CN106814065A - 一种氢化可的松快速检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及分析化学检测技术领域,特别涉及一种氢化可的松的快速检测方法，取待测样品，加入盐酸溶液，振摇，再加乙酸乙酯，振摇，离心或静置使分层；取离心液或上层溶液，加入氢氧化钠溶液，振摇，离心或静置使分层；将氢氧化钠溶液滴在白色滴板上，滴加氯化三苯四氮唑试液，混合均匀，滴加供试品溶液，观察颜色变化。本发明方法操作简便，分析成本低；排除相关因素的干扰，更有利于对溶液颜色的观察，所用提取液、洗涤液、萃取液、检测剂的专属性强，通过提取、洗涤、萃取过程中三次利用不同物质溶解性差异分离除去干扰物质，使显色反应的灵敏度提高、检测结果正确率高、显色反应迅速，现象明显，适用于现场快速检测。
Description
技术领域
本发明涉及分析化学检测领域，涉及一种氢化可的松的快速检测方法。
背景技术
近年来，人们对健康和药物安全的愈来愈重视，由于保健品、中成药大部分来源于天然物质，疗效温和，具有较高安全性，在哮喘等慢性疾病的治疗中受到国内外患者的青睐，但其存在起效慢或效果不明显的缺点。为谋取暴利，部分不法分子利用人们急于见效的心理，在没有经过任何药理和毒理研究的情况下，在其中随意非法添加起效快、疗效确切的化学药物具有止咳作用的化学药品，目前常见的有茶碱、地塞米松等。保健品、中成药的化学成分非常复杂，不同厂家工艺不统一，不能与化学药品一样进行全程检测，非法添加添加的化学药物不易被识别，极具隐蔽性和欺骗性。消费者在不知情的情况下长期服用，极易诱发不良反应，使健康受到不同程度的危害，严重者甚至可导致死亡。
氢化可的松(Hydrocortisone，HC)属肾上腺皮质激素类药，在临床上广泛使用，是我国产量最大的激素类药物。氢化可的松的作用主要是抗炎、免疫抑制、抗毒作和抗休克等。目前报道的主要不良反应为过敏性休克、糖皮质激素停药综合征等，对人体危害很大。由于氢化可的松止咳起效快速显著，且便宜易得，具有被非法添加到止咳类保健品、食品和中成药中的风险，因此亟需开发快速、可靠的氢化可的松的检测方法，以保障人民群众的饮食用药安全。
目前，国家药品监督管理局批准的检查中成药中非法添加氢化可的松的快速检查为薄层色谱法（TLC法）和液相二级质谱法（LC-MS/MS法），对操作人员的要求较高，不利于在基层部门广泛开展，人们需要一种操作简单、速度较快、成本较低的检测方法，以便快速鉴别出保健品、食品、中成药中是否添加氢化可的松。利用化学反应的快速鉴别法，以其成本低、反应迅速、现象易观察、操作步骤简单等优点得到很多人的重视，非常适合在基层尤其是偏远地区的推广。本发明针对目前市场上的大部分保健品、食品、中成药提供一种准确快速的氢化可的松非法添加的检测方法，以满足检验及监管的需要。
发明内容
本发明针对现有技术中氢化可的松检测中存在的检测要求高、成本高、不够快速和灵活的缺点，提供一种氢化可的松的快速检测方法，具有分析成本低、不需要对照品及较大型分析仪器、专属性强、灵敏度高、检验结果正确率高等优点，适用于中成药、保健食品和食品中是否添加氢化可的松的现场快速检测。
氢化可的松化学名为11β，17α，21-三羟基孕甾-4-烯-3,20-二酮，白色或几乎白色结晶性粉末，无臭。初无味，随后又持续的苦味；遇光易变质。不溶于水。在强碱性条件下能将四氮唑盐定量地还原为有色甲臜(formazan)，呈色，因此利用四氮唑比色反应可以快速鉴别氢化可的松。但中成药、保健食品和食品中成分复杂，有大量有色物质(如植物色素等)，他们中有些能溶于有机溶剂，而有些则可溶于水，如不分离，则会严重干扰快速检测方法的显色反应的观察，难以得出正确的判断结果。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种氢化可的松的快速检测方法，检测步骤为：
（1）取待测样品，加入盐酸溶液，振摇，再加乙酸乙酯，振摇，离心或静置使分层；
（2）取离心液或上层溶液，加入氢氧化钠溶液，振摇，离心或静置使分层；
（3）将氢氧化钠溶液滴在白色滴板上，滴加氯化三苯四氮唑试液，混合均匀，滴加步骤（2）得到的离心液或上层溶液，观察颜色变化。
步骤（1）中，取胶囊剂的内容物、片剂或颗粒剂（1/3～1次口服剂量），研细，有利于目标物氢化可的松溶解；若片剂为有色包衣，应除去有色包衣，减小色素干扰结果的判定；若供试品为口服溶液，取3ml（1/3～1次口服剂量）试验。
步骤（1）中，盐酸溶液为水溶液，浓度为0.5～1mol/L，优选lmol/L。
步骤（1）中选择的有机萃取液乙酸乙酯，为普通化学试剂,实验中分别用乙醚、氯仿进行了试验，在碱性条件下，乙醚、氯仿乳化严重，不利于与水相分层，乙醚挥发性更强，氯仿更不利于环保，本试验优化萃取液为乙酸乙酯。
步骤（2）、（3）中，氢氧化钠溶液为水溶液，浓度为0.5～1mol/L，优选lmol/L。
步骤（3）中，氯化三苯四氮唑试液为氯化三苯四氮唑的无水乙醇溶液，浓度为0.5%。
步骤（3）中1mol/L氢氧化钠溶液：取氢化可的松5mg，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇2-4min，离心使分层，取上层溶液，置具塞离心管中，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心，上层液作为供试品溶液，本试验优化1mol/L氢氧化钠溶液用量1滴（20～40μl）。
步骤（3）中供试品溶液溶液和氯化三苯四氮唑试液用量的优化。
取氢化可的松5mg，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇2-4min，离心使分层，取上层溶液，置具塞离心管中，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心，上层液作为供试品溶液，本试验优化氯化三苯四氮唑试液和供试品溶液的用量均为5滴。
步骤（3）中实验反应温度和观测时间：
本试验在常温条件下，阳性反应在20秒后开始，能够观测到试剂颜色逐渐变红，2分钟后颜色不再加深。
本发明与现有技术相比，有益效果如下：
（1）待测样品通过提取、洗涤、与氯化三苯四氮唑溶液和强碱溶液反应显色三步即可检出样品中是否含有氢化可的松，且所用提取液、洗涤液、检测剂均为普通的化学试剂，操作简便，分析成本低；
（2）待测样品经预处理后再与检测剂反应，可以排除相关因素的的干扰，更有利于对溶液颜色的观察，对样品中是否有氢化可的松做出更准确地判断；
（3）本发明的检测方法中，所用提取液、洗涤液、萃取液、检测剂的专属性强，通过提取、洗涤、萃取过程中三次利用不同物质溶解性差异分离除去干扰物质，使显色反应的灵敏度提高、检测结果正确率高、显色反应迅速，现象明显，适用于现场快速检测,氢化可的松最小检出限0.3mg。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步描述本发明，在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均包括在本发明的范围内。
实施例1:片剂的检测
试剂配制：提取液为乙酸乙酯；1mol/L盐酸溶液：取盐酸9ml，加水适量使成100ml，摇匀；1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水100ml，振摇使溶解；氯化三苯四氮唑试液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加无水乙醇使溶解为100ml。
待测样品：通痹片（烟台渤海制药集团有限公司生产，批号：131101，规格0.3g，LC-MS/MS方法测定本品不含氢化可的松）
检测方法，步骤为：取5片，除去着色包衣，研细，取0.5g，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阴性反应（不显红色）。
结果分析：本品不含氢化可的松，结果与实际相符。
实施例2：模拟阳性片剂样品的检测
试剂配制：提取液为乙酸乙酯；1mol/L盐酸溶液：取盐酸9ml，加水适量使成100ml，摇匀；1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水100ml，振摇使溶解；氯化三苯四氮唑试液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加无水乙醇使溶解为100ml。
待测样品：通痹片（烟台渤海制药集团有限公司生产，批号：131101，规格0.3g），取5片，除去着色包衣，加氢化可的松10mg。
检测方法，步骤为：取5片，除去着色包衣，加氢化可的松10mg，研细，取0.5g，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阳性反应（显红色）。
结果分析：本品为加入氢化可的松的模拟阳性样品，结果检出氢化可的松，结果与实际相符。
实施例3: 糖浆的检测
待测样品：强力批把露（潍坊天阳药业有限公司生产，批号：160401，规格180ml/瓶，LC-MS/MS方法测定本品不含氢化可的松）
检测方法，步骤为：取3ml，置具塞离心管中，加0.5mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的0.5mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取0.5mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阴性反应（不显红色）。
结果分析：本品不含氢化可的松，结果与实际相符。
实施例4: 模拟阳性糖浆样品的检测
待测样品：强力批把露（潍坊天阳药业有限公司生产，批号：160401，规格180ml/瓶；取3ml，加氢化可的松2mg）
检测方法，步骤为：取加入氢化可的松2mg 的口服溶液3ml，置具塞离心管中，加0.5mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的0.5mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取0.5mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阳性反应（显红色）。
结果分析：本品为加入氢化可的松的模拟阳性样品，结果检出氢化可的松，结果与实际相符。
实施例5: 颗粒的检测
试剂配制：提取液为乙酸乙酯；1mol/L盐酸溶液：取盐酸9ml，加水适量使成100ml，摇匀；1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水100ml，振摇使溶解；氯化三苯四氮唑试液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加无水乙醇使溶解为100ml。
待测样品：小儿肺热咳喘颗粒（上海医药集团青岛国风药业有限公司生产，批号：160304，规格3g/袋，LC-MS/MS方法测定本品不含氢化可的松）。
检测方法，步骤为：取1袋，研细，取0.5g，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阴性反应（不显红色）。
结果分析：本品不含氢化可的松，结果与实际相符。
实施例6: 模拟阳性颗粒样品的检测
试剂配制：提取液为乙酸乙酯；1mol/L盐酸溶液：取盐酸9ml，加水适量使成100ml，摇匀；1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水100ml，振摇使溶解；氯化三苯四氮唑试液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加无水乙醇使溶解为100ml。
待测样品：小儿肺热咳喘颗粒（上海医药集团青岛国风药业有限公司生产，批号：160304，规格3g/袋），每袋样品中加入氢化可的松10mg。
检测方法，步骤为：取加入氢化可的松10mg的1袋样品，研细，取0.5g，置具塞离心管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇3min，离心使分层，取上层溶液，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心使分层，上层液作为供试品溶液；取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加氯化三苯四氮唑试液5滴，混合均匀，加供试品溶液5滴，颜色呈阳性反应（显红色）。
结果分析：本品为加入氢化可的松的模拟阳性样品，结果检出氢化可的松，结果与实际相符。
检出限试验
1) 取氢化可的松10mg，加乙酸乙酯10ml溶解，分别精密量取0（1号样品）、0.1（2号样品）、,0.3（3号样品）、0.5（4号样品）、1（5号样品）和2ml（6号样品），分别置具塞离心管中，氮气吹干，加1mol/L盐酸溶液5ml，振摇1min，再加乙酸乙酯5ml，强烈振摇2min，离心使分层；
2)取1)上层溶液，置具塞离心管中，加等体积的1mol/L氢氧化钠溶液，振摇1min，离心。
3)取1mol/L氢氧化钠溶液1滴，置白色瓷点滴板上，加0.5%氯化三苯四氮唑无水乙醇试液5滴，混合均匀，加2) 上层溶液5滴，3、4、5和6号样品2分钟内溶液颜色变红色。本试验氢化可的松最小检出限0.3mg。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限制，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种氢化可的松的快速检测方法，其特征在于包括以下步骤:
（1）取待测样品，加入盐酸溶液，振摇，再加乙酸乙酯，振摇，离心或静置使分层；
（2）取离心液或上层溶液，加入氢氧化钠溶液，振摇，离心或静置使分层；
（3）将氢氧化钠溶液滴在白色滴板上，滴加氯化三苯四氮唑试液，混合均匀，滴加步骤（2）得到的离心液或上层溶液，观察颜色变化。
2.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于步骤（1）中盐酸溶液浓度为0.5～1mol/L，步骤（2）和（3）中氢氧化钠溶液浓度为0.5～1mol/L。
3.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于待测样品与盐酸溶液的比例为0.5g：ml或者3ml：5ml。
4.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于步骤（1）中待测样品与乙酸乙酯的比例为0.5g：5ml或者3ml：5ml。
5.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于步骤（2）中离心液或上层溶液与加入的氢氧化钠溶液的体积比为1:1。
6.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于氯化三苯四氮唑试液为氯化三苯四氮唑的无水乙醇溶液，浓度为0.5%。
7.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于取胶囊剂的内容物、片剂或颗粒剂，研细，取0.5g作为待测样品；或取口服溶液3ml作为待测样品。
8.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于步骤（3）中1mol/L的氢氧化钠溶液滴加1滴；氯化三苯四氮唑试液和离心液或上层溶液的滴加量均为5滴。
9.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于步骤（3）中滴加完毕后在常温条件下，反应在20秒后开始，观测试剂颜色是否逐渐变红，观测时间为2分钟。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: Xinluo Avenue high tech Zone of Ji'nan City, Shandong Province, No. 2749 250101 Applicant after: Food and medicine Inspection Research institute of Shandong Province Address before: Xinluo Avenue high tech Development Zone Ji'nan city Shandong province 250101 No. 2749 drug inspection office building 1-101 Applicant before: Food and medicine Inspection Research institute of Shandong Province |
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| CB02 | Change of applicant information | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170609 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |