CN106754139B - 一种增加乙醛脱氢酶活性的保健酒及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种增加乙醛脱氢酶活性的保健酒及制备方法，所述保健酒含有一种增加乙醛脱氢酶活性的组合物以及酒液，所述组合物包括蛇肉、葡萄籽提取物、姜黄提取物，酒液与蛇肉、葡萄籽提取物和姜黄提取物重量分数比为500～5000：20～70：20～50：20～50；所述保健酒是通过酒液浸泡、混匀、过滤进行制备。该保健酒能显著提高体内乙醛脱氢酶的活性，减少酒精对人体的副作用，促进保健酒行业健康地发展。

Description

一种增加乙醛脱氢酶活性的保健酒及制备方法

技术领域

本发明属于药酒制备技术领域，尤其涉及一种增加乙醛脱氢酶活性的保健酒及制备方法。

背景技术

摄入人体内的酒精在乙醇脱氢酶作用下产生的乙醛，而乙醛对人体是有害的。最近发现，体内积累的乙醛可促进组织细胞发生氧化应激反应，可干扰线粒体呼吸链的代谢，导致供氧不足，使钙调节紊乱和蛋白质合成减少等。因此，乙醛是饮酒损伤机体的重要因素。

众所周知，东方人(如中国人、日本人和越南人)体内的乙醛脱氢酶含量较西方人低。饮酒易引起乙醛在体内积聚，释放出胺类物质,会产生脸红、头痛、头晕、嗜睡、呕吐和心动过速等不良反应。体内乙醛主要在肝脏内在乙醛脱氢酶(acetaldehyde，ALDH)的作用下氧化为乙酸，乙酸可被彻底地氧化为CO2和H2O。ALDH有19种同工酶，其中ALDH2最为重要。有学者报道，白酒或酒精在很低浓度下就能明显抑制乙醛脱氢酶的活性。过量饮酒会增加高血压，导致脑卒中发生，所以过量饮酒甚至酗酒肯定是百害而无一益。现有研究也表明，传统白酒一般情况下会抑制体内乙醛脱氢酶的活性，导致动物体内出现损伤。乙醛脱氢酶的活性增高被认为是一种内源性心脑血管的保护因子，对人体有益。因此，如能配置出激活人体乙醛脱氢酶活性的保健酒，并使其在治病强身的同时减轻饮酒对人体的损伤，这对药酒健康地发展具有重大意义。

现有市场中有种类繁多的药蛇酒，大量文献报道蛇、酒、药三者合一可加强蛇酒本身具有祛湿散寒、益气活血、滋补强身的功效。蛇酒具有“通血脉、散湿气、行药势、杀百邪恶毒气、除风下气、开胃下食、温肠胃、御风寒和止腰膝疼痛”等药效，对人体具有多种保护功能。目前有关药蛇酒的制作，一般都是依靠传统的经验，缺乏科学地分析和测试，没有对其药理、毒性做详细系统地分析与研究。因此有必要对此进行进一步的研究。

发明内容

本发明目的在于克服现有酒精抑制体内乙醛脱氢酶活性的不足，提供一种保健酒及制备方法，其能显著提高体内乙醛脱氢酶的活性，减少酒精对人体的副作用；同时对保健酒进行科学地评价分析，促进保健酒行业健康地发展。

本发明的技术方案为：一种保健酒，所述保健酒包括酒液和增加乙醛脱氢酶活性的组合物；所述组合物中各成分的重量份数分别为：蛇肉20～70份、葡萄籽提取物20～50份、姜黄提取物20～50份、葛根2～10份、甘草2～10份、山药2～5份和党参2～5份。

作为对上述技术方案的进一步改进，所述保健酒中酒液与组合物中蛇肉、葡萄籽提取物和姜黄提取物的质量比为：酒液：蛇肉：葡萄籽提取物：姜黄提取物＝(500-5000)：(20-70)：(20-50)：(20-50)。

作为对上述技术方案的更进一步改进，所述酒液的度数为25％～60％，所述蛇肉来源于蝮蛇、五步蛇和眼镜蛇的至少一种。

最后，本发明还提供一种保健酒的制备方法，其包含以下步骤：

a)将所述组合物中所含除葡萄籽提取物和姜黄提取物以外的其余成分洗净并粉碎；

b)将步骤a)中粉碎后的各成分与葡萄籽提取物、姜黄提取物放入提取桶中，用酒液浸泡1～4个月；

c)浸泡完成后，于24小时内收集提取桶中的提取液，将提取液混匀，再存放40～45天；

d)对存放后的提取液进行过滤、灌装，即得保健酒。

葡萄籽提取物主要为从葡萄籽中提取的多酚混合物，其中活性最强的是低聚原花青素，是一种人体内不能合成的新型高效天然抗氧化剂物质。

本发明所述葡萄籽提取物可直接购于市场或采用现有技术常用方法从葡萄籽提取得到，现有技术中从葡萄籽中提取得到葡萄籽提取物的方法包括但不限于：

将粉碎的葡萄籽中加入数倍提取剂，回流提取一段时间后获得暗棕色粗品，再经过纯化、100目滤网过滤，获得葡萄籽提取物。葡萄籽提取物的质量标准符合国家标准，理化性质具体如下：葡萄籽提取物的色泽呈红棕色，味道为涩味，水中不容物重量分数≤5％，干燥后失重的重量分数≤5％，炽灼残渣的重量分数<2％，重金属的含量<10ppm，农药残留量<2ppm。总细菌量<1000cfu/gm，霉菌和酵母菌的量均<100cfu/gm，未检测到大肠杆菌和沙门式菌。

姜黄(Curcuma longa L.)可用于治疗血阏气滞、胸胁刺痛、经闭腹痛、跌打肿痛、风湿疼痛。姜黄提取物以姜黄干燥的根茎为原料，其含有挥发油、姜黄素、甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素和二氢姜黄素等，油中主要成分为姜黄酮、芳姜黄酮和姜烯等。

本发明所述姜黄提取物可直接购于市场或采用现有技术常用方法从姜黄提取得到，现有技术中从姜黄中提取得姜黄提取物的方法包括但不限于：将粉碎的姜黄用碱液提取，分离出纤维素、淀粉等成分；碱性提取液用酸沉淀；再进行80目滤网过滤，干燥后获得姜黄提取物。姜黄提取物质量标准符合国家标准，理化性质具体如下：姜黄提取物为棕色的粉末状，具有特殊气味，干燥后失重的重量分数≤5％，灰分的重量分数<5％，重金属的含量<10ppm，农药残留量<2ppm。总细菌量<1000cfu/gm，霉菌和酵母菌的量均<100cfu/gm，未检测到大肠杆菌和沙门式菌。

本发明的有益效果在于：本发明用酒液浸泡蛇肉、葡萄籽提取物和姜黄提取物等成分制备保健酒，该保健酒被科学地证实能显著提高体内乙醛脱氢酶的活性，减少酒精对人体的副作用。

附图说明

图1为不同浓度的保健酒对人肝细胞氧化应激反应的影响(图中白色亮点表示为发生氧化应激的肝细胞)。

具体实施方式

为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。

1.保健酒的制备

实施例1

本发明含有增加乙醛脱氢酶活性的组合物的保健酒的一种实施例，本实施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉20份、葡萄籽提取物20份、姜黄提取物20份、白酒500份(酒精度为25％或45％或60％)。

本实施例所述保健酒的制备方法为：

a)将所述组合物中所含除葡萄籽提取物和姜黄提取物以外的其余成分洗净并粉碎；

b)将步骤a)中粉碎后的各成分与葡萄籽提取物、姜黄提取物放入提取桶中，用酒液浸泡1～4个月；

c)浸泡完成后，于24小时内收集提取桶中的提取液，将提取液混匀，再存放40～45天；

d)对存放后的提取液进行过滤、灌装，即得保健酒。

实施例2

本发明含有增加乙醛脱氢酶活性的组合物的保健酒的另一种实施例，本实施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉50份、葡萄籽提取物30份、姜黄提取物30份、白酒1000份(酒精度为25％或45％或60％)。

本实施例所述保健酒的制备方法可参照实施例1。

实施例3

本发明含有增加乙醛脱氢酶活性的组合物的保健酒的另一种实施例，本实施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉70份、葡萄籽提取物50份、姜黄提取物50份、白酒5000份(酒精度为25％或45％或60％)。

本实施例所述保健酒的制备方法可参照实施例1。

实施例4

本发明含有增加乙醛脱氢酶活性的组合物的保健酒的另一种实施例，本实施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉40份、葡萄籽提取物35份、姜黄提取物30份、葛根2份、白酒2000份(酒精度为25％或45％或60％)。

本实施例所述保健酒的制备方法可参照实施例1。

实施例5

本发明含有增加乙醛脱氢酶活性的组合物的保健酒的另一种实施例，本实施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉45份、葡萄籽提取物50份、姜黄提取物30份、葛根5份、白酒2500份(酒精度为25％或45％或60％)。

本实施例所述保健酒的制备方法可参照实施例1。

实施例6

本发明含有增加乙醛脱氢酶活性的组合物的保健酒的另一种实施例，本实施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉60份、葡萄籽提取物35份、姜黄提取物25份、葛根10份、白酒3000份(酒精度为25％或45％或60％)。

本实施例所述保健酒的制备方法可参照实施例1。

实施例7

本发明含有增加乙醛脱氢酶活性的组合物的保健酒的另一种实施例，本实施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉20份、葡萄籽提取物20份、姜黄提取物20份、葛根2份、甘草2份、山药2份、党参2份、白酒500份(酒精度为25％或45％或60％)。

本实施例所述保健酒的制备方法可参照实施例1。

实施例8

本发明含有增加乙醛脱氢酶活性的组合物的保健酒的另一种实施例，本实施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉50份、葡萄籽提取物30份、姜黄提取物30份、葛根5份、甘草5份、山药5份和党参5份和白酒1000份(酒精度为25％、45％和60％)。

本实施例所述保健酒的制备方法可参照实施例1。

实施例9

本发明含有增加乙醛脱氢酶活性的组合物的保健酒的另一种实施例，本实施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉70份、葡萄籽提取物50份、姜黄提取物50份、葛根10份、甘草10份、山药3份和党参4份和白酒5000份(酒精度为25％、45％和60％)。

本实施例所述保健酒的制备方法可参照实施例1。

上述所述保健酒的配方见表1，实施例11为最优配方。

表1保健酒的成分及重量份数(份)

2.保健酒的指标参数检测

实施例10

分别量取实施例1～9中所制备得到的保健酒30ml，均加入50ml的清洁干燥无色玻璃杯中，对保健酒各种指标参数进行检测，参数指标均如下：色泽为微黄色且均匀，含量微量的悬浮物或沉淀，甲醛含量(g/100ml)<0.02％，总糖含量(以葡萄糖计算，g/l)<100，铅、锰、砷及总酸的含量符合国家标准。总细菌量<1000cfu/gm，霉菌和酵母菌的量均<100cfu/gm，未检测到大肠杆菌和沙门式菌。

3.保健酒对小鼠肝细胞ALDH2活性的影响

实施例11

工作原理：乙醇代谢产生乙醛，在7-羟基-3-(4-羟苯基)-异黄酮-7-糖苷(Daidzin)存在与否的情况下，由乙醛脱氢酶2的催化作用，转化为乙酸产物后，通过检测反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)转化为还原型NADH后峰值的增高，即采用比色法来定量测定裂解样品中ALDH2的特异性酶活性。

试验方法：

试验动物：雄性清洁级成年昆明种小鼠，体重18～22g，均购自广东省医学实验动物中心。剂量选择和配制：小鼠采用灌胃注射方式，每天灌胃一次，连续3天后测定肝组织ALDH2活性。

分组：对照组(6.5ml蒸馏水/20g)，45％白酒组-红高粱酒(0.65ml/20g，用蒸馏水补充至6.5ml)，低剂量保健酒、中剂量保健酒和高剂量保健酒(分别为0.65、1.9、6.5ml/20g；注射量不足6.5ml，用蒸馏水补充)；每组取10只小鼠，每只小鼠每天灌胃一次，连续灌胃3天，最后一次灌胃24小时后，取小鼠肝组织，用ALDH2试剂盒测定肝组织ALDH2活性。保健酒处理后的小鼠肝细胞ALDH2活性(U/L)见表2，所采用的保健酒为实施例1～9，且实施例1～9所用浸泡的白酒均为45％红高粱酒。

肝细胞ALDH2活性测定：将肝组织剪碎，剪碎后放入液氮中速冻过夜。次日，从液氮中取出，即刻用液氮碾磨成粉末状(组织未冻融)。按10mg组织加入乙醛脱氢酶2活性检测试剂盒中裂解液10μl的比例加入裂解液，充分混匀，放进冰槽里孵育30min，期间每10min强力涡旋震荡30s。4℃、12000rpm离心10min，取上清。

ALDH2酶活性(μmol/min/mg)为：[(样品读数－背景读数)×样品稀释倍数×0.25(ml，测定容量×1000]÷[0.005(样品容量，ml)×6.22(毫摩尔吸光系数)×0.6(cm)×5(min)]÷(样品蛋白浓度)。

