CN106901076A

CN106901076A - 一种中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN106901076A
Application number: CN201710233186.9A
Authority: CN
Inventors: 万金娟; 沈美芳; 潘建林; 林海; 赵沐子; 朱凛; 张美琴; 邵俊杰
Original assignee: Freshwater Fisheries Research Institute of Jiangsu Province
Current assignee: Freshwater Fisheries Research Institute of Jiangsu Province
Priority date: 2017-04-11
Filing date: 2017-04-11
Publication date: 2017-06-30

Abstract

本发明公开了一种中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂及其制备方法和应用。取果寡糖、乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌；先将上述各组分分别经超微粉碎机粉碎，然后过120目的筛网；将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内按照配比充分混匀后，再将果寡糖与上述混合物混匀，即制成粉状抗应激免疫增强剂。本发明原料来源稳定，取材广泛，制备简单，性价比高；并从甲壳类动物的免疫机理出发，使用时有助于提高蟹肝胰腺抗氧化能力，清除体内自由基，同时提高机体的免疫力和抗应激能力，促使幼蟹健康生长。

Description

一种中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于水产养殖领域，涉及一种中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂及其制备方法和应用。

背景技术

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)俗称河蟹，属节肢动物门(Arthropoda)，甲壳纲(Cmstacea)，十足目(Decapoda)，弓蟹科(Varunidae)，绒螯蟹属(Eriocheir)，是一种肉质鲜美的特种水产品，具有重要的经济价值，在江苏水产养殖业中更是占了举足轻重的地位——2015年江苏河蟹养殖面积达到263.99千公顷，产量达到了364534吨，占了全国产量的45％。然而，随着现代化养殖业的迅速发展，河蟹在集约化养殖过程中，一是养殖水环境日益恶化；二是病害问题日益凸显，尤其是近年来河蟹“水瘪子”(患病河蟹肝胰腺发白、发灰，糜烂、萎缩、坏死，导致河蟹干瘪、壳内积水无肉)呈现发病面积、发病率增多的趋势，据不完全统计，江苏兴化地区2015年约有80％以上蟹塘发病，患病河蟹达到30％～40％，严重影响了渔民的经济效益，制约了河蟹产业的健康发展；三是河蟹极易受到饲养密度、水质变化和投喂管理等方面因素影响而产生应激，其中运输应激就是养殖到销售环节之间(尤其是高温期间)一种较为常见的氧化应激反应；当应激强度过强或时间过长时，机体会产生大量的自由基，抗氧化水平下降，破坏氧化-抗氧化平衡，从而免疫力下降、机体受损。由上述可见，保护肝胰腺健康，提高河蟹自身免疫力，增强抗应激性能，对于河蟹产业的健康发展至关重要。

鉴于传统的抗菌药物、抗生素等具有引起病原菌耐药性、高残留、用量大等缺点，促使越来越多的科研人员将目光投向抗菌药物替代品的研究。

目前已有一些关于果寡糖、乳酸菌、芽孢杆菌以及酵母菌等作为添加剂在水产饲料中的使用，但是有关这几者之间的配伍使用，还未见报道。同时，由于甲壳动物缺乏特异性免疫，所以对其免疫动能的研究主要集中在非特异性免疫、抗氧化能力方面。此外，众多研究表明，谷丙转氨酶、谷草转氨酶常被用作评价肝脏健康指标；溶菌酶是重要的非特异性免疫因子；皮质醇、血糖可以反应鱼类应激反应的强弱，是应激反应的敏感指标；此外，超氧化物气化酶、过氧化氢酶等是机体抗氧化系统的重要组成成分。因此，通过对中华绒螯蟹幼蟹血淋巴相关生化指标、肝胰腺抗氧化指标及运输应激后成活率情况的研究，研制一种针对中华绒螯蟹幼蟹的安全、高效抗应激免疫增强剂，为新形势下进一步完善其饲料配方提供科学依据，对中华绒螯蟹绿色健康养殖和产业的可持续发展具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂。

本发明的另一目的是提供该中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂的制备方法。

本发明的又一目的是提供该中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂的应用。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强组合物，由以下组分组成：果寡糖55～75重量份，乳酸菌10～25重量份，芽孢杆菌8～20重量份，酵母菌5～15重量份。

所述的组合物优选由以下组分组成：果寡糖65～75重量份，乳酸菌12～20重量份，芽孢杆菌8～15重量份，酵母菌5～10重量份。

本发明所述的抗应激免疫增强组合物在制备中华绒螯蟹幼蟹抗应激和/或提高免疫力的制剂中的应用。

一种中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂，含有本发明所述的抗应激免疫增强剂。

所述的抗应激免疫增强剂优选通过以下方法制备得到：将本发明所述的组合物各组分分别经超微粉碎机粉碎，然后过120目的筛网，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀后，再将果寡糖与上述混合物混匀，即制成所述的抗应激免疫增强剂。

