CN104273345B - 一种罗氏沼虾用复合免疫增强剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种罗氏沼虾用复合免疫增强剂及其应用，罗氏沼虾用复合免疫增强剂按重量百分比计，由以下组分混合制成：银耳多糖20‑30%，黄芩苷5‑12%，茶树菇多糖30‑40%，左旋咪唑5‑13%，维生素C 15‑30%。本发明原材料来源稳定、广泛，成本低，无毒副作用，且在自然条件下可降解，不会在虾体内残留，能够增强罗氏沼虾的非特异性免疫机能，还能提高罗氏沼虾的生长能力。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖技术领域，特别涉及一种罗氏沼虾用复合免疫增强剂及其应用。
背景技术
罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)又名马来西亚大虾、淡水长臂大虾，在分类上属于节肢动物门(Arthropada)，甲壳纲(Crustacea)，十足目(Decapoda)，长臂虾科(Palaemonidae)，沼虾属(Macrobrachium)，是一种大型淡水经济虾类。原产于印度洋、太平洋区域的热带和亚热带地区。1976年罗氏沼虾从日本引入中国，经过三十多年的养殖，特别是在20世纪90年代以来，随着人工育苗技术的改进和养殖技术的发展，养殖面积与产量迅速提升，到2009年，我国罗氏沼虾年育苗量达250亿尾以上，养殖面积约3万公顷，养殖产量超过13.5万吨，已成为世界上罗氏沼虾养殖产量最多的国家，是我国淡水甲壳类养殖中仅次于河蟹、淡水青虾的主要养殖品种。但罗氏沼虾作为国外引进品种，经三十多年的人工养殖后，种质衰退现象严重，主要表现为生长缓慢、性成熟时间提早、抗逆性能下降。其中，抗病力下降是一个突出的表现，再加上养殖环境恶化等多种因素，导致罗氏沼虾的育苗和养殖过程中疾病频发，严重影响罗氏沼虾养殖效益与产业发展。
免疫增强剂是指单独使用或者与抗原联用均能增强机体免疫应答的一类物质，主要增强水产动物的非特异性免疫功能，现已证明，具有免疫增强作用的物质不下几十种，常用的有植物、真菌、细菌等来源的提取物。而目前在虾蟹病害防治过程中，主要是大量使用抗菌素及一些化学药物，虽对有关疾病有一定疗效，一定程度上缓解了部分疾病的发生，但是抗生素频繁和大量使用，存在着耐药性、毒副作用大、虾蟹自身免疫力下降以及药物残留对人类健康造成诸多问题。由此，疫苗和免疫增强剂成为水产动物病害防治的首选，这其中疫苗对多种疾病尤其病毒性疾病有显著的预防作用，但特异性能力强，生产上操作可行性差，因而，对提高甲壳类动物非特异性免疫能力有着独特功效的免疫增强剂，已成为水产养殖中的研究热点，同时也符合水产行业健康生态养殖这一新动向。
发明内容
本发明的目的在于解决现在罗氏沼虾养殖过程中大量使用抗菌素存在的耐药性、毒副作用大、虾自身免疫力下降以及药物残留对人类健康造成威胁等问题，提供一种罗氏沼虾用复合免疫增强剂，原材料来源稳定、广泛，成本低，无毒副作用，且在自然条件下可降解，不会在虾体内残留，能够增强罗氏沼虾的非特异性免疫机能，还能提高罗氏沼虾的生长能力。
本发明还提供了该罗氏沼虾用复合免疫增强剂作为饲料添加剂的应用，添加量小且使用方便。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种罗氏沼虾用复合免疫增强剂，按重量百分比计，由以下组分混合制成：银耳多糖20-30％，黄芩苷5-12％，茶树菇多糖30-40％，左旋咪唑5-13％，维生素C 15-30％。
本发明针对罗氏沼虾的生理特性，对多种可能的免疫增强组分初筛后，对筛选得到的免疫增强组分进行优化组合(并不是完全对免疫增强性能最佳的组分进行组合，而是针对各组分的互补特性及协同功效及免疫增强效果综合考虑)：银耳多糖可以显著提高动物内皮细胞的吞噬功能、提高血清总补体的水平等，黄芩苷具有抗炎、抗变态、抗菌等作用，茶树菇多糖具有抑菌、清除活性氧自由基等作用，左旋咪唑具有抗菌、抗病毒、抗原虫等作用，维生素C具有抗氧化、抑制病毒增生等作用。本发明针对罗氏沼虾的生理特性对各组分合理配比，协同发挥作用，有利于从整体性、综合性上提高罗氏沼虾的非特性免疫，增强对有害菌、病毒的抵抗力。
作为优选，所述罗氏沼虾用复合免疫增强剂按重量百分比计，由以下组分混合制成：银耳多糖24-26％，黄芩苷9-11％，茶树菇多糖34-36％，左旋咪唑9-10％，维生素C 19-21％。这样的配比效果最佳。
一种罗氏沼虾用复合免疫增强剂作为饲料添加剂的应用，按占罗氏沼虾配合饲料重量计，所述罗氏沼虾用复合免疫增强剂在罗氏沼虾配合饲料中的添加量为0.05％-0.1％。本发明的以罗氏沼虾用复合免疫增强剂以0.05％-0.1％添加到饲料中，该条件下罗氏沼虾免疫效果佳。
本发明的有益效果是：
(1)克服了虾类免疫增强剂使用过程中经常存在的免疫负反馈调控问题，可以在罗氏沼虾整个养殖周期内使用。
(2)原料来源稳定、广泛，降低了使用成本。
(3)免疫增强剂各组分常用于人体免疫调节，无无毒副作用，且在自然条件下可降解，不会在虾体内残留。
(4)使用方便，可添加到饲料中投喂。
