CN106900692A - 一种血液dna的保存剂组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种血液DNA的保存剂组合物，按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：20～50份防腐剂，5～15份抗凝剂，0.5～5份核酸酶抑制剂，1～5份代谢抑制剂，40～70水；其中，所述核酸酶抑制剂包括硅藻土、膨润土、乙醇、甲酰胺、氧钒核糖核苷复合物、二硫赤藓糖醇、焦碳酸二乙酯、蛋白酶K、肝素、β‑巯基乙醇、羟胺氧铜离子、硫酸铵、二硫苏糖醇、半胱氨酸、4‑甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物中一种或多种。
Description
技术领域
本发明涉及DNA保存领域，具体地，本发明涉及一种血液DNA的保存剂组合物。
背景技术
血浆保存管是一种直接抽取全血的，常温下可稳定保存血液DNA(cfDNA)和循环肿瘤DNA(ctDNA)，稳定储存和运输的采血管。虽然健康人体的血浆中只有少量无细胞DNA，但血液循环中的无细胞DNA水平的增减与许多临床疾病有关。由于安全性、准确性而被接受和认可的产妇产前无创筛查即是通过对产妇血液中的胎儿血液DNA的检测分析，对胎儿遗传疾病做出诊断。而对于人体血液中的循环肿瘤DNA的检测分析，为肿瘤早筛创造了条件。同时使针对肿瘤的精准医疗成为可能。
在检测过程中血液DNA的量的多少是一个很重要的指标，若白细胞或者核红细胞破裂，基因组中DNA将降解进入到血浆中污染游离的DNA，严重影响检测结果。
另外，检测血液DNA需要QPCR等分子生物学技术，并非每个医疗单位都具有检测的能力，故不具备检测能力的医疗单位将采集到的样本邮寄到具有检测能力的单位进行检测，所以，样本的保存和运输需要特殊的条件，如低温。
针对上述问题，本发明提供一种常温采集血样、常温保存血样时间长的血液DNA保存剂。
发明内容
本发明提供一种血液DNA的保存剂组合物，按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述核酸酶抑制剂包括硅藻土、膨润土、乙醇、甲酰胺、氧钒核糖核苷复合物、二硫赤藓糖醇、焦碳酸二乙酯、蛋白酶K、肝素、β-巯基乙醇、羟胺氧铜离子、硫酸铵、二硫苏糖醇、半胱氨酸、4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物中一种或多种。
在一种实施方式中，所述核酸酶抑制剂包括氧钒核糖核苷复合物、半胱氨酸、4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物中一种或多种。
在一种实施方式中，所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为(0.1～0.5)：1。
在一种实施方式中，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1。
在一种实施方式中，所述防腐剂包括羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸乙酯钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、对羟基苯甲酸异丁酯钠、对羟基苯甲酸异丙酯钠、对羟基苯甲酸丁酯钠、双咪唑烷基脲、咪唑烷基脲、重氮烷基脲、碘代丙炔基丁基氨基甲酸酯、山梨酸、山梨酸钾、鲸蜡基三甲基氯化铵、鲸蜡基氯化吡啶鎓、氯化苄乙氧铵、二异丁基乙氧基乙基二甲基苄基氯化铵、二异丁基苯氧基乙氧基乙基二甲基苄基氯化铵、N-烷基-N，N-二甲基苄基的氯化铵、溴化铵、糖精酸铵、三甲基氯化铵、氯代羟基乙酸铝钠、柠檬酸三乙酯、三鲸蜡基甲基氯化铵、2，4，4’-三氯-2’-羟基二苯醚、3，4，4’-三氯碳酰苯胺、L-赖氨酸十六烷基酰胺、DMDM乙内酰脲、羟甲基氨基乙酸钠、苯甲酸、丙酸、水杨酸、2，4-己二烯酸、2-羟基联苯、3-乙酰基-甲基-2，4-(3H)喃二酮、甲酸、十一烯酸、5-氨基-1，3-双(2-乙基己基)-5-甲基六氢嘧啶、2-溴-2-硝基-1，3-丙二醇、2，4-二氯苄醇、N-(4-氯苯基)-N’-(3，4-二氯苯基)脲、2，4，4’-三氯-2’-羟基-二苯醚、聚(六亚甲基缩二胍)-盐酸盐、1，2-二溴-2，4-二氰基丁烷、4，4-二甲基-1，3-恶唑烷、苯甲酸钠、甲基异噻唑啉酮、乙醇、甲醇中一种或多种。
在一种实施方式中，所述抗凝剂包括EDTA钾盐、EDTA钠盐、柠檬酸钠、肝素盐中一种或多种；所述肝素盐包括肝素钠、肝素锂、肝素钙、肝素胺中一种或多种。
在一种实施方式中，所述代谢抑制剂包括金黄三羧酸、甘油醛、磷酸二羟丙酮、甘油醛-3-磷酸、3-磷酸-2-磷酸甘油酸、磷酸、丙酮酸、葡萄糖酸、氟化钠、氟化钾中一种或多种。
在一种实施方式中，所述血液DNA的保存剂组合物还包括细胞膜保护剂。
在一种实施方式中，所述细胞膜保护剂包括丝氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺中的一种或几种。
在一种实施方式中，所述血液DNA的保存剂组合物保存在真空采血管中。
参考以下详细说明更易于理解本申请的上述以及其他特征、方面和优点。
具体实施方式
参选以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
连接词“由…组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由…组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。
说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本发明并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本发明不限于该精确数值。在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。
此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
“聚合物”意指通过聚合相同或不同类型的单体所制备的聚合化合物。通用术语“聚合物”包含术语“均聚物”、“共聚物”、“三元共聚物”与“共聚体”。
“共聚体”意指通过聚合至少两种不同单体制备的聚合物。通用术语“共聚体”包括术语“共聚物”(其一般用以指由两种不同单体制备的聚合物)与术语“三元共聚物”(其一般用以指由三种不同单体制备的聚合物)。其亦包含通过聚合更多种单体而制造的聚合物。“共混物”意指两种或两种以上聚合物通过物理的或化学的方法共同混合而形成的聚合物。
本发明提供一种血液DNA的保存剂组合物，按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述核酸酶抑制剂包括硅藻土、膨润土、乙醇、甲酰胺、氧钒核糖核苷复合物、二硫赤藓糖醇、焦碳酸二乙酯、蛋白酶K、肝素、β-巯基乙醇、羟胺氧铜离子、硫酸铵、二硫苏糖醇、半胱氨酸、4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物中一种或多种。
优选地，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
在一种实施方式中，所述核酸酶抑制剂包括氧钒核糖核苷复合物、半胱氨酸、4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物中一种或多种。
本发明中，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
核酸酶抑制剂
核酸酶抑制剂指特异性作用于酶的某些基团，降低酶的活性甚至使酶完全丧失活性的物质，作用于或影响酶的活性中心或必需基团导致酶活性下降或丧失而降低酶促反应速率的物质，可分为可逆抑制剂和不可逆抑制剂。对酶有一定的选择性，只能对某一类或几类酶起抑制作用，抑制剂进入酶活性部位并且改变金属离子的配位层。
本发明中，所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物为4-甲酰苯甲酸与羟甲基甘氨酸和1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷进行酯化反应，然后与4-氨基-3-氟苯酚进行反应得到席夫碱化合物，席夫碱化合物与硫酸钒进行反应得到钒配合物，最后在偶联剂的作用下接枝十二烷基磺酸钠，得到4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应8～12h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：(0.9～1.8)：(0.9～2)：(0.01～0.03)：(6～10)；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：(0.1～0.3)；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6～8h，冷却至5～10℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：(0.5～1)：(0.001～0.002)；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至90～100℃反应3～5h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：(7～10)：(0.03～0.8)；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45～50℃反应4～6h，100～110℃干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：(0.5～1.2)：(0.001～0.006)。
在一种实施方式中，所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为(0.1～0.5)：1。
在一种实施方式中，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1。
本发明中，所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物不仅具有核酸酶抑制作用，还具有防腐的性能，其对微生物体内的酶系统活性有干扰作用，造成微生物体内代谢紊乱而达到抑菌作用。
防腐剂
防腐剂有酸性防腐剂(山梨酸钾)、酯类防腐剂、无机防腐剂、来自动物和植物中的天然防腐剂等。天然防腐剂的最大特点是安全、无毒，由于具有较好的抗氧化和抗菌活性，大多数植物可作为植物性天然防腐剂的原料。不同的植物性防腐剂的抑菌或杀菌机理不同。部分植物性天然防腐剂能破坏肽聚糖、β-1,4糖苷键等，损伤细胞壁和细胞膜系统，阻碍细胞壁的合成，使胞内物质外泄，从而使微生物自溶或抑制微生物的生命活动；部分对微生物体内的酶系统活性有干扰作用，造成微生物体内代谢紊乱而达到抑菌作用；另一部分可通过改变菌体遗传物质结构来达到抑菌效果；另外还有一些能使微生物的蛋白质凝固或变性，从而干扰其生长和繁殖。
在一种实施方式中，所述防腐剂包括羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸乙酯钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、对羟基苯甲酸异丁酯钠、对羟基苯甲酸异丙酯钠、对羟基苯甲酸丁酯钠、双咪唑烷基脲、咪唑烷基脲、重氮烷基脲、碘代丙炔基丁基氨基甲酸酯、山梨酸、山梨酸钾、鲸蜡基三甲基氯化铵、鲸蜡基氯化吡啶鎓、氯化苄乙氧铵、二异丁基乙氧基乙基二甲基苄基氯化铵、二异丁基苯氧基乙氧基乙基二甲基苄基氯化铵、N-烷基-N，N-二甲基苄基的氯化铵、溴化铵、糖精酸铵、三甲基氯化铵、氯代羟基乙酸铝钠、柠檬酸三乙酯、三鲸蜡基甲基氯化铵、2，4，4’-三氯-2’-羟基二苯醚、3，4，4’-三氯碳酰苯胺、L-赖氨酸十六烷基酰胺、DMDM乙内酰脲、羟甲基氨基乙酸钠、苯甲酸、丙酸、水杨酸、2，4-己二烯酸、2-羟基联苯、3-乙酰基-甲基-2，4-(3H)喃二酮、甲酸、十一烯酸、5-氨基-1，3-双(2-乙基己基)-5-甲基六氢嘧啶、2-溴-2-硝基-1，3-丙二醇、2，4-二氯苄醇、N-(4-氯苯基)-N’-(3，4-二氯苯基)脲、2，4，4’-三氯-2’-羟基-二苯醚、聚(六亚甲基缩二胍)-盐酸盐、1，2-二溴-2，4-二氰基丁烷、4，4-二甲基-1，3-恶唑烷、苯甲酸钠、甲基异噻唑啉酮、乙醇、甲醇中一种或多种；
优选地，所述防腐剂包括2-溴-2-硝基-1，3-丙二醇、2，4-二氯苄醇、N-(4-氯苯基)-N’-(3，4-二氯苯基)脲、DMDM乙内酰脲、聚(六亚甲基缩二胍)-盐酸盐、双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲、乙醇、甲醇中一种或多种；更优选地，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲。
在一种实施方式中，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：(1～3)：(1～5)；优选地，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：2.1：4.1。
抗凝剂
应用物理或化学方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。能够阻止血液凝固的化学试剂或物质，称为抗凝剂或抗凝物质。
在一种实施方式中，所述抗凝剂包括EDTA钾盐、EDTA钠盐、柠檬酸钠、肝素盐中一种或多种；所述肝素盐包括肝素钠、肝素锂、肝素钙、肝素胺中一种或多种；优选地，所述抗凝剂包括EDTA钾盐、EDTA钠盐、柠檬酸钠中一种或多种；更优选地，所述抗凝剂为EDTA钾盐、EDTA钠盐。
本发明中，所述EDTA钾盐为乙二胺四乙酸三钾；所述EDTA钠盐为乙二胺四乙酸二钠。
枸橼酸钠(柠檬酸钠)与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固；肝素与抗凝酶Ⅱ一起，在低浓度能抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之间的作用，并能加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成；还有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X的作用。肝素的盐类有钠、锂、铵盐；EDTA通过与水相中的钙离子形成稳定的螯合物而阻止血液凝固。EDTA的盐类有钾、钠、锂盐、均溶于水，钾盐较钠盐的溶解度大，全血胞计数最好使用EDTA的钾盐。
在一种实施方式中，所述EDTA钾盐与所述EDTA钠盐的重量比为(1.5～4)：1；优选地，所述EDTA钾盐与所述EDTA钠盐的重量比为(2～2.5)：1；更优选地，所述EDTA钾盐与所述EDTA钠盐的重量比为2.2：1。
本发明中通过EDTA钾盐和EDTA钠盐进行协调作用，提高抗凝效果。
在一种实施方式中，所述代谢抑制剂包括金黄三羧酸、甘油醛、磷酸二羟丙酮、甘油醛-3-磷酸、3-磷酸-2-磷酸甘油酸、磷酸、丙酮酸、葡萄糖酸、氟化钠、氟化钾中一种或多种；优选地，所述代谢抑制剂包括金黄三羧酸、丙酮酸、葡萄糖酸、氟化钠、氟化钾中一种或多种。
细胞膜保护剂
细胞膜保护剂是指对细胞膜有稳定作用，能提高细胞对缺血、缺氧的耐受性，即对细胞有明显保护作用的药剂。
在一种实施方式中，所述血液DNA的保存剂组合物还包括细胞膜保护剂。
在一种实施方式中，按重量份计算，所述细胞膜保护剂为1～5份。
在一种实施方式中，所述细胞膜保护剂包括丝氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺中的一种或几种；优选地，所述细胞膜保护剂包括丝氨酸、甘氨酸、酪氨酸、天冬氨酸中的一种或几种。
在一种实施方式中，所述血液DNA的保存剂组合物保存在真空采血管中。
本发明中，所述血液DNA的保存剂组合物的制备方法如下：
按重量份向反应器中加入抗凝剂、水，搅拌均匀后依次加入防腐剂、核酸酶抑菌剂、代谢抑制剂、细胞膜保护剂，继续搅拌，搅拌均匀后将血液DNA的保存剂组合物装入试剂瓶中密封高压蒸汽灭菌。
制作成真空采血管应在十万级净化车间环境中生产，将配置的血液DNA的保存剂组合物按照一般采血管工艺抽真空压塞。
本发明中，通过提供了一种利用酯化反应、缩合反应得到的4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物具有优异的降低酶的活性，另外接枝十二烷基磺酸钠能够有效提高4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物在保存剂中的溶解性及分散性，通过与氧钒核糖核苷复合物协同作用，进一步提高血液DNA在真空采血管中的保存时间，另外通过与防腐剂、抗凝剂、细胞保护剂等协同作用，可以使采集的游离的DNA样本在常温下保持初始状态20天检测结果不受影响。
本发明中，所述血液DNA保存剂降低了血液DNA的样本的储存条件，降低了保存成本及劳动量。
本发明中，血液样本与血液DNA的保存剂组合物的初接触需要足够长的时间，需要事先进行混合均匀，以抑制细胞裂解，降低核酸酶的活性。具体操作如下：
将血液样本与血液DNA的保存剂组合物上下颠倒十次及十次以上，均匀混合血液样本与血液DNA的保存剂组合物。
本发明中血液样本与血液DNA的保存剂组合物混合均匀后可冷冻保存或者常温(22℃)保存。
下面通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售的，购于国药化学试剂。
实施例1
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：2.1：4.1；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45℃反应5h，100℃减压干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：0.8：0.002，所述偶联剂为硅烷偶联剂。
实施例2
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45℃反应5h，100℃减压干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：0.8：0.002，所述偶联剂为硅烷偶联剂。
实施例3
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为重氮烷基脲；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45℃反应5h，100℃减压干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：0.8：0.002，所述偶联剂为硅烷偶联剂。
实施例4
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为咪唑烷基脲；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45℃反应5h，100℃减压干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：0.8：0.002，所述偶联剂为硅烷偶联剂。
实施例5
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：1：5；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45℃反应5h，100℃减压干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：0.8：0.002，所述偶联剂为硅烷偶联剂。
实施例6
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：2.1：4.1；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.5：1；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45℃反应5h，100℃减压干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：0.8：0.002，所述偶联剂为硅烷偶联剂。
实施例7
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：2.1：4.1；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.1：1；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45℃反应5h，100℃减压干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：0.8：0.002，所述偶联剂为硅烷偶联剂。
实施例8
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：2.1：4.1；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45℃反应5h，100℃减压干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：0.8：0.002，所述偶联剂为硅烷偶联剂。
实施例9
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：2.1：4.1；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.5：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45℃反应5h，100℃减压干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：0.8：0.002，所述偶联剂为硅烷偶联剂。
实施例10
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：2.1：4.1；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45℃反应5h，100℃减压干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：0.8：0.002，所述偶联剂为硅烷偶联剂。
对比例1
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：2.1：4.1；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
对比例2
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：2.1：4.1；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45；
(4)向反应器中加入钒配合物、十二烷基磺酸钠溶液、偶联剂，45℃反应5h，100℃减压干燥，得到所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述钒配合物与所述十二烷基磺酸钠溶液、所述偶联剂的重量比为1：0.8：0.002，所述偶联剂为硅烷偶联剂。
对比例3
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：2.1：4.1；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水；区别在于所述核酸酶抑制剂为4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物未接枝十二烷基磺酸钠。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45。
对比例4
按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述防腐剂为双咪唑烷基脲、重氮烷基脲、咪唑烷基脲，所述双咪唑烷基脲与所述重氮烷基脲、所述咪唑烷基脲的重量比为1：2.1：4.1；所述抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸三钾与所述乙二胺四乙酸二钠的重量比为2.2：1；所述核酸酶抑制剂为4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物；所述代谢抑制剂为葡萄糖酸；所述细胞膜保护剂为甘氨酸，所述水为经过灭菌处理的超纯水；区别在于所述核酸酶抑制剂为4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物未接枝十二烷基磺酸钠。
所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的制备步骤如下：
(1)向反应器中加入4-甲酰苯甲酸、羟甲基甘氨酸钠、1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶，减压抽真空，通入氮气，加入二氯甲烷，室温下反应10h，过滤，减压浓缩滤液；所述4-甲酰苯甲酸与所述羟甲基甘氨酸钠、所述二环己基碳二亚胺、所述4-二甲氨基吡啶、所述二氯甲烷的重量比为1：1.3：1.1：0.017：8；所述羟甲基甘氨酸钠与所述1，3-二(3-羟基丙基)-1，1，3，3-四甲基二硅氧烷的重量比为1：0.25；
(2)向反应器中加入无水乙醇、缓慢滴加溶于无水乙醇的4-氨基-3-氟苯酚，滴加完毕后，加入冰醋酸，氮气保护下室温反应6h，冷却至5℃，过滤，干燥，得到席夫碱化合物；所述4-氨基-3-氟苯酚与所述4-甲酰苯甲酸、所述无水乙醇、所述冰醋酸的重量比为1：0.7：0.001；
(3)向反应器中加入席夫碱化合物、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，分批加入硫酸钒，升温至95℃反应4h，降温至室温，过滤，减压干燥，得到钒配合物；所述席夫碱化合物与所述N,N-二甲基甲酰胺、所述硫酸钒的重量比为1：8：0.45。
性能测试
利用看家基因β-actin的CT值来检测血浆(血液样品)中血液DNA量的变化。分别做了室温静置0～20天，常温运输7天的对比实验。室温静置0、7、14、20天样品，常温运输前和运输回来的样品，取同样体积的血浆(500μl)进行血液DNA的提取，溶解在45ul超纯水中，取4ulDNA模板进行QPCR测试。
室温保存试验：3个志愿者血液样品，分别取5mL置于真空采血管(含有200μL保存剂)中，上下颠倒10次混匀，室温放置。对0天、7天、14天和20天真空采血管中的血液样品进行处理。
运输试验：3个志愿者血液样品，分别取5mL置于真空采血管中，上下颠倒10次混匀，在运输7天后对样品进行处理。以0天的真空采血管样品作对照。
表1性能测试结果
从上述数据可以看出，与所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物、4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物中一种、未接枝十二烷基磺酸钠的4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物相比，本发明提供的血液DNA的保存剂组合物与血液样本混合均匀后可冷冻保存或者常温(22℃)，通过与防腐剂、抗凝剂、细胞保护剂等协同作用，可以使采集的游离的DNA样本在常温下保持初始状态20天检测结果不受影响；接枝十二烷基磺酸钠能够有效提高4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物在保存剂中的溶解性及分散性，通过与氧钒核糖核苷复合物协同作用，进一步提高血液DNA在真空采血管中的保存时间。
上述的实施例仅是说明性的，用于解释本发明的特征的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制，而且在科技上的进步将形成由于语言表达的不准确的原因而未被目前考虑的可能的等同物或子替换，且这些变化也应在可能的情况下被解释为被所附的权利要求覆盖。
Claims (10)
1.一种血液DNA的保存剂组合物，其特征在于，按重量份计算，所述血液DNA的保存剂组合物包括：
其中，所述核酸酶抑制剂包括硅藻土、膨润土、乙醇、甲酰胺、氧钒核糖核苷复合物、二硫赤藓糖醇、焦碳酸二乙酯、蛋白酶K、肝素、β-巯基乙醇、羟胺氧铜离子、硫酸铵、二硫苏糖醇、半胱氨酸、4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物中一种或多种。
2.根据权利要求1所述血液DNA的保存剂组合物，其特征在于，所述核酸酶抑制剂包括氧钒核糖核苷复合物、半胱氨酸、4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物中一种或多种。
3.根据权利要求2所述血液DNA的保存剂组合物，其特征在于，所述核酸酶抑制剂为氧钒核糖核苷复合物和4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为(0.1～0.5)：1。
4.根据权利要求3所述血液DNA的保存剂组合物，其特征在于，所述氧钒核糖核苷复合物和所述4-甲酰苯甲酸席夫碱钒配合物的重量比为0.24：1。
5.根据权利要求1所述血液DNA的保存剂组合物，其特征在于，所述防腐剂包括羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸乙酯钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、对羟基苯甲酸异丁酯钠、对羟基苯甲酸异丙酯钠、对羟基苯甲酸丁酯钠、双咪唑烷基脲、咪唑烷基脲、重氮烷基脲、碘代丙炔基丁基氨基甲酸酯、山梨酸、山梨酸钾、鲸蜡基三甲基氯化铵、鲸蜡基氯化吡啶鎓、氯化苄乙氧铵、二异丁基乙氧基乙基二甲基苄基氯化铵、二异丁基苯氧基乙氧基乙基二甲基苄基氯化铵、N-烷基-N，N-二甲基苄基的氯化铵、溴化铵、糖精酸铵、三甲基氯化铵、氯代羟基乙酸铝钠、柠檬酸三乙酯、三鲸蜡基甲基氯化铵、2，4，4’-三氯-2’-羟基二苯醚、3，4，4’-三氯碳酰苯胺、L-赖氨酸十六烷基酰胺、DMDM乙内酰脲、羟甲基氨基乙酸钠、苯甲酸、丙酸、水杨酸、2，4-己二烯酸、2-羟基联苯、3-乙酰基-甲基-2，4-(3H)喃二酮、甲酸、十一烯酸、5-氨基-1，3-双(2-乙基己基)-5-甲基六氢嘧啶、2-溴-2-硝基-1，3-丙二醇、2，4-二氯苄醇、N-(4-氯苯基)-N’-(3，4-二氯苯基)脲、2，4，4’-三氯-2’-羟基-二苯醚、聚(六亚甲基缩二胍)-盐酸盐、1，2-二溴-2，4-二氰基丁烷、4，4-二甲基-1，3-恶唑烷、苯甲酸钠、甲基异噻唑啉酮、乙醇、甲醇中一种或多种。
6.根据权利要求1所述血液DNA的保存剂组合物，其特征在于，所述抗凝剂包括EDTA钾盐、EDTA钠盐、柠檬酸钠、肝素盐中一种或多种；所述肝素盐包括肝素钠、肝素锂、肝素钙、肝素胺中一种或多种。
7.根据权利要求1所述血液DNA的保存剂组合物，其特征在于，所述代谢抑制剂包括金黄三羧酸、甘油醛、磷酸二羟丙酮、甘油醛-3-磷酸、3-磷酸-2-磷酸甘油酸、磷酸、丙酮酸、葡萄糖酸、氟化钠、氟化钾中一种或多种。
8.根据权利要求1所述血液DNA的保存剂组合物，其特征在于，所述血液DNA的保存剂组合物还包括细胞膜保护剂。
9.根据权利要求1所述血液DNA的保存剂组合物，其特征在于，所述细胞膜保护剂包括丝氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺中的一种或几种。
10.根据权利要求1～9所述血液DNA的保存剂组合物，其特征在于，所述血液DNA的保存剂组合物保存在真空采血管中。
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