CN106831979A - 鱼鳞胶原蛋白水凝胶及其制备方法与应用 - Google Patents
鱼鳞胶原蛋白水凝胶及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106831979A CN106831979A CN201510855741.2A CN201510855741A CN106831979A CN 106831979 A CN106831979 A CN 106831979A CN 201510855741 A CN201510855741 A CN 201510855741A CN 106831979 A CN106831979 A CN 106831979A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fish scale
- gained
- collagen
- filter residue
- treatment filter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 109
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 109
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 108
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims abstract description 93
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 44
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 claims abstract description 37
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 25
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 23
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 10
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 76
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 74
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 57
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 37
- 229960002668 sodium chloride Drugs 0.000 claims description 37
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 239000002893 slag Substances 0.000 claims description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 3
- 238000007605 air drying Methods 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000003801 milling Methods 0.000 claims description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 238000011017 operating method Methods 0.000 abstract description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 description 4
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 2
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000001157 Fourier transform infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 231100000460 acute oral toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- AINBZKYUNWUTRE-UHFFFAOYSA-N ethanol;propan-2-ol Chemical compound CCO.CC(C)O AINBZKYUNWUTRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000003305 oral gavage Methods 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N propane-1,1-diol Chemical class CCC(O)O ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/04—Dispersions; Emulsions
- A61K8/042—Gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
- A61K8/65—Collagen; Gelatin; Keratin; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
- C07K1/303—Extraction; Separation; Purification by precipitation by salting out
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
- C08J3/02—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques
- C08J3/03—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques in aqueous media
- C08J3/05—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques in aqueous media from solid polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2389/00—Characterised by the use of proteins; Derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Birds (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
本发明提供鱼鳞胶原蛋白水凝胶及其制备方法与应用,其中,所述方法包括:采用酸性水溶液对鱼鳞进行酸处理,分离得酸处理滤渣;采用含盐水溶液对所得酸处理滤渣进行盐处理,分离得盐处理滤渣;采用酸性水溶液对所得盐处理滤渣进行提取,分离得酸解粗提液;在所得酸解粗提液中加入盐进行盐析,分离得鱼鳞胶原蛋白沉淀;将所得鱼鳞胶原蛋白沉淀进行搅拌透析直接得鱼鳞胶原蛋白水凝胶;所述的搅拌透析是将鱼鳞胶原蛋白沉淀进行透析的同时进行搅拌。相比于现有技术制备胶原蛋白水凝胶的方法,本发明可直接从鱼鳞制备胶原蛋白水凝胶,制备方法简单,操作步骤少,成本低。
Description
技术领域
本发明涉及鱼鳞胶原蛋白水凝胶及其制备方法与应用,属于生物材料领域。
背景技术
胶原蛋白具有独特的三螺旋结构、低抗原性、无毒性、良好的生物相容性和生物可降解性等特点,已被广泛应用于医药、食品、化妆品及饲料等领域。在胶原蛋白的应用中,胶原蛋白水凝胶是一种重要的应用形式,例如在化妆品领域中,可利用胶原蛋白水凝胶制成保湿护肤品;在生物医药材料领域中,可将胶原蛋白水凝胶作为药物缓释材料或外用敷料(如眼科疾病敷料)等。因此,如何制备胶原蛋白水凝胶是需解决的技术问题之一。
刘克海,董玲等公开了一种胶原蛋白凝胶的制备方法(胶原蛋白凝胶的制备及其中药物体外扩散性考察,中国药房,2011第22卷第13期,1189-1190),其是先以鱼鳞为原材料,采用胃蛋白酶为试剂提取得到胶原蛋白沉淀,然后将适量的所得胶原蛋白沉淀加入至柠檬酸溶液、甘油(丙二醇)及乙醇(异丙醇)三元体系中形成胶原蛋白凝胶。该胶原蛋白水凝胶制备方法相对复杂,需要先采用特定工艺制得胶原蛋白沉淀,然后采用复杂的三元体系才能获得胶原蛋白水凝胶,其制备成本高,操作步骤多。
