CN106754392A - 一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法 - Google Patents

一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106754392A
CN106754392A CN201710181106.XA CN201710181106A CN106754392A CN 106754392 A CN106754392 A CN 106754392A CN 201710181106 A CN201710181106 A CN 201710181106A CN 106754392 A CN106754392 A CN 106754392A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dying
tap
chlamydomonas reinhardtii
activating
state
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710181106.XA
Other languages
English (en)
Inventor
孟丹
赵辉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin University of Commerce
Original Assignee
Tianjin University of Commerce
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin University of Commerce filed Critical Tianjin University of Commerce
Priority to CN201710181106.XA priority Critical patent/CN106754392A/zh
Publication of CN106754392A publication Critical patent/CN106754392A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor

Landscapes

  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法。本发明按照以下步骤进行：将平板上划有濒死亡状态的衣藻的琼脂块用手术刀切下，将琼脂块转移到装有液体TAP培养基的小锥形瓶中，23±0.5℃，放置到摇床上避光摇晃过夜，摇床的转速为90rpm，次日放到23±0.5℃，8000Lx光强下，14h光照/10h避光的光周期培养环境中振荡培养24h，摇床的转速为180rpm；然后取不含琼脂块的上清培养基涂布到含有50μg/ml抗菌剂的TAP固体培养基上，放置到23±0.5℃，8000Lx光强下，14h光照/10h避光的光周期培养5‑15天。本发明操作简单，成本低，有利于珍贵藻株的保存使用。

