CN106770230A - 一种醋酸泼尼松快速检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种由醋酸泼尼松的快速检测的方法，待测样品经提取、洗涤与氯化三苯四氮唑(TTC)溶液和强碱溶液反应显色步骤，并根据颜色判断是否含有醋酸泼尼松。检测方法操作简便、分析成本低，待测样品经预处理后再与检测剂反应，可以排除相关因素的干扰，更有利于对溶液颜色的观察，对样品中是否有醋酸泼尼松做出更准确地判断。本发明的检测方法专属性强，通过提取、洗涤、萃取分离除去干扰物质，使显色反应的灵敏度提高、检测结果正确率高、显色反应迅速，现象明显，适用于现场快速检测。
Description
（一）技术领域
本发明属于分析化学检测领域，涉及一种醋酸泼尼松的快速检测方法。
（二）背景技术
近年来，人们对健康和药物安全愈来愈重视，由于保健品和中成药大部分来源于天然物质，疗效温和，具有较高安全性，在哮喘等慢性疾病的治疗中受到国内外患者的青睐，但其存在起效慢或效果不明显的缺点。为谋取暴利，部分不法分子利用人们急于见效的心理，在没有经过任何药理和毒理研究的情况下，在其中随意非法添加起效快、疗效确切的具有止咳作用的化学药品，目前常见的有茶碱、地塞米松等。保健品和中成药的化学成分非常复杂，不同厂家工艺不统一，不能与化学药品一样进行全程检测，非法添加的化学药物不易被识别，极具隐蔽性和欺骗性。消费者在不知情的情况下长期服用，极易诱发不良反应，使健康受到不同程度的危害，严重者甚至可导致死亡。
醋酸泼尼松(Prednisone Acetate)是目前市场上占有率较高的肾上腺皮质激素类止咳平喘药物，主要用于过敏性与自身免疫性炎症性疾病，适用于结缔组织病，系统性红斑狼疮，重症多肌炎，严重的支气管哮喘，皮肌炎，血管炎等过敏性疾病，目前报道的主要不良反应为柯兴氏征，诱发神经精神症状以及消化系统溃疡、骨质疏松、生长发育受抑制、并发和加重感染等，另外醋酸泼尼松与对乙酰氨基酚多种药物之间可发生相互作用，对人体产生不同程度的危害。由于醋酸泼尼松止咳起效快速显著，且便宜易得，被非法添加到止咳类保健品和中成药中的风险指数很高，因此亟需开发快速、可靠的醋酸泼尼松的检测方法，以保障人民群众的饮食用药安全。
醋酸泼尼松化学名为17α，21-二羟基孕甾-1，4-二烯-3，11，20-三酮21-醋酸酯，白色或几乎白色的结晶性粉末，不溶于水，微溶于乙醇、乙酸乙酯，略溶于丙酮，易溶于氯仿。化学结构中具有C17-α-醇酮基团，具有还原性。在强碱性条件下能将四氮唑盐定量地还原为有色甲臜(formazan)，呈色，因此利用四氮唑比色反应可以快速鉴别醋酸泼尼松。但中成药和保健品中成分复杂，有大量有色物质(如植物色素等)，他们中有些能溶于有机溶剂，而有些则可溶于水，如不分离，则会严重干扰快速检测方法的显色反应的观察，难以得出正确的判断结果。
目前，国家药品监督管理局批准的检查中成药中非法添加醋酸泼尼松的快速检查为薄层色谱法（TLC法），对操作人员的要求较高，不利于在基层部门广泛开展，人们需要一种操作简单、速度较快、成本较低的检测方法，以便快速鉴别出保健品和中成药中是否添加醋酸泼尼松。利用化学反应的快速鉴别法，以其成本低、反应迅速、现象易观察、操作步骤简单等优点得到很多人的重视，非常适合在基层尤其是偏远地区的推广。本发明针对目前市场上的大部分保健品和中成药提供一种准确快速的醋酸泼尼松非法添加的检测方法，以满足检验及监管的需要。
（三）发明内容
本发明针对现有技术中存在的上述缺点，提供一种醋酸泼尼松的快速检测方法，具有分析成本低、不需要对照品及较大型分析仪器、专属性强、灵敏度高、检验结果正确率高等优点，适用于中成药和保健品中是否添加醋酸泼尼松的现场快速检测。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种醋酸泼尼松的快速检测方法，检测步骤为：
1)取胶囊剂的内容物、片剂（包衣片除去着色包衣）或颗粒剂，研细，取0.5g（1/3～1次口服剂量）作为待测样品；或取口服溶液3ml（1/3～1次口服剂量）作为待测样品；
2) 取待测样品，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇2～4min，离心或静置使分层；
3) 取2)上层溶液，置具塞离心管中，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心或静置使分层；
4)取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加0.5%氯化三苯四氮唑无水乙醇试液5滴，混合均匀，加3)上层溶液5滴，2分钟内溶液颜色变红色为待测样品中含醋酸泼尼松。
2.根据权利要求1所述的一种醋酸泼尼松的快速检测方法，其特征为：
步骤1)中，取胶囊剂的内容物、片剂或颗粒剂（1/3～1次口服剂量），研细，有利于目标物醋酸泼尼松溶解；若片剂为有色包衣，应除去有色包衣，减小色素干扰结果的判定；若供试品为口服溶液，取3ml（1/3～1次口服剂量）试验；
步骤2)中，盐酸溶液为水溶液，浓度为0.5～1mol/L，优选lmol/L；
步骤2)中选择的有机萃取液乙酸乙酯，为普通化学试剂,实验中分别用乙醚、氯仿进行了试验，在碱性条件下，乙醚、氯仿乳化严重，不利于与水相分层，乙醚挥发性更强，氯仿更不利于环保，本试验优化萃取液为乙酸乙酯；
步骤3)中，氢氧化钠溶液为水溶液，浓度为0.5～1mol/L，优选lmol/L；
步骤4)中，氯化三苯四氮唑试液为氯化三苯四氮唑的无水乙醇溶液，浓度为0.5%；
步骤4)中1mol/L氢氧化钠溶液：取醋酸泼尼松5mg，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇2～4min，离心使分层，取上层溶液，置具塞离心管中，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心，上层液作为供试品溶液，本试验优化1mol/L氢氧化钠溶液用量1滴（40～60μl）；
步骤4)中供试品溶液溶液和氯化三苯四氮唑试液用量的优化：
取醋酸泼尼松5mg，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇2～4min，离心使分层，取上层溶液，置具塞离心管中，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心，上层液作为供试品溶液，本试验优化氯化三苯四氮唑试液和供试品溶液的用量均为5滴；
步骤4)中实验反应温度和观测时间：
本试验在常温条件下，阳性反应在20秒后开始，能够观测到试剂颜色逐渐变红，2分钟后颜色不再加深。
本发明与现有技术相比，有益效果如下：
1)待测样品通过提取、洗涤、与氯化三苯四氮唑溶液和强碱溶液反应显色三步即可检出样品中是否含有醋酸泼尼松，且所用提取液、洗涤液、检测剂均为普通的化学试剂，操作简便，分析成本低；
2)待测样品经预处理后再与检测剂反应，可以排除相关因素的的干扰，更有利于对溶液颜色的观察，对样品中是否有醋酸泼尼松做出更准确地判断；
3)本发明的检测方法中，所用提取液、洗涤液、萃取液、检测剂的专属性强，通过提取、洗涤、萃取过程中三次利用不同物质溶解性差异分离除去干扰物质，使显色反应的灵敏度提高、检测结果正确率高、显色反应迅速，现象明显，适用于现场快速检测。
（四）具体实施方式
下面结合具体实施例进一步描述本发明，在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均包括在本发明的范围内。
实施例1: 颗粒的检测
试剂配制：提取液为乙酸乙酯；1mol/L盐酸溶液：取盐酸9ml，加水适量使成100ml，摇匀；1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水100ml，振摇使溶解；氯化三苯四氮唑试液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加无水乙醇使溶解为100ml。
待测样品：小儿肺热咳喘颗粒（上海医药集团青岛国风药业有限公司生产，批号：160304，规格3g/袋，LC-MS/MS方法测定本品不含醋酸泼尼松）。
检测方法，步骤为：取1袋，研细，取0.5g，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阴性反应（不显红色）。
结果分析：本品不含醋酸泼尼松，结果与实际相符。
实施例2: 模拟阳性颗粒样品的检测
试剂配制：提取液为乙酸乙酯；1mol/L盐酸溶液：取盐酸9ml，加水适量使成100ml，摇匀；1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水100ml，振摇使溶解；氯化三苯四氮唑试液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加无水乙醇使溶解为100ml。
待测样品：小儿肺热咳喘颗粒（上海医药集团青岛国风药业有限公司生产，批号：160304，规格3g/袋），每袋样品中加入醋酸泼尼松10mg。
检测方法，步骤为：取加入醋酸泼尼松10mg的1袋样品，研细，取0.5g，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阳性反应（显红色）。
结果分析：本品为加入醋酸泼尼松的模拟阳性样品，结果检出醋酸泼尼松，结果与实际相符。
实施例3: 糖浆的检测
试剂配制：提取液为乙酸乙酯；1mol/L盐酸溶液：取盐酸9ml，加水适量使成100ml，摇匀；1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水100ml，振摇使溶解；氯化三苯四氮唑试液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加无水乙醇使溶解为100ml。
待测样品：强力批把露（潍坊天阳药业有限公司生产，批号：160401，规格180ml/瓶，LC-MS/MS方法测定本品不含醋酸泼尼松）
检测方法，步骤为：取3ml，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阴性反应（不显红色）。
结果分析：本品不含醋酸泼尼松，结果与实际相符。
实施例4: 模拟阳性糖浆样品的检测
试剂配制：提取液为乙酸乙酯；1mol/L盐酸溶液：取盐酸9ml，加水适量使成100ml，摇匀；1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水100ml，振摇使溶解；氯化三苯四氮唑试液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加无水乙醇使溶解为100ml。
待测样品：强力批把露（潍坊天阳药业有限公司生产，批号：160401，规格180ml/瓶；取3ml，加醋酸泼尼松2mg）
检测方法，步骤为：取加入醋酸泼尼松2mg 的口服溶液3ml，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阳性反应（显红色）。
结果分析：本品为加入醋酸泼尼松的模拟阳性样品，结果检出醋酸泼尼松，结果与实际相符。
实施例5:片剂的检测
试剂配制：提取液为乙酸乙酯；1mol/L盐酸溶液：取盐酸9ml，加水适量使成100ml，摇匀；1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水100ml，振摇使溶解；氯化三苯四氮唑试液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加无水乙醇使溶解为100ml。
待测样品：珍菊降压片（江苏中兴药业有限公司生产，批号：160401，规格0.24g，LC-MS/MS方法测定本品不含醋酸泼尼松）
检测方法，步骤为：取5片，除去着色包衣，研细，取0.5g，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阴性反应（不显红色）。
结果分析：本品不含醋酸泼尼松，结果与实际相符。
实施例6模拟阳性片剂样品的检测
试剂配制：提取液为乙酸乙酯；1mol/L盐酸溶液：取盐酸9ml，加水适量使成100ml，摇匀；1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水100ml，振摇使溶解；氯化三苯四氮唑试液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加无水乙醇使溶解为100ml。
待测样品：珍菊降压片（江苏中兴药业有限公司生产，批号：160401，规格0.24g），取5片，除去着色包衣，加醋酸泼尼松10mg。
检测方法，步骤为：取5片，除去着色包衣，加醋酸泼尼松10mg，研细，取0.5g，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阳性反应（显红色）。
结果分析：本品为加入醋酸泼尼松的模拟阳性样品，结果检出醋酸泼尼松，结果与实际相符。
Claims (2)
1.一种醋酸泼尼松的快速检测方法，检测步骤为：
1)取胶囊剂的内容物、片剂（包衣片除去着色包衣）或颗粒剂，研细，取0.5g（1/3～1次口服剂量）作为待测样品；或取口服溶液3ml（1/3～1次口服剂量）作为待测样品；
2) 取待测样品，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇2～4min，离心或静置使分层；
3) 取2)上层溶液，置具塞离心管中，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心或静置使分层；
4)取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加0.5%氯化三苯四氮唑无水乙醇试液5滴，混合均匀，加3)上层溶液5滴，2分钟内溶液颜色变红色为待测样品中含醋酸泼尼松。
2.根据权利要求1所述的一种醋酸泼尼松的快速检测方法，其特征为：
步骤1)中，取胶囊剂的内容物、片剂或颗粒剂（1/3～1次口服剂量），研细，有利于目标物醋酸泼尼松溶解；若片剂为有色包衣，应除去有色包衣，减小色素干扰结果的判定；若供试品为口服溶液，取3ml（1/3～1次口服剂量）试验；
步骤2)中，盐酸溶液为水溶液，浓度为0.5～1mol/L，优选lmol/L；
步骤2)中选择的有机萃取液乙酸乙酯，为普通化学试剂,实验中分别用乙醚、氯仿进行了试验，在碱性条件下，乙醚、氯仿乳化严重，不利于与水相分层，乙醚挥发性更强，氯仿更不利于环保，本试验优化萃取液为乙酸乙酯；
步骤3)中，氢氧化钠溶液为水溶液，浓度为0.5～1mol/L，优选lmol/L；
步骤4)中，氯化三苯四氮唑试液为氯化三苯四氮唑的无水乙醇溶液，浓度为0.5%；
步骤4)中1mol/L氢氧化钠溶液：取醋酸泼尼松5mg，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇2-4min，离心使分层，取上层溶液，置具塞离心管中，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心，上层液作为供试品溶液，本试验优化1mol/L氢氧化钠溶液用量1滴（40～60μl）；
步骤4)中供试品溶液溶液和氯化三苯四氮唑试液用量的优化：
取醋酸泼尼松5mg，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇2-4min，离心使分层，取上层溶液，置具塞离心管中，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心，上层液作为供试品溶液，本试验优化氯化三苯四氮唑试液和供试品溶液的用量均为5滴；
步骤4)中实验反应温度和观测时间：
本试验在常温条件下，阳性反应在20秒后开始，能够观测到试剂颜色逐渐变红，2分钟后颜色不再加深。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170531 |
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