CN104031274A公开了一种水产鱼皮胶原蛋白凝胶的制备方法,其是以水产鱼皮胶原蛋白为原料,先将该原料在4℃下溶解在醋酸中,随后调节pH,然后将调节pH的胶原上清液混合液置于模具中,在30~40℃水浴静置1~2h,使其充分自聚凝固成型,最后将成型后的水凝胶置于超纯水中浸泡得到水产鱼皮胶原蛋白凝胶。该胶原蛋白水凝胶制备方法同样是以制备好的水产鱼皮胶原蛋白为原料,工艺复杂,制备成本高,操作步骤多。
由上可知,上述方法均是先制得胶原蛋白,然后再将所得胶原蛋白制成其水凝胶,采用这些工艺制备胶原蛋白水凝胶工艺复杂,制备成本高,操作步骤多。
鱼鳞是继猪皮、牛皮等后重要的提取胶原蛋白的原材料,现有技术有大量的从鱼鳞中提取胶原蛋白的报道,例如CN103570827A及CN103172729A等,但对于如何从鱼鳞直接制备胶原蛋白水凝胶却未有报道。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种鱼鳞胶原蛋白水凝胶的制备方法,所述方法可从鱼鳞中直接制备得到鱼鳞胶原蛋白水凝胶,工艺简单,制备成本低。
本发明的另一目的在于提供由所述方法得到的鱼鳞胶原蛋白水凝胶。
本发明的再一目的在于提供所述鱼鳞胶原蛋白水凝胶的应用。
为实现上述目的,本发明提供一种鱼鳞胶原蛋白水凝胶的制备方法,所述方法包括如下步骤:
(a)采用无机酸性水溶液对鱼鳞进行酸处理,分离得酸处理滤渣,优选地,所述鱼鳞为由风干后的鱼鳞磨粉得到的干鱼鳞粉;
(b)采用含盐水溶液对步骤(a)所得酸处理滤渣进行盐处理,分离得盐处理滤渣;
(c)采用有机酸性水溶液对步骤(b)所得盐处理滤渣进行提取,分离得酸解粗提液;
(d)在步骤(c)所得酸解粗提液中加入盐进行盐析,分离得鱼鳞胶原蛋白沉淀;
(e)将步骤(d)所得鱼鳞胶原蛋白沉淀进行搅拌透析直接得鱼鳞胶原蛋白水凝胶;
其中,所述的搅拌透析是将鱼鳞胶原蛋白沉淀进行透析的同时进行搅拌;优选地,搅拌的速率为1000~2000rpm。
本发明通过对鱼鳞依次进行酸处理、盐处理、酸提取、盐析及搅拌透析可从鱼鳞原料直接制备得到鱼鳞胶原蛋白水凝胶,相比于现有技术制备胶原蛋白水凝胶的方法,其制备方法简单,操作步骤少,成本低。
根据本发明的具体实施方案,在本发明所述步骤(a)中,所述酸处理是在鱼鳞中加入0.1~0.5mol/L的盐酸进行搅拌处理,优选在22~28℃下搅拌4~24h;
优选地,所述鱼鳞与所述盐酸的固液比为1g:10mL~1g:30mL。
一般地,步骤(a)中所述的分离得酸处理滤渣可通过常见的分离方式实现,例如过滤、离心等。
根据本发明的具体实施方案,在本发明所述步骤(b)中,所述盐处理是在步骤(a)所得酸处理滤渣中加入质量分数为1%~5%的氯化钠水溶液进行搅拌处理,优选在22~28℃下搅拌6~48h;
优选地,所述酸处理滤渣与所述氯化钠水溶液的固液比为1g:20mL~1g:50mL。
一般地,步骤(b)中所述的分离得盐处理滤渣可通过常见的分离方式实现,例如过滤、离心等。
根据本发明的具体实施方案,本发明所述步骤(c)是在步骤(b)所得盐处理滤渣中加入0.1~1.0mol/L乙酸水溶液进行搅拌处理,优选在22~28℃下搅拌24~48h;
优选地,所述盐处理滤渣与所述乙酸水溶液的固液比为1g:10mL~1g:30mL。
一般地,步骤(c)中所述的分离得酸解粗提液可通过常见的分离方式实现,如过滤、离心等,例如可将酸提取后的混合液在约10000r/min下离心20~40分钟,收集上清液,然后再将上清液抽滤得到更清澈的酸解粗提液。
根据本发明的具体实施方案,在本发明所述步骤(d)中,所述盐析是在步骤(c)中所得酸解粗提液中加入氯化钠进行盐析,优选盐析12~36h;
优选地,使加入的氯化钠在酸解粗提液中的浓度为0.5~1.2mol/L,更优选0.9~1.1mol/L。通过将加入的氯化钠限定在0.9~1.1mol/L的范围内,可在不增加盐杂质的前提下,显著提高鱼鳞胶原蛋白提取率,提取率可达约75%以上。
根据本发明的具体实施方案,在本发明所述步骤(e)中,所述透析采用截留分子量为2000~8000的透析膜,优选在22~28℃下搅拌透析2~4天。
另一方面,本发明提供一种I型鱼鳞胶原蛋白水凝胶,其是根据本发明所述的方法制备得到的;优选地,所述I型鱼鳞胶原蛋白水凝胶中所述胶原蛋白的纯度为80%~90%。
再一方面,本发明提供所述I型胶原蛋白水凝胶在制备护肤品中的应用;优选地,所述护肤品为保湿性护肤品。
又一方面,本发明提供所述I型胶原蛋白水凝胶在制备药物缓释材料或外用辅料中的应用。
综上可知,本发明提供的鱼鳞胶原蛋白水凝胶的制备方法可从鱼鳞中直接制备得到鱼鳞胶原蛋白水凝胶,制备方法简单,操作步骤少,成本低。
附图说明
图1为实施例1所得鱼鳞胶原蛋白水凝胶的紫外图谱;
图2为实施例1所得鱼鳞胶原蛋白水凝胶的红外图谱。
具体实施方式
为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解,现对本发明的技术方案及附图进行以下详细说明,但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。下述实施例中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法;所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得。
实施例1
(a)在鱼鳞中加入0.2mol/L的盐酸,在24℃下搅拌6h,过滤得酸处理滤渣;所述鱼鳞与所述盐酸的固液比1g:10mL;
(b)在所得酸处理滤渣中加入质量分数为1%的氯化钠水溶液,24℃下搅拌8h,过滤得盐处理滤渣,所述酸处理滤渣与所述氯化钠水溶液的固液比1g:20mL;
(c)在所得盐处理滤渣中加入0.2mol/L乙酸水溶液,在24℃下搅拌24h,在约10000r/min下离心20~40分钟,收集上清液,然后再将上清液抽滤得到更清澈的酸解粗提液;所述盐处理滤渣与所述乙酸水溶液的固液比为1g:10mL;
(d)在所得酸解粗提液中加入氯化钠进行盐析12h,使加入的氯化钠在酸解粗提液中的浓度为0.9mol/L;
(e)在所得鱼鳞胶原蛋白沉淀在搅拌(搅拌的速率为1000rpm)的同时进行透析,所述透析采用截留分子量为2000的透析膜,所述搅拌优选在24℃下透析2天,直接制得鱼鳞胶原蛋白水凝胶。本实施例鱼鳞胶原蛋白的提取率为74.32%,纯度为82.13%。
将实施例1所得鱼鳞胶原蛋白水凝胶成品,配置成1mg/mL的水溶液,在紫外-可见分光光度计(Lambda 750)上进行扫描,扫描波长为200~400nm,所得结果如图1所示,从图1中可以看出实施例1所得水凝胶成品的最大吸收峰均出现在219nm处,为Ⅰ型胶原的特征吸收峰。
取实施例1所得微量鱼鳞胶原蛋白水凝胶成品,于105℃干燥烘箱内烘至绝干,并制成透明薄片,采用傅里叶红外光谱(BRUKER VERTEX 70)进行扫描,扫描范围为4000~500cm-1,结果如图2所示,从图2中可看出其三螺旋结构的存在。
从图1~图2可以证明本实施例所得鱼鳞胶原蛋白水凝胶为I型胶原蛋白。
实施例2
(a)在鱼鳞中加入0.3mol/L的盐酸,在24℃下搅拌12h,过滤得酸处理滤渣;所述鱼鳞与所述盐酸的固液比1g:20mL;
(b)在所得酸处理滤渣中加入质量分数为1%的氯化钠水溶液,24℃下搅拌8h,过滤得盐处理滤渣,所述酸处理滤渣与所述氯化钠水溶液的固液比1g:20mL;
(c)在所得盐处理滤渣中加入0.2mol/L乙酸水溶液,在24℃下搅拌24h,在约10000r/min下离心20~40分钟,收集上清液,然后再将上清液抽滤得到更清澈的酸解粗提液;所述盐处理滤渣与所述乙酸水溶液的固液体积比为1g:10mL;
(d)在所得酸解粗提液中加入氯化钠进行盐析12h,使加入的氯化钠在酸解粗提液中的浓度为0.9mol/L;
(e)在所得鱼鳞胶原蛋白沉淀在搅拌(搅拌的速率为1200rpm)的同时进行透析,所述透析采用截留分子量为2000的透析膜,所述搅拌优选在24℃下透析2天,直接制得鱼鳞胶原蛋白水凝胶。本实施例鱼鳞胶原蛋白的提取率为79.67%,纯度为86.22%。经与实施例1相同的测试,本实施例所得鱼鳞胶原蛋白为I型胶原蛋白。
实施例3
(a)在鱼鳞中加入0.2mol/L的盐酸,在24℃下搅拌6h,过滤得酸处理滤渣;所述鱼鳞与所述盐酸的固液比1g:20mL;
(b)在所得酸处理滤渣中加入质量分数为3%的氯化钠水溶液,24℃下搅拌8h,过滤得盐处理滤渣,所述酸处理滤渣与所述氯化钠水溶液的固液比1g:30mL;
(c)在所得盐处理滤渣中加入0.3mol/L乙酸水溶液进行搅拌处理,优选在24℃下搅拌24h,在约10000r/min下离心20~40分钟,收集上清液,然后再将上清液抽滤得到更清澈的酸解粗提液;所述盐处理滤渣与所述乙酸水溶液的固液体积比为1g:20mL;
(d)在所得酸解粗提液中加入氯化钠进行盐析12h,使加入的氯化钠在酸解粗提液中的浓度为1.0mol/L;
(e)在所得鱼鳞胶原蛋白沉淀在搅拌(搅拌的速率为1000rpm)的同时进行透析,所述透析采用截留分子量为4000的透析膜,所述搅拌优选在24℃下透析4天,直接制得鱼鳞胶原蛋白水凝胶。本实施例鱼鳞胶原蛋白的提取率为82.11%,纯度为87.58%。经与实施例1相同的测试,本实施例所得鱼鳞胶原蛋白为I型胶原蛋白。
实施例4
(a)在鱼鳞中加入0.5mol/L的盐酸,在26℃下搅拌20h,过滤得酸处理滤渣;所述鱼鳞与所述盐酸的固液比1g:20mL;
