CN106701873A - 一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，包括以下步骤：预处理：将辣木籽晒干去皮，得到白色球状的内子，去离子水浸泡，干燥，超微粉碎，过筛；脱脂：往内子粉末中加入脱脂剂和活性剂，搅拌，静置，过滤得块状粉末，再将粉末风干后过筛；提取活性蛋白：往过筛后的粉末中加入Tris—HCl缓冲液，搅拌，水浴加热，加入酶解剂和助溶剂，继续搅拌，离心取上清液，上清液中加入析出剂，静置过滤得印度辣木籽中活性蛋白；冻干保存。本发明通过预处理工艺改善来达到高效脱脂，活性蛋白提取率明显提高，提取的活性蛋白效果优异。

Description

一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法

技术领域

本发明属于活性蛋白提取领域，具体涉及一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法。

背景技术

辣木籽是白花菜目辣木科，又称鼓槌树。多年生热带落叶乔木。辣木籽除少量用于种植之外，大量的用途是用来做生产原料，在食品、医药、保健、化妆品等领域都有着良好的应用价值，因为富含辣木籽油，其在降低血脂、血压，减肥瘦身，调节肠胃，护肝戒酒，增强人体免疫力方面都具有显著疗效。

现有技术提供多种活性蛋白提取方法，例如，中国发明授权专利文献一种从芹菜籽中提取天然活性蛋白质和多肽的方法授权公告号：CN102020695B 该发明涉及一种从芹菜籽中提取天然活性蛋白质和多肽的方法，该方法通过超声协助提取、硫酸铵沉淀得到具有生物活性(如抗氧化活性)的蛋白质和多肽，再通过常规方法确定提取的蛋白质和多肽的成分及其分子量和确定蛋白质和多肽的抗氧化活性。为维吾尔药食两用植物芹菜籽的生物活性物质基础研究，并开发相应的产品提供了依据。该方法提取过程简单，又不易使蛋白质和多肽失活，制备的蛋白质和多肽生物活性(如抗氧化活性)高，无毒性、热稳定性好，易于扩大规模生产，降低提取过程的成本，是提取制备生物活性蛋白质和多肽的理想方法之一。通过该方法获得的蛋白质和多肽作为制备食品以及化妆品添加剂的用途。

现有技术制备的蛋白质和多肽生物活性高，无毒性、热稳定性好，但工艺复杂且预处理不太理想，活性蛋白提取率有待提高。

发明内容

本发明为解决上述技术问题提供一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，上述方法提取方法简单且提取活性蛋白含量高。

本发明为解决上述技术所采取的方法为：一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，步骤如下：

1）预处理：将辣木籽晒干，去皮，得到白色球状的内子，去离子水浸泡，干燥，超微粉碎，过筛；去离子水可充分的将去皮后的内子表面可溶杂质与内子分离，避免在后续步骤中杂质对提取的影响，保证提取过程无杂质干扰。

2）脱脂：往内子粉末中加入脱脂剂和活性剂，搅拌，静置，过滤得块状粉末，再将粉末风干后过筛；内子中的油脂会影响活性蛋白的提取率故用脱脂剂对内子粉末进行脱脂，添加的活性剂可保证脱脂过程中内子粉末中活性蛋白的活性。

3）提取活性蛋白：往过筛后的粉末中加入Tris—HCl缓冲液，搅拌，水浴加热，加入酶解剂和助溶剂，继续搅拌，离心取上清液，上清液中加入析出剂，静置过滤得印度辣木籽中活性蛋白；将粉末中的活性蛋白充分酶解出来，提高活性蛋白的提取率。

4）冻干保存，由于活性蛋白对环境的要求很高，常温下高浓度的生物蛋白很容易失去活性，为确保活性采用冻干工艺。

步骤1中内子在去离子水中浸泡30~50min取出后置于干燥器内干燥，干燥器内设有干燥剂。通过加热使辣木籽粉中的湿分气化逸出，获得干燥的辣木籽粉末，干燥后再经超微粉碎，用50~150目筛网后得辣木籽粉，便于超微粉碎和后续的脱脂工艺。

干燥剂由以下成分及重量份组成：生石灰70~90重量份、三聚磷酸钠0.1~0.5份，壳聚糖0.1~0.5份，纳米二氧化硅1~5份、无水硫酸铜5~10份、硫酸亚铁2~8份、四甲基哌啶醇2~6份，在预处理过程中辣木子内部含有太多水分不利于后续的脱脂和提取蛋白，辣木子内部水分过多可能会因环境影响而导致活性蛋白减少，采用干燥剂可有效除去辣木籽中多余的水分，且效果优异，提升辣木籽的抗氧化性，避免活性蛋白的减少而影响提取率。

去离子水内含有磷酸二氢钾2~4重量份和异丙醇3~6重量份，可有效溶解辣木籽中杂质，提取活性蛋白过程中若存在杂质会直接导致活性蛋白提取率的降低，通过去离子水的浸泡将辣木子中的杂质浸泡出来并溶解，再经过干燥来达到去除辣木籽中可溶解杂质的效果，效果优异。

Tris-Hcl缓冲液由三羟甲基氨基甲烷2~6重量份和超纯水15~25重量份组成，pH值为8.6~8.9，浓度为1.3~1.6mol/L。值和浓度在此范围缓冲液效果优异，缓冲液中的低离子强度特点有利于活性蛋白的提取。脱脂剂体积为内子粉末2~4倍，可保证充分脱脂，搅拌静置1~2天后用50~150目筛子过筛，便于后续步骤提取活性蛋白。

步骤3中采用离心机离心，离心转速为3000~4000r/min，离心时间10~20min，进行固液分离将杂质去除便于活性蛋白的提取。

有益效果：本发明在预处理中使用干燥器进行干燥，且干燥器内设有干燥剂。通过加热使辣木籽粉中的湿分气化逸出，获得干燥的辣木籽粉末，采用干燥剂可有效除去辣木籽中多余的水分，且效果优异，提升辣木籽的抗氧化性，避免活性蛋白的减少而影响提取率，在预处理中用去离子水浸泡辣木子，将其中的杂质浸泡出来并溶解，再经过干燥来达到去除辣木籽中可溶解杂质的效果，效果优异。本发明通过预处理工艺改善来达到高效脱脂，活性蛋白提取率明显提高，提取的活性蛋白效果优异。

具体实施例

实施例1：

一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，步骤如下：

1）预处理：将辣木籽晒干，去皮，得到白色球状的内子，去离子水浸泡，干燥，超微粉碎，过筛；去离子水可充分的将去皮后的内子表面可溶杂质与内子分离，避免在后续步骤中杂质对提取的影响，保证提取过程无杂质干扰。

2）脱脂：往内子粉末中加入脱脂剂和活性剂，搅拌，静置，过滤得块状粉末，再将粉末风干后过筛；内子中的油脂会影响活性蛋白的提取率故用脱脂剂对内子粉末进行脱脂，添加的活性剂可保证脱脂过程中内子粉末中活性蛋白的活性。

3）提取活性蛋白：往过筛后的粉末中加入Tris—HCl缓冲液，搅拌，水浴加热，加入酶解剂和助溶剂，继续搅拌，离心取上清液，上清液中加入析出剂，静置过滤得印度辣木籽中活性蛋白；将粉末中的活性蛋白充分酶解出来，提高活性蛋白的提取率。

4）冻干保存，由于活性蛋白对环境的要求很高，常温下高浓度的生物蛋白很容易失去活性，为确保活性采用冻干工艺。

步骤1中内子在去离子水中浸泡30~50min取出后置于干燥器内干燥，干燥器内设有干燥剂。通过加热使辣木籽粉中的湿分气化逸出，获得干燥的辣木籽粉末，干燥后再经超微粉碎，用50~150目筛网后得辣木籽粉，便于超微粉碎和后续的脱脂工艺。

干燥剂由以下成分及重量份组成：生石灰70~90重量份、三聚磷酸钠0.1~0.5份，壳聚糖0.1~0.5份，纳米二氧化硅1~5份、无水硫酸铜5~10份、硫酸亚铁2~8份、四甲基哌啶醇2~6份，在预处理过程中辣木子内部含有太多水分不利于后续的脱脂和提取蛋白，辣木子内部水分过多可能会因环境影响而导致活性蛋白减少，采用干燥剂可有效除去辣木籽中多余的水分，且效果优异，提升辣木籽的抗氧化性，避免活性蛋白的减少而影响提取率。

去离子水内含有磷酸二氢钾2~4重量份和异丙醇3~6重量份，可有效溶解辣木籽中杂质，提取活性蛋白过程中若存在杂质会直接导致活性蛋白提取率的降低，通过去离子水的浸泡将辣木子中的杂质浸泡出来并溶解，再经过干燥来达到去除辣木籽中可溶解杂质的效果，效果优异。

Tris-Hcl缓冲液由三羟甲基氨基甲烷2~6重量份和超纯水15~25重量份组成，pH值为8.6~8.9，浓度为1.3~1.6mol/L。值和浓度在此范围缓冲液效果优异，缓冲液中的低离子强度特点有利于活性蛋白的提取。

脱脂剂体积为内子粉末2~4倍，可保证充分脱脂，搅拌静置1~2天后用50~150目筛子过筛，便于后续步骤提取活性蛋白。

步骤3中采用离心机进行离心，离心转速为3000~4000r/min，离心时间10~20min，进行固液分离将杂质去除便于活性蛋白的提取。

实施例2：

一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，步骤如下：

1）预处理：将辣木籽晒干，去皮，得到白色球状的内子，内子在去离子水中浸泡优选30min取出后置于干燥器内干燥，干燥器内设有干燥剂。通过加热使辣木籽粉中的湿分气化逸出，获得干燥的辣木籽粉末，干燥后再经超微粉碎，50~150目筛网后得辣木籽粉，便于超微粉碎和后续的脱脂工艺，超微粉碎，过筛；去离子水可充分的将去皮后的内子表面可溶杂质与内子分离，避免在后续步骤中杂质对提取的影响，保证提取过程无杂质干扰。

2）脱脂：往内子粉末中加入脱脂剂和活性剂，脱脂剂体积为内子粉末优选3倍，可保证充分脱脂，搅拌静置优选2天后用优选80目筛子过筛，便于后续步骤提取活性蛋白。搅拌，静置，过滤得块状粉末，再将粉末风干后过筛；内子中的油脂会影响活性蛋白的提取率故用脱脂剂对内子粉末进行脱脂，添加的活性剂可保证脱脂过程中内子粉末中活性蛋白的活性。

3）提取活性蛋白：往过筛后的粉末中加入Tris—HCl缓冲液，Tris-Hcl缓冲液由三羟甲基氨基甲烷优选4重量份和超纯水优选20重量份组成，pH值为优选8.8，浓度为优选1.5mol/L。值和浓度在此范围缓冲液效果优异，缓冲液中的低离子强度特点有利于活性蛋白的提取。搅拌，水浴加热，加入酶解剂和助溶剂，继续搅拌，放入离心机进行离心取上清液，离心机转速为优选4000r/min，离心时间优选15min，进行固液分离将杂质去除便于活性蛋白的提取。上清液中加入析出剂，静置过滤得印度辣木籽中活性蛋白；将粉末中的活性蛋白充分酶解出来，提高活性蛋白的提取率。

4）冻干保存，由于活性蛋白对环境的要求很高，常温下高浓度的生物蛋白很容易失去活性，为确保活性采用冻干工艺。

干燥剂由以下成分及重量份组成：优选生石灰80重量份、三聚磷酸钠优选0.5份，壳聚糖优选0.5份，纳米二氧化硅优选3份、无水硫酸铜优选10份、硫酸亚铁优选6份、四甲基哌啶醇优选4份，在预处理过程中辣木子内部含有太多水分不利于后续的脱脂和提取蛋白，辣木子内部水分过多可能会因环境影响而导致活性蛋白减少，采用干燥剂可有效除去辣木籽中多余的水分，且效果优异，提升辣木籽的抗氧化性，避免活性蛋白的减少而影响提取率。

去离子水内含有磷酸二氢钾优选3重量份和异丙醇优选5重量份，可有效溶解辣木籽中杂质，提取活性蛋白过程中若存在杂质会直接导致活性蛋白提取率的降低，通过去离子水的浸泡将辣木子中的杂质浸泡出来并溶解，再经过干燥来达到去除辣木籽中可溶解杂质的效果，效果优异。0.02~0.1份的二甲亚砜和0.01~0.05份的甘油可以有效的提高综合效果，其原因尚待进一步研究。本发明在预处理中使用干燥器进行干燥，且干燥器内设有干燥剂。通过加热使辣木籽粉中的湿分气化逸出，获得干燥的辣木籽粉末，采用干燥剂可有效除去辣木籽中多余的水分，且效果优异，提升辣木籽的抗氧化性，避免活性蛋白的减少而影响提取率，在预处理中用去离子水浸泡辣木子，将其中的杂质浸泡出来并溶解，再经过干燥来达到去除辣木籽中可溶解杂质的效果，效果优异。本发明通过预处理工艺改善来达到高效脱脂，活性蛋白提取率明显提高，提取的活性蛋白效果优异。

以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

Claims (8)

1.一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，其特征在于以下步骤：

1）预处理：将辣木籽晒干，去皮，得到白色球状的内子，去离子水浸泡，干燥，超微粉碎，过筛；

2）脱脂：往内子粉末中加入脱脂剂和活性剂，搅拌，静置，过滤得块状粉末，再将粉末风干后过筛；

3）提取活性蛋白：往过筛后的粉末中加入Tris—HCl缓冲液，搅拌，水浴加热，加入酶解剂和助溶剂，继续搅拌，离心取上清液，上清液中加入析出剂，静置过滤得印度辣木籽中活性蛋白；

4）冻干保存。

2.根据权利要求1所述的一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，其特征在于：步骤1中内子在去离子水中浸泡30~50min取出后置于干燥器内干燥，干燥器内设有干燥剂。

3.根据权利要求2所述的一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，其特征在于：所述干燥剂由以下成分及重量份组成：生石灰70~90重量份、三聚磷酸钠0.1~0.5份，壳聚糖0.1~0.5份，纳米二氧化硅1~5份、无水硫酸铜5~10份、硫酸亚铁2~8份、四甲基哌啶醇2~6份。

4.根据权利要求1所述的一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，其特征在于：所述去离子水内含有磷酸二氢钾2~4重量份和异丙醇3~6重量份。

5.根据权利要求3所述的一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，其特征在于：所述的还含有0.02~0.1份的二甲亚砜和0.01~0.05份的甘油。

6.根据权利要求1所述的一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，其特征在于：所述的Tris-Hcl缓冲液由三羟甲基氨基甲烷2~6重量份和超纯水15~25重量份组成，pH值为8.6~8.9，浓度为1.3~1.6mol/L。

7.根据权利要求1所述的一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，其特征在于：所述脱脂剂体积为内子粉末2~4倍，搅拌2~3小时，静置1~2天后风干用50~150目筛子过筛。

8.根据权利要求1所述的一种从印度辣木籽中活性蛋白提取方法，其特征在于：所述步骤3中采用离心机离心，离心转速为3000~4000r/min，离心时间10~20min。