表2保健酒对小鼠肝细胞ALDH2活性的影响

实施例	对照组	红高粱酒	低剂量保健酒	中剂量保健酒	高剂量保健酒
						1	67.9	44.9	49.5	70.3	69.1
2	67.9	44.9	50.3	71.5	69.0
						3	67.9	44.9	50.1	72.0	68.9
4	67.9	44.9	51.5	75.2	72.4
						5	67.9	44.9	52.0	76.3	73.7
6	67.9	44.9	52.1	76.2	73.5
						7	67.9	44.9	62.4	96.1	85.8
8	67.9	44.9	63.2	100.0	89.3
						9	67.9	44.9	62.6	97.8	86.2

从表2，可以得出红高粱酒降低小鼠肝细胞的ALDH2活性，保健酒组相对于红高粱组具有提高小鼠肝细胞的ALDH2活性；中剂量保健酒组和高剂量保健酒组小鼠肝细胞的ALDH2活性高于对照组，且前者小鼠肝细胞的ALDH2活性高于后者；实施例8(配方为蛇肉50份、葡萄籽提取物30份、姜黄提取物30份、葛根5份、甘草5份、山药5份和党参5份和白酒1000份)处理后的小鼠ALDH2活性高于同浓度下的其他实施例，为最优配方。

4.保健酒对人肝细胞(L-02)ALDH2活性的影响

实施例12

人肝细胞株由中科院上海实验细胞中心提供，人肝细胞L-02细胞接种在含10％胎牛血清的正常培养基内，于湿度为95％、5％CO₂、37℃条件下培养至细胞融合为80％。向培养基内加入中剂量浓度为0.1％保健酒，孵育24小时。以浓度为0作为对照组，并测定浓度为0.1％红高粱酒组时人肝细胞ALDH2活性，每组5次重复。保健酒处理后的人肝细胞ALDH2(U/L)活性见表3，所采用的保健酒为实施例1～9，且实施例1～9所用浸泡的白酒均为45％红高粱酒。

表3保健酒对人肝细胞ALDH2活性的影响

从表3，可以得出用中剂量浓度的保健酒处理后的人肝细胞ALDH2活性高于红高粱酒组和对照组；且实施例8处理后的人肝细胞ALDH2活性最高，为最优配方。

5.不同浓度保健酒对人肝细胞氧化应激的影响

实施例13

活性氧检测主要利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。

细胞样本收集：吸取细胞培养液，备用。用胰酶消化细胞，并收集至备用的细胞培养液中。2000rpm 4℃离心5min，收集细胞，小心吸除上清，同时确保尽量无细胞被吸除，PBS洗涤一次。保健酒对肝细胞氧化应激反应的影响见图1。

将图1结合表2和表3，可以更加直观地发现保健酒对ALDH2活性的影响与传统白酒不同，肝氧化应激受损是酒精所致的重要损伤，ALDH2的活性与肝细胞受损呈负相关。故激活ALDH2活性可明显减少酒精对人体肝脏的损伤，对指导人体饮用保健酒具有重要意义。

综合上述，本发明所述的评价机制不拘于以往国内研究的试验，而是在传统白酒一般抑制乙醛脱氢酶活性的基础上，测定不同剂量保健酒对醛脱氢酶的影响，结果得到对醛脱氢酶活性增高的保健酒配方。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，但并不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (3)

1.一种保健酒，其特征在于，所述保健酒由酒液与增加乙醛脱氢酶活性的组合物制成；

所述组合物中各成分的重量份数分别为：蛇肉20～70份、葡萄籽提取物20～50份、姜黄提取物20～50份、葛根2～10份、甘草2～10份、山药2～5份和党参2～5份；

所述酒液与组合物中蛇肉、葡萄籽提取物和姜黄提取物的质量比为：酒液：蛇肉：葡萄籽提取物：姜黄提取物＝(500-5000)：(20-70)：(20-50)：(20-50)。

2.根据权利要求1所述的保健酒，其特征在于，所述酒液的度数为25％～60％，所述蛇肉来源于蝮蛇、五步蛇和眼镜蛇的至少一种。

3.一种如权利要求1～2任一项所述保健酒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包含以下步骤：

a)将所述组合物中所含除葡萄籽提取物和姜黄提取物以外的其余成分洗净并粉碎；

b)将步骤a)中粉碎后的各成分与葡萄籽提取物、姜黄提取物放入提取桶中，用酒液浸泡1～4个月；

c)浸泡完成后，于24小时内收集提取桶中的提取液，将提取液混匀，再存放40～45天；

d)对存放后的提取液进行过滤、灌装，即得保健酒。

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