(b)在所得酸处理滤渣中加入质量分数为4%的氯化钠水溶液,26℃下搅拌36h,过滤得盐处理滤渣,所述酸处理滤渣与所述氯化钠水溶液的固液比1g:40mL;
(c)在所得盐处理滤渣中加入0.9mol/L乙酸水溶液,在26℃下搅拌48h,在约10000r/min下离心20~40分钟,收集上清液,然后再将上清液抽滤得到更清澈的酸解粗提液;所述盐处理滤渣与所述乙酸水溶液的固液比为1g:20mL;
(d)在所得酸解粗提液中加入氯化钠进行盐析36h,使加入的氯化钠在酸解粗提液中的浓度为1.1mol/L;
(e)在所得鱼鳞胶原蛋白沉淀在搅拌(搅拌的速率为1000rpm)的同时进行透析,所述透析采用截留分子量为4000的透析膜,所述搅拌优选在24℃下透析2天,直接制得鱼鳞胶原蛋白水凝胶。本实施例鱼鳞胶原蛋白的提取率为89.19%。经与实施例1相同的测试,本实施例所得鱼鳞胶原蛋白为I型胶原蛋白。
实施例5
(a)在鱼鳞中加入0.1mol/L的盐酸,在24℃下搅拌4h,过滤得酸处理滤渣;所述鱼鳞与所述盐酸的固液比1g:10mL;
(b)在所得酸处理滤渣中加入质量分数为1%的氯化钠水溶液,24℃下搅拌6,过滤得盐处理滤渣,所述酸处理滤渣与所述氯化钠水溶液的固液比1g:10mL;
(c)在所得盐处理滤渣中加入0.1mol/L乙酸水溶液在24℃下搅拌24h,在约10000r/min下离心20~40分钟,收集上清液,然后再将上清液抽滤得到更清澈的酸解粗提液;所述盐处理滤渣与所述乙酸水溶液的固液体积比为1g:10mL;
(d)在所得酸解粗提液中加入氯化钠进行盐析12h,使加入的氯化钠在酸解粗提液中的浓度为0.3mol/L;
(e)所得鱼鳞胶原蛋白沉淀在搅拌(搅拌的速率为1200rpm)的同时进行透析,所述透析采用截留分子量为4000的透析膜,所述搅拌优选在24℃下透析4天,直接制得鱼鳞胶原蛋白水凝胶。本实施例鱼鳞胶原蛋白的提取率为51.21%,纯度为80.11%。经与实施例1相同的测试,本实施例所得鱼鳞胶原蛋白为I型胶原蛋白。
实施例6
(a)在鱼鳞中加入0.1mol/L的盐酸,在24℃下搅拌8h,过滤得酸处理滤渣;所述鱼鳞与所述盐酸的固液比1g:20mL;
(b)在所得酸处理滤渣中加入质量分数为3%的氯化钠水溶液,24℃下搅拌8h,过滤得盐处理滤渣,所述酸处理滤渣与所述氯化钠水溶液的固液比1g:10mL;
(c)在所得盐处理滤渣中加入0.5mol/L乙酸水溶液,在24℃下搅拌24h,在约10000r/min下离心20~40分钟,收集上清液,然后再将上清液抽滤得到更清澈的酸解粗提液;所述盐处理滤渣与所述乙酸水溶液的固液比为1g:20mL;
(d)在所得酸解粗提液中加入氯化钠进行盐析12h,使加入的氯化钠在酸解粗提液中的浓度为1.5mol/L;
(e)所得鱼鳞胶原蛋白沉淀在搅拌(搅拌的速率为1200rpm)的同时进行透析,所述透析采用截留分子量为4000的透析膜,所述搅拌优选在24℃下透析4天,直接制得鱼鳞胶原蛋白水凝胶。本实施例鱼鳞胶原蛋白的提取率为67.57%,纯度为80.78%。经与实施例1相同的测试,本实施例所得鱼鳞胶原蛋白为I型胶原蛋白。
实施例7
(a)在鱼鳞中加入0.1mol/L的盐酸进行搅拌处理,在24℃下搅拌8h;所述鱼鳞与所述盐酸的固液比1g:20mL;
(b)在所得酸处理滤渣中加入质量分数为3%的氯化钠水溶液,24℃下搅拌8h,所述酸处理滤渣与所述氯化钠水溶液的固液比1g:30mL;
(c)在所得盐处理滤渣中加入0.3mol/L乙酸水溶液,在24℃下搅拌24h;所述盐处理滤渣与所述乙酸水溶液的固液体积比为1g:20mL;
(d)在所得酸解粗提液中加入氯化钠进行盐析12h,使加入的氯化钠在酸解粗提液中的浓度为1.0mol/L;
(e)所得鱼鳞胶原蛋白沉淀在搅拌(搅拌的速率为200rpm)的同时进行透析,所述透析采用截留分子量为4000的透析膜,所述搅拌优选在24℃下透析4天,直接制得鱼鳞胶原蛋白水凝胶。本实施例鱼鳞胶原蛋白的提取率为76.75%,纯度为83.34%。经与实施例1相同的测试,本实施例所得鱼鳞胶原蛋白为I型胶原蛋白。
将实施例1~4所得鱼鳞胶原蛋白水凝胶成品分别编号为样品1~样品4,依据食品中氨基酸的测定标准GB/T5009,124-2003,采用氨基酸分析仪(日立L-8800型)对样品1~4进行检测以分析所得鱼鳞胶原蛋白水凝胶的氨基酸成分;检测条件,柱温:57℃恒温;色谱柱:日立855-350型;反应柱温:134℃;柠檬酸pH缓冲液梯度洗脱;检测波长:570nm+440nm;流速:洗脱泵0.4mL/min+衍生泵0.35mL/min分析时间:59min;检测结果如下表1所示:
表1鱼鳞胶原蛋白水凝胶氨基酸含量
从上表1可以看出鱼鳞胶原蛋白特征氨基酸-羟脯氨酸的含量为10.17-14.26g/100g,高于目前市售的胶原蛋白。进一步说明,本发明的方法稳定且有效。
依据GB15193.3-2014对实施例1~4所得鱼鳞胶原蛋白水凝胶进行急性经口毒性试验,其中检测环境为屏蔽环境动物房,其使用许可证号:SYXK(浙)2011-0158,室温为20.3~23.7℃,相对湿度为50.3%~68.4%;试验动物为清洁级ICR小鼠,20只,雌雄各半,每只体重为18~22g,由浙江省实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK(浙)2014-0001;染毒途径为:经口灌胃;试验方法为:采用限量法,灌胃剂量为10000mg/kg,染毒前动物禁食4h,染毒后,每天观察中毒症状和行为变化,每周称重一次,对中毒死亡动物和染毒后14天存活动物作大体解剖观察;实验结果表明实验动物在染毒14天内未见任何中毒症状和中毒死亡,雌雄动物的平均体重未见异常。实验观察结束,对受试动物进行大体解剖检查未见异常,其LD50≥5000mg/kg,根据急性毒性分级,所测样品为实际无毒。
对实施例1~4所得鱼鳞胶原蛋白水凝胶的变性温度、吸湿性、乳化性及起泡性进行测试,所得结果如下表2所示:
表2
分析项目 | 所得结果 | 分析方法 |
变性温度,℃ | 35.23±4.7 | 差式扫描量热法(DSC) |
乳化性, | 3.36±0.86 | 强浊度法 |
吸湿性,g/g | 0.25±0.07 | 差重法 |
起泡性,% | 185±12 | 气流法 |
从表2中可以看出,本方法所制备的鱼鳞胶原蛋白水凝胶性能稳定,不易变性。
最后说明的是:以上实施例仅用于说明本发明的实施过程和特点,而非限制本发明的技术方案,尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解:依然可以对本发明进行修改或者等同替换,而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换,均应涵盖在本发明的保护范围当中。
Claims (10)
1.一种鱼鳞胶原蛋白水凝胶的制备方法,所述方法包括如下步骤:
(a)采用无机酸性水溶液对鱼鳞进行酸处理,分离得酸处理滤渣,优选地,所述鱼鳞为由风干后的鱼鳞磨粉得到的干鱼鳞粉;
(b)采用含盐水溶液对步骤(a)所得酸处理滤渣进行盐处理,分离得盐处理滤渣;
(c)采用有机酸性水溶液对步骤(b)所得盐处理滤渣进行提取,分离得酸解粗提液;
(d)在步骤(c)所得酸解粗提液中加入盐进行盐析,分离得鱼鳞胶原蛋白沉淀;
(e)将步骤(d)所得鱼鳞胶原蛋白沉淀进行搅拌透析直接得鱼鳞胶原蛋白水凝胶;
其中,所述的搅拌透析是将鱼鳞胶原蛋白沉淀进行透析的同时进行搅拌;优选地,搅拌的速率为1000~2000rpm。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤(a)中所述酸处理是在鱼鳞中加入0.1~0.5mol/L的盐酸进行搅拌处理,优选在22~28℃下搅拌4~24h;
优选地,所述鱼鳞与所述盐酸的固液比为1g:10mL~1g:30mL。
3.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤(b)中所述盐处理是在步骤(a)所得酸处理滤渣中加入质量分数为1%~5%的氯化钠水溶液进行搅拌处理,优选在22~28℃下搅拌6~48h;
优选地,所述酸处理滤渣与所述氯化钠水溶液的固液比为1g:20mL~1g:50mL。
4.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤(c)是在步骤(b)所得盐处理滤渣中加入0.1~1.0mol/L乙酸水溶液进行搅拌处理,优选在22~28℃下搅拌24~48h;
优选地,所述盐处理滤渣与所述乙酸水溶液的固液比为1g:10mL~1g:30mL。
5.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤(d)中所述盐析是在步骤(c)中所得酸解粗提液中加入氯化钠进行盐析,优选盐析12~36h;
优选地,使加入的氯化钠在酸解粗提液中的浓度为0.5~1.2mol/L,更优选0.9~1.1moL/L。
6.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤(e)中所述透析采用截留分子量为2000~8000的透析膜;优选在22~28℃下透析2~4天。
7.一种I型鱼鳞胶原蛋白水凝胶,其是根据权利要求1~6中任一项所述方法制备得到的。
8.根据权利要求7所述的I型鱼鳞胶原蛋白水凝胶,其中,所述I型鱼鳞胶原蛋白水凝胶中胶原蛋白的纯度为80%~90%。
9.权利要求7或8所述I型胶原蛋白水凝胶在制备护肤品中的应用;优选地,所述护肤品为保湿性护肤品。
10.权利要求7或8中所述I型胶原蛋白水凝胶在制备药物缓释材料或外用辅料中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510855741.2A CN106831979A (zh) | 2015-11-30 | 2015-11-30 | 鱼鳞胶原蛋白水凝胶及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510855741.2A CN106831979A (zh) | 2015-11-30 | 2015-11-30 | 鱼鳞胶原蛋白水凝胶及其制备方法与应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106831979A true CN106831979A (zh) | 2017-06-13 |
Family
ID=59148544
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510855741.2A Pending CN106831979A (zh) | 2015-11-30 | 2015-11-30 | 鱼鳞胶原蛋白水凝胶及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106831979A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111330068A (zh) * | 2020-03-05 | 2020-06-26 | 温州医科大学 | 一种水胶体抗菌敷料及其制备方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060160734A1 (en) * | 2003-11-26 | 2006-07-20 | Akihiko Kusanagi | In situ method for treatment and repair of meniscal injuries |
CN103665397A (zh) * | 2013-11-12 | 2014-03-26 | 广州市一杰医药科技有限公司 | 水凝胶的制备方法及应用 |
CN104031274A (zh) * | 2014-05-28 | 2014-09-10 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种水产鱼皮胶原蛋白水凝胶的制备方法 |
CN104045841A (zh) * | 2014-06-29 | 2014-09-17 | 陈昆 | 丝素蛋白水凝胶的制备方法 |
WO2014147383A1 (en) * | 2013-03-18 | 2014-09-25 | Heart Biotech Limited | Peptides and uses thereof |
CN104892750A (zh) * | 2015-05-27 | 2015-09-09 | 深圳先进技术研究院 | 一种酸溶性鱼鳞胶原蛋白的制备方法 |
-
2015
- 2015-11-30 CN CN201510855741.2A patent/CN106831979A/zh active Pending
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060160734A1 (en) * | 2003-11-26 | 2006-07-20 | Akihiko Kusanagi | In situ method for treatment and repair of meniscal injuries |
WO2014147383A1 (en) * | 2013-03-18 | 2014-09-25 | Heart Biotech Limited | Peptides and uses thereof |
CN103665397A (zh) * | 2013-11-12 | 2014-03-26 | 广州市一杰医药科技有限公司 | 水凝胶的制备方法及应用 |
CN104031274A (zh) * | 2014-05-28 | 2014-09-10 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种水产鱼皮胶原蛋白水凝胶的制备方法 |
