CN106701847A - 续随子二萜烷型化合物的转化制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物药物领域，涉及续随子二萜烷型化合物的转化方法，本发明利用已知微生物对续随子二萜醇及其衍生物进行微生物转化，结合化学酰基化，制备了续随子二萜烷型衍生物化合物，尤其是采用卷枝毛霉菌CICC40242微生物对续随子二萜醇、大戟因子L3进行羟基化生物转化，并在C8与C18引入的羟基进行化学酰基化，得到3个羟基化产物和6个C8醇酯化产物。所述位点的羟基化能提高大戟因子L3的水溶性，提高成药性。进一步，制得的续随子烷型二萜衍生物化合物可制备抗肿瘤活性与抗肿瘤多药耐药性得药物组合物。
Description
技术领域
本发明属生物药物领域，涉及续随子二萜烷型化合物的转化方法，具体涉及利用已知微生物对续随子二萜醇及其衍生物进行微生物转化，结合化学酰基化，制备续随子二萜烷型衍生物的方法。
背景技术
现有技术公开了续随子二萜烷型化合物属于二萜骨架的天然产物，具有较明显的抗肿瘤活性与抗肿瘤多药耐药性(MDR)。构效关系研究表明，其母核上取代基的差异能明显改变该类化合物的抗肿瘤活性和MDR活性。
研究公开了续随子二萜烷型化合物是从大戟科植物续随子Euphorbia lathyris L.中首次分离得到(Tetrahedron Letters,1971,18:1325-1328)。随后从其他植物中陆续分离得到多种续随子二萜烷型衍生物，如从大戟科植物Euphorbia lagascae中分离得到5个具有诱导肿瘤细胞凋亡和抗肿瘤多药耐药性的续随子二萜醇酯衍生物(Planta Medica,2005,72:162-168)。此外对这些从植物中分离得到的续随子二萜烷型衍生物也进行了进一步化学反应修饰，得到14个抗肿瘤多药耐药性更高效的衍生物(Bioorganic &Medicinal Chemistry,2014,22:6392-6400)。虽然已经从植物中分离得到多种结构丰富的续随子二萜烷型化合物，但至今尚未获得其低活性碳发生羟基化的续随子二萜烷型产物。该二萜骨架类型化合物的C-8位和C-18位为低活性位点，难以用化学方法接上羟基，而羟基是此类化合物进一步合成修饰的良好起始基团。
微生物转化是利用微生物生长过程中合成的特异酶完成特定生化反应。据报道，微生物在生长过程中可以合成多种酶，催化不同反应，例如氧化反应、还原反应、水解反应、脱氢反应、缩合反应和开环反应等，这类酶催化反应具有特异性和高效性，相对于化学反应，在底物的非活性碳原子上进行反应更高效环保。
因此，利用微生物对续随子二萜烷型化合物进行转化研究，以期获得一些难以用传统化学合成制备的特异位点(尤其是C-8和C-18低活性碳位点)的转化产物，并结合化学合成法，对微生物转化产物进一步进行化学修饰，迄今为止尚未见有关续随子二萜类化合物的微生物转化研究的报道。
发明内容
本发明的目的是提供续随子二萜烷型化合物非活性碳上进行结构改造的方法，尤其是制备具有生理活性、化学反应无法羟基化的续随子二萜烷型类化合物的微生物转化方法。
本发明使用卷枝毛霉Mucor circinelloides CICC 40242分别对续随子二萜醇(Lathyrol)和大戟因子L3(Euphorbia Factor L3)进行了微生物转化或生物转化组合化学酰化，获得以下结构通式的续随子烷型二萜衍生物：
经鉴定，所获得的续随子烷型二萜衍生物化合物为：
化合物18α-羟基大戟因子L3：R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝OH,R4＝H
化合物218-羟基大戟因子L3：R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝H,R4＝OH
化合物38α-羟基续随子二萜醇：R1＝R2＝OH,R3＝OH,R4＝H
化合物48α-乙酰氧基大戟因子L3：R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝OAc,R4＝H
化合物58α-苯甲酰氧基大戟因子L3：R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝OBz,R4＝H
化合物68α-环丙甲酰氧基大戟因子L3：R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝R4＝H
化合物78α-烟酰氧基大戟因子L3：R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝R4＝H
化合物88α-对氟苯甲酰氧基大戟因子L3：R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝R4＝H
化合物98α-(3)-呋喃甲酰氧基大戟因子L3：R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝R4＝H
本发明中所述的微生物转化法包括以下步骤：
(1)生产菌株为卷枝毛霉Mucor circinelloides CICC 40242，该菌株在琼脂培养基上生长良好，将生长在琼脂培养基上的卷枝毛霉菌丝划线接种于马铃薯固体培养基上，在20-28℃的恒温培养箱中培养3-7天，得到试管种；
其中，所述卷枝毛霉Mucor circinelloides菌种微生物还包括其功能等同的变异体和突变体；
(2)将试管种中的菌丝接种到250mL的三角瓶中，每瓶含有50mL液体马铃薯培养基，培养温度为25-28℃，转速为130-180rpm，培养时间为24小时，获得种子液；
(3)将种子液按2％～5％体积比接入新鲜马铃薯培养基，28℃，130-180rpm条件下培养24-72小时后，加入转化底物续随子二萜醇或大戟因子L3,在20-28℃、130-180rpm的条件下转化培养72-240小时；本发明的一个实施例中，优选将卷枝毛霉CICC 40242种子液按1％-3％体积比接入马铃薯培养基，28℃培养12-48小时，再加入5mg/mL大戟因子L3或续随子二萜醇的乙醇溶液；
(4)将发酵液用布氏漏斗减压过滤，获得发酵滤液，按照1:1.5体积比用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压蒸干，发酵产物用硅胶柱层析法分离得到大戟因子L3的发酵产物8α-羟基大戟因子L3(1)和18-羟基大戟因子L3(2)；续随子二萜醇的转化产物8α-羟基续随子二萜醇(3)；
其中，所述的液体培养基包括组分：200g马铃薯去皮，切成1立方厘米小丁，经1L水微沸煎煮20分钟，随后用8层纱布趁热过滤，放凉后滤液用水补齐到1L，加入20g葡萄糖，搅拌溶解；分装后121℃高压灭菌20分钟后，放凉使用；
其中，所述的固体培养基包含组分：液体培养基加入1％琼脂，加热溶解并分装，121℃高压灭菌20分钟后，放凉使用。
本发明中，大戟因子L3经卷枝毛霉CICC 40242转化反应所得的8α-羟基大戟因子L3(1)进行化学酰化，酰化反应物包括乙酰氯、苯甲酰氯、环丙甲酰氯、烟酰氯、3-呋喃甲酰氯和对氟苯甲酰氯。
本发明中，所述的生物转化组合化学酰化法，包括以下步骤：
1)制备8α-乙酰氧基大戟因子L3(4)：将10-15mg的8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加1-2滴三乙胺，1-2mg的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的乙酰氯，反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水；
2)制备8α-苯甲酰基大戟因子L3(5)：将10-15mg的8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加1-2滴三乙胺，1-2mg DMAP，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的苯甲酰氯，反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水；
3)制备8α-环丙甲酰氧基大戟因子L3(6)：将10-15mg的8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加1-2滴三乙胺，1-2mg DMAP，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的环丙甲酰氯，加热回流反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水；
4)制备8α-烟酰氧基大戟因子L3(7)：将10-15mg的8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加1-2滴三乙胺，1-2mg DMAP，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的烟酰氯盐酸盐，加热回流反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水；
5)制备8α-对氟苯甲酰氧基大戟因子L3(8)：将10-15mg的8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加1-2滴三乙胺，1-2mg DMAP，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的对氟苯甲酰氯，加热回流反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水；
6)制备8α-(3)-呋喃甲酰氧基大戟因子L3(9)：将10-15mg的8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加1-2滴三乙胺，1-2mg DMAP，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的呋喃-3-乙酰氯，加热回流反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水。
本发明利用已知微生物对续随子二萜醇及其衍生物进行微生物转化，结合化学酰基化，制备了续随子二萜烷型衍生物化合物，尤其是采用卷枝毛霉菌CICC40242微生物对续随子二萜醇、大戟因子L3进行羟基化生物转化，并在C8与C18引入的羟基进行化学酰基化，得到3个羟基化产物和6个C8醇酯化产物。所述位点的羟基化能提高大戟因子L3的水溶性，提高成药性。
更进一步，本发明制得的续随子烷型二萜衍生物化合物可制备抗肿瘤活性与抗肿瘤多药耐药性得药物组合物，其中含有所述的化合物或其药学上可接受的溶剂及药学上可接受的载体。
具体实施方式
实施例1 检视卷枝毛霉Mucor circinelloides CICC 40242对续随子二萜醇(Lathyrol)和大戟因子L3(Euphorbia Factor L3)的转化结果
本发明对20个菌种进行转化筛选，结果表明卷枝毛霉对续随子二萜醇、大戟因子L3有较强的转化能力。
所述菌种筛选培养基为马铃薯培养基：将200g去皮马铃薯切成1立方厘米小丁，用1L水煮沸20分钟，马铃薯液过滤后加入20g葡萄糖，分装于250mL三角瓶，每瓶50mL，在121℃、0.15Mpa下灭菌20分钟；
菌种接种于斜面固体培养基上，28℃培养7天，保存于4℃冰箱内，采用两步活化法活化菌种，先将菌种接种于马铃薯培养基，28℃，180rpm条件下摇瓶培养48h后，获得种子液；种子液以1％-3％体积比接种于另一马铃薯培养基内，同条件培养48h，每瓶活化后的菌液加入5mg/mL的续随子二萜醇乙醇溶液或大戟因子L3乙醇溶液，终浓度为0.1mg/mL，同条件培养72h后，抽滤发酵液后得滤液，加乙酸乙酯萃取3次，合并后回收乙酸乙酯，残渣加少量甲醇溶解供薄层色谱鉴别用，其中的空白对照加入纯乙醇；
分别将转化后的样品和空白对照溶液点于硅胶薄层板上，续随子二萜醇转化后样品以二氯甲烷-甲醇(10:1)上行法展开，大戟因子L3转化后样品以二氯甲烷-甲醇(20:1)上行法展开，取出晾干溶剂后，喷以10％的硫酸-乙醇溶液，加热显色，结果显示，转化产物和底物同样显示砖红色-棕色斑点，转化产物的Rf值小于底物的Rf值。
实施例2 制备8α-羟基大戟因子L3(1)和18-羟基大戟因子L3(2)
采用两步活化法活化菌种，获得的种子液以1％体积比接种于装有250mL马铃薯培养基、体积为1L三角瓶中，28℃，180rpm条件下摇瓶培养48h，每瓶活化后的菌液加入5mg/mL的大戟因子L3乙醇溶液，终浓度为0.1mg/mL。同条件培养72h后，发酵液抽滤，滤液加乙酸乙酯萃取3次，合并后回收乙酸乙酯，得到发酵液总提物；
发酵液总提物用少量乙酸乙酯溶解，以1g硅胶(100目-200目)拌样，二氯甲烷湿法上样于装有40g柱层析硅胶(200-300目)的硅胶柱内，用二氯甲烷-甲醇(30:1)洗脱，先后得到含8α-羟基大戟因子L3(1)和18-羟基大戟因子L3(2)的流分，回收溶剂，用丙酮溶解残渣，将样品溶液点于硅胶薄层板上，以二氯甲烷-甲醇(20:1)上行法展开，取出晾干溶剂后，喷以10％的硫酸-乙醇溶液，加热显色，8α-羟基大戟因子L3(1)在硅胶薄层板中显示一个砖红色-棕色斑点，Rf值为0.6左右；18-羟基大戟因子L3(2)在硅胶薄层板中显示一个砖红色-棕色斑点，Rf值为0.5左右，化合物1和2的NMR结构鉴定数据如表1所示。
实施例3 制备8α-羟基续随子二萜醇(3)
采用两步活化法活化菌种，获得的种子液以1％体积比接种于装有250mL马铃薯培养基、体积为1L三角瓶中，28℃，180rpm条件下摇瓶培养48h，每瓶活化后的菌液加入5mg/mL的续随子二萜醇的乙醇溶液，终浓度为0.1mg/mL，同条件培养72h后，发酵液抽滤，滤液加乙酸乙酯萃取3次，合并后回收乙酸乙酯，得到发酵液总提物；
发酵液总提物用少量乙酸乙酯溶解，以1g硅胶(100-200目)拌样，二氯甲烷湿法上样装有40g柱层析硅胶(200-300目)的硅胶柱内，用二氯甲烷-甲醇(30:1)洗脱，得到含8α-羟基续随子二萜醇(3)的流分，回收溶剂，用丙酮溶解残渣，将样品溶液点于硅胶薄层板上，以二氯甲烷-甲醇(10:1)上行法展开，取出晾干溶剂后，喷以10％的硫酸-乙醇溶液，加热显色，8α-羟基大戟因子L3(3)在硅胶薄层板中显示一个砖红色-棕色斑点，Rf值为0.4左右。化合物3的NMR结构鉴定数据如表1所示。
表1是8α-羟基大戟因子L3(1)、18-羟基大戟因子L3(2)和8α-羟基续随子二萜醇(3)的NMR数据表。
表1
。
实施例4 制备8α-乙酰氧基大戟因子L3(4)
取10mg干燥无水的8α-羟基大戟因子L3(1)于50mL圆底烧瓶内，加入10-15mL无水四氢呋喃，再加入8μL三乙胺、微量4-二甲氨基吡啶(DMAP)，用磁力搅拌器搅拌溶解混合，冰浴条件下再加入醋酐3-5μL，共同搅拌冰浴下反应3-5小时；
检测反应是否完成：0.5mm直径的毛细管吸取少量反应液，点样于硅胶薄层板，平行点样8α-羟基大戟因子L3(1)，采用石油醚-乙酸乙酯(7:3)上行法展开，完毕后取出晾干，254nm紫外灯下检视，反应完成的标志是在反应液展开处，与8α-羟基大戟因子L3(1)相同位置(Rf＝0.4)没有亮斑或仅有微弱亮斑，在Rf＝0.6左右处产生新的亮斑，确定反应完成后，加入20mL饱和碳酸氢钠淬灭，反应液用等体积乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯层，回收溶剂得到残渣。残渣用少量二氯甲烷溶解后，用0.5g硅胶(100-200目)拌样，二氯甲烷湿法上样于装有15g柱层析硅胶(300-400目)的硅胶柱中，以二氯甲烷-甲醇(35:1)洗脱，得到含8α-乙酰氧基大戟因子L3(4)的流分，收集流分回收溶剂。
实施例5 制备8α-苯甲酰氧基大戟因子L3(5)
取10mg干燥无水的8α-羟基大戟因子L3(1)于50mL圆底烧瓶内，加入10-15mL无水四氢呋喃，再加入8μL三乙胺、微量4-二甲氨基吡啶(DMAP)，用磁力搅拌器搅拌溶解混合，冰浴条件下加入苯甲酰氯5-8μL，共同搅拌常温条件下反应5-8小时；
检测反应是否完成：0.5mm直径的毛细管吸取少量反应液，点样于硅胶薄层板，平行点样8α-羟基大戟因子L3(1)，采用石油醚-乙酸乙酯(7:3)上行法展开，完毕后取出晾干，254nm紫外灯下检视，反应完成的标志是在反应液展开处，与8α-羟基大戟因子L3(1)相同位置(Rf＝0.4)没有亮斑或仅有微弱亮斑，在Rf＝0.7左右处产生新的亮斑，确定反应完成后，加入20mL饱和碳酸氢钠淬灭，反应液用等体积乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯层，回收溶剂得到残渣，残渣用少量二氯甲烷溶解后，用0.5g硅胶(100-200目)拌样，二氯甲烷湿法上样于装有15g柱层析硅胶(300-400目)的硅胶柱中，以二氯甲烷-甲醇(35:1)洗脱，得到含8α-苯甲酰氧基大戟因子L3(5)的流分，收集流分回收溶剂。
实施例6 制备8α-环丙甲酰氧基大戟因子L3(6)
取10mg干燥无水的8α-羟基大戟因子L3(1)于50mL圆底烧瓶内，加入10-15mL无水四氢呋喃，加入8μL三乙胺、微量4-二甲氨基吡啶(DMAP)，用磁力搅拌器搅拌溶解混合，再加入环丙甲酰氯3μL，共同搅拌回流加热反应3小时；
检测反应是否完成：0.5mm直径的毛细管吸取少量反应液，点样于硅胶薄层板，平行点样8α-羟基大戟因子L3(1)，采用石油醚-乙酸乙酯(7:3)上行法展开，完毕后取出晾干，254nm紫外灯下检视，反应完成的标志是在反应液展开处，与8α-羟基大戟因子L3(1)相同位置(Rf＝0.4)没有亮斑或仅有微弱亮斑，在Rf＝0.8左右处产生新的亮斑，确定反应完成后，加入20mL饱和碳酸氢钠淬灭，反应液用等体积乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯层，回收溶剂得到残渣，残渣用少量二氯甲烷溶解后，用0.5g硅胶(100-200目)拌样，二氯甲烷湿法上样于装有15g柱层析硅胶(300-400目)的硅胶柱中，以二氯甲烷-甲醇(35:1)洗脱，得到含8α-环丙甲酰氧基大戟因子L3(6)的流分，收集流分回收溶剂。
实施例7 制备8α-烟酰氧基大戟因子L3(7
取10mg干燥无水的8α-羟基大戟因子L3(1)于50mL圆底烧瓶内，加入10-15mL无水四氢呋喃，加入8μL三乙胺、微量4-二甲氨基吡啶(DMAP)，用磁力搅拌器搅拌溶解混合，再加入烟酰氯5μL，共同搅拌回流加热反应3小时；
检测反应是否完成：0.5mm直径的毛细管吸取少量反应液，点样于硅胶薄层板，平行点样8α-羟基大戟因子L3(1)，采用石油醚-乙酸乙酯(7:3)上行法展开，完毕后取出晾干，254nm紫外灯下检视，反应完成的标志是在反应液展开处，与8α-羟基大戟因子L3(1)相同位置(Rf＝0.4)没有亮斑或仅有微弱亮斑，在Rf＝0.6左右处产生新的亮斑。确定反应完成后，加入20mL饱和碳酸氢钠淬灭，反应液用等体积乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯层，回收溶剂得到残渣，残渣用少量二氯甲烷溶解后，用0.5g硅胶(100-200目)拌样，二氯甲烷湿法上样于装有15g柱层析硅胶(300-400目)的硅胶柱中，以二氯甲烷-甲醇(35:1)洗脱，得到含8α-烟酰氧基大戟因子L3(7)的流分，收集流分回收溶剂。
实施例8 制备8α-对氟苯甲酰氧基大戟因子L3(8)
取10mg干燥无水的8α-羟基大戟因子L3(1)于50mL圆底烧瓶内，加入10-15mL无水四氢呋喃，加入8μL三乙胺、微量4-二甲氨基吡啶(DMAP)，用磁力搅拌器搅拌溶解混合，再加入对氟苯甲酰氯6μL，共同搅拌回流加热反应6小时；
检测反应是否完成：0.5mm直径的毛细管吸取少量反应液，点样于硅胶薄层板，平行点样8α-羟基大戟因子L3(1)，采用石油醚-乙酸乙酯(7:3)上行法展开，完毕后取出晾干，254nm紫外灯下检视。反应完成的标志是在反应液展开处，与8α-羟基大戟因子L3(1)相同位置(Rf＝0.4)没有亮斑或仅有微弱亮斑，在Rf＝0.8左右处产生新的亮斑。确定反应完成后，加入20mL饱和碳酸氢钠淬灭，反应液用等体积乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯层，回收溶剂得到残渣，残渣用少量二氯甲烷溶解后，用0.5g硅胶(100-200目)拌样，二氯甲烷湿法上样于装有15g柱层析硅胶(300-400目)的硅胶柱中，二氯甲烷-甲醇(35:1)洗脱，得含8α-对氟苯甲酰氧基大戟因子L3(8)的流分，收集流分回收溶剂。
实施例9 制备8α-(3)-呋喃甲酰氧基大戟因子L3(9)
取10mg干燥无水的8α-羟基大戟因子L3(1)于50mL圆底烧瓶内，加入10-15mL无水四氢呋喃，再加入8μL三乙胺、微量4-二甲氨基吡啶(DMAP)，用磁力搅拌器搅拌溶解混合，再加入3-呋喃甲酰氯4μL，共同搅拌回流加热反应6小时；
检测反应是否完成：0.5mm直径的毛细管吸取少量反应液，点样于硅胶薄层板，平行点样8α-羟基大戟因子L3(1)，采用石油醚-乙酸乙酯(7:3)上行法展开，完毕后取出晾干，254nm紫外灯下检视。反应完成的标志是在反应液展开处，与8α-羟基大戟因子L3(1)相同位置(Rf＝0.4)没有亮斑或仅有微弱亮斑，在Rf＝0.5左右处产生新的亮斑。确定反应完成后，加入20mL饱和碳酸氢钠淬灭，反应液用等体积乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯层，回收溶剂得到残渣，残渣用少量二氯甲烷溶解后，用0.5g硅胶(100-200目)拌样，二氯甲烷湿法上样于装有15g柱层析硅胶(300-400目)的硅胶柱中，以二氯甲烷-甲醇(35:1)洗脱，得到含8α-(3)-呋喃甲酰氧基大戟因子L3(9)的流分，收集流分回收溶剂。
Claims (5)
1.具有下列通式的续随子二萜烷型化合物的转化制备方法，其特征在于：用卷枝毛霉Mucor circinelloides菌种微生物(保藏号为CICC 40242)或其功能等同的变异体和突变体，对续随子二萜醇、大戟因子L3进行微生物转化或生物转化组合化学酰化，获得下式的续随子二萜烷型化合物：
其中，
化合物1：8α-羟基大戟因子L3，R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝OH,R4＝H
化合物2：18-羟基大戟因子L3，R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝H,R4＝OH
化合物3：8α-羟基续随子二萜醇，R1＝R2＝OH,R3＝OH,R4＝H
化合物4：8α-乙酰氧基大戟因子L3,R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝OAc,R4＝H
化合物5：8α-苯甲酰氧基大戟因子L3，R1＝OBz,R2＝OAc,R3＝OBz,R4＝H
化合物6：8α-环丙甲酰氧基大戟因子L3，R1＝OBz,R2＝OAc,R4＝H
化合物7：8α-烟酰氧基大戟因子L3，R1＝OBz,R2＝OAc,R4＝H
化合物8：8α-对氟苯甲酰氧基大戟因子L3，R1＝OBz,R2＝OAc,R4＝H
化合物9：8α-(3)-呋喃甲酰氧基大戟因子L3，R1＝OBz,R2＝OAc,R4＝H；
按微生物转化法：其中包括步骤：
(1)将生长在琼脂培养基上的卷枝毛霉菌株Mucor circinelloides CICC 40242菌丝划线接种于马铃薯固体培养基上，在20-28℃的恒温培养箱中培养3-7天，得到试管种；
(2)将试管种中的菌丝接种到三角瓶中，每瓶含有液体马铃薯培养基，培养温度为25-28℃，转速为130-180rpm，培养时间为24小时，获得种子液；
(3)将种子液按2％～5％体积比接入新鲜马铃薯培养基，28℃，130-180rpm条件下培养24-72小时后，加入转化底物续随子二萜醇或大戟因子L3,在20-28℃、130-180rpm的条件下转化培养72-240小时；
(4)将发酵液用布氏漏斗减压过滤，获得发酵滤液，按照1:1.5体积比用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压蒸干，发酵产物用硅胶柱层析法分离得到大戟因子L3的发酵产物8α-羟基大戟因子L3(1)和18-羟基大戟因子L3(2)；续随子二萜醇的转化产物8α-羟基续随子二萜醇(3)；
进一步，按生物转化组合化学酰化法，其包括步骤：
1)制备8α-乙酰氧基大戟因子L3(4)：将8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加三乙胺，4-二甲氨基吡啶(DMAP)，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的乙酰氯，反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水；
2)制备8α-苯甲酰基大戟因子L3(5)：将8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加三乙胺，DMAP，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的苯甲酰氯，反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水；
3)制备8α-环丙甲酰氧基大戟因子L3(6)：将8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加三乙胺DMAP，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的环丙甲酰氯，加热回流反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水；
4)制备8α-烟酰氧基大戟因子L3(7)：将8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加三乙胺，DMAP，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的烟酰氯盐酸盐，加热回流反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水；
5)制备8α-对氟苯甲酰氧基大戟因子L3(8)：将8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加三乙胺DMAP，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的对氟苯甲酰氯，加热回流反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水；
6)制备8α-(3)-呋喃甲酰氧基大戟因子L3(9)：将8α-羟基大戟因子L3(1)溶于无水四氢呋喃，滴加三乙胺，DMAP，磁力搅拌混合均匀，投入1.5当量的呋喃-3-乙酰氯，加热回流反应10-15小时，加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，用乙酸乙酯萃取，溶剂回收后用制备液相分离，流动相比例为75％甲醇-水。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将卷枝毛霉CICC 40242种子液按1％-3％体积比接入马铃薯培养基，28℃培养12-48小时，再加入5mg/mL大戟因子L3或续随子二萜醇的乙醇溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的大戟因子L3经卷枝毛霉CICC40242转化反应所得的8α-羟基大戟因子L3(1)进行化学酰化的酰化反应物包括乙酰氯、苯甲酰氯、环丙甲酰氯、烟酰氯、3-呋喃甲酰氯和对氟苯甲酰氯。
4.一种药物组合物，其中含有权利要求1的化合物或其药学上可接受的溶剂化物及药学上可接受的载体。
5.权利要求4所述的药物组合物在用于制备抗肿瘤活性与抗肿瘤多药耐药的药物中的用途。
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