Description

一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法
技术领域
本发明涉及一种活化莱茵衣藻的方法，特别是一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法。
背景技术
莱茵衣藻是一种单细胞的低等藻类，属于绿藻门团藻目衣藻科衣藻属。在自然界中，被认为属于土壤生物。莱茵衣藻的采集地包括温带，热带和极地地区，被分离的地点包括淡水湖泊和池塘、污水池、海洋和微咸水、雪、花园和农业土壤、沙漠、森林、泥炭沼泽等。莱茵衣藻具有两根等长的鞭毛，具有大型的杯状叶绿体，能够进行光合作用。莱茵衣藻培养方式简单，花费低，生长周期短，并且在实验室中就可以进行大量的培养。莱茵衣藻是单倍体，并且已经完成了全基因组测序工作。衣藻生化技术、细胞技术与分子生物学技术都已经成熟。所以目前衣藻被作为模式生物被广泛应用于各种科学研究，包括与纤毛疾病相关的纤毛组装和摆动的研究，光合作用的研究，生物柴油的研究，金属离子污染毒害的研究，并且莱茵衣藻有望可以作为蛋白质的合成机器生产药用蛋白质。
为了方便在实验室中进行研究，莱茵衣藻野生型和突变体藻株通常保存在固体平板培养基上，在藻株无污染的情况下通常一个月进行一次活化，通过划线转接到新鲜的固体平板上。但是目前由于转接活化不及时、染菌或者突变体藻株的生长特性等原因，保存在固体平板上的藻株会出现生长状态不佳，濒死亡的状态，即使划线转接到新鲜的固体平板培养基上也不能进行生长，藻株逐渐死亡，不能获得藻落，最终导致藻株的死亡丢失。实验室需要再次从国外的衣藻库购买新的藻株，价格昂贵且不方便运输。同时可能导致实验室筛选获得的珍贵的突变体藻株的丢失，科研损失巨大。
发明内容
本发明的目的是提供一种活化濒死亡的莱茵衣藻的方法，解决目前实验室中藻株状态不佳进而死亡丢失的问题。
本发明的目的是这样实现的：将平板上划有濒死亡状态衣藻的琼脂块用手术刀切下，将琼脂块转移到装有液体TAP培养基的小锥形瓶中，23±0.5℃，放置到摇床上避光摇晃过夜，摇床的转速为90rpm，次日放到23±0.5℃，8000Lx光强下，14h光照/10h避光的光周期培养环境中振荡培养24h，摇床的转速为180rpm；然后取不含琼脂块的上清培养基涂布到含有50μg/ml抗菌剂的TAP固体培养基上，放置到23±0.5℃，8000Lx光强下，14h光照/10h避光的光周期培养5-15天，即可获得活化好的藻株克隆。
所述实验藻种为：莱茵衣藻，即Chlamydomonas reinhardtii。
所述TAP液体培养基为：Tris 2.42g/L，TAP盐溶液25ml/L，磷酸盐溶液0.375ml/L，微量金属元素溶液1ml/L，冰醋酸1ml/L，121℃高压蒸汽灭菌30min。所述TAP固体培养基为在液体培养基配置时加入15g/L的琼脂粉后，121℃高压蒸汽灭菌30min，倒平板。
所述的TAP盐溶液为：NH4Cl 15g/L，CaCl2·2H2O 2g/L，MgSO4·7H2O 4g/L；所述的磷酸盐溶液为：KH2PO4 144g/L，K2HPO4 288g/L；Hutner Trace Metal微量元素溶液为：EDTA二钠盐50g/L，H3BO3 11.4g/L，ZnSO4·7H2O 22g/L，CoCl·6H2O 1.61g/L，MnCl2·4H2O5.06g/L，CuSO4·5H2O 1.57g/L，(NH4)6Mo7O24·4H2O 1.1g/L，FeSO4·7H2O 4.99g/L，用KOH或者HCl调节pH至7.0。
所述的含有多菌灵的TAP固体培养基平板中加入的抗菌剂为多菌灵，多菌灵使用的终浓度为50μg/ml。
所述的多菌灵的加入方法为：将适量多菌灵加入到TAP培养基的冰醋酸成分中溶解后，再进行培养基的配置。
本发明的有益效果是：提供了一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法，操作简单，成本低，有效地解决了在实验室中使用莱茵衣藻进行科学研究时状态不佳的藻株死亡丢失的问题，有利于珍贵藻株的保存使用。此方法可以方便快速的活化濒死亡状态的莱茵衣藻，并获得无细菌污染的新鲜藻株克隆，避免重新购买藻种的昂贵费用，同时避免珍贵的突变体藻株的丢失。
本发明的优点是：
1.在最终的涂布平板中加入多菌灵，有效的防止新活化藻株染菌的问题。
2.将多菌灵溶解到冰醋酸中再进行TAP培养基的配置，有效的解决了多菌灵微溶于水，直接加入培养基中不能有效溶解进而影响抑菌作用的问题。
3.提供了一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法，由于莱茵衣藻作为模式生物被广泛应用于各方面的研究，所以该方法应用范围广，具有很好的推广价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步描述。
1.配置液体TAP培养基：所述TAP液体培养基为：Tris 2.42g/L，TAP盐溶液25ml/L，磷酸盐溶液0.375ml/L，Hutner Trace Metal微量元素溶液1ml/L，冰醋酸1ml/L，121℃高压蒸汽灭菌30min。所述的TAP盐溶液为：NH4Cl 15g/L，CaCl2·2H2O 2g/L，MgSO4·7H2O 4g/L；所述的磷酸盐溶液为：KH2PO4 144g/L，K2HPO4 288g/L；Hutner Trace Metal微量元素溶液为：EDTA二钠盐50g/L，H3BO3 11.4g/L，ZnSO4·7H2O 22g/L，CoCl·6H2O 1.61g/L，MnCl2·4H2O 5.06g/L，CuSO4·5H2O 1.57g/L，(NH4)6Mo7O24·4H2O 1.1g/L，FeSO4·7H2O 4.99g/L，用KOH或者HCl调节pH至7.0。
2.配置含有50μg/ml多菌灵的TAP固体培养基平板：在液体培养基配置时，先将适量多菌灵加入到TAP培养基的冰醋酸成分中溶解后，再进行培养基的配置，然后加入15g/L的琼脂粉后，121℃高压蒸汽灭菌30min，倒平板备用。
3.衣藻细胞的初活化：在超净工作台内将平板上划有濒死亡状态的衣藻的琼脂块用手术刀切下，将切下来的琼脂块转移到装有3ml液体TAP培养基的小锥形瓶中，23±0.5℃，用锡箔纸将锥形瓶包裹后，将其放置到摇床上90rpm慢速摇晃过夜。
4.衣藻细胞的再活化：次日将锥形瓶放到23±0.5℃，8000Lx光强下，14h/10(光照/黑暗)的光周期摇床上180rpm快速振荡培养24h，然后在超净工作台内取不含琼脂块的上清培养基，将其平均涂布到2个含有50μg/ml多菌灵的TAP固体培养基平板上，放置到23±0.5℃，8000Lx光强下，14h/10(光照/黑暗)的光周期培养5-15天，即可获得新生长出的藻株克隆。
5.活化藻株的保存：将活化好的藻株划线转接到新鲜的TAP固体培养基平板上，23±0.5℃，8000Lx光强下，14h/10(光照/黑暗)的光周期培养3-5天后，可用于后续实验的研究或者放到23±0.5℃的暗处进行保存备用。

Claims (6)

1.一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法，其特征是，按照以下步骤进行：将平板上划有濒死亡状态的衣藻的琼脂块用手术刀切下，将琼脂块转移到装有液体TAP培养基的小锥形瓶中，23±0.5℃，放置到摇床上避光摇晃过夜，摇床的转速为90rpm，次日放到23±0.5℃，8000Lx光强下，14h光照/10h避光的光周期培养环境中振荡培养24h，摇床的转速为180rpm；然后取不含琼脂块的上清培养基涂布到含有50μg/ml抗菌剂的TAP固体培养基上，放置到23±0.5℃，8000Lx光强下，14h光照/10h避光的光周期培养5-15天，即可获得活化好的藻株克隆。
2.根据权利要求1所述的一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法，其特征是：所述实验藻种为：莱茵衣藻，即Chlamydomonas reinhardtii。
3.根据权利要求1所述的一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法，其特征是：所述TAP液体培养基为：Tris 2.42g/L，TAP盐溶液25ml/L，磷酸盐溶液0.375ml/L，微量金属元素溶液1ml/L，冰醋酸1ml/L，121℃高压蒸汽灭菌30min；所述TAP固体培养基为在液体培养基配置时加入15g/L的琼脂粉后，121℃高压蒸汽灭菌30min，倒平板。
4.根据权利要求3所述的一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法，其特征在于，所述的TAP盐溶液为：NH4Cl 15g/L，CaCl2·2H2O 2g/L，MgSO4·7H2O 4g/L；所述的磷酸盐溶液为：KH2PO4 144g/L，K2HPO4 288g/L；Hutner Trace Metal微量元素溶液为：EDTA二钠盐50g/L，H3BO3 11.4g/L，ZnSO4·7H2O 22g/L，CoCl·6H2O 1.61g/L，MnCl2·4H2O 5.06g/L，CuSO4·5H2O 1.57g/L，(NH4)6Mo7O24·4H2O 1.1g/L，FeSO4·7H2O 4.99g/L，用KOH或者HCl调节pH至7.0。
5.根据权利要求1所述的一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法，其特征是：在TAP平板中加入的抗菌剂为多菌灵，使用的终浓度为50μg/ml，在上述TAP固体培养基灭菌前加入。
6.根据权利要求5所述的一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法，其特征是：配置TAP固体培养基时，先将多菌灵加入到TAP培养基的冰醋酸成分中溶解后，再进行培养基的配置。
CN201710181106.XA 2017-03-24 2017-03-24 一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法 Pending CN106754392A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710181106.XA CN106754392A (zh) 2017-03-24 2017-03-24 一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710181106.XA CN106754392A (zh) 2017-03-24 2017-03-24 一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106754392A true CN106754392A (zh) 2017-05-31