CN104045841A (zh) * | 2014-06-29 | 2014-09-17 | 陈昆 | 丝素蛋白水凝胶的制备方法 |
CN104892750A (zh) * | 2015-05-27 | 2015-09-09 | 深圳先进技术研究院 | 一种酸溶性鱼鳞胶原蛋白的制备方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
JAE-KYUNG KIM ET AL.: ""Preparation and Properties of Collagen/Modified Hyaluronic Acid Hydrogel for Biomedical Application"", 《JOURNAL OF NANOSCIENCE AND NANOTECHNOLOGY》 * |
四川省农业科学院 等: "《科技增收实用技术》", 31 March 2014, 四川科学技术出版社 * |
方亮: "《药用高分子材料学》", 31 August 2015, 中国医药科技出版社 * |
熊月琴 等: "胶原基医用复合水凝胶的制备及性质研究", 《现代食品科技》 * |
石庆华: "《生物化学实验指导》", 30 September 2006, 中国农业大学出版社 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111330068A (zh) * | 2020-03-05 | 2020-06-26 | 温州医科大学 | 一种水胶体抗菌敷料及其制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0893449B1 (en) | Antitumor substance extracted from hen-of-the-woods | |
CN106967169B (zh) | 一种鱼胶原蛋白的提取方法 | |
WO2001051070A1 (fr) | Substance eem-s physiologiquement active issue de champignons, methode de production de ladite substance et medicaments | |
JP5886877B2 (ja) | アロエ多糖体の組成物及び方法 | |
CN104250285A (zh) | 一种大黄鱼鱼肉抗氧化肽及其制备方法和用途 | |
CN107857806A (zh) | 一种鲟鱼精蛋白及鲟鱼精蛋白多肽的制备方法 | |
CN103316045A (zh) | 一种畜禽用多联特异性转移因子及制备方法 | |
CN104558115A (zh) | 一种孔鳐鱼肉蛋白抗氧化多肽及其制备方法和用途 | |
CN109400741A (zh) | 一种灵芝孢子多糖的分离纯化方法 | |
CN105837704B (zh) | 一种苜蓿多糖的提取和纯化方法 | |
CN105237626A (zh) | 一种抗菌肽hjh-3及其应用 | |
CN109627323A (zh) | 蛇皮胶原蛋白肽及其制备和应用 | |
CN106831979A (zh) | 鱼鳞胶原蛋白水凝胶及其制备方法与应用 | |
CN105769657B (zh) | 一种以藏药材黑木耳为主要成分的护肤品及其制备方法 | |
CN104672302A (zh) | 一种多肽菌素、其制备方法及其应用 | |
CN110025499B (zh) | 牡丹肽-富勒烯的制备方法 | |
KR101156775B1 (ko) | 항암활성을 갖는 영지버섯 추출물 및 염기성 알콜을 이용한 추출 방법 | |
CN111004305B (zh) | 姬松茸小肽及其制备方法和应用 | |
CN113912673A (zh) | 一种芝麻来源的低苦味ace抑制肽及其制备方法和应用 | |
CN106924297A (zh) | 一种粒毛盘菌胞内黑色素作为急性肝损伤药物的用途 | |
JP7197891B2 (ja) | プロテオグリカン及び/又はグリコサミノグリカンの製造方法 | |
CN103788231B (zh) | 一种从兔耳软骨中制备高纯度硫酸软骨素a的方法 | |
CN106084007A (zh) | 一种黄粉虫天然抗氧化八肽的分离鉴定及功能分析 | |
CN115462530B (zh) | 板栗仁提取物及其提取方法和在抗氧化产品中的应用 | |
CN110256528A (zh) | 一种能够显著清除活性氧(ros)的天然寡肽 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |