CN106822224B - 黄芪总苷在制备预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤药物中的用途、药物组合物及食品 - Google Patents
黄芪总苷在制备预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤药物中的用途、药物组合物及食品 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了黄芪总苷在制备预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤药物中的用途、药物组合物及食品,其中黄芪总苷在制备药物中的用途,所述药物用于预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤。由此,可以利用黄芪总苷制备防治微波辐射致生殖器官损伤的药物,进而可以利用制备得到的药物对可能会遭受微波辐射的人或动物进行给药预防,或者对已遭受微波辐射致生殖器官损伤的人或动物进行给药治疗,实现减少生殖器官损伤、修复受损的生殖器官的目的。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体涉及黄芪总苷在制备预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤药物中的用途、药物组合物及食品。
背景技术
微波辐射的生物危害越来越受到国内外学者的广泛关注。生殖器官是微波辐射的敏感器官之一。研究表明,微波辐射可引起男性性功能减退,精液质量下降,生殖器官结构和功能损伤,表现为精子数量减少、活动力下降、活力和运动参数下降、畸形精子率增加,血清睾酮含量下降,睾丸、精子组织结构和超微结构损伤等。
近年来,对微波辐射致生殖器官损伤及其防护的研究在国内外受到普遍重视,但有效的防护药物尚缺乏。因而,目前可用于防治微波辐射致生殖器官损伤的药物的研发仍待加强。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此,本发明的一个目的在于提出一种能够有效用于防治微波辐射致生殖器官损伤的药物。
需要说明的是,本发明是基于发明人的下列发现而完成的:
黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根,具有补中益气,利水消肿等药理作用,可调节机体免疫功能、增强细胞代谢和强心降压等,对人体多脏器均有良好的保护作用。黄芪总苷是黄芪主要活性成分黄芪皂苷和大豆皂苷等组成的皂苷类化合物的总称。
发明人经多次实验研究惊喜地发现:黄芪总苷可通过提高大鼠精子活动度、活力参数和运动参数,降低大鼠精子畸形率,改善大鼠睾丸组织结构和超微结构,有效地保护微波辐射所致的生殖器官损伤。
进而,根据本发明的一个方面,本发明提供了黄芪总苷在制备药物中的用途。根据本发明的实施例,所述药物用于预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤。由此,基于黄芪总苷能够有效降低生殖器官活性氧和乳酸脱氢酶的含量,减少生殖器官损伤,修复受损的生殖器官,可以利用黄芪总苷制备防治微波辐射致生殖器官损伤的药物,进而可以利用制备得到的药物对可能会遭受微波辐射的人或动物进行给药预防,或者对已遭受微波辐射致生殖器官损伤的人或动物进行给药治疗,实现减少生殖器官损伤、修复受损的生精细胞的目的。
根据本发明的另一方面,本发明还提供了一种用于预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤的药物组合物。根据本发明的实施例,该药物组合物包含:黄芪总苷。发明人惊奇地发现,利用本发明的药物组合物,可以有效地对可能会遭受微波辐射的人或动物进行给药预防,或者对已遭受微波辐射致生殖器官损伤的人或动物进行给药治疗,通过有效降低生殖器官活性氧和乳酸脱氢酶的含量,减少生殖细胞损伤,修复受损的生殖器官。
根据本发明的实施例,本发明的用于预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤的药物组合物,进一步包含药学上可接受的赋形剂。由此,本发明的药物组合物能够被制备成任何便于给药的药物剂型。
根据本发明的一些具体示例,所述赋形剂为选自粘合剂、填料、涂膜聚合物、增塑剂、助流剂、崩解剂和润滑剂的至少一种。由此,能够将本发明的药物组合物制成便于给药的药物剂型。
根据本发明的又一方面,本发明还提供了一种食品。根据本发明的实施例,该食品包含:黄芪总苷。发明人发现,人或动物适当食用包含黄芪总苷的食品,能够有效预防微波辐射致生殖器官损伤。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解,其中:
图1-图5显示了根据本发明一个实施例,黄芪总苷停药后6h即30mW/cm2微波辐射后14d大鼠精子活动度SCA检测结果,其中:
图1为假辐射组,红色和绿色精子为主(标尺为25微米),
图2为辐射对照组,绿色和蓝色为主(标尺为25微米),
图3为40mg/(kg.d)黄芪总苷组,红色、绿色和蓝色精子为主(标尺为25微米),
图4为80mg/(kg.d)黄芪总苷组,红色和绿色精子为主(标尺为25微米),
图5为160mg/(kg.d)黄芪总苷组,红色和绿色精子为主(标尺为25微米);
图6-图14显示了根据本发明一个实施例,黄芪总苷对30mW/cm2微波辐射大鼠睾丸组织结构影响的观察结果,其中:
图6为给药7d(辐射后7d)假辐射组睾丸组织结构(标尺为50微米)
图7为给药7d(辐射后7d)辐射组大鼠睾丸组织结构(标尺为50微米),
图8为给药7d(辐射后7d)40mg/(kg.d)组大鼠睾丸组织结构(标尺为50微米),
图9为给药7d(辐射后7d)80mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸组织结构(标尺为50微米),
图10为给药7d(辐射后7d)160mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸组织结构(标尺为50微米),
图11为停药后6h(辐射后14d)辐射组大鼠睾丸组织结构(标尺为50微米),
图12停药后6h(辐射后14d)40mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸组织结构(标尺为50微米),
图13为停药后6h(辐射后14d)80mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸组织结构(标尺为50微米),
图14为停药后6h(辐射后14d)160mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸组织结构(标尺为50微米);
图15-图19显示了根据本发明一个实施例,停药后6h(辐射后14d)黄芪总苷对30mW/cm2微波辐射大鼠睾丸组织超微结构影响的观察结果,其中:
图15为假辐射组大鼠睾丸组织超微结构(标尺为500纳米),
图16为辐射组大鼠睾丸组织超微结构(标尺为500纳米),
图17为40mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸组织超微结构(标尺为2微米),
图18为80mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸组织超微结构(标尺为2微米),
图19为160mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸组织超微结构(标尺为500纳米)。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的,仅用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。
用途
如前所述,发明人发现,黄芪总苷能够有效减少生殖器官损伤,修复受损的生殖细胞。进一步,发明人发现,利用包含黄芪总苷的药物可以对可能会遭受微波辐射的人或动物进行给药预防,或者对已遭受微波辐射致生殖器官损伤的人或动物进行给药治疗,实现有效减少生殖器官细胞损伤、修复受损的生殖器官的目的。
因而,根据本发明的一个方面,本发明提供了黄芪总苷在制备药物中的用途。根据本发明的实施例,所述药物用于预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤。
其中,需要说明的是,如本发明所使用的术语“治疗”任何疾病或病症,在其中一些实施例中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一些实施例中,“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数,包括可能不为患者所察觉的身体参数。在另一些实施例中,“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。
术语“预防”指获病或障碍的风险的减少(即:使疾病的至少一种临床症状在主体内停止发展,该主体可能面对或预先倾向面对这种疾病,但还没有经历或表现出疾病的症状)。
药物组合物
根据本发明的另一方面,本发明还提供了一种用于预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤的药物组合物。根据本发明的实施例,该药物组合物包含:黄芪总苷。发明人惊奇地发现,利用本发明的药物组合物,可以有效地对可能会遭受微波辐射的人或动物进行给药预防,或者对已遭受微波辐射致生殖器官损伤的人或动物进行给药治疗,通过有效降低生殖器官细胞损伤,修复受损的生殖器官。
当将本发明的药物组合物用于治疗微波辐射致生殖器官损伤时,治疗有效量的黄芪总苷作为药物组合物的活性成分提供。
此外,根据本发明的实施例,本发明的用于预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤的药物组合物,可以进一步包含药学上可接受的赋形剂。由此,本发明的药物组合物能够被制备成任何便于给药的药物剂型。其中,根据本发明的一些具体示例,所述赋形剂为选自粘合剂、填料、涂膜聚合物、增塑剂、助流剂、崩解剂和润滑剂的至少一种。由此,能够将本发明的药物组合物制成便于给药的药物剂型。
根据本发明的另一些实施例,所述药物组合物进一步包含至少一种药学上可接受的载体、辅剂或赋形剂,以及任选地,其它的治疗和/或预防成分。
合适的载体、辅剂和赋形剂对于本领域技术人员是熟知的并且详细描述于例如Ansel H.C.et al.,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems(2004)Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia;Gennaro A.R.et al.,Remington:The Science and Practice of Pharmacy(2000)Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia;和Rowe R.C.,Handbook of Pharmaceutical Excipients(2005)Pharmaceutical Press,Chicago中。
本文所使用的术语“治疗有效量”是指足以显示出有意义的患者益处的各活性组分的总量。当使用单独的活性成分单独给药时,该术语仅指该成分。当组合应用时,该术语则是指不论组合、依次或同时给药时,都引起治疗效果的活性成分的组合量。从与制剂其他成分相容以及对其接受者无害的意义上来讲,载体、稀释剂或赋形剂必须是可接受的。
根据本发明的另一方面,还提供了用于制备药物制剂的方法,该方法包括将黄芪总苷与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混匀。本发明所使用的术语“药学上可接受的”是指这样的化合物、原料、组合物和/或剂型,它们在合理医学判断的范围内,适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、变态反应或与合理的利益/风险比相对称的其他问题和并发症,并有效用于既定用途。
通常,黄芪总苷通过用于发挥类似效用的物质的任何常规施用方式以治疗有效量被施用。适宜的剂量范围取决于多种因素,例如所治疗疾病的严重性、施用对象的年龄和相对健康状况、所用黄芪总苷的效力、施用的途径和形式、施用所针对的适应症以及相关医学执业者的偏好和经验。治疗所述疾病领域的普通技术人员无需过多实验依靠个人知识和本申请的公开内容即能确定用于给定疾病的黄芪总苷的治疗有效量。
通常,本发明的药物组合物以药物制剂形式施用,所述的药物制剂包括那些适于口服(包括口腔和舌下)、直肠、鼻、局部、肺、阴道或胃肠外(包括肌内、动脉内、鞘内、皮下和静脉内)施用的药物制剂或适于吸入或吹入施用形式的药物制剂。优选的施用方式通常为口服,使用合适的日剂量方案,可根据疾痛程度对其进行调整。
可将黄芪总苷与一种或多种常规辅剂、载体或稀释剂一起置于药物组合物和单位剂量形式中。药物组合物和单位剂量形式可包含常规比例的常规成分,含或不含另外的活性化合物或成分,单位剂量形式可以含有与所应用的计划日剂量范围相称的任何适宜的有效量的活性成分。药物组合物的应用形式可以是固体例如片剂或填充胶囊剂、半固体、粉末、缓释制剂或液体例如溶液剂、混悬剂、乳剂、酏剂或口服使用的填充胶囊剂;或是用于直肠或阴道施用的栓剂形式;或是用于胃肠外使用的无菌注射用溶液形式。因此,每片中含有约1mg活性成分或更宽地,含有约0.01至约100mg活性成分的制剂是适宜的代表性的单位剂量形式。
具体地,本发明的可以配制成各种口服施用的剂量形式。药物组合物和剂量形式可以包含黄芪总苷作为活性成分。可药用的载体可以是固体或液体。固体形式的制剂包括:散剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒剂。固体载体可以是一种或多种物质,其也可以用作稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包囊材料。在散剂中,载体通常为研细的固体,其与研细的活性成分形成混合物。在片剂中,活性成分通常与具有必需粘合能力的载体以适宜的比例相混合并压制成所需的形状和大小。适宜的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”旨在包括含有包囊材料作为载体以提供胶囊的活性化合物的制剂,在所述胶囊中带有或不带有载体的活性成分被与之结合的该载体所包围。类似地,还包括扁囊剂和锭剂。片剂、散剂、胶囊剂、丸剂、扁囊剂和锭剂均是适于口服施用的固体形式。
其它适于口服施用的形式包括液体形式的制剂(包括乳剂、糖浆、酏剂、水性溶液剂、水性混悬剂)或者在使用前即刻转变为液体形式制剂的固体形式的制剂。乳剂可以在溶液例如丙二醇水溶液中制备或可以含有乳化剂例如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶。水性溶液剂可通过将活性成分溶解在水中并加入适宜的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂来制备。水性混悬剂可通过用粘性物质例如天然或合成的胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它公知的悬浮剂将研细的活性成分分散在水中来制备。液体形式的制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂,除了活性成分外其还可以含有着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、人造的和天然的甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
黄芪总苷可被配制用于胃肠外施用(例如,通过注射如快速浓注或连续输注施用)并且可以以单位剂量形式存在于安瓿、预先灌装的注射器、小容量输液中或存在于添加了防腐剂的多剂量容器中。药物组合物可采用的形式有例如在油性或水性赋形剂中的混悬剂、溶液剂或乳剂,例如在聚乙二醇水溶液中的溶液剂。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的例子包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和注射用有机酯(例如油酸乙酯),并且可含有制剂物质如防腐剂、湿润剂、乳化剂或悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者,活性成分可以为粉末形式,其获得方法是将无菌固体进行无菌分装或通过将溶液冻干以便在使用前用适宜的赋形剂例如无菌、无热原的水进行构建。
黄芪总苷可被配制用于以软膏剂、乳膏剂或洗剂形式或以透皮贴剂形式局部施用于表皮。软膏剂和乳膏剂可以例如用添加了适宜的增稠剂和/或胶凝剂的水性或油性基质进行配制。洗剂可以用水性或油性基质配制并且通常还含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。适用于在口中局部施用的制剂包括:在经矫味的基质中包含活性剂的锭剂,所述经矫味的基质通常是蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶;在惰性基质中含有活性成分的软锭剂,所述惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶;以及在合适的液体载体中包含活性成分的漱口剂。
黄芪总苷可被配制用于以栓剂形式施用。可首先将低熔点蜡如脂肪酸甘油酯混合物或可可脂熔化,并将活性成分例如通过搅拌均匀分散。然后将熔融的均匀混合物倒入合适大小的模具中,使其冷却并固化。
黄芪总苷可被配制用于阴道施用。除活性成分外还含有本领域公知载体的阴道栓、卫生栓、乳青剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂是适宜的。
黄芪总苷可被配制用于经鼻施用。可将溶液剂或混悬剂通过常规方法、例如用滴管、吸管或喷雾器直接应用于鼻腔。制剂可以是单剂量或多剂量形式。对于滴管或吸管的多剂量形式,这可以通过由患者施用适宜的、预定体积的溶液剂或混悬剂来实现。对于喷雾器,这可以例如通过计量雾化喷雾泵来实现。
黄芪总苷可被配制用于气雾剂施用,特别是施用于呼吸道并且包括鼻内施用。这里采用的黄芪总苷通常具有小的粒度,例如5微米或更小数量级的粒度。所述的粒度可通过本领域公知的方法、例如通过微粉化获得。活性成分以含有适宜抛射剂如含氯氟烃(CFC)例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷或者二氧化碳或其它适宜气体的加压包装提供。气雾剂还可合适地含有表面活性剂如卵磷脂。药物剂量可通过计量阀控制。或者,活性成分可以以干燥粉末形式、例如在适宜粉末基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮中的化合物的粉末混合物形式提供。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量形式例如以明胶胶囊剂或药筒或泡罩包装形式存在可通过吸入器由其中施用粉末。
需要时,制剂可以用适于缓释或控释施用活性成分的肠溶包衣进行制备。例如,黄芪总苷可被配制成透皮或皮下药物递送装置。当必须缓释化合物(黄芪总苷)时和当患者对治疗方案的依从性至关重要时,这些递送系统是有利的。透皮递送系统中的化合物经常附着在皮肤粘着性固体载体上。所关注的化合物也可以与渗透促进剂、例如月桂氮革酮(1-十二烷基氮杂环庚-2-酮)组合使用。可通过手术或注射将缓释递送系统皮下插入到皮下层。皮下植入物将化合物包囊在液体可溶性膜、例如硅橡胶或生物可降解的聚合物例如聚乳酸中。
药物制剂优选为单位剂量形式。在该形式中,制剂被细分为含有适宜量活性成分的单位剂量。单位剂量形式可以是成套包装的制剂,包装中含有离散量的制剂,例如成套包装的片剂、胶囊剂和在小瓶中的粉末或安瓶剂。另外,单位剂量形式可以是胶囊剂、片剂、扁囊剂或锭剂本身,或者其可以是成套包装形式中适宜数量的这些形式中的任何一种。
其它适宜的药用载体和它们的制剂在Remington:The Science and Practice ofPharmacy1995Martin,E.W编辑,Mack Publishing Company,第19版,Easton,Pennsylvania中有描述。
本发明的药物组合物可用于制备预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤的药物。
本发明的药物组合物包含黄芪总苷,以及药学上可接受的载体,辅剂或赋形剂。本发明的药物组合物中黄芪总苷的量可以有效地可探测地预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤。
本发明的药物组合物的“有效量”或“有效剂量”是指处理或减轻微波辐射致生殖器官损伤的严重度的有效量。根据本发明的实施例,黄芪总苷和包含黄芪总苷的药物组合物可以是任何给药量和任何给药途径来有效地用于处理或减轻疾病的严重程度。必需的准确的量将根据患者的情况而改变,这取决于种族,年龄,患者的一般条件,感染的严重程度,特殊的因素,给药方式,等等。黄芪总苷或包含黄芪总苷的药物组合物可以和一个或多个其他治疗剂联合给药。
本发明的药物组合物除了对人类治疗有益以外,还可应用于兽医治疗宠物、引进品种的动物和农场的动物中的哺乳动物。另外一些动物的实例包括马、狗和猫。
食品
根据本发明的又一方面,本发明还提供了一种食品。根据本发明的实施例,该食品包含:黄芪总苷。发明人发现,人或动物适当食用包含黄芪总苷的食品,能够有效预防微波辐射致生殖器官损伤。
此外,根据本发明的实施例,本发明的食品还可以进一步包括食品学上可接受的添加剂。
需要说明的是,在本文中所使用的术语“食品”应作广义理解,其可以是任何可被食用的形式,即除了常规的食品形式外,本发明的食品还可以为保健品、饮品等。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解,下面的实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1黄芪总苷对微波辐射致大鼠精子活动度、活力和运动参数变化的影响
1.实验动物分组和模型制作方法
取75只二级雄性Wistar大鼠,随机分成5组,分为假辐射组、辐射对照组、40mg/(kg.d)黄芪总苷组、80mg/(kg.d)黄芪总苷组和160mg/(kg.d)黄芪总苷组,每组15只。用军事医学科学院微波辐射源对其进行全身均匀辐射,微波辐射源的平均功率密度为30mW/cm2,辐射15分钟。各组大鼠于辐射后当天开始灌胃给药,每天1次,连续14d,药物浓度分别为4mg×ml-1、8mg×ml-1、16mg×ml-1,注射剂的溶剂为蒸馏水,其中假辐射组大鼠的黄芪总苷注射量为0,即仅注射蒸馏水。
2.大鼠精子活动度检测
分别于给药7d(辐射后7d),停药后6h、7d(微波辐射后14d、21d),随机从各组动物中抽取5只,经腹腔注射1%戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后,剖开附睾和附睾管,0.3ml生理盐水(37℃孵育1h的生理盐水)冲洗后,采用SCA精子动态分析系统(西班牙Microptic公司)分析精子活动度,包括活动率(AR)即A+B+C级精子比例,A级(快速前向运动)、B级(慢速前向运动)、C级(非前向运动)、D级(不动)精子比例。结果见图1-图5和表1-3。
图1-图5是黄芪总苷停药后6h即30mW/cm2微波辐射后14d大鼠精子活动度SCA检测结果图;本领域技术人员可知,原图为彩色图片,其中红色:A级精子;绿色:B级精子;蓝色:C级精子;黄色:D级精子。其中,由检测结果可知,图1为假辐射组,红色和绿色精子为主(标尺为25微米),图2为辐射对照组,绿色和蓝色为主(标尺为25微米),图3为40mg/(kg.d)黄芪总苷组,红色、绿色和蓝色精子为主(标尺为25微米),图4为80mg/(kg.d)黄芪总苷组,红色和绿色精子为主(标尺为25微米),图5为160mg/(kg.d)黄芪总苷组,红色和绿色精子为主(标尺为25微米)。结果显示,与辐射对照组相比,给予黄芪总苷能提高辐射致精子活动度的下降。
表1黄芪总苷给药7d(30mW/cm2微波辐射后7d)大鼠附睾精子活动度(%)
*与假辐射组相比,P<0.05;△与辐射组相比,P<0.05。
由表1可知:给药7d即辐射后7d,辐射对照组与假辐射组比较,辐射对照组A+B级精子比例明显减少(p<0.05),C、D级精子比例增加(p<0.05);各剂量黄芪总苷组与辐射对照组比较,A+B级精子比例有增加趋势,C级精子比例下降,80mg/(kg.d)组和160mg/(kg.d)组有统计学意义(p<0.05)。具体见表1。
表2黄芪总苷停药6h(30mW/cm2微波辐射后14d)大鼠附睾精子活动度(%)
*与假辐射组相比,P<0.05,**与假辐射组相比,P<0.01;
△与辐射组相比,P<0.05,△△与辐射组相比,P<0.01。
由图1-图5、表2可知:停药6h即辐射后14d,辐射对照组与假辐射组比较,辐射对照组A+B级精子比例明显减少(p<0.01),而C、D级精子比例明显增加(p<0.05或p<0.01);各给药组与辐射对照组比较,A+B级精子比例明显增加,C级精子和D级精子比例明显下降,其中80mg/(kg.d)组和160mg/(kg.d)组有统计学意义(p<0.05或p<0.01)。
表3黄芪总苷停药7d(30mW/cm2微波辐射后21d)大鼠附睾精子活动度(%)
*与假辐射组相比,P<0.05,**与假辐射组相比,P<0.01;
△与辐射组相比,P<0.05,△△与辐射组相比,P<0.01。
由表3可知:停药7d即辐射后21d,辐射对照组与假辐射组比较,辐射对照组A+B级精子比例有减少,而C、D级精子比例明显增加(p<0.05);各给药组与辐射对照组比较,A+B级精子比例有增加,C级精子和D级精子比例下降,其中160mg/(kg.d)组有统计学意义(p<0.01)。
3.大鼠精子活力参数变化检测
分别于停药后6h、7d(微波辐射后14d、21d),随机从各组动物中抽取5只,经腹腔注射1%戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后,剖开附睾和附睾管,0.3ml生理盐水(37℃孵育1h的生理盐水)冲洗后,采用SCA精子动态分析系统(西班牙Microptic公司)分析精子活力参数,包括曲线速度(VCL),直线速度(VSL),平均速度(VAP),鞭打频率(BCF)。结果见表4-6。
表4黄芪总苷给药7d(30mW/cm2微波辐射后7d)大鼠附睾精子活动参数
*与假辐射组相比,P<0.05;△与辐射组相比,P<0.05。
由表4可知:给药7d即辐射后7d,辐射对照组与假辐射组比较,辐射对照组精子活力参数VCL、VCL、VAP、BCF下降,其中VCL、VAP有统计学意义(p<0.05);各给药组与辐射对照组比较,活力参数增加,其中160mg/(kg.d)组VAP有统计学意义(p<0.05)。
表5黄芪总苷停药6h(30mW/cm2微波辐射后14d)大鼠附睾精子活动参数
*与假辐射组相比,P<0.05,**与假辐射组相比,P<0.01;
△与辐射组相比,P<0.05,△△与辐射组相比,P<0.01。
由表5可知:停药6h即辐射后14d,辐射对照组与假辐射组比较,辐射对照组精子活力参数VCL、VCL、VAP、BCF均明显下降(p<0.01);各给药组与辐射对照组比较,活力参数增加趋势,其中80mg/(kg.d)组VCL、VAP和160mg/(kg.d)组VCL、VSL、VAP有统计学意义(p<0.05)。
表6黄芪总苷停药7d(30mW/cm2微波辐射后21d)大鼠附睾精子活动参数
*与假辐射组相比,P<0.05;△与辐射组相比,P<0.05。
由表6可知:停药6h即辐射后14d,辐射对照组与假辐射组比较,辐射对照组精子活力参数VCL、VCL、VAP、BCF下降,其中VCL、VAP有统计学意义(p<0.05);各给药组与辐射对照组比较,活力参数增加,160mg/(kg.d)组VCL、VAP有统计学意义(p<0.05)。
4.大鼠精子运动参数变化检测
分别于停药后6h、7d(微波辐射后14d、21d),随机从各组动物中抽取5只,经腹腔注射1%戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后,剖开附睾和附睾管,0.3ml生理盐水(37℃孵育1h的生理盐水)冲洗后,采用SCA精子动态分析系统(西班牙Microptic公司)分析精子运动参数包括平均振幅(ALH),线性指数(LIN),直线至顺(STR),振动指数(WOB)。结果见表7-9。
表7黄芪总苷给药7d(30mW/cm2微波辐射后7d)大鼠附睾精子运动参数
*与假辐射组相比,P<0.05;△与辐射组相比,P<0.05。
由表7可知:给药7d即辐射后7d,辐射对照组与假辐射组比较,辐射对照组精子运动参数ALH下降,LIN、STR、WOB增加,其中ALH、LIN有统计学意义(p<0.05);各给药组与辐射对照组比较,ALH有增加趋势,LIN、STR、WOB有下降趋势,其中ALH、LIN有统计学意义(p<0.05)。
表8黄芪总苷停药6h(30mW/cm2微波辐射后14d)大鼠附睾精子运动参数
*与假辐射组相比,P<0.05;△与辐射组相比,P<0.05。
由表8可知:停药6h即辐射后14d,辐射对照组与假辐射组比较,辐射对照组精子运动参数VCL下降(p<0.05),WOB升高(p<0.05);各给药组与辐射对照组比较,160mg/(kg.d)组ALH、WOB有统计学意义(p<0.05)。
表9黄芪总苷停药7d(30mW/cm2微波辐射后21d)大鼠附睾精子运动参数
由表9可知:停药7d即辐射后21d,辐射对照组与假辐射组比较,辐射对照组精子运动参数ALH下降趋势,LIN、STR、WOB增加趋势,各给药组与辐射对照组比较,运动参数ALH有升高趋势,LIN、STR、WOB有下降趋势。
实施例2黄芪总苷对微波辐射致大鼠精子畸形率的影响
取75只二级雄性Wistar大鼠,随机分成5组,分为假辐射组、辐射对照组、40mg/(kg.d)黄芪总苷组、80mg/(kg.d)黄芪总苷和160mg/(kg.d)黄芪总苷组,每组15只。用军事医学科学院微波辐射源对其进行全身均匀辐射,微波辐射源的平均功率密度为30mW/cm2,辐射15分钟。各组大鼠于辐射后当天开始灌胃给药,每天1次,连续14d,药物浓度分别为4mg×ml-1、8mg×ml-1、16mg×ml-1,注射剂的溶剂为蒸馏水,其中假辐射组大鼠的黄芪总苷注射量为0,即仅注射蒸馏水。
分别于给药7d(辐射后7d),停药后6h、7d(微波辐射后14d、21d),随机从各组动物中抽取5只,经腹腔注射1%戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后,剖开附睾和附睾管,0.3ml生理盐水冲洗,制成精子悬液,涂片和HE染色后采用莱卡D6000光学显微镜观察精子头部形态学改变,参照大鼠畸形精子分类方法,计数完整精子(有头有尾)中头部畸形(包括大头、小头、尖头、双头、香蕉、无钩、不定形等)的精子数,每只大鼠计数500~1000个精子,计算精子畸形率=精子畸形数/1000。结果见表10。
表10黄芪总苷对30mW/cm2微波辐射后大鼠附睾精子畸形率影响(‰)
*与假辐射组相比,P<0.05;△与辐射组相比,P<0.05。
由表9精子畸形率计数结果可知:辐射对照组与假辐射组比较,辐射后7d、14d、21d畸形率均升高,其中辐射后7d和14d有统计学意义(p<0.05);各剂量黄芪总苷组与假辐射组比较,给药7d、停药后6h、7d精子畸形率有增加趋势。各剂量黄芪总苷组与辐射对照组比较,给药7d、停药后6h、7d精子畸形率均下降,其中给药7d、停药后6h 80mg/(kg.d)和160mg/(kg.d)黄芪总苷组变化有统计学意义(p<0.05)。
实施例3黄芪总苷对微波辐射致大鼠睾丸组织结构的影响
取75只二级雄性Wistar大鼠,随机分成5组,分为假辐射组、辐射对照组、40mg/(kg.d)黄芪总苷组、80mg/(kg.d)黄芪总苷和160mg/(kg.d)黄芪总苷组,每组15只。用军事医学科学院微波辐射源对其进行全身均匀辐射,微波辐射源的平均功率密度为30mW/cm2,辐射15分钟。各组大鼠于辐射后当天开始灌胃给药,每天1次,连续14d,药物浓度分别为4mg×ml-1、8mg×ml-1、16mg×ml-1,注射剂的溶剂为蒸馏水,其中假辐射组大鼠的黄芪总苷注射量为0,即仅注射蒸馏水。
分别于给药7d(辐射后7d),停药后6h、7d(微波辐射后14d、21d)处死大鼠,取大鼠睾丸组织,10%缓冲福尔马林固定后,常规梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,切片厚2.5μm,梯度乙醇脱腊至水,苏木素染细胞核,70%盐酸乙醇分化,1%乙醇伊红染色,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固,光镜观察观察睾丸组织的修复情况并照像。结果见图6-图14。
图6-图14是黄芪总苷对30mW/cm2微波辐射大鼠睾丸组织结构影响的观察结果,其中,图6为给药7d(辐射后7d)假辐射组睾丸组织结构(标尺为50微米),图7为给药7d(辐射后7d)辐射对照组大鼠睾丸结构(标尺为50微米),图8为给药7d(辐射后7d)40mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸结构(标尺为50微米),图9为给药7d(辐射后7d)80mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸结构(标尺为50微米),图10为给药7d(辐射后7d)160mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸结构(标尺为50微米),图11为停药后6h(辐射后14d)辐射对照组大鼠睾丸结构(标尺为50微米),图12为停药后6h(辐射后14d)40mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸结构(标尺为50微米),图13为停药后6h(辐射后14d)80mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸结构(标尺为50微米),图14为停药后6h(辐射后14d)160mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸(标尺为50微米)。结果显示,与辐射组相比较,给予黄芪总苷能改善辐射致睾丸组织的损伤。
实施例4黄芪总苷对微波辐射致大鼠睾丸超微结构的影响
取75只二级雄性Wistar大鼠,随机分成5组,分为假辐射组、辐射对照组、40mg/(kg.d)黄芪总苷组、80mg/(kg.d)黄芪总苷和160mg/(kg.d)黄芪总苷组,每组15只。用军事医学科学院微波辐射源对其进行全身均匀辐射,微波辐射源的平均功率密度为30mW/cm2,辐射15分钟。各组大鼠于辐射后当天开始灌胃给药,每天1次,连续14d,药物浓度分别为4mg×ml-1、8mg×ml-1、16mg×ml-1,注射剂的溶剂为蒸馏水,其中假辐射组大鼠的黄芪总苷注射量为0,即仅注射蒸馏水。
分别于给药7(辐射后7d),停药后6h、7d(微波辐射后14d、21d)处死大鼠,取新鲜睾丸组织1mm3,放入2.5%戊二醛固定2h,1%锇酸后固定2h,梯度乙醇和丙酮脱水,Epon812包埋,半薄切片定位后,制作超薄切片,醋酸铀和柠檬酸铅双重染色,透射电镜观察睾丸组织的修复情况并拍照保存。结果见图15-图19。
图15-图19是停药后6h(辐射后14d)黄芪总苷对30mW/cm2微波辐射大鼠睾丸组织超微结构影响的观察结果,图15为假辐射组大鼠睾丸组织超微结构(标尺为500纳米),图16为辐射组大鼠睾丸组织超微结构(标尺为500纳米),图17为40mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸组织超微结构(标尺为2微米),图18为80mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸组织超微结构(标尺为2微米),图19为160mg/(kg.d)黄芪总苷组大鼠睾丸组织超微结构(标尺为500纳米)。结果显示,与辐射组相比较,给予黄芪总苷能改善微波辐射致睾丸组织超微结构的损伤。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,本领域的普通技术人员可以理解:在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
Claims (1)
1.黄芪总苷作为唯一活性成分在制备药物中的用途,所述药物用于预防或治疗微波辐射致生殖器官损伤。
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