本发明所述的中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂的制备方法，将本发明所述的组合物各组分分别经超微粉碎机粉碎，然后过120目的筛网，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀后，再将果寡糖与上述混合物混匀，即制成所述的抗应激免疫增强剂。

本发明所述的中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂在制备中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强饲料中的应用。

所述的中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强饲料是将所述的抗应激免疫增强组合物按照0.5wt％～1wt％的量添加到常规中华绒螯蟹饲料中所得。

有益效果：

本发明针对中华绒螯蟹幼蟹的特性，从甲壳动物的免疫机理和应激反应机制出发，结合前期在其它甲壳动物试验研究，筛选出果寡糖、乳酸菌、芽孢杆菌以及酵母菌，并将其按照特定配比复配，一是利用果寡糖、乳酸菌、芽孢杆菌保护机体、提高机体抗应激能力的功能；二是利用果寡糖、酵母菌的抗氧化功能，提高机体的抗氧化能力，保护肝胰腺，降低“水瘪子”病发概率；三是利用果寡糖具有与乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌这三种益生菌一样的抑制有害菌繁殖、改善肠道菌群平衡、促生长、增强机体免疫力的功能，各组分相辅相成，克服了单一组分可能存在的不足之处，高效安全。四种组分复配，得到抗应激免疫增强组合物，并在此基础上制备得到中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂。此抗应激免疫增强剂有助于提高蟹肝胰腺抗氧化能力，清除体内自由基，同时提高机体的免疫力和抗应激能力，促使幼蟹健康生长。

本发明各组分来源稳定，取材广泛，制备简单，性价比高。

具体实施方式

实施例1

取果寡糖70重量份、乳酸菌13重量份、芽孢杆菌10重量份、酵母菌7重量份；将上述各组分经超微粉碎机粉碎，过120目的筛网，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀后，再将果寡糖与上述混合物混匀，制成抗应激免疫增强剂。

实施例2

生长试验：中华绒螯蟹由江苏省淡水水产研究所浦口基地提供。试验选择健康、规格和重量基本一致的幼蟹(初均体重：9.91±0.05g)。随机分组，设有对照组A(投喂基础日粮)、对照组B(在基础日粮中添加1.0％果寡糖)、对照组C(在基础日粮中添加0.2％酵母菌+0.2％芽孢杆菌+0.1％酵母菌)和试验组(在基础日粮中添加0.7％实施例1制备的抗应激免疫增强剂)，每组设3个平行试验，每平行组75只试验蟹。共12个水泥池(4m×4m×2m)。蟹驯化7天后投喂各组饲料70天，测定其生长、免疫相关指标。

基础日粮：河蟹饲料(粗蛋白38％，粗脂肪5.2％，粗纤维6.9％，粗灰分17.8％，总磷1.2％，赖氨酸2.1％)。

其中，所使用的酵母菌、芽孢杆菌来源没有特殊限制，乳酸菌为高温乳酸菌。市售可饲料用的酵母菌、芽孢杆菌、高温乳酸菌均适宜使用于本发明，如江苏易实生物科技有限公司生产的酵母菌、芽孢杆菌，思科福(北京)生物科技有限公司生产的高温乳酸菌等。

表1

*增重率％＝(平均终体重-平均初体重)/平均初体重*100

结果表明：与对照组A相比，抗应激免疫增强剂组显著提高了：增重率25.92％、溶菌酶水平38.58％、超氧化物气化酶水平12.67％、过氧化氢酶水平68.41％(P<0.05)；显著降低了饵料系数26.80％、谷丙转氨酶水平30.03％、谷草转氨酶水平14.66％(P<0.05)。与对照组B相比，抗应激免疫增强剂组显著提高了：增重率17.48％(P<0.05)；显著降低了饵料系数18.25％、谷丙转氨酶水平10.78％(P<0.05)。与对照组C相比，抗应激免疫增强剂组显著提高了增重率13.57％、溶菌酶水平38.58、过氧化氢酶水平21.54％(P<0.05)；显著降低了饵料系数13.85％、谷丙转氨酶水平40.00％、谷草转氨酶水平9.37％。因此，本发明抗应激免疫增强剂的添加较之各对照组能显著促进中华绒螯蟹幼蟹的生长，提高蟹机体的免疫力和抗氧化能力；同时还起到保护肝脏的作用。

运输应激试验：生长试验70天后，禁食24小时，再挑选规格一致的蟹，每组6个重复，每个重复15只装在一个网兜里，试验采用无水运输，运输时间为3h(镇江——南京)；达到南京后，将蟹放置养殖箱(容积为160L，水深20cm)中观察其生理活动，并统计各组蟹0d、1d、2d、3d的累积死亡率.

表2

结果表明：中华绒螯蟹幼蟹在运输应激后，蟹的活力开始下降，对外界反应能力减弱。由表3可见，与对照组A相比，抗应激免疫增强剂组死亡率在1d、2d、3d分别显著降低了60.07％、41.94％、45.65％(P<0.05)；与对照组B相比，抗应激免疫增强剂组死亡率在2d、3d分别显著降低了18.18％、19.35％(P<0.05)；与对照组C相比，抗应激免疫增强剂组死亡率在2d、3d分别显著降低了35.71％、30.55％(P<0.05)。因此，该抗应激免疫增强剂能提高中华绒螯蟹幼蟹抗应激的能力，减少由应激造成的死亡。

实施例3

取果寡糖65重量份、乳酸菌20重量份、芽孢杆菌10重量份、酵母菌5重量份；将上述各组分经超微粉碎机粉碎，过120目的筛网，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀后，再将果寡糖与上述混合物混匀，制成抗应激免疫增强剂。

实施例4

取果寡糖65重量份、乳酸菌12重量份、芽孢杆菌15重量份、酵母菌8重量份；将上述各组分经超微粉碎机粉碎，过120目的筛网，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀后，再将果寡糖与上述混合物混匀，制成抗应激免疫增强剂。

实施例5

取果寡糖66重量份、乳酸菌17重量份、芽孢杆菌11重量份、酵母菌6重量份；将上述各组分经超微粉碎机粉碎，过120目的筛网，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀后，再将果寡糖与上述混合物混匀，制成抗应激免疫增强剂。

实施例6

取果寡糖68重量份、乳酸菌13重量份、芽孢杆菌12重量份、酵母菌7重量份；将上述各组分经超微粉碎机粉碎，过120目的筛网，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀后，再将果寡糖与上述混合物混匀，制成抗应激免疫增强剂。

实施例7

取果寡糖70重量份、乳酸菌12重量份、芽孢杆菌8重量份、酵母菌10重量份；将上述各组分经超微粉碎机粉碎，过120目的筛网，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀后，再将果寡糖与上述混合物混匀，制成抗应激免疫增强剂。

实施例8

取果寡糖73重量份、乳酸菌12重量份、芽孢杆菌7重量份、酵母菌8重量份；将上述各组分经超微粉碎机粉碎，过120目的筛网，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀后，再将果寡糖与上述混合物混匀，制成抗应激免疫增强剂。

实施例9

取果寡糖75重量份、乳酸菌12重量份、芽孢杆菌8重量份、酵母菌5重量份；将上述各组分经超微粉碎机粉碎，过120目的筛网，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀后，再将果寡糖与上述混合物混匀，制成抗应激免疫增强剂。

实施例10

按照实施例2中的生长试验和应激试验方法，分别测定投喂含实施例3～9中制备的抗应激免疫增强剂的蟹的生长、免疫等指标以及应激后2d成活率。对照组投喂基础日粮，各试验组分别在基础日粮中添加0.7％实施例3～9制备的抗应激免疫增强剂。结果见表4和表5。

表3

*平均增重率％＝(平均终体重-平均初体重)/平均初体重*100

表4

表3和4中的实验组A～G分别对应实施例3～9制备的抗应激免疫增强剂。

Claims

1.一种用于中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强的组合物，其特征在于由以下组分组成：果寡糖55～75重量份，乳酸菌10～25重量份，芽孢杆菌8～20重量份，酵母菌5～15重量份。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于由以下组分组成：果寡糖65～75重量份，乳酸菌12～20重量份，芽孢杆菌8～15重量份，酵母菌5～10重量份。

3.权利要求1或2所述的组合物在制备中华绒螯蟹幼蟹抗应激和/或提高免疫力的制剂中的应用。

4.一种中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂，其特征在于含有权利要求1或2所述的组合物。

5.根据权利要求4所述的中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂，其特征在于所述的免疫增强剂通过以下方法制备得到：将权利要求1或2所述的组合物各组分经超微粉碎机粉碎，过120目的筛网后，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀，再将果寡糖与上述混合物混匀，即制成所述的抗应激免疫增强剂。

6.权利要求4所述的中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂的制备方法，其特征在于将权利要求1或2所述的组合物各组分经超微粉碎机粉碎，过120目的筛网后，先将乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌于混合机内充分混匀，再将果寡糖与上述混合物混匀，即制成所述的抗应激免疫增强剂。

7.权利要求4所述的中华绒螯蟹幼蟹抗应激免疫增强剂在制备中华绒螯蟹幼蟹抗应激饲料中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述的中华绒螯蟹幼蟹抗应激饲料是将权利要求4所述的抗应激免疫增强剂按照0.5wt％～1wt％的量添加到常规中华绒螯蟹饲料中所得。