Family

ID=58967322

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710181106.XA Pending CN106754392A (zh) 2017-03-24 2017-03-24 一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106754392A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101608164A (zh) * 2009-07-17 2009-12-23 四川大学 一种采用组合抑菌剂从天然水域中快速分离异养微藻的方法
CN102925490A (zh) * 2011-08-12 2013-02-13 中国科学院植物研究所 提高衣藻产氢量的培养基及其制备方法
CN104830694A (zh) * 2015-05-26 2015-08-12 江苏师范大学 戊唑醇与萘啶酮酸混合进行莱茵衣藻培养过程中除菌方法
WO2015118457A1 (en) * 2014-02-05 2015-08-13 Reliance Industries Limited A modified microorganism having enhanced biomass synthesis capacity and a method thereof
CN104893979A (zh) * 2015-05-26 2015-09-09 江苏师范大学 利用混合抗菌剂进行莱茵衣藻培养过程中的除菌方法
CN105543281A (zh) * 2016-01-13 2016-05-04 江苏师范大学 一种利用方波电击进行莱茵衣藻高效建库的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101608164A (zh) * 2009-07-17 2009-12-23 四川大学 一种采用组合抑菌剂从天然水域中快速分离异养微藻的方法
CN102925490A (zh) * 2011-08-12 2013-02-13 中国科学院植物研究所 提高衣藻产氢量的培养基及其制备方法
WO2015118457A1 (en) * 2014-02-05 2015-08-13 Reliance Industries Limited A modified microorganism having enhanced biomass synthesis capacity and a method thereof
CN104830694A (zh) * 2015-05-26 2015-08-12 江苏师范大学 戊唑醇与萘啶酮酸混合进行莱茵衣藻培养过程中除菌方法
CN104893979A (zh) * 2015-05-26 2015-09-09 江苏师范大学 利用混合抗菌剂进行莱茵衣藻培养过程中的除菌方法
CN105543281A (zh) * 2016-01-13 2016-05-04 江苏师范大学 一种利用方波电击进行莱茵衣藻高效建库的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Xi et al. Novel materials for urban farming
CN102747017B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN102992877A (zh) 一种花卉苗木扦插基质
CN102845289A (zh) 一种红掌培养基
Guo et al. Responses of dissolved organic carbon and dissolved nitrogen in surface water and soil to CO2 enrichment in paddy field
KR20220114347A (ko) 식물 생장을 촉진시키는 식물 활성화용 유기농 천연호르몬의 액체비료 제조방법
CN105532411A (zh) 一种保存丛枝菌根真菌的方法
CN103039333A (zh) 植物栽培基质
CN102699017A (zh) 棕榈酸强化藨草修复石油污染湿地土壤的方法
CN103387832A (zh) 一种烟草专用可降解液体地膜及其制备方法
CN101999318B (zh) 一种枫杨组织培养繁殖方法
CN101731127A (zh) 花卉无土栽培基质与营养液
CN102329623A (zh) 一种农用盐碱消生产方法及其应用
CN106754392A (zh) 一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法
CN105217799A (zh) 一种溶藻链霉菌活性物质的工业化发酵方法
CN103798031A (zh) 一种生物稳定污泥与透气性盆栽容器结合的育树方法
CN104355412A (zh) 一种生物净化富营养化水体的方法
CN104587505B (zh) 原位对基质快速消毒的方法
CN105210883B (zh) 一种薯类作物的培养基及其应用
CN108012909A (zh) 一种提高木榄大苗移栽成活率的栽培方法
Qadir et al. Vegetative bioremediation of sodic and saline-sodic soils for productivity enhancement and environment conservation
CN111876162A (zh) 一种新型多功能盐碱土壤改良剂及其制备方法
CN113149794A (zh) 一种提高橡胶草组培苗移栽成活率用营养液及其提高方法
CN109005745A (zh) 一种镉胁迫下的植物种子催芽方法及其使用的催芽剂
CN104604657A (zh) 一种虎尾兰的培养基

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170531