK8主要通过启动JA/ET抗病信号途径，参与植物对腐生真菌侵染的抗病响应。MED21能够与HUB1发生互作，介导植物对腐生真菌
A.brassicicola和B.cinerea的抗性。拟南芥med25突变体对乙烯和茉莉酸的敏感型降低，且易感腐生真菌
A.brassicicola和B.cinerea(Dhawan R,Luo H,Foerster AM,et al.HISTONEMONOUBIQUITINATION1interacts with a subunit of the mediator complex andregulates defense against necrotrophic fungal pathogens in Arabidopsis.Plantcell,2009,21:1000-1019；Kidd BN1,Edgar CI,Kumar KK,et al.The mediator complexsubunit PFT1is a key regulator of jasmonate-dependent defense inArabidopsis.Plant cell,2009,21:2237-2252；Zhu Y,Schluttenhoffer CM,Wang P,etal.CYCLIN-DEPENDENT KINASE8differentially regulates plant immunity to fungalpathogens through kinase-dependent and-independent functions inArabidopsis.Plant cell,2014,26:4149-4170)。以上结果说明，中介因子复合体能够参与植物免疫调控。
在本发明提出之前，申请人发现中介复合体亚基OsMediator16(OsMEDdiator16)是水稻与稻瘟病菌互作过程中的重要响应因子。在水稻在接种稻瘟病菌72小时后，OsMEDdiator16表达量明显上调。为了进一步分析MED16在水稻抗稻瘟病中的功能，申请人构建了OsMEDdiator16超量表达载体以及CRISPR/Cas9敲除载体。获得稳定转基因材料后，对其进行稻瘟病抗性鉴定。结果表明，超量表达OsMEDdiator16能够提高水稻对稻瘟病的抗性，而突变材料更感稻瘟病。基于以上结果，表明OsMEDdiator16能够受稻瘟病菌诱导上调表达，且正调控水稻对稻瘟病的抗性，对培育具有稻瘟病抗性的水稻新品种具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一个调控水稻对稻瘟病抗性的中介复合体亚基OsMEDdiator16基因。该基因基于拟南芥同源序列比对以及水稻接种稻瘟病菌基因表达差异分析，从水稻基因组中克隆得到。OsMEDdiator16基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，或至少为50％同源性的序列，以及上述DNA片段编码的蛋白或经过改造修饰的具有相同功能的蛋白。
本发明的另一个目的提供了一个中介因子基因OsMEDdiator16在参与水稻稻瘟病抗性中的应用。通过遗传转化，使SEQ ID NO：1所示的序列或与其功能等同的同源基因在水稻植株中超量表达。本发明基因编码的蛋白质序列，其序列如SEQ ID NO：2所示氨基酸序列至少50％同源性的序列，来达到调控水稻对稻瘟病抗性的目的，从而应用于水稻抗稻瘟病品系的培育，同时可作为稻瘟病抗性水稻的标记基因。
本发明通过对水稻MED基因家族进行稻瘟病菌诱导表达模式分析，筛选得到一个受稻瘟病菌显著诱导上调表达的基因OsMEDdiator16。利用农杆菌介导的遗传转化方法在水稻中超量表达或敲除该基因，发现超量表达该基因的转基因材料对稻瘟病抗性增强，而突变材料则更感稻瘟病。由此表明，OsMEDdiator16是水稻对稻瘟病抗性响应的正调控因子。此外本发明还涉及含有该基因或者其同源基因片段的载体和设计该基因或其功能类似物增强植物对稻瘟病抗性在农业育种中的应用。
本发明的技术方案如下所述：
申请人克隆得到一种调控水稻稻瘟病抗性的水稻中介因子OsMEDdiator16基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
上述调控水稻稻瘟病抗性的水稻中介因子OsMEDdiator16基因编码的蛋白质序列如SEQ ID NO:2所示。
本发明涉及的OsMEDdiator16基因在调控水稻稻瘟病抗性中的应用。
更详细的技术方案如下所述：
申请人前期的研究是利用RT-qPCR方法分析水稻MED基因家族受稻瘟病菌诱导的表达模式，根据基因诱导表达情况，最终确定研究目的基因OsMEDdiator16(见图1中的A图)。
从粳稻品种日本晴中提取叶片RNA，利用反转录酶SuperscriptⅢ(购自Invitrogen公司,美国)，将其反转录合成cDNA。反应条件：65℃5min，50℃60min，70℃10min。利用水稻基因组信息，合成扩增引物正向引物OsMEDdiator16-full-F(5’ATGCGCGTGCCCGAGCTCTG3’)和反向引物OsMEDdiator16-full-R(5’TCAAACGACTTTCACCCATG3’)扩增出OsMEDdiator16基因的cDNA全长(3513bp)。PCR反应条件：94℃预变性3min；94℃30sec，59℃30sec，72℃2min 50sec，28个循环；72℃延伸7min。将扩增获得的PCR产物连入pGEM-T载体(购自Promega公司，美国)，筛选阳性克隆并测序，获得所需的基因ORF，其序列为SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，编码1171个氨基酸序列(SEQ ID NO:2所示序列)。对氨基酸序列进行同源比对分析发现，OsMEDdiator16与来源于二穗短柄草的MED16基因同源度最高，其次是来源于玉米的MED16(图1中的B图)。
本发明分别构建了该基因的超量表达载体pCAMBIA1300s-OsMEDdiator16(见图2中的A图)和CRISPR/Cas9-OsMEDdiator16基因敲除载体(图2中的B图)，申请人利用农杆菌转化方法将这两个载体分别转化到粳稻品种日本晴中，得到该基因的超表达的阳性株系和CRISPR/Cas9阳性株系，检测其表达量并选取表达量符合的2个T1代超表达株系(编号为OE-MED16-26-14、OE-MED16-12-3，见图3中的A图)及2个CRISPR/Cas9转化株系(在靶位点上下游设计检测引物，扩增出相应的片段并进行测序，筛选靶标位点发生基因编辑，造成大片段缺失或者翻译提前终止的材料进行后续实验，最终选择编号为med16-11和med16-26两个提前终止的株系,见图3中的B图)，作为后续试验材料。
本发明对OsMEDdiator16转基因材料(超量表达株系和CRISPR/Cas9突变株系)(CRISPR/Cas9突变株系的培育方法和选择标准是公知的方法，是转基因的方法之一，该突变体并非偶然得到，而是利用CRISPR/Cas9技术创造的，CRISPR/Cas9是目前进行基因编辑的常用技术，实际上也是通过转基因获得的生物材料)进行稻瘟病接种鉴定，发现与对照材料相比，OsMEDdiator16超量表达材料对稻瘟病抗性明显提高，med16突变体更感稻瘟病菌(图4)。在接种稻瘟病菌72小时后，抗病相关基因PR1a、PR1b、PAD4、LOX的表达水平在OsMEDdiator16超量表达材料中显著高与于对照材料(图5)。由此可见，OsMEDdiator16正调控水稻对稻瘟病的抗性。
本发明的优点：
(1)本发明通过对水稻中介复合体亚基基因受稻瘟病诱导表达模式进行分析，从中筛选并鉴定得到OsMEDdiator16基因，同时发现OsMEDdiator16是水稻抗稻瘟病的正调控调控因子。通过遗传转化，超量表达该基因获得抗稻瘟病的水稻新品系，也可以作为水稻抗性材料的标志基因。
(2)虽然在拟南芥中已经克隆了多个MED基因，并对其进行了功能验证，但目前对水稻中MED基因的研究报道还很少，也很少有文献支撑水稻MED基因能够参与到免疫调控中，本发明克隆的OsMEDdiator16基因丰富了水稻中对这类功能基因的研究。
(3)超量表达OsMEDdiator16的水稻对稻瘟病抗性显著增强，而med16突变体则更感稻瘟病。这表明OsMEDdiator16基因参与了水稻对稻瘟病的抗性响应，并扮演着重要的角色。通过提高OsMEDdiator16基因的表达量能够调节水稻体内抗性因子的积累，从而提高水稻对稻瘟病的抗性。
(4)选育抗稻瘟病的水稻材料一直为水稻育种家所重视，OsMEDdiator16的发现和利用将有助于解决生产上水稻稻瘟病抗性容易丧失的问题。由于目前生产上稻瘟病造成的水稻产量损失巨大，选育抗病品种显得尤为重要，应用OsMEDdiator16基因将有助于培育高抗稻瘟病的水稻新品种。
附图说明
图1：OsMEDdiator16诱导表达模式以及进化树分析图。附图标记说明：图1中的A图为OsMEDdiator16在野生型日本晴水稻接种稻瘟菌72小时后，与对照相比，受到明显的诱导表达。图1中的B图为OsMEDdiator16进化树分析。选取其他有代表性植物进行进化树分析和生物信息学分析，结果表明OsMEDdiator16序列与二穗短柄草(Brachypodium distachyon)BdMED16序列同源性最高，其次是玉米的MED16基因的序列。
图2：OsMEDdiator16超表达载体和CRISPR/Cas9基因敲除载体构建。附图标记说明：图2中的A图是pCAMBIA1300S-OsMEDdiator16超量表达载体的图谱。图2中的B图是CRISPR/Cas9-OsMEDdiator16基因敲除载体图谱。
图3：转基因后代的检测结果。附图标记说明：图3中的A图是OsMEDdiator16超量表达材料(T1代)表达量的检测结果。附图标记说明：选择OE-MED16-26-14(高表达水平)和OE-MED16-12-3(中等表达水平)的两个水稻转基因株系进行后续研究。图2中的B图和C图是med16突变体基因编辑类型检测。选择med16-11和med16-26两个翻译提前终止的突变体株系进行后续的研究。
图4：对照材料与转基因材料稻瘟病抗性鉴定。附图标记说明：图4中的A图为接种前对照材料和转基因材料接种稻瘟病菌的叶片形态。图4中的B图为对照材料和转基因材料接种稻瘟病菌5d后的表型观察。结果表明，与对照材料相比，OsMEDdiator16超量表达更抗稻瘟病，而med16突变体则更感稻瘟病。
图5：对照材料与转基因材料接种稻瘟病菌72h后抗病相关基因表达分析。附图标记说明：图5是接种稻瘟病菌72h后，抗病相关基因PAD4、PR1A、LOX、PR1B等在对照材料以及OE-MED16-26-14中表达水平的检测结果。
具体实施方式
对序列表的序列的说明
SEQ ID NO：1是本发明克隆的OsMEDdiator16基因的核苷酸序列。
SEQ ID NO：2是OsMEDdiator16基因编码的蛋白质序列。
以下实施例定义了本发明，并描述了本发明在分离克隆包含有OsMEDdiator16基因完整编码区段的cDNA段，以及验证OsMEDdiator16基因功能的方法。根据以下的描述和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并且在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明做出各种改变和修改，以使其适用不同的用途和条件。
实施例1：OsMEDdiator16基因的分离与克隆
1、水稻RNA提取与反转录
从野生型粳稻品种日本晴(一个公开使用的水稻材料)水稻新鲜叶片中提取总RNA，采用植物RNA提取试剂盒(MiniBEST Plant RNA Extraction Kit)提取总RNA，使用方法参照TaKaRa PrimeScript TMRT reagent Kit with gDNA Eraser说明书。将获得的RNA样品首先进行消除基因组DNA反应，去除DNA反应液体系：2.0μL 5×gDNA Eraser Buffer，1.0μL gDNA Eraser,1.0μg RNA,6.0μL RNase free ddH2O，混匀后，在42℃干浴锅中反应2min；取出消化后的混合液进行反转录反应。反应体系：1.0μL Prime Script RT EnzymeMix I，4.0μL RT Primer Mix，4.0μL 5×Prime Script Buffer 2，1.0μL RNase-FreeddH2O，10.0μL消化后混合液。反转录反应条件：37℃，15min；85℃，5sec，4℃保存。
2、OsMEDdiator16基因受稻瘟病菌诱导表达模式分析
为了探究OsMEDdiator16基因是否参与了水稻的抗病过程，本发明采用RT-qPCR的方法检测野生型水稻未接种稻瘟菌和接种稻瘟菌水稻72小时后OsMEDdiator16基因转录水平上的相对表达量变化，结果表明OsMEDdiator16基因极显著受到稻瘟病菌诱导上调表达。野生型日本晴水稻属于粳型常规水稻，在温室长至4叶期时，进行稻瘟病离体叶片接种。稻瘟病菌株P131由华中农业大学植物科学技术学院的黄俊斌教授研究团队惠赠，为常规稻瘟病菌。稻瘟病菌接菌采用的是常规的剪叶法，即对长至四叶一心期的的水稻植株中前部5cm左右叶段进行接种。稻瘟病菌培养遵循已公开发表的方法。接种后分不同时间点取接种叶片抽提总RNA，反转录成cDNA作为模板。设计OsMEDdiator16特异引物正向引物qOsMEDdiator16-F(5’CCTTTGAGGAAAAGTTCCTTACCC3’)和反向引物qOsMEDdiator16-R(5’CAATGAAGCTGAACAGAACCC 3’)，用水稻内源肌动蛋白Actin(基因登录号AK101613)作为内参基因Actin-F(正向引物5’GAGACCTTCAACACCCCTGCTA-3’)和反向引物Actin-R(5’ATCACCAGAGTCCAACACATTACCT3’)。采用实时定量RT-qPCR分析试剂盒(
Figure BDA0002021910770000061
Geeen PCRMaster Mix，参照试剂盒使用说明书操作)，在BIO-Rad CFX Connect(BIO-Rad公司制造)荧光定量PCR仪上进行反应。结果显示，在OsMEDdiator16极显著收到稻瘟病诱导上调表达，暗示OsMEDdiator16可能参与水稻对稻瘟病菌的抗性响应。
3、OsMEDdiator16基因序列获得
利用正向引物OsMEDdiator16-full-F(5’ATGCGCGTGCCCGAGCTCTG3’)和反向引物OsMEDdiator16-full-R(5’TCAAACGACTTTCACCCATG 3’)，用粳稻日本晴的cDNA作模板克隆得到OsMEDdiator16的全长序列。PCR反应条件：94℃预变性3min；94℃30sec，59℃30sec，72℃2min50sec，30个循环；72℃延伸7min。将扩增获得的PCR产物连入pGEM-T载体(购自Promega公司，美国)，筛选阳性克隆并测序，将阳性菌株保存在-80℃。获得所需的OsMEDdiator16基因的开放阅读框(ORF)，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。通过BlastX(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)确定OsMEDdiator16基因的开放阅读框(ORF)所对应的1171个氨基酸，由此推测OsMEDdiator16基因编码的蛋白质序列如序列表SEQ ID NO：2所示。
实施例2：OsMEDdiator16超量表达以及CRISPR/Cas9基因敲除载体构建
1、超量表达载体的构建
为了验证OsMEDdiator16的基因功能，申请人构建了超量表达载体来转化日本晴胚性愈伤组织。以实施例1中得到的OsMEDdiator16阳性克隆的质粒为模板，设计超表达引物，在引物两端分别加SalI和KpnI的酶切位点以及相应的保护碱基，将所述的引物分别命名正向引物OsMEDdiator16-OE-F(5’GGGGTACCATGCGCGTGCCCGAGCTCTGCAGGAACTT3’)和反向引物OsMEDdiator16-OE-R(5’ACGCGTCGACCGTCAAATTCAAACGACTTTCAC 3’)，进行PCR扩增。将所得的PCR产物进行琼脂糖电泳及纯化回收(购自天根生化科技(北京)有限公司)，测定浓度后，用SalI和KpnI进行双酶切，酶切产物纯化回收后于-20℃保存备用。在液体LB培养基中(添加50mg/L卡那霉素)活化pCAMBIA1300(质粒，一种来自澳大利亚CAMBIA实验室的商用质粒)菌株，提取质粒后，用用SalI和KpnI进行双酶切，将酶切产物纯化回收后于-20℃保存备用。将上述酶切回收的OsMEDdiator16目的片段与线性化载体pCAMBIA1300进行连接反应，具体的反应体系为：1.0μL T4ligase，0.5μL 10×T4ligase Buffer，100ngOsMEDdiator16酶切产物，80ng线性化pCAMBIA1300，用无菌ddH2O补足体积至5.0μL。25℃反应3-4h后，进行大肠杆菌热激转化，所用菌株为大肠杆菌DH5α。具体转化流程为：将-80℃保藏的大肠杆菌DH5α感受态细胞冰浴溶化，向5μL连接反应中加入50μL感受态细胞，轻轻混匀，冰上放置15-30min；冰浴结束后，42℃水浴90sec，然后迅速置于冰上3min；加入400μLLB液体培养基，于37℃，200rpm，复苏培养45min；复苏完成后，5000rpm，离心2min，弃上清300μL，用剩余上清重悬菌体；将菌液均匀涂在LB的固体培养基(添加50mg/L卡那霉素)上，37℃倒置培养过夜。挑取单克隆，选择2-3个阳性克隆测序，保存没有任何突变的菌株及相应质粒，命名为重组质粒pCAMBIA1300s-OsMEDdiator16。将测序正确的重组质粒pCAMBIA1300s-OsMEDdiator16通过冻融法转入根癌农杆菌EHA105感受态，挑取单菌落于YEP液体培养基(YEP液体培养基为常用培养基，本实施例中添加了30mg/L利福平和50mg/L卡那霉素),28℃振荡培养36-48h，PCR检测后，阳性菌株加适量甘油于-80℃保存备用。
2、CRISPR/Cas9基因敲除载体构建
利用华中农业大作物遗传改良国家重点实验室开发的CRISPR-P 1.0(http://crispr.hzau.edu.cn/CRISPR/)设计OsMEDdiator16的guide RNA(gRNA)。依据OsMEDdiator16DNA序列以及基因结构，设计了两个gRNA(即：gRNA1：5’AATGCACGAGGGCATGATCG 3’；gRNA2：5’GTGTTCACATTGCCAGGAAC3’)。合成接头引物MED16-gRNA1-U3F
(5’AATGCACGAGGGCATGATCGgttttagagctagaa 3’)，MED16-gRNA1-U3R(5’CGATCATGCCCTCGTGCATTtgcaccagccgggaa3’)，MED16-gRNA2-U3F(5’GTGTTCACATTGCCAGGAACgttttagagctagaa3’),MED16-gRNA2-U3R(5’GTTCCTGGCAATGTGAACACtgcaccagccgggaa 3’)，以及gRNA连入表达载体pRGEB32所需的接头引物S5AD5-F(5’CAGATGATCCGTGGCAACAAAG3’)和S5AD5-R(5’TTTCTAGCTCTAAAACAAAA3’)；L5AD5-F(5’CAGATGATCCGTGGCAACAAAGCACCAGTGGTCTAG3’)和L5AD5-R(5’TTTCTAGCTCTAAAACAAAAAAAAAAGCACCGACTCG3’)。以pGTR质粒为模板，用L5AD5-F/MED16-gRNA1-U3R、MED16-gRNA1-U3F/MED16-gRNA2-U3R、MED16-gRNA2-U3F/L5AD5-R三对引物进行PCR扩增。PCR反应条件：94℃预变性3min；94℃30sec，59℃30sec，72℃30sec，26个循环；72℃延伸7min。将得到的3个RCR产稀释20-50倍后，等体积混匀。取1μL上述混合物为模板，用S5AD5-F/S5AD5-R引物对进行扩增。PCR反应条件：94℃预变性3min；94℃30sec，59℃30sec，72℃45sec，26个循环；72℃延伸7min。将所得的产物(即串联两个gRNA的DNA片段)进行纯化回收，并测定浓度；将CRISPR/Cas9表达载体pRGEB32用BsaI进行酶切，将酶切产物进行纯化回收，得到线性化的pRGEB32载体。利用infusion重组的方法，将纯化的PCR产物连入到线性化的pRGEB32载体中。具体反应条件：PCR产物100ng,线性化的pRGEB32载体50-80ng，infusion酶(takara)1μL，10×infusion Buffer 1μL，加ddH2O至10μL，50℃反应30min。将上述反应产物热激转化大肠杆菌DH5α，挑单克隆进行阳性检测并测序，保存阳性菌株和质粒，并将阳性质粒转化根癌农杆菌EHA105感受态。挑取单菌落于YEP液体培养基(YEP液体培养基为常用培养基，本实施例中添加了30mg/L利福平和50mg/L卡那霉素),28℃振荡培养36-48h，PCR检测后，阳性菌株加适量甘油于-80℃保存备用。本实施例中涉及的载体pGTR和pRGEB32为华中农业大学谢卡斌教授惠赠。
实施例3：水稻遗传转化
1.诱导愈伤组织：提前准备无菌的愈伤组织诱导培养基，100mL的三角瓶中倒入40-50mL的诱导培养基。将水稻种子(品种日本晴，同前)剥掉颖壳，在超净工作台中进行无菌操作，先用75％乙醇溶液浸泡种子1min，再用0.1％HgCl2溶液浸泡种子15-20min，最后用无菌水洗涤5-10次。每瓶培养基种8-12颗种子，28℃暗培养40-50天诱导愈伤组织的产生；
2.继代：提前2-3天配制继代培养基，继代培养基配方用愈伤组织诱导培养基。按常规方法对培养基进行灭菌，使培养基干燥(湿度太大的培养基不利于愈伤组织的生长)。从诱导的愈伤组织中，挑选淡黄色，颗粒状，干燥，活力强的愈伤组织转入继代培养基中，28℃暗培养20d；
3.预培养：提前用500mL三角瓶分装无菌预培养培养基，试验前每250mL培养基中加入300μL100Mm乙酰丁香酮，5mL 40％葡萄糖，混匀后，每瓶装8-10皿培养基；从继代的愈伤组织中，挑取外观为淡黄色，颗粒状，干燥，且活力强的愈伤组织转入预培养培养基的培养皿中，每个皿接种60-80块左右，绿豆大小的愈伤组织，愈伤组织较大可用无菌镊子夹碎，2于8℃暗培养3d；
4.侵染与共培养：试验前2d，将含有目的基因(OsMEDdiator16)的农杆菌菌株在含有抗生素(30mg/L利福平和50mg/L卡那霉素)的平皿上划线，活化。准备悬浮培养基(100mL/菌株)，共培养基(250mL/菌株)，大平皿，小平皿(里面垫有吸水纸和滤纸，使用前灭菌并烘干)，准备250mL无菌三角瓶若干。将划线培养的农杆菌刮入1/2N6悬浮培养基中(N6培养基是常用植物组织培养基，加入100μL AS+2mL50％葡萄糖)，于28℃，200rpm，培养30min。摇菌同时将预培养的愈伤组织收集到250mL无菌三角瓶中。将农杆菌菌液倒入愈伤组织中，浸泡30min。倒去菌液，先将装有愈伤组织的三角瓶倒置于无菌小皿上，吸干菌液，再把愈伤组织铺在无菌大皿的滤纸上，上面盖一张滤纸，用灭菌镊子轻压愈伤组织，吸干表面菌液，自然干燥3-4h。将充分干燥的愈伤组织用灭菌的勺子均匀的铺到共培养基上(铺上之后最好不要再挪动，以减少培养基与愈伤组织表面的接触，防止农杆菌的过度生长)，于19℃暗培养3d。
5.水洗与筛选(简称S1培养基)：准备无菌水，大皿，小皿(含有吸水纸和滤纸)，250mL三角瓶若干，筛选培养基；将共培养后的愈伤组织转移至水洗杯中，倒入灭菌蒸馏水至完浸没愈伤组织，盖上盖子振荡20-30sec，倒掉灭菌蒸馏水。如此重复2-3次。加入灭菌蒸馏水至完全浸没愈伤组织，盖上盖子摇晃混匀，振荡20-30sec，静置5min，倒掉灭菌蒸馏水。加入灭菌蒸馏水至完全浸没愈伤组织，盖上盖子摇晃混匀，振荡20-30sec，静置10min。最后倒掉灭菌蒸馏水，加入含500mg/L羧苄青霉素的灭菌蒸馏水，200rpm摇晃30min。倒掉蒸馏水，自然干燥愈伤。将处理后愈伤组织转移至筛选培养基中，28℃暗培养20d；
6.筛选(简称培养基S2)：准备筛选培养基S2，每250mL培养基中加入300μL羧苄青霉素，250μL潮霉素，5mL 50％葡萄糖，倒皿后应在超净工作台上开盖用无菌风吹1.5-2h，筛选培养基表面不宜太湿，否则筛选时不利于农杆菌的抑制和抗性愈伤组织的生长；从S1培养基上挑选干燥的、没有农杆菌污染的愈伤，摆放在S2培养基上(每皿接种25到30块愈伤组织)，28℃暗培养20d；
7.愈伤组织分化：提前3-4d准备分化培养基。挑选淡黄色，致密，干燥的抗性愈伤组织小块，接种到分化培养基中，于28℃光照(光照强度3000Lux)培养40d，在培养后期会分化出幼苗。
8.生根：提前2-3d准备生根培养基。准备灭菌空皿4-5个；将分化出的苗子从分化培养基中拔出，一块愈伤只取一棵，用剪刀剪去过长的叶子和根，接入生根管内，每根管内接入1-2株幼苗；在光培养室(光照强度3000Lux)培养15-20d，等根生长充分后，炼苗4-7d，然后移栽到温室。
本发明的实施例中涉及的水稻遗传转化的专用培养基配方及其配制：
母液配方：
1.MSmax储备液(10X)
Figure BDA0002021910770000091
Figure BDA0002021910770000101
逐次溶解，然后加蒸馏水定容到1000mL。
2.MSmin储备液(100X)
Figure BDA0002021910770000102
注：Na2MoO4必须单独溶解，再与其它组分混合，加蒸馏水定容到1000mL，室温保存。
3.N6max储备液(10X)
Figure BDA0002021910770000103
逐次溶解，然后加蒸馏水定容到1000mL。
4.N6min储备液(100X)
Figure BDA0002021910770000104
用蒸馏水定容到1000mL，室温保存。
5.Fe2+-EDTA储备液(100X)
往一个试剂瓶中加入300mL蒸馏水和FeSO4·7H2O 2.78g；
往另一试剂瓶中加入300mL蒸馏水，并加热到70℃，然后加入Na2EDTA·2H2O3.73g，溶解好后，将两个试剂瓶中的溶液混合，在70℃保温2小时，然后加蒸馏水定容到1000mL，4℃避光保存。
6.Vitamin储备液(100X)
Figure BDA0002021910770000111
加蒸馏水定容到1000mL，4℃保存。
7.AAmax储备液(10X)
Figure BDA0002021910770000112
加蒸馏水定容到1000mL，室温避光保存。
8.AAmin储备液(100X)
Figure BDA0002021910770000113
Na2MoO4单独溶解，然后与其它组分混合并加蒸馏水定容到1000mL，室温避光保存。
9.6-BA储备液(1mg/mL)
6-BA 100mg，加入1.0mL 1M KOH振摇至6-BA溶解，然后加蒸馏水定容到100mL，室温保存。
10.KT储备液(1mg/mL)
KT 100mg；加入1.0ml 1M KOH振摇至KT溶解，然后加蒸馏水定容到100mL，室温保存。
11.2,4-D储备液(1mg/mL)
2,4-D 100mg，加入1.0ml 1M KOH振摇5min，然后加10mL蒸馏水并振摇至2,4-D溶解，用蒸馏水定容到100mL，室温保存。
12.100μM AS储备液
AS 0.196g；
DMSO 10mL；
用1.5mL离心管分装，4℃保存。
13.IAA储备液(1mg/mL)
IAA 100mg，加入1.0ml 1N KOH振摇至IAA溶解，然后用dH2O定容到100ml，室温避光保存。
14.NAA储备液(1mg/mL)
NAA 100mg，加入1.0mL 1M KOH振摇至NAA溶解，再用蒸馏水定容到100mL，室温避光保存。
培养基配方：
1.诱导培养基
Figure BDA0002021910770000121
pH值：5.9
加蒸馏水定容至1000mL。
2.继代培养基
Figure BDA0002021910770000122
Figure BDA0002021910770000131
pH值：5.9
加蒸馏水定容至1000mL。
3.预培养培养基
Figure BDA0002021910770000132
加蒸馏水定容至250mL。
4.共培养培养基
Figure BDA0002021910770000133
pH值：5.6
加蒸馏水定容至250mL。
5.悬浮培养基
Figure BDA0002021910770000134
Figure BDA0002021910770000141
pH值：5.4
加蒸馏水定容至100mL。
6.筛选培养基
Figure BDA0002021910770000142
pH值：6.0
加蒸馏水定容至250Ml
7.分化培养基
Figure BDA0002021910770000143
pH值：6.0
加蒸馏水定容至1000mL。
8.生根培养基
Figure BDA0002021910770000151
pH值：5.8
加蒸馏水定容至1000mL。
实施例4：对转基因材料稻瘟病菌的接种鉴定
1.西红柿燕麦培养基OM配置：将水煮至沸腾，称取40g燕麦片，加入至沸水中煮30min，过滤取汁；鲜榨西红柿汁150mL，加入到燕麦汁中，加水定容至1L，添加1.6％琼脂(Agar)；常规高温高压灭菌。用于稻瘟菌产孢的培养基，需在在1L培养基中加入0.6gCaCO3。
2.稻瘟病菌菌株的纯化与保存：在超净工作台里用移液器将稻瘟病菌的分生孢子液涂在1.6％水琼脂板上，置于28℃培养箱，温育12h后，在解剖镜下用挑针挑取萌发的单个分生孢子，点接在OM平板上，置于28℃培养箱。温育2-3d后，将单个分生孢子萌发形成的菌丝转移到新的OM平板上，这些单孢纯化的菌株可用于后续试验。将待保存菌株的菌丝块点接到已铺有灭菌滤纸片的OM平板上，置于28℃培养箱中。待菌落长满培养皿后，取出滤纸片，置入灭菌的硫酸纸袋中。将硫酸纸袋置于干燥器中放置一周，转移到密封的容器中，-20℃保存。
3.产孢：将野生型菌株P131点接在OM平板上，置于28℃光照培养箱倒置培养。生长5d后，用涂菌环将菌丝充分打断，均匀地涂布到新的OM平板上，置于28℃光照培养箱倒置培养。36h后用棉签轻轻将肉眼可见新生的气生菌丝洗下，盖上双层纱布，置于28℃光照培养。48h后，用30mL蒸馏水彻底将OTA平板上的分生孢子洗至50mL的离心管中。
4.孢子液接种：用30mL 0.025％吐温溶液将分生孢子从上述培养了5d的OM板上洗下，然后经由三层擦镜纸制成的漏斗过滤至50mL离心管中，调节分生孢子浓度至2×105个/mL。吸取5-10μL调好浓度的孢子悬浮液，接种到水稻叶片表面。用封口膜密封接种盒以保温保湿，用黑布遮光培养。36h后揭去黑布，见光培养(光照强度)，继续保湿培养48h后揭去封口膜，一般接种后5d开始发病。
序列表
<110> 湖北大学
<120> 调控水稻对稻瘟病抗性的中介复合体亚基OsMEDdiator16基因
<141> 2019-03-25
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 3513
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<220>
<221> gene
<222> (1)..(3513)
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(3513)
<400> 1
atg cgc gtg ccc gag ctc tgc agg aac ttc agt gca gtt gct tgg tgc 48
Met Arg Val Pro Glu Leu Cys Arg Asn Phe Ser Ala Val Ala Trp Cys
1 5 10 15
ggg aag ctc aat gca att gca tgc gca tca gag act tgt gca cgc ata 96
Gly Lys Leu Asn Ala Ile Ala Cys Ala Ser Glu Thr Cys Ala Arg Ile
20 25 30
cca agc tct aat tca agc cca cca ttt tgg att ccc ata cac att cta 144
Pro Ser Ser Asn Ser Ser Pro Pro Phe Trp Ile Pro Ile His Ile Leu
35 40 45
aat cca gag aga cca aca gaa tgt tct gtt ttc aat gtg aaa gca gat 192
Asn Pro Glu Arg Pro Thr Glu Cys Ser Val Phe Asn Val Lys Ala Asp
50 55 60
tct cca cgc gac ttt gtt caa ttc att gaa tgg tct cct cga tca tgc 240
Ser Pro Arg Asp Phe Val Gln Phe Ile Glu Trp Ser Pro Arg Ser Cys
65 70 75 80
cct cgt gca tta ctg gtg gca aat ttt cat gga agg att act ata tgg 288
Pro Arg Ala Leu Leu Val Ala Asn Phe His Gly Arg Ile Thr Ile Trp
85 90 95
aca cag cca act aag ggt cct act aat ctt gta cgt gat gcc agt tcc 336
Thr Gln Pro Thr Lys Gly Pro Thr Asn Leu Val Arg Asp Ala Ser Ser
100 105 110
tgg caa tgt gaa cac gaa tgg cgt caa gat ctt tcg gtg gtg act aag 384
Trp Gln Cys Glu His Glu Trp Arg Gln Asp Leu Ser Val Val Thr Lys
115 120 125
tgg ttg tca gga att tct ccg tat aga tgg ctt cct gca aac tct agt 432
Trp Leu Ser Gly Ile Ser Pro Tyr Arg Trp Leu Pro Ala Asn Ser Ser
130 135 140
act tca tca aac ttg aaa acc ttt gag gaa aag ttc ctt acc cag cag 480
Thr Ser Ser Asn Leu Lys Thr Phe Glu Glu Lys Phe Leu Thr Gln Gln
145 150 155 160
cct caa agt tcg gct ggg tgg cca aac att cta tgt gtc tgt tca gtt 528
Pro Gln Ser Ser Ala Gly Trp Pro Asn Ile Leu Cys Val Cys Ser Val
165 170 175
ttt tca tcg ggt tct gtt cag ctt cat tgg tca caa tgg cct tct caa 576
Phe Ser Ser Gly Ser Val Gln Leu His Trp Ser Gln Trp Pro Ser Gln
180 185 190
aac tca gca caa cct aga tgg ttt tct act agc aaa ggg ctt tta gga 624
Asn Ser Ala Gln Pro Arg Trp Phe Ser Thr Ser Lys Gly Leu Leu Gly
195 200 205
gca ggg cca agc ggc ata atg gct gct gat gct att att act gaa act 672
Ala Gly Pro Ser Gly Ile Met Ala Ala Asp Ala Ile Ile Thr Glu Thr
210 215 220
gga gca tta cat gtt gct ggt gtt ccc ctt gtt aat cca tct act gta 720
Gly Ala Leu His Val Ala Gly Val Pro Leu Val Asn Pro Ser Thr Val
225 230 235 240
gtg gtt tgg gag gtg atg cca ggc ctt ggc aat ggt att cag gca act 768
Val Val Trp Glu Val Met Pro Gly Leu Gly Asn Gly Ile Gln Ala Thr
245 250 255
gca aag ata aat gca aca agc tct ctt cct cca tca cta aat ccc cca 816
Ala Lys Ile Asn Ala Thr Ser Ser Leu Pro Pro Ser Leu Asn Pro Pro
260 265 270
ctc tgg gct ggt ttt gct cca ctt gca tct tac ctc ttc tct ttg caa 864
Leu Trp Ala Gly Phe Ala Pro Leu Ala Ser Tyr Leu Phe Ser Leu Gln
275 280 285
gac tac ctt gtt tcc gag ggc gca cag aca aaa aaa cag gca cag gta 912
Asp Tyr Leu Val Ser Glu Gly Ala Gln Thr Lys Lys Gln Ala Gln Val
290 295 300
gat aat gag acc act gag gta gca tcg atc cat tgt tgt cca gtt tcc 960
Asp Asn Glu Thr Thr Glu Val Ala Ser Ile His Cys Cys Pro Val Ser
305 310 315 320
aac ttt tca gct tac gtc agt cct gaa gct gct gcc cag tca gcc act 1008
Asn Phe Ser Ala Tyr Val Ser Pro Glu Ala Ala Ala Gln Ser Ala Thr
325 330 335
acc aca aca tgg gga tct ggg gtt acc tca gtt gct ttt gat ccc act 1056
Thr Thr Thr Trp Gly Ser Gly Val Thr Ser Val Ala Phe Asp Pro Thr
340 345 350
cga ggg gga tca gtt att aca gtt gta ata gtt gaa ggg cag tac atg 1104
Arg Gly Gly Ser Val Ile Thr Val Val Ile Val Glu Gly Gln Tyr Met
355 360 365
tct cct tat gat cct gat gaa gga cct tcc atc act gga tgg aga gtc 1152
Ser Pro Tyr Asp Pro Asp Glu Gly Pro Ser Ile Thr Gly Trp Arg Val
370 375 380
cag tgc tgg gaa tct tca gtc caa cct gtt gtt ctt cat cca ata ttt 1200
Gln Cys Trp Glu Ser Ser Val Gln Pro Val Val Leu His Pro Ile Phe
385 390 395 400
gga agc cct gca aac ttt ggt gga cag cca cct aca cag act gtt tgg 1248
Gly Ser Pro Ala Asn Phe Gly Gly Gln Pro Pro Thr Gln Thr Val Trp
405 410 415
tcc aca aga gtt aac aaa agc atc cca cca tct gag gac ctt aag aac 1296
Ser Thr Arg Val Asn Lys Ser Ile Pro Pro Ser Glu Asp Leu Lys Asn
420 425 430
cct caa tca tat gtt cca atg cca aca act tca gat gag cgg agt tct 1344
Pro Gln Ser Tyr Val Pro Met Pro Thr Thr Ser Asp Glu Arg Ser Ser
435 440 445
tct gag tgc agt gtt gac agg gcg aac cga ctt agc ttt gac cct tat 1392
Ser Glu Cys Ser Val Asp Arg Ala Asn Arg Leu Ser Phe Asp Pro Tyr
450 455 460
gat ctt cca aat gat gtc aga caa ttg gcc caa ata gtt tat tct gct 1440
Asp Leu Pro Asn Asp Val Arg Gln Leu Ala Gln Ile Val Tyr Ser Ala
465 470 475 480
cat ggt ggt gag gtt gca gtt gca ttc ctg cgt gga ggt gtg cac att 1488
His Gly Gly Glu Val Ala Val Ala Phe Leu Arg Gly Gly Val His Ile
485 490 495
ttt tca ggt cca aac ttt gaa cag gtt gat agc tat cat gtc aat gtt 1536
Phe Ser Gly Pro Asn Phe Glu Gln Val Asp Ser Tyr His Val Asn Val
500 505 510
ggc tca gca att gct cca cca gcc ttc tcc tcc agt ggt tgt tgc ttg 1584
Gly Ser Ala Ile Ala Pro Pro Ala Phe Ser Ser Ser Gly Cys Cys Leu
515 520 525
gca tca gta tgg cat gac aca ctc aaa gat cga acc ata cta aag ata 1632
Ala Ser Val Trp His Asp Thr Leu Lys Asp Arg Thr Ile Leu Lys Ile
530 535 540
ata cgt gtg ctt cct cct gca att ctt aat gct cag aca aag gtt agc 1680
Ile Arg Val Leu Pro Pro Ala Ile Leu Asn Ala Gln Thr Lys Val Ser
545 550 555 560
tca gct gtt tgg gaa cga gca ata gca gat aga ttt tgg tgg agt cta 1728
Ser Ala Val Trp Glu Arg Ala Ile Ala Asp Arg Phe Trp Trp Ser Leu
565 570 575
ttg gct ggt gtg gat tgg tgg gat gct gtt ggc tgc aca caa agt gct 1776
Leu Ala Gly Val Asp Trp Trp Asp Ala Val Gly Cys Thr Gln Ser Ala
580 585 590
gct gaa gat ggt att gtc tca ctg aac agt gtg ata gct ttg ctg gac 1824
Ala Glu Asp Gly Ile Val Ser Leu Asn Ser Val Ile Ala Leu Leu Asp
595 600 605
gcg gac ttc cat tgt ctt cca act ata caa cag agg caa caa cac tgt 1872
Ala Asp Phe His Cys Leu Pro Thr Ile Gln Gln Arg Gln Gln His Cys
610 615 620
cct aat ctt gat agg ata aag tgt aga ttg ttg gaa gga aca aat gct 1920
Pro Asn Leu Asp Arg Ile Lys Cys Arg Leu Leu Glu Gly Thr Asn Ala
625 630 635 640
caa gat gtc aga gca ctt gtg ttg gac atg caa gca aga ttg ctt ctg 1968
Gln Asp Val Arg Ala Leu Val Leu Asp Met Gln Ala Arg Leu Leu Leu
645 650 655
gat atg ctt ggc aag gga att gag tct gcc ctg ata aat cca tca act 2016
Asp Met Leu Gly Lys Gly Ile Glu Ser Ala Leu Ile Asn Pro Ser Thr
660 665 670
ctg cta cct gaa ccg tgg caa gct tcc agt gac atg tta tct agc att 2064
Leu Leu Pro Glu Pro Trp Gln Ala Ser Ser Asp Met Leu Ser Ser Ile
675 680 685
ggg cct gac aaa atg act gtt gac cca gct cta ctt tta agc atc cag 2112
Gly Pro Asp Lys Met Thr Val Asp Pro Ala Leu Leu Leu Ser Ile Gln
690 695 700
ggg tac gtt gat gct gtt cta gat tta gcg tca cat ttt atc aca cgc 2160
Gly Tyr Val Asp Ala Val Leu Asp Leu Ala Ser His Phe Ile Thr Arg
705 710 715 720
ttg cga cgc tat gcg agc ttc tgc cga act ttg gct agc cat gca gtt 2208
Leu Arg Arg Tyr Ala Ser Phe Cys Arg Thr Leu Ala Ser His Ala Val
725 730 735
gga gca tct tct ggt tca ggc aat tct agg aat atg gtt aca agt cca 2256
Gly Ala Ser Ser Gly Ser Gly Asn Ser Arg Asn Met Val Thr Ser Pro
740 745 750
acc aac agt tct cct tca cct tca act aac caa ggt aat caa ggt gga 2304
Thr Asn Ser Ser Pro Ser Pro Ser Thr Asn Gln Gly Asn Gln Gly Gly
755 760 765
gta gcg tct aca aca ggg agc tca caa atg caa gag tgg gtc caa ggt 2352
Val Ala Ser Thr Thr Gly Ser Ser Gln Met Gln Glu Trp Val Gln Gly
770 775 780
gcc att gct aag att agt aac aat act gat ggt gct gca aat gct gca 2400
Ala Ile Ala Lys Ile Ser Asn Asn Thr Asp Gly Ala Ala Asn Ala Ala
785 790 795 800
cca aat cca att agc ggg agg tca tca ttc atg cct att agc ata aat 2448
Pro Asn Pro Ile Ser Gly Arg Ser Ser Phe Met Pro Ile Ser Ile Asn
805 810 815
acg gga aca ttc cct ggc aca cca gct gtt aga ctt att ggg gac tgc 2496
Thr Gly Thr Phe Pro Gly Thr Pro Ala Val Arg Leu Ile Gly Asp Cys
820 825 830
cat ttc ctt cat aga tta tgt cag ctg ttg cta ttt tgt ttg ctt ttt 2544
His Phe Leu His Arg Leu Cys Gln Leu Leu Leu Phe Cys Leu Leu Phe
835 840 845
cgg aga agg caa tct cca agg ata cct gca aat gca caa aaa agt tct 2592
Arg Arg Arg Gln Ser Pro Arg Ile Pro Ala Asn Ala Gln Lys Ser Ser
850 855 860
gat tct agc atg cag aaa caa cac ttg atg aac agt aag aca gag gat 2640
Asp Ser Ser Met Gln Lys Gln His Leu Met Asn Ser Lys Thr Glu Asp
865 870 875 880
aat act ttg gca gtc aga tct ggt cta ggt gct gcc aaa ttg gaa gat 2688
Asn Thr Leu Ala Val Arg Ser Gly Leu Gly Ala Ala Lys Leu Glu Asp
885 890 895
ggc aca act tca cgt gga cag atg gtt gga gca aag ggt gct gaa gaa 2736
Gly Thr Thr Ser Arg Gly Gln Met Val Gly Ala Lys Gly Ala Glu Glu
900 905 910
aat cca gtg ggc aac aaa tct gct agg ata ggt tct ggc aat gct ggc 2784
Asn Pro Val Gly Asn Lys Ser Ala Arg Ile Gly Ser Gly Asn Ala Gly
915 920 925
caa ggt tat act tca gac gag gtg aaa gtc ctt ttt ctc ata tta gtt 2832
Gln Gly Tyr Thr Ser Asp Glu Val Lys Val Leu Phe Leu Ile Leu Val
930 935 940
gac cta tgt aaa cgg act gca acc ttg caa cat ccg ttg cct tct tct 2880
Asp Leu Cys Lys Arg Thr Ala Thr Leu Gln His Pro Leu Pro Ser Ser
945 950 955 960
cag gtt ggt tcg agc aat att att ata agg ctg cat tac atc gat ggc 2928
Gln Val Gly Ser Ser Asn Ile Ile Ile Arg Leu His Tyr Ile Asp Gly
965 970 975
aat tac act gtg ctc cct gag gta gtg gaa gca tct ctt ggc cct cat 2976
Asn Tyr Thr Val Leu Pro Glu Val Val Glu Ala Ser Leu Gly Pro His
980 985 990
atg cag aat atg cct cgt cca cgt gga gct gat gct gct ggc ctt cta 3024
Met Gln Asn Met Pro Arg Pro Arg Gly Ala Asp Ala Ala Gly Leu Leu
995 1000 1005
ctt cga gaa tta gaa ctg cag ccc cct gct gaa gaa tgg cat aga cgc 3072
Leu Arg Glu Leu Glu Leu Gln Pro Pro Ala Glu Glu Trp His Arg Arg
1010 1015 1020
aac atg ttt ggt ggg cca tgg tca gaa cca gat gat ctt ggt cca ttg 3120
Asn Met Phe Gly Gly Pro Trp Ser Glu Pro Asp Asp Leu Gly Pro Leu
1025 1030 1035 1040
gat aat acg cga cag cta aaa atc aat ggc tct acc aat cgc cac tta 3168
Asp Asn Thr Arg Gln Leu Lys Ile Asn Gly Ser Thr Asn Arg His Leu
1045 1050 1055
tcg gac atg gaa gag gat ggc gac agc tcc ttt ggg att caa aat ctt 3216
Ser Asp Met Glu Glu Asp Gly Asp Ser Ser Phe Gly Ile Gln Asn Leu
1060 1065 1070
tgg cca aga aag cgc cgg ttg tct gaa aga gat gca gca ttt ggt ctg 3264
Trp Pro Arg Lys Arg Arg Leu Ser Glu Arg Asp Ala Ala Phe Gly Leu
1075 1080 1085
aaa aca tcc gtg ggg ctg gga tct ttt cta ggt gtg atg ggt tct cgg 3312
Lys Thr Ser Val Gly Leu Gly Ser Phe Leu Gly Val Met Gly Ser Arg
1090 1095 1100
aga gat gtt att aca gct gtg tgg aaa aca ggc ctc gaa ggt gaa tgg 3360
Arg Asp Val Ile Thr Ala Val Trp Lys Thr Gly Leu Glu Gly Glu Trp
1105 1110 1115 1120
tac aag tgc ata cga tgt ttg agg caa acc tgt gca ttt gct cag cct 3408
Tyr Lys Cys Ile Arg Cys Leu Arg Gln Thr Cys Ala Phe Ala Gln Pro
1125 1130 1135
ggt gct cta gct ccg aac acg tcg aat gag ctt gag gca tgg tgg atc 3456
Gly Ala Leu Ala Pro Asn Thr Ser Asn Glu Leu Glu Ala Trp Trp Ile
1140 1145 1150
agc cga tgg acc cat gct tgc cca atg tgc ggt ggg aca tgg gtg aaa 3504
Ser Arg Trp Thr His Ala Cys Pro Met Cys Gly Gly Thr Trp Val Lys
1155 1160 1165
gtc gtt tga 3513
Val Val
1170
<210> 2
<211> 1170
<212> PRT
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 2
Met Arg Val Pro Glu Leu Cys Arg Asn Phe Ser Ala Val Ala Trp Cys
1 5 10 15
Gly Lys Leu Asn Ala Ile Ala Cys Ala Ser Glu Thr Cys Ala Arg Ile
20 25 30
Pro Ser Ser Asn Ser Ser Pro Pro Phe Trp Ile Pro Ile His Ile Leu
35 40 45
Asn Pro Glu Arg Pro Thr Glu Cys Ser Val Phe Asn Val Lys Ala Asp
50 55 60
Ser Pro Arg Asp Phe Val Gln Phe Ile Glu Trp Ser Pro Arg Ser Cys
65 70 75 80
Pro Arg Ala Leu Leu Val Ala Asn Phe His Gly Arg Ile Thr Ile Trp
85 90 95
Thr Gln Pro Thr Lys Gly Pro Thr Asn Leu Val Arg Asp Ala Ser Ser
100 105 110
Trp Gln Cys Glu His Glu Trp Arg Gln Asp Leu Ser Val Val Thr Lys
115 120 125
Trp Leu Ser Gly Ile Ser Pro Tyr Arg Trp Leu Pro Ala Asn Ser Ser
130 135 140
Thr Ser Ser Asn Leu Lys Thr Phe Glu Glu Lys Phe Leu Thr Gln Gln
145 150 155 160
Pro Gln Ser Ser Ala Gly Trp Pro Asn Ile Leu Cys Val Cys Ser Val
165 170 175
Phe Ser Ser Gly Ser Val Gln Leu His Trp Ser Gln Trp Pro Ser Gln
180 185 190
Asn Ser Ala Gln Pro Arg Trp Phe Ser Thr Ser Lys Gly Leu Leu Gly
195 200 205
Ala Gly Pro Ser Gly Ile Met Ala Ala Asp Ala Ile Ile Thr Glu Thr
210 215 220
Gly Ala Leu His Val Ala Gly Val Pro Leu Val Asn Pro Ser Thr Val
225 230 235 240
Val Val Trp Glu Val Met Pro Gly Leu Gly Asn Gly Ile Gln Ala Thr
245 250 255
Ala Lys Ile Asn Ala Thr Ser Ser Leu Pro Pro Ser Leu Asn Pro Pro
260 265 270
Leu Trp Ala Gly Phe Ala Pro Leu Ala Ser Tyr Leu Phe Ser Leu Gln
275 280 285
Asp Tyr Leu Val Ser Glu Gly Ala Gln Thr Lys Lys Gln Ala Gln Val
290 295 300
Asp Asn Glu Thr Thr Glu Val Ala Ser Ile His Cys Cys Pro Val Ser
305 310 315 320
Asn Phe Ser Ala Tyr Val Ser Pro Glu Ala Ala Ala Gln Ser Ala Thr
325 330 335
Thr Thr Thr Trp Gly Ser Gly Val Thr Ser Val Ala Phe Asp Pro Thr
340 345 350
Arg Gly Gly Ser Val Ile Thr Val Val Ile Val Glu Gly Gln Tyr Met
355 360 365
Ser Pro Tyr Asp Pro Asp Glu Gly Pro Ser Ile Thr Gly Trp Arg Val
370 375 380
Gln Cys Trp Glu Ser Ser Val Gln Pro Val Val Leu His Pro Ile Phe
385 390 395 400
Gly Ser Pro Ala Asn Phe Gly Gly Gln Pro Pro Thr Gln Thr Val Trp
405 410 415
Ser Thr Arg Val Asn Lys Ser Ile Pro Pro Ser Glu Asp Leu Lys Asn
420 425 430
Pro Gln Ser Tyr Val Pro Met Pro Thr Thr Ser Asp Glu Arg Ser Ser
435 440 445
Ser Glu Cys Ser Val Asp Arg Ala Asn Arg Leu Ser Phe Asp Pro Tyr
450 455 460
Asp Leu Pro Asn Asp Val Arg Gln Leu Ala Gln Ile Val Tyr Ser Ala
465 470 475 480
His Gly Gly Glu Val Ala Val Ala Phe Leu Arg Gly Gly Val His Ile
485 490 495
Phe Ser Gly Pro Asn Phe Glu Gln Val Asp Ser Tyr His Val Asn Val
500 505 510
Gly Ser Ala Ile Ala Pro Pro Ala Phe Ser Ser Ser Gly Cys Cys Leu
515 520 525
Ala Ser Val Trp His Asp Thr Leu Lys Asp Arg Thr Ile Leu Lys Ile
530 535 540
Ile Arg Val Leu Pro Pro Ala Ile Leu Asn Ala Gln Thr Lys Val Ser
545 550 555 560
Ser Ala Val Trp Glu Arg Ala Ile Ala Asp Arg Phe Trp Trp Ser Leu
565 570 575
Leu Ala Gly Val Asp Trp Trp Asp Ala Val Gly Cys Thr Gln Ser Ala
580 585 590
Ala Glu Asp Gly Ile Val Ser Leu Asn Ser Val Ile Ala Leu Leu Asp
595 600 605
Ala Asp Phe His Cys Leu Pro Thr Ile Gln Gln Arg Gln Gln His Cys
610 615 620
Pro Asn Leu Asp Arg Ile Lys Cys Arg Leu Leu Glu Gly Thr Asn Ala
625 630 635 640
Gln Asp Val Arg Ala Leu Val Leu Asp Met Gln Ala Arg Leu Leu Leu
645 650 655
Asp Met Leu Gly Lys Gly Ile Glu Ser Ala Leu Ile Asn Pro Ser Thr
660 665 670
Leu Leu Pro Glu Pro Trp Gln Ala Ser Ser Asp Met Leu Ser Ser Ile
675 680 685
Gly Pro Asp Lys Met Thr Val Asp Pro Ala Leu Leu Leu Ser Ile Gln
690 695 700
Gly Tyr Val Asp Ala Val Leu Asp Leu Ala Ser His Phe Ile Thr Arg
705 710 715 720
Leu Arg Arg Tyr Ala Ser Phe Cys Arg Thr Leu Ala Ser His Ala Val
725 730 735
Gly Ala Ser Ser Gly Ser Gly Asn Ser Arg Asn Met Val Thr Ser Pro
740 745 750
Thr Asn Ser Ser Pro Ser Pro Ser Thr Asn Gln Gly Asn Gln Gly Gly
755 760 765
Val Ala Ser Thr Thr Gly Ser Ser Gln Met Gln Glu Trp Val Gln Gly
770 775 780
Ala Ile Ala Lys Ile Ser Asn Asn Thr Asp Gly Ala Ala Asn Ala Ala
785 790 795 800
Pro Asn Pro Ile Ser Gly Arg Ser Ser Phe Met Pro Ile Ser Ile Asn
805 810 815
Thr Gly Thr Phe Pro Gly Thr Pro Ala Val Arg Leu Ile Gly Asp Cys
820 825 830
His Phe Leu His Arg Leu Cys Gln Leu Leu Leu Phe Cys Leu Leu Phe
835 840 845
Arg Arg Arg Gln Ser Pro Arg Ile Pro Ala Asn Ala Gln Lys Ser Ser
850 855 860
Asp Ser Ser Met Gln Lys Gln His Leu Met Asn Ser Lys Thr Glu Asp
865 870 875 880
Asn Thr Leu Ala Val Arg Ser Gly Leu Gly Ala Ala Lys Leu Glu Asp
885 890 895
Gly Thr Thr Ser Arg Gly Gln Met Val Gly Ala Lys Gly Ala Glu Glu
900 905 910
Asn Pro Val Gly Asn Lys Ser Ala Arg Ile Gly Ser Gly Asn Ala Gly
915 920 925
Gln Gly Tyr Thr Ser Asp Glu Val Lys Val Leu Phe Leu Ile Leu Val
930 935 940
Asp Leu Cys Lys Arg Thr Ala Thr Leu Gln His Pro Leu Pro Ser Ser
945 950 955 960
Gln Val Gly Ser Ser Asn Ile Ile Ile Arg Leu His Tyr Ile Asp Gly
965 970 975
Asn Tyr Thr Val Leu Pro Glu Val Val Glu Ala Ser Leu Gly Pro His
980 985 990
Met Gln Asn Met Pro Arg Pro Arg Gly Ala Asp Ala Ala Gly Leu Leu
995 1000 1005
Leu Arg Glu Leu Glu Leu Gln Pro Pro Ala Glu Glu Trp His Arg Arg
1010 1015 1020
Asn Met Phe Gly Gly Pro Trp Ser Glu Pro Asp Asp Leu Gly Pro Leu
1025 1030 1035 1040
Asp Asn Thr Arg Gln Leu Lys Ile Asn Gly Ser Thr Asn Arg His Leu
1045 1050 1055
Ser Asp Met Glu Glu Asp Gly Asp Ser Ser Phe Gly Ile Gln Asn Leu
1060 1065 1070
Trp Pro Arg Lys Arg Arg Leu Ser Glu Arg Asp Ala Ala Phe Gly Leu
1075 1080 1085
Lys Thr Ser Val Gly Leu Gly Ser Phe Leu Gly Val Met Gly Ser Arg
1090 1095 1100
Arg Asp Val Ile Thr Ala Val Trp Lys Thr Gly Leu Glu Gly Glu Trp
1105 1110 1115 1120
Tyr Lys Cys Ile Arg Cys Leu Arg Gln Thr Cys Ala Phe Ala Gln Pro
1125 1130 1135
Gly Ala Leu Ala Pro Asn Thr Ser Asn Glu Leu Glu Ala Trp Trp Ile
1140 1145 1150
Ser Arg Trp Thr His Ala Cys Pro Met Cys Gly Gly Thr Trp Val Lys
1155 1160 1165
Val Val
1170

Claims (2)

1. 一种水稻中介复合体亚基OsMediator16基因在调控稻瘟病抗性中的应用，其特征在于，所述水稻中介复合体亚基OsMediator16基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2. 一种水稻中介复合体亚基OsMediator16基因编码的蛋白质序列在调控稻瘟病抗性中的应用，其特征在于，所述水稻中介复合体亚基OsMediator16基因编码的蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN111349649B (zh) * 2020-03-16 2020-11-17 三峡大学 一种用于双孢蘑菇的基因编辑的方法及应用
CN114456248B (zh) * 2022-03-15 2023-05-26 湖北大学 协同调控水稻对干旱及稻瘟病抗性的脱落酸受体OsPYL2基因及其应用
CN114854765A (zh) * 2022-05-11 2022-08-05 莆田学院 一种水稻抗病基因lbrg1、重组载体、重组工程菌、应用及功能鉴定方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000125885A (ja) * 1998-08-21 2000-05-09 Japan Science & Technology Corp イネいもち病抵抗性遺伝子および関連遺伝子
CN109280082A (zh) * 2018-10-19 2019-01-29 云南省农业科学院农业环境资源研究所 一种稻瘟病抗性基因Pi57及其编码蛋白与应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000125885A (ja) * 1998-08-21 2000-05-09 Japan Science & Technology Corp イネいもち病抵抗性遺伝子および関連遺伝子
CN109280082A (zh) * 2018-10-19 2019-01-29 云南省农业科学院农业环境资源研究所 一种稻瘟病抗性基因Pi57及其编码蛋白与应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Overexpression of OsMed16 Inhibits the Growth of Rice and Causes Spontaneous Cell Death";Jie Jiang 等;《Genes》;20210427;第12卷(第656期);全文 *
"The Mediator Complex Subunits MED14,MED15,and MED16 Are Involved in Defense Signaling Crosstalk in Arabidopsis";Chenggang Wang 等;《Frontiers in Plant Science》;20161222;全文 *
"中介因子复合体在植物中的功能研究进展";罗骏 等;《分子植物育种》;20180810;第16卷(第23期);全文 *

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