(5)不仅能够增强罗氏沼虾的非特异性免疫机能，还在一定程度上提高罗氏沼虾的生长能力。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
罗氏沼虾虾苗购自浙江省淡水水产研究所下属的长兴罗氏沼虾SPF良种基地；免疫增强剂各组分(银耳多糖、黄芩苷、茶树菇多糖、左旋咪唑、维生素C)均为市售产品，纯度均在95％以上。
BCA法蛋白定量试剂盒、过氧化物酶(POD)检测试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒、碱性磷酸酶(AKP)检测试剂盒、酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒和溶菌酶(LZM)检测试剂盒等均购自南京建成生物工程研究所。
实施例1：
1、罗氏沼虾用复合免疫增强剂配制：将银耳多糖25g，黄芩苷10g，茶树菇多糖35g，左旋咪唑10g，维生素C 20g；混合均匀后得复合免疫增强剂，将0.05％(占罗氏沼虾配合饲料重量计)的复合免疫增强剂加入罗氏沼虾配合饲料(市售)中混合均匀，投喂罗氏沼虾。
2、罗氏沼虾非特异性免疫指标的测定：连续投喂罗氏沼虾(每天饲料投喂量为虾体重的3％-7％，以吃完为准)40天后，提取罗氏沼虾血清，对虾血清的总蛋白、LZM、ACP、AKP、SOD、POD和PO等免疫指标进行测定，其中总蛋白、LZM、ACP、AKP、SOD、POD检测方法参照试剂盒说明书操作，PO活力的测定参照ASHIDA的方法进行(Ashida M.Purif ication andcharacterization of pre-phenoloxidase from hemolymph of the silkworm Bombyxmorl[J].Archives of Biochemiatry and Biophyaics，1971，144(2)：749-762。)。
3、对罗氏沼虾的存活率和增重情况进行统计。
结果表明：实验组的罗氏沼虾免疫指标LZM、ACP、SOD、PO明显高于对照组，如表1所示；实验组的罗氏沼虾存活率为91％，而对照组的成活率是72％；实验组的罗氏沼虾平均增重量是对照组的1.3倍。
表1：
实施例2：
1、罗氏沼虾用复合免疫增强剂配制：将银耳多糖25g，黄芩苷10g，茶树菇多糖35g，左旋咪唑10g，维生素C 20g；混合均匀后得复合免疫增强剂，将0.1％(占罗氏沼虾配合饲料重量计)的复合免疫增强剂加入罗氏沼虾配合饲料(市售)中混合均匀，投喂罗氏沼虾。
2、罗氏沼虾非特异性免疫指标的测定：连续投喂罗氏沼虾40天后，提取罗氏沼虾血清，对LZM、ACP、AKP、SOD、POD和PO等免疫指标进行测定，检测方法与实施例1相同。
3、对罗氏沼虾的存活率和增重情况进行统计。
结果表明：实验组的罗氏沼虾免疫指标LZM、ACP、SOD、PO明显高于对照组，如表2所示；实验组的罗氏沼虾存活率为97％，而对照组的成活率是76％；实验组的罗氏沼虾平均增重量是对照组的1.7倍。
表2
实施例3：
1、罗氏沼虾用复合免疫增强剂配制：将银耳多糖20g，黄芩苷5g，茶树菇多糖40g，左旋咪唑5g，维生素C 30g；混合均匀后得复合免疫增强剂，将0.05％(占罗氏沼虾配合饲料重量计)的复合免疫增强剂加入罗氏沼虾配合饲料(市售)中混合均匀，投喂罗氏沼虾。
2、罗氏沼虾非特异性免疫指标的测定：连续投喂罗氏沼虾40天后，提取罗氏沼虾血清，对LZM、ALP、AKP、SOD、POD和PO等免疫指标进行测定，检测方法与实施例1相同。
3、对罗氏沼虾的存活率和增重情况进行统计。
结果表明，实验组的罗氏沼虾免疫指标LZM、ACP、SOD、PO明显高于对照组，如表3所示；实验组的罗氏沼虾存活率为88.5％，而对照组的成活率是72％；实验组的罗氏沼虾平均增重量是对照组的1.1倍。
表3：
实施例4：
1、罗氏沼虾用复合免疫增强剂配制：将银耳多糖30g，黄芩苷12g，茶树菇多糖30g，左旋咪唑13g，维生素C 15g；混合均匀后得复合免疫增强剂，将0.1％(占罗氏沼虾配合饲料重量计)的复合免疫增强剂加入罗氏沼虾配合饲料(市售)中混合均匀，投喂罗氏沼虾。
2、罗氏沼虾非特异性免疫指标的测定：连续投喂罗氏沼虾40天后，提取罗氏沼虾血清，对LZM、ALP、AKP、SOD、POD和PO等免疫指标进行测定，检测方法与实施例1相同。
3、对罗氏沼虾的存活率和增重情况进行统计。
结果表明，实验组的罗氏沼虾免疫指标LZM、ACP、SOD、PO明显高于对照组，如表4所示；实验组的罗氏沼虾存活率为89％，而对照组的成活率是73％；实验组的罗氏沼虾平均增重量是对照组的1.15倍。
表4：
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
Claims (1)
1.一种罗氏沼虾用复合免疫增强剂，其特征在于：所述罗氏沼虾用复合免疫增强剂按重量百分比计，由以下组分混合制成：银耳多糖25%，黄芩苷10%，茶树菇多糖35%，左旋咪唑10%，维生素C 20%；各组分纯度均在95%以上；所述复合免疫增强剂占饲料质量的